Bằng đếm số khuẩn lạc trên môi trường thạch
Nguyên tắc: mỗi khuẩn lạc được hình thành từ 1 tế bào. Số khuẩn lạc chính là số tế bào trong một đơn vị thể tích mẫu.
Cách tiến hành [14, 26, 27]:
- Pha loãng mẫu để có độ pha loãng 10-1
, 10-2, 10-3,,10-4, 10-5 - Chuẩn bị môi trường đặc trưng và hấp khử trùng.
- Đổ môi trường vào hộp petri vô khuẩn (mỗi hộp khoảng 20-30ml), để nguội. Dùng pipet vô trùng hút 0,1ml dịch mẫu pha loãng cho lên bề mặt hộp petri. Sau đó dùng que gạt vô trùng gạt đều khắp bề mặt thạch sao cho bề mặt thạch thật khô. Các thao tác được thực hiện gần ngọn lửa đèn cồn trong tủ cấy để tránh nhiễm VSV. Bao gói, lật úp đĩa petri, ủ ở nhiêt độ 300
C trong 2-3 ngày. Chọn 3 nồng độ pha loãng liên tiếp, mỗi nồng độ cấy 3 hộp petri.
Cách đếm: Khi kết thúc thời gian ủ, đếm số khuẩn lạc phát triển trên môi trường thạch như sau:
- Lấy bút chì kẻ 2 đường vuông góc dưới đáy đĩa Petri và đánh dấu thứ tự từng vùng I, II, III, IV.
- Đếm số khuẩn lạc từng vùng. Nhớ đánh dấu các khuẩn lạc đã đếm. - Số lượng tế bào VSV trog 1ml mẫu được tính theo công thức sau đây:
Trong đó:
N: số tế bào VSV trong 1ml mẫu
n – số khuẩn lạc trung bình trong 1 đĩa Petri ở một độ pha loãng nhất định.
v – thể tích dịch mẫu đem cấy (bằng 0,1ml đối với phương pháp cấy gạt và 1ml đối với phương pháp đổ đĩa.
38