nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của tỏi (allium sativum l.) đối với vi khuẩn escherichia coli và ảnh hưởng của tỏi lên sự tăng trưởng của gà

Điều đáng nói là phần lớn lượng kháng sinh này không những để điều trị bệnh cho vật nuôi mà còn để phòng bệnh và tăng thêm lợi thế về mặt tăng trưởng cho vật nuôi bằng việc bổ sung kháng

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA

TỎI (Allium sativum L.) ĐỐI VỚI VI KHUẨN

ESCHERICHIA COLI VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA

TỎI LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG CỦA GÀ

CẦN THƠ - 2014

ThS BÙI THỊ LÊ MINH VÕ NGỌC DUY

MSSV: 3102936 Lớp: CN10Y4A1 – K36

CẦN THƠ - 2014

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA

TỎI (Allium sativum L.) ĐỐI VỚI VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA

TỎI LÊN SỰ TĂNG TRƯỞNG CỦA GÀ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN THÚ Y

Đề tài “Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của tỏi (Allium sativum L.) đối với

vi khuẩn Escherichia coli và ảnh hưởng của tỏi lên sự tăng trưởng của gà” do

sinh viên Võ Ngọc Duy thực hiện tại Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh

Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ từ tháng 8 năm 2014 đến tháng 12 năm

2014

Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2014 Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2014

ThS Bùi Thị Lê Minh

Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2014

Duyệt Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng

LỜI CẢM ƠN

Trải qua một quá trình theo học tại trường Đại học Cần thơ, hôm nay tôi đã hoàn thành luận văn tốt nghiệp của mình Trong suốt quá trình học tập và thực hiện luận văn ngoài nổ lực của bản thân, còn có nguồn động viên gia đình, bạn bè và sự dạy bảo tận tình của quý thầy cô Tôi xin gửi lời cảm ơn và lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình của mình, đặc biệt là mẹ của tôi - người đã dành trọn tình thương và hy sinh một đời người cao cả cho tôi được cất bước đến trường

Xin trân trọng ghi nhớ công lao và lòng biết ơn sâu sắc đến cô Bùi Thị Lê Minh là người đã tận tình chỉ bảo và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài Xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến cô Châu Thị Huyền Trang là người đã nâng đỡ và động viên tôi trong suốt quá trình theo học tại trường Cảm ơn các thầy cô Bộ môn

Thú Y và Bộ môn Chăn Nuôi đã truyền đạt cho tôi những kiến thức, kinh nghiệm

quý báu, cùng những bài học về nhận thức xã hội trong quá trình học tập tại

trường Cùng tất cả các anh chị, bạn bè đã động viên, đã chia sẽ và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập và thực hiện đề tài

Cuối cùng xin chúc quý thầy cô cùng các anh, chị, em và các bạn dồi dào sức khỏe

và thành đạt trong cuộc sống

Võ Ngọc Duy

MỤC LỤC

Trang tựa i

Trang duyệt ii

Lời cảm ơn iii

Mục lục iv

Danh mục chữ viết tắt vi

Danh mục bảng vii

Danh mục hình viii

Tóm lược ix

CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 2: CƠ SỞ LÝ LUẬN 3

2.1 Giới thiệu về cây tỏi 3

2.1.1 Đặc điểm thực vật 3

2.1.2 Thành phần hóa học 3

2.1.3 Tác dụng và công dụng của tỏi 4

2.1.3.1 Tác dụng 4

2.1.3.2 Một số nghiên cứu về tác dụng của tỏi 7

2.1.3.3 Một số kinh nghiệm dân gian sử dụng nghệ phòng trị bệnh trên gà 10

2.2 Giới thiệu về vi khuẩn E.coli 11

2.2.1 Những đặc điểm của vi khuẩn E.coli 11

2.2.2 Tính gây bệnh 12

2.2.3 Một số hội chứng do vi khuẩn E.coli gây ra trên gà 13

2.3 Phương pháp xác đinh MIC 16

2.3.1 Mục đích 16

2.3.2 Nguyên lý 16

2.4 Kỹ thuật chăm sóc, nuôi dưỡng gà thịt 17

CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19

3.1 Phương tiện nghiên cứu 19

3.1.1 Thời gian, địa điểm, đối tượng nghiên cứu 19

3.1.2 Vật liệu và dụng cụ nghiên cứu 19

3.2 Phương pháp nghiên cứu 20

3.2.1 Xác định hàm lượng vật chất khô của tỏi 20

3.2.2 Xác định MIC của tỏi trên vi khuẩn E.coli 20

3.2.3 Bố trí thí nghiệm sử dụng tỏi phòng bệnh cho gà 23

3.2.3.1 Trước khi bố trí thí nghiệm 23

3.2.3.2 Bố trí thí nghiệm 25

3.2.4 Các chỉ tiêu theo dõi 26

3.2.4.1 Tiêu tốn thức ăn 26

3.2.4.2 Khối lượng và tăng trọng 26

3.2.4.3 Hệ số chuyển hóa thức ăn 26

3.2.5 Phương pháp xử lý thống kê 26

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27

4.1 Kết quả xác định MIC của dịch chiết tỏi tươi đối với vi khuẩn E.coli 27

4.2 Kết quả khảo sát khả năng tăng trọng của gà 29

4.2.1 Ảnh hưởng của việc bổ sung tỏi tươi lên tiêu tốn thức ăn 29

4.2.2 Ảnh hưởng của việc bổ sung tỏi tươi lên tăng trọng 29

4.2.3 Ảnh hưởng của việc bổ sung tỏi tươi vào khẩu phần đến hệ số chuyển hóa thức ăn của gà 31

4.3 Kết quả theo dõi triệu chứng và bệnh tích của gà 32

CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34

5.1 Kết luận 34

5.2 Đề nghị 34

TÀI LIỆU THAM KHẢO 35

PHỤ CHƯƠNG THỐNG KÊ 39

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT

Nhu cầu dinh dƣỡng cơ bản của gà thịt

Nhiệt độ, ẩm độ trong chuồng úm gà con

18

18 3.1 Nồng độ dịch chiết tỏi pha loãng ở các ống nghiệm 22 3.2 Quy trình cấp thuốc cho các nghiệm thức gà thí nghiệm 23 3.3 Thành phần dinh dƣỡng của các loại thức ăn của gà thí nghiệm 24

4.2 Tiêu tốn thức ăn của gà qua các tuần tuổi (g/con/ngày) 29 4.3 Tăng trọng bình quân của gà qua các tuần tuổi (g/con/tuần) 30 4.4 Hệ số chuyển hóa thức ăn của gà trong giai đoạn thí nghiệm 31

DANH MỤC HÌNH

2.2 Sự chuyển đổi từ alliin thành allyl sulfenic acid 5

2.4 Lòng đỏ không tiêu, viêm phúc mạc do E coli 15

2.5 Nhiễm trùng huyết cấp tính, gan hoại tử lốm đốm có màu xám

2.7 Manh tràng phình to, chứa đầy dịch do E coli 15

TÓM LƢỢC

Đề tài nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của tỏi tươi đối với vi khuẩn E coli và sử dụng tỏi tươi vào khẩu phần thức ăn ở các mức độ 1%, 2%, 3%, 4% để khảo sát sự tăng trọng của giống gà Tàu lai Lương Phượng được thực hiện từ tháng 8 đến tháng 12 năm 2014 Đề tài ghi nhận kết quả MIC của tỏi đối với vi khuẩn E coli phân lập trên gà thả vườn tại các nông hộ ở Thành phố Cần Thơ là 12,5 µg/ml, 25 µg/ml Kết quả thí nghiệm cho thấy, gà ở các nghiệm thức bổ sung tỏi tươi ở 5 tuần tuổi đến 10 tuần tuổi thì mức tăng trọng, hệ số chuyển hoá thức ăn (FCR) tương đương với nghiệm thức sử dụng thuốc thú y (không bổ sung tỏi) và mức tiêu tốn thức ăn qua các tuần tuổi đều thấp hơn so với nghiệm thức không bổ sung tỏi

Cụ thể, ở các nghiệm thức bổ sung tỏi 1%, 2%, 3%, 4% thì hệ số chuyển hoá thức

ăn dao động ở 2,87 - 3,07, tăng trọng bình quân dao động 194,4 - 210,3 g/con/tuần Kết quả thí nghiệm cũng cho thấy việc sử dụng tỏi tươi vào khẩu phần

ăn của gà ở các mức 1%, 2%, 3%, 4% phòng được bệnh tiêu chảy do E coli.

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Ở Việt Nam, nghành chăn nuôi gia cầm là ngành sản xuất truyền thống, chiếm vị trí quan trọng và đứng thứ hai trong tổng giá trị sản xuất của nghành chăn nuôi nước ta Chăn nuôi gà chiếm 72-73% trong tổng số đàn gia cầm hàng năm Năm

2013, đàn gà cả nước đạt 236,4 triệu con, sản lượng thịt đạt 762,3 nghìn tấn (Tổng cục Thống kê, 2013) Song song với việc phát triển của nghành chăn nuôi

gà thì nhiều vấn đề khác cần phải được quan tâm như tình hình dịch bệnh Đặc biệt hiện nay, nghành chăn nuôi gà nước ta đang sử dụng một lượng kháng sinh khá lớn Điều đáng nói là phần lớn lượng kháng sinh này không những để điều trị bệnh cho vật nuôi mà còn để phòng bệnh và tăng thêm lợi thế về mặt tăng trưởng cho vật nuôi bằng việc bổ sung kháng sinh vào thức ăn hay vào nước uống với liều thấp và thường xuyên do đó dễ gây nên tình trạng kháng kháng sinh của các loài vi khuẩn gây bệnh, làm tồn dư kháng sinh trong các sản phẩm chăn nuôi, sự tích lũy kháng sinh trong cơ thể về lâu dài sẽ ảnh hưởng xấu đến sức khỏe người tiêu dùng như rối loạn tiêu hóa, dị ứng kháng sinh, nguy cơ ung thư và béo phì… Một số giải pháp tốt để thay thế việc dùng kháng sinh vào thức ăn chăn nuôi hiện nay là sử dụng các chất bổ sung thay thế vừa đảm bảo sự tăng trưởng, hiệu quả

sử dụng thức ăn, tăng cường sức khỏe cho vật nuôi mà lại không ảnh hưởng đến sức khỏe của con người như bổ sung vi khuẩn hữu ích probiotic, các thảo dược

có các hoạt chất kháng khuẩn, các axit hữu cơ, enzyme tiêu hóa, các chế phẩm giàu kháng thể Trong đó việc dùng thảo dược có những ưu điểm là không có tác dụng phụ như các loại thuốc kháng sinh tân dược, thuốc kháng cầu trùng và một

số loại thuốc khác Một số thảo dược và chiết xuất từ thảo dược có tác dụng ức chế và kháng khuẩn, không có hiện tượng kháng thuốc, không tồn dư trong thực phẩm, dễ hoà tan trong nước, rất ít độc, thân thiện với môi trường, dễ sử dụng do hầu hết các loại thảo dược này thường được dùng ở các dạng bào chế đơn giản Hiện nay, trên thế giới có hơn 60 chi thực vật có đặc tính ức chế vi khuẩn

Escherichia Coli hay Staphylococcus aureus (Newman, 1998), trong đó tỏi ( Allium sativum L.) là một trong những loại thảo dược được sử dụng lâu đời trong

chế độ ăn uống, điều trị bệnh cho con người và vật nuôi Trong chăn nuôi, tỏi được sử dụng như một chất bổ sung tự nhiên vào thức ăn của vật nuôi, giúp cải thiện tốc độ tăng trưởng, giảm hệ số chuyển hóa thức ăn, và giảm tỷ lệ tử vong (Tollba and Hassan, 2003) Tỏi rất giàu các hợp chất chứa gốc sulfur và các tiền

tố allicin, diallyl sulfide và diallyl trisulfide trong đó allicin được xem là thành

phần hoạt hóa tiềm năng của tỏi và nó là một hoạt chất tự nhiên có tính kháng khuẩn mạnh Các hợp chất này với các đặc tính sinh học và có tác dụng tốt với việc làm giảm lượng cholesterol ở người cũng như các sản phẩm chăn nuôi

(Silagy and Neil, 1994; Konjufca et al., 1997; Chowdhury et al., 2002) Theo Lewis et al (2003) việc bổ sung bột tỏi trong khẩu phần của gà thịt có ảnh hưởng

lên năng suất và hoạt động của vi khuẩn đường ruột

Từ những nghiên cứu về những đặc tính sinh học của tỏi nêu trên, đề tài “Nghiên

cứu tác dụng kháng khuẩn của tỏi (Allium sativum L.) đối với vi khuẩn

Escherichia coli và ảnh hưởng của tỏi lên sự tăng trưởng của gà” được thực

hiện nhằm mục tiêu:

- Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của tỏi trên một số chủng vi

khuẩn E coli phân lập trên gà thả vườn tại các hộ chăn nuôi gà ở thành

phố Cần Thơ

- Khảo sát ảnh hưởng của việc bổ sung tỏi tươi vào khẩu phần ăn của gà

đến khả năng tăng trọng và khả năng phòng bệnh tiêu chảy do E coli cho

gà

CHƯƠNG 2

CƠ SỞ LÝ LUẬN

2.1 Giới thiệu về cây tỏi

Tỏi có tên khoa học là Allium sativum L, tiếng Latinh “Therica rusticorum”, tên

gọi khác là Đại hoàng (Trung Quốc), hom kía (Thái), sluôn (Tày) Tỏi thuộc họ

Hành (Liliaceae) và có nguồn gốc từ Indonesia Có rất nhiều loại tỏi khác nhau

như tỏi voi, tỏi tây, tỏi gié, tỏi tía, tỏi Trung Quốc, tỏi gấu, tỏi ngọc, tỏi đen

2.1.1 Đặc điểm thực vật

Cây thân thảo sống nhiều năm Thân hình trụ, phía dưới mang nhiều rễ phụ, phía trên mang nhiều lá Ở mỗi nách lá có một chồi nhỏ sau này sẽ phát triển thành một tép tỏi Các tép này nằm chung trong một cái bao (do các bẹ lá trước tạo ra) thành một củ tỏi tức là thân hành của tỏi Lá cứng, hình dài, thẳng dài 15 - 50 cm, rộng 1 – 2,5 cm có rãnh khía, mép lá hơi ráp Hoa xếp thành tán ở ngọn thân trên một cán hoa dài 55 cm Bao hoa màu trắng hay hồng bao bởi một cái mo dễ rụng tận cùng thành mũi nhọn dài (Vũ Văn Chuyên, 2007)

2.1.2 Thành phần hóa học

Tỏi chứa chủ yếu là tinh dầu, 100 kg tỏi chứa 60 – 200 g tinh dầu bay hơi và chúng quy định các tính chất dược lí của tỏi Tỏi chứa ít nhất 33 các hợp chất sulfur như aliin, allicin, ajoene, allypropl, diallyl, trisulfide, sallylcysteine, vinyldithiines, S-allymercaptocystein, và các hợp chất khác Khoáng chất như selenium và các enzyme như allinase, peroxidases, myrosinase và một vài enzyme khác Những nghiên cứu trước đây gợi ý rằng hoạt tính chủ yếu của tỏi có được là do thành phần sinh học của tỏi chứa các hợp chất lưu huỳnh như

Hình 2.1 Cây tỏi (Allium sativum L)

(http://dongyhanoi.org)

allin, dialyllsulphydes và allicin (Amagase et al., 1993) hợp chất S – allyl

cystine, là một loại hợp chất lưu huỳnh, không mùi, tan trong nước, so với các loại cây dược liệu khác thì tỏi tươi có chứa các hợp chất sulfur cao nhất (3.2%) Theo các nghiên cứu gần đây cho thấy tỏi có 3 hoạt chất chính là allicin, liallyl sulfide và ajoene (Heli Roy, 2005)

2.1.3 Tác dụng và công dụng của tỏi

2.1.3.1 Tác dụng

Allicin tinh khiết là một chất dầu không màu, tính tan trong nước không ổn định, hòa tan trong cồn, dung môi hữu cơ như benzen, ether, dễ bị phân hủy trong môi trường kiềm, acid nhẹ ít bị ảnh hưởng Dễ dàng bị phá hủy bởi nhiệt độ và ánh sáng Allicin là hoạt chất mạnh nhất và quan trọng nhất của tỏi nhưng allicin không hiện diện trong tỏi tươi mà nó tồn tại dưới dạng tiền chất allin Bản thân allin hiện diện trong tỏi không có chức năng kháng khuẩn, mà phải qua sự chuyển đổi bởi enzyme allinase và nước để thành allicin với tính chất kháng khuẩn cao

Nồng độ enzyme allinase trong tỏi tươi là rất lớn, chiếm đến 10% hàm lượng protein tổng số (10mg/g tỏi tươi) được chứa trong các khoang khác nhau của củ tỏi Allin là 1 acid amin, trong tỏi tươi alliin và men allinase có

lượng tương đương nhau và nằm trong mỗi ngăn riêng biệt (Reuter et al.,1996)

Khi củ tỏi bị dập hoặc nghiền nhuyễn, men allinase được giải phóng và sẽ xúc tác phản ứng thủy phân tạo ra allicin (Peter Josling, 2005) Do đó, càng cắt nhỏ hoặc càng giã nhuyễn thì hoạt tính của tỏi càng cao Theo kết quả nghiên cứu của

Iberrt et al (1990) dịch chiết tỏi không được bảo quản ở điều kiện thích hợp thì

allicin và các sản phẩm sulfur khác bị giảm đi 50% sau 2 ngày Chính vì thế, việc để tỏi lâu ngày trong nhiệt độ lạnh, có thể làm mất đi một phần hoạt lực của enzyme allinase và allicin có trong dịch tỏi

Allicin là một chất không bền nên dễ biến mất sau khi được tạo ra, khi tiếp xúc với không khí sẽ được chuyển hóa thành diallyl disulfide, vinyl dithiin, ajoene Càng để lâu ngoài không khí càng mất bớt hoạt tính Đun qua lò vi sóng sẽ phá hủy hoàn toàn chất allicin Bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp người ta đã xác định được hàm lượng allicin trong tép tỏi tươi sau khi giã nát một phút đã đạt 63% nhưng sau 30 phút tiếp xúc với không khí lượng allicin chỉ còn 39%

Hình 2.2 Sự chuyển đổi từ alliin thành allyl sulfenic acid (Nguồn: Stool

& Seebeck, 1949)

Hình 2.3 Allyl sulfenic chuyển đổi thành Allicine (Nguồn: Stool &

Seebeck, 1949) Liallyl sulfide không mạnh bằng allicin nhưng liallyl sulfide bền hơn, không bị biến chất nhanh như allicin và vẫn giữ được hoạt tính khi đun nấu Giống như allicin, càng giã nhỏ thì càng cho ra nhiều liallyl sulfide

Ajoene ít được nhắc đến cũng có tác dụng làm giảm độ dính của máu Ngoài ra, tỏi còn có hàm lượng selenium, một chất chống oxy hóa mạnh làm tăng khả năng bảo vệ màng tế bào, phòng chống ung thư và bệnh tim mạch

Cavalito and Bailey (1994) là những người đầu tiên chứng minh rằng hoạt động kháng khuẩn của tỏi chủ yếu là do allicin Allicin được mô tả với các khái niệm khác nhau như diallyl thiosulphinate, allylsuiphide hay S-(2-Propenyl) 2-propene-1-sulfinothioate

Allicin có hoạt tính kháng khuẩn rất mạnh do trong công thức phân tử có chứa nguyên tố oxy hoạt động và liên kết đôi S=S với phân tử Nhóm kháng sinh đầu tiên là sulphonamides được phát minh đầu tiên những năm 1930 và thành công rực rỡ trong việc điều trị các bệnh nhiễm khuẩn vì nó có chứa nhóm Sulfer hoạt động giống như nhóm Sulfer của allicin Allicin có tác động ức chế toàn bộ quá trình tổng hợp RNA và ức chế từng phần sự tổng hợp DNA và protein, cho thấy mục tiêu tác động chính của allicin trên RNA Ngoài ra Allicin còn cạnh tranh kết hợp với các acid amin cystein là yếu tố sinh trưởng và phát triển của các vi khuẩn gây bệnh ở người và động vật, làm cho vi khuẩn không phát triển được

Sivam et al., (1997) ghi nhận rằng tỏi có phổ kháng khuẩn rộng và được biết đến

như là một nhân tố hiệp đồng với các loại kháng sinh khác Tương tự như Ciprofloxacin, tỏi ức chế hoạt động của enzym DNA gyrase làm cho hai mạch đơn của DNA không thể duỗi xoắn trong tổng hợp DNA và do đó cản trở sự sao

chép DNA của vi khuẩn và các hoạt động khác liên quan đến DNA Ngoài ra, tương tự như Ampicillin, tỏi ức chế tổng hợp thành của tế bào, tác động vào quá trình tạo các liên kết chéo giữa các chuỗi polysacharide của thành tế bào làm cho

tế bào vi khuẩn dễ bị các tế bào thực bào phá vỡ do thay đổi áp suất thẩm thấu Allicin được chuyển hóa qua gan, thận và niêm mạc ruột non, sinh ra sản phẩm thứ cấp là diallyl disulfide Allicin trong dịch vị (pH=1,7) không bị mất hoạt lực trong vòng 24 giờ và trong dịch tụy (pH=9,3) hoạt tính sẽ mất hết hoạt lực sau 24 giờ

Allicin là có hoạt tính kháng khuẩn mạnh hơn cả penicillin Nước tỏi pha loãng 1/85.000 – 120.000 lần vẫn có hiệu lực ức chế nhiều loại vi khuẩn gram âm và

gram dương như Staphylococcus, Streptococcus, Mycobacterium tuberculosis,

Vibrio cholera, Salmonella

Allicin dễ gây kích ứng da và niêm mạc Allicin có thể dùng để điều trị rộng rãi

các vết thương có mủ do không bị PABA cạnh tranh (Gupta Rainy et al, 2014)

Chiết xuất dịch tỏi làm tăng hoạt tính của các tế bào tạo lympho B và T, làm tăng hoạt tính thực bào của các lympho bào, tăng các tế bào tạo màng tiêu máu Sự hiện diện của máu không làm ảnh hưởng đến hoạt tính chống vi sinh vật của

allicin ở nồng độ cao (Sanjay K Banerjee et al, 2002)

Tỏi cũng như chiết xuất của tỏi có phổ kháng khuẩn rộng, tác dụng ức chế trên

70 loại vi khuẩn, điển hình như Staphylococcus aureus, Streptococcus

pneumoniae, Salmonella typhi, Escherichia coli, Corynebacterium diphteriaae, Mycobacterium tuberculosis…Ngoài ra, tỏi còn có tính kháng nấm, kháng ký

sinh trùng và kháng siêu vi do tỏi có thể ngừa được cảm cúm và một số bệnh đường hô hấp, kể cả vi rút gây lở mồm long móng trâu, bò Trong ống nghiệm, nước tỏi 3% đủ diệt được các trực trùng lỵ và trực khuẩn đường ruột Tỏi đặc biệt

để phòng tránh các rối loạn men tiêu hóa, các nhiễm khuẩn dạ dày ruột, kích thích tiết dịch vị, tiết mật, tăng tính ngon miệng, giải độc thủy ngân, tẩy uế môi trường, nâng cao chất lượng thịt (Cavalito and Bailey, 1944; Hughes and Lawson, 1991) Nghiên cứu của Kim J.W and Kyung K.H (2003) cho thấy tỏi

có hoạt chất chống nấm men, và ổn định ngay khi pH thay đổi, phù hợp cho việc ứng dụng trong bảo quản thực phẩm

Thành phần hóa học chứa trong tỏi ở trạng thái tươi được trình bày trong bảng 2.1

Bảng 2.1 Giá trị dinh dưỡng có trong 100 gam tỏi tươi

-2.1.3.2 Một số nghiên cứu về tác dụng của tỏi

Theo Kim H.S (2005) trên thế giới có khoảng 500.000 loài thực vật nhưng số bệnh do vi khuẩn gây ra trên chúng chỉ chiếm 1% Vì vậy, việc nghiên cứu sâu rộng về các chất tự nhiên với hoạt tính kháng khuẩn mới rất là cần thiết trong tương lai Hiện nay, các nhà khoa học và các nhà dinh dưỡng học đang nghiên

cứu, tìm kiếm các chất bổ sung tự nhiên vào thức ăn cho vật nuôi để thay thế các loại kháng sinh và chất kích thích tăng trọng gây ảnh hưởng xấu đến chất lượng của các sản phẩm chăn nuôi và sức khỏe người tiêu dùng

Ngược lại với kháng sinh nhân tạo, theo Pleasant Grove, (1995) thì tỏi (Allium

sativum L.) được xem như là một loại kháng sinh tự nhiên, giảm nguy cơ ung

thư, chất bổ trợ miễn dịch, có thể làm giảm Cholesterol trong máu,…mà không tác động xấu đến môi trường Với ưu điểm không độc, không tồn dư, dễ hòa tan

(Chu Mạnh Thắng và ctv, 2009 - trích dẫn bởi Trần Hồng Thủy và ctv, 2013) và

thân thiện với môi trường nên ngày nay Chính vì vậy, việc ứng dụng tỏi cũng như các loại thảo mộc thiên nhiên và các loài thực vật đã nhận được sự tán thành rộng rãi và nghiên cứu sâu rộng trong chăn nuôi

Tỏi có tác dụng trong điều trị bệnh trên ếch Thái Lan do Aeromonas hydrophila (Trần Hồng Thủy và ctv, 2013) Cá rô phi (Oreochromic niloticus) sau khi bổ

sung tỏi vào thức ăn ở các nồng độ 10, 20g.kg-1 nuôi trong 1 - 2 tháng làm tăng

mức tăng trọng và tỉ lệ sống sót ở loài cá này (Salah Mesahy Aly et al., 2008)

Theo nghiên cứu của Teferi and Hahn, (2002) tỏi có tác dụng hiệu quả trong việc

ức chế các vi khuẩn như Staphylococcus aureus, Shigella, Samlmonella Một ký

tỏi sẽ cho ra 1 – 2 gam allicin Theo nghiên cứu của Angela M Farías et al, (2014) đã

tính được hàm lượng allicin có trong 1 gam tỏi tươi là 248±2 µg

Ghi nhận từ kết quả nghiên cứu của Deresse Daka et al (2009) về tỏi trên

Staphylococcus aureus cho thấy tỏi có thể điều trị được các trường hợp ngộ độc

thực phẩm do nhiễm loài vi khuẩn này

Theo báo cáo của Alli J.A et al (2010) ghi nhận rằng vi khuẩn Streptococcus

pneumonia và Pseudomonas aeruginosa không kháng lại tỏi do đó tỏi sẽ là một

tác nhân kháng khuẩn đầy hứa hẹn trong tương lai

Ở Bangladesh, người ta bước đầu thử nghiệm về hoạt tính kháng khuẩn của các loại gia vị như tỏi, hồ tiêu, rau mùi (ngò rí), chanh ta, hành tây, gừng và đã ghi nhận rằng tỏi có tác dụng trong hiệu quả điều trị tiêu chảy do E.coli kháng thuốc trong cộng đồng

Một số nghiên cứu gần đây cho thấy tỏi mang đến một loạt các lợi ích về hiệu suất và sinh hóa, sinh lý đối với gà thịt và gà đẻ trứng Trong đó, những lợi ích

mà tỏi mang lại đáng chú ý nhất đó là về tăng trưởng, hiệu quả sử dụng thức ăn, năng suất và chất lượng trứng, hỗ trợ miễn dịch và làm giảm lượng cholesterol trong máu ở các loài gia cầm

Năm 1858, Louis Pasteur đã tiến hành quan sát hoạt động kháng khuẩn của tỏi và

từ đó tỏi được dùng như một chất khử trùng để ngăn ngừa sự hoại thư trong các

Thế Chiến thế giới I và II (Groppo et al., 2007)

Theo Lâm Minh Thuận (2011), việc sử dụng chế phẩm tự nhiên như nghệ, gừng, tỏi để thay thế kháng sinh trong chăn nuôi giúp cho gà chuyển hóa và trao đổi chất, đồng thời nâng cao sức đề kháng bệnh, tạo ra thịt sạch, an toàn cho sức khỏe người sử dụng và đem lại hiệu quả kinh tế cao cho người chăn nuôi

Có rất nhiều nghiên cứu của ảnh hưởng của tỏi trong việc phòng và điều trị bệnh

trên động vật thủy sản (Erol-Florian Garbor et al., 2010) và cũng có những ghi

nhận rằng tỏi có thể loại bỏ hiệu quả các loài vi khuẩn hiện diện chủ yếu ở nước

ngọt bao gồm Pseudomonas fluorescens, Myxococcus piscicola, vibrio

anguillarum, Edwardsiela tarda, Aeromonas punctata, Flexibacter intestinalis và Yersinia ruckeri (Lee J.Y 2012) Tỏi có thể kiểm soát các tác nhân gây bệnh như

vi khuẩn, nấm, gia tăng sức khỏe của cá (Corzo-Martinez et al., 2007)

Các nhà khoa học ở Đại học Alabama, Mỹ đã chứng minh được các tác động của tỏi như tính kháng khuẩn, kháng nấm, và cả tác động tích cực của tỏi lên tim mạch với việc làm giảm lượng cholesterol tích tụ trong thành mạch máu của

động vật Hơn nữa theo kết quả nghiên cứu của Konjufca et al (1997) cho thấy

khi bổ sung tỏi ở các mức 1%; 3,5% và 4% vào khẩu phần ăn của gà thịt từ 1 –

21 ngày tuổi thì có sự làm giảm cholesterol trong máu và thịt của gà

Jamel et al (2013) chứng minh rằng việc bổ sung bột tỏi 0,5% vào thức ăn của

gà giúp ích cho sự hấp thụ thức ăn tốt hơn và cải thiện tăng trưởng

Trong nghiên cứu của Mercola J (1997) cho thấy allicin có trong tỏi làm mất hoạt động của các enzym của vi khuẩn bằng phản ứng hydrosulfur do đó ức chế

sự tăng trưởng của vi khuẩn

Trong nghiên cứu của Alagib et al (2013) thì việc bổ sung bột tỏi vào khẩu phần

ăn ở mức 3% giúp gà tăng trọng tốt và năng suất cao hơn Nhiều loài côn trùng như dán, muỗi (aedes truyền bệnh sốt xuất huyết, culex truyền bệnh viêm não Nhật Bản) rất sợ mùi tỏi

Theo khẳng định trong nghiên cứu của Iwalokun et al (2004) về việc bổ sung và

thay thế các loại thuốc kháng sinh trong điều trị bệnh tật bằng các kháng sinh thực vật sẽ giảm bớt gánh nặng về vấn đề kháng thuốc và giảm chi phí điều trị

Theo kết quả nghiên cứu của Iram Gull et al (2012), thử nghiệm MIC của tỏi đối với các vi khuẩn như E coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus Subtilis,

Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus typhi thì cho thấy rằng các chủng vi khuẩn này nhạy cảm với

dịch chiết tỏi được chiết xuất bằng nước cất hơn dịch chiết tỏi được chiết xuất bằng methanol và ethanol Nghiên cứu này cho kết quả MIC của dịch chiết tỏi

được chiết xuất bằng nước cất đối với vi khuẩn E coli là 0.1 mg/ml và kết quả

MIC của các vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa, Bacillus Subtilis,

Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus epidermidis và Staphylococcus typhi lần lượt là 0.09 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml, 0.2 mg/ml,

0.09 mg/ml và 0.02 mg/ml Nghiên cứu này đã chỉ ra rằng, vi khuẩn gam dương thì nhạy cảm với dịch chiết tỏi hơn là vi khuẩn gam âm

2.1.3.3 Một số kinh nghiệm dân gian sử dụng tỏi phòng trị bệnh trên gà

Theo IIRR (1994), tỏi là một dược liệu được sử dụng rất phổ biến để phòng trị bệnh trên gia súc gia cầm ở một số nước Châu Á như Thái Lan, Ấn Độ, Philippin, Malaysia, Lào, Campuchia và Việt Nam Trên gà, tỏi được sử dụng để

phòng và trị các bệnh sau:

Bệnh tiêu chảy

Phòng ngừa : giã nát 7 – 10 tép tỏi tươi và một miếng củ nghệ với nhau , sau đó

trộn vào thức ăn hằng ngày cho gia cầm (cách này dùng cho khoảng 10 gà trưởng thành)

Các bệnh kí sinh trùng

Giã nát ít nhất 6 tép tỏi tươi và trộn vào thức ăn cho gia cầm, điều trị cho 10 con

gà từ 1 đến 2 ngày Sau một tháng lặp lại 1 lần

Các bệnh do nấm mốc gây ra cho gà

Để phòng ngừa các bệnh gây ra do các loại nấm như Aspergillus fumigatus,

Aspergillus flavus, Candida albicans trên gia cầm bằng cách nghiền nát tỏi tươi

và trộn vào thức ăn cho gà, sử dụng từ 1 -3 tép tỏi cho một con gà trên một ngày

Sự kết hợp giữa tỏi và nghệ tươi cũng mang đến hiệu quả trong việc phòng bệnh

do những đặc tính mà chúng kết hợp lại

Ngoài ra, tỏi tươi giã nát cùng với bột nghệ và dầu dừa vừa đủ kết hợp với nhau giúp vết thương mau lành bằng cách thoa hỗn hợp này lên vết thương của gia cầm ngày 2 lần

2.2 Giới thiệu về vi khuẩn E coli

2.2.1 Những đặc điểm chung của vi khuẩn E coli

Escherichia coli thuộc họ Enterobacteriaceae Tên Escherichia được đặt theo tên

của Escherich, người đầu tiên phân lập và đưa ra đặc điểm riêng của vi khuẩn

này vào năm 1885 E coli là loài quan trọng được tìm thấy trong phân (Karmali

et al., 1983) Trong các vi khuẩn đường ruột, Escherichia coli là vi khuẩn phổ

biến nhất, chúng chiếm 80% vi khuẩn hiếu khí sống ở ruột (Trần Cẩm Vân, 2001) Vi khuẩn này xuất hiện và sinh sống trong ruột động vật chỉ vài giờ sau

khi sinh và tồn tại cho đến khi con vật chết E coli sinh sống bình thường trong

đường ruột của người và động vật, khi các điều kiện nuôi dưỡng, khẩu phần thức

ăn, vệ sinh thú y kém, sức chống đỡ bệnh tật của con vật yếu thì E coli trở nên

cường độc và có khả năng gây bệnh Chỉ một phần nhỏ số chủng có thể sản xuất yếu tố độc lực và gây hại con vật (Gyles and Fairbrother, 2010)

Đặc điểm hình thái E coli

E coli là trực khuẩn hình gậy ngắn, kích thước 2 – 3µm x 6µm, hai đầu tròn

Phần lớn E coli có khả năng di động do có lông ở xung quanh thân, không sinh nha bào, có thể có giáp mô (Lưu Hữu Mãnh, 2009) Thân được bao phủ bởi

những sợi protein có chức năng bám dính và giúp cơ thể di động E coli bắt màu

gram âm, có thể bắt màu đều hoặc sẫm ở 2 đầu, khoảng giữa nhạt

Đặc điểm nuôi cấy E coli

E coli mọc dễ dàng trong MC, EMB, NB Một số hóa chất ức chế sự tăng

trưởng của E coli như chlorine và dẫn xuất, muối mật, brilliant green, sodium

deoxycholate, sodium tetrathionate, selenite, Trong những điều kiện thích hợp

E coli phát triển rất nhanh, thời gian thế hệ chỉ khoảng 20 – 30 phút Cấy vào

môi trường lỏng sau 3 – 4 giờ làm đục nhẹ môi trường, sau 24 giờ làm đục đều, sau hai ngày trên mặt môi trường có váng mỏng, những ngày sau dưới đáy ống nghiệm có thể thấy xuất hiện cặn

Trên môi trường NB vi khuẩn E Coli phát triển làm cho môi trường đục đều, có

lắng cặn ở đáy ống nghiệm, màu xám nhạt, khi lắc thì cặn tan đều vào trong môi trường Nếu để qua 24 giờ thì hình thành màng mỏng trên bề mặt Trên môi trường thạch NA sau 24 giờ hình thành những khuẩn lạc tròn, ướt, màu tro trắng nhạt, hơi lồi, đường kính từ 2 – 3 mm Nuôi lâu khuẩn lạc gần nâu nhạt và phát

triển rộng ra Trên môi trường MC vi khuẩn E coli hình thành khuẩn lạc to, tròn

đều, màu hồng nhạt, mặt khuẩn lạc hơi lồi, kích thước 2 – 3 mm (Nguyễn Vĩnh Phước, 1970)

Đặc tính sinh hóa của E coli

Theo Nguyễn Ngọc Hải (2012) vi khuẩn E coli được định danh bằng phản ứng

IMViC qua các thử nghiệm sinh hóa sau

Thử nghiệm sinh indole: Tryptophan là một axit amin có thể bị oxi hóa bởi sinh vật có hệ men tryptophanase tạo nên các sản phẩm chứa gốc indole Khi nhỏ vài giọt thuốc thử Kovac’s nếu trong môi trường có sinh indole thì sẽ có vòng màu

hồng cánh sen nổi lên trên Vi khuẩn E coli có phản ứng indole dương tính

Thử nghiệm MR (Methyl red): Nhiều loài sinh vật nhất là nhóm vi khuẩn đường ruột có khả năng lên men glucose tạo sản phẩm acid bền làm cho pH của môi trường bị hạ thấp xuống dưới 4,5 Chất chỉ thị methyl red giúp phân biệt độ pH của môi trường sau khi vi khuẩn lên men glucose Phản ứng dương tính môi

trường chuyển sang màu đỏ, âm tính thì môi trường có màu vàng Vi khuẩn E

coli có phản ứng MR dương tính

Thử nghiệm VP (Voges Proskauer): Đối với môi trường VP tùy loại enzyme vi khuẩn có được mà quá trình lên men glucose sẽ cho sản phẩm cuối cùng khác nhau Một trong số đó là aceton sẽ tạo phức với thuốc thử α-naphthol và KOH Phản ứng dương tính khi môi trường có màu đỏ nhạt, phản ứng âm tính khi môi

trường có màu vàng hoặc không đổi màu E coli có phản ứng VP âm tính

Khả năng chuyển hóa citrate: Trong môi trường Simmons citrate, nếu vi khuẩn

có khả năng sử dụng citrate (là nguồn cacbon duy nhất) thì sẽ kiềm hóa môi trường làm môi trường từ màu xanh lá cây chuyển sang màu xanh dương, kết quả

âm tính khi môi trường giữ nguyên màu xanh lá cây Vi khuẩn E coli có phản

ứng citrate âm tính

Cấu trúc kháng nguyên

Cấu trúc kháng nguyên của E coli gồm kháng nguyên thân O (somatic), kháng

nguyên lông H (flagellar), kháng nguyên vỏ K (capsular) và kháng nguyên F (fimbrae) Cho đến nay đã xác định được 174 kháng nguyên O (từ O1 – O181 với các O31, O47, O67, O72, O93, O94, và O122 bị loại bỏ), 80 kháng nguyên

K, 53 kháng nguyên H và hơn 20 kháng nguyên F

2.2.2 Tính gây bệnh

Các chủng vi khuẩn E coli gây bệnh trên gia cầm (nhóm APEC) chủ yếu thuộc

serotypes O, cùng một loại gia cầm nhưng có thể nhiễm nhiều các serotypes khác nhau Ở gà mái đẻ, phân lập được serotypes O1, O2, O78; ở gà giò phân lập được serotypes O86, O88, O103 Ở gà con, các serotypes O2, O5, O78, O88 được tìm

thấy (Oilveira et al., 2009 - trích dẫn bởi Nguyễn Hoàng Dũ, 2013)

Vi khuẩn E coli bằng cách trực tiếp hay gián tiếp xâm nhập vào đường ruột của

gà (Gyles, 1992) Bản thân vi khuẩn E coli có thể gây bệnh được là do nhiều yếu

tố như khả năng bám dính, khả năng xâm nhập, các loại kháng nguyên, yếu tố dung huyết, khả năng kháng kháng sinh và độc tố Nhưng quan trọng nhất là 2 yếu tố độc lực chính: kháng nguyên bám dính (fimbrae) và độc tố đường ruột (Enterotoxin)

Khả năng bám dính cho phép vi khuẩn bám dính vào tế bào biểu mô lông ruột non từ đó gây nên những biến đổi bệnh lý kèm theo Sự tăng nhanh về số lượng của tế bào vi khuẩn dường như có liên quan đến khả năng bám dính của chúng vào tế bào biểu mô ruột để tránh sự đào thải của nhu đọng ruột Đa số các chủng

vi khuẩn E coli được phân lập từ gia súc non bị tiêu chảy đều có một kháng

nguyên bề mặt gọi là Pili

Độc tố đường ruột (Enterotoxin) do vi khuẩn sinh ra gắn vào receptor trên tế bào ruột non của vật chủ gây những biến đổi chức năng sinh lý của màng tế bào, dẫn đến việc tăng cường bài xuất nước và các chất điện giải ra khỏi màng tế bào Bên cạnh ảnh hưởng trực tiếp của các tác nhân gây bệnh như một bệnh truyền nhiễm kế phát trên cơ sở thiếu vitamin và mắc bệnh virus và ký sinh trùng thì

nguyên nhân gây gây tiêu chảy do vi khuẩn E coli trên gà còn chịu tác động của

các yếu tố khách quan như sự thay đổi thời tiết, thức ăn chất lượng kém, vận

chuyển, tiêm chủng làm giảm sức đề kháng, tạo stress làm cho vi khuẩn E coli

dễ dàng xâm nhập vào vào cơ thể qua niêm mạc đường ruột gây bệnh cho gia

cầm (Lê Hồng Mận và ctv., 1999) Bệnh tiêu chảy do E coli xảy ra ở gà 5 – 50

ngày tuổi và thường gây bệnh thứ phát trong giai đoạn này

Kết quả nghiên cứu về bệnh trực khuẩn E coli ở một số gà công nghiệp hướng thịt và khả năng kháng kháng sinh của một số chủng vi khuẩn E coli phân lập của Trương Hà Thái et al (2009) – được trích dẫn bởi tác giả Nguyễn Hoàng Dũ, (2013) cho thấy các chủng vi khuẩn E coli mẫn cảm với các loại kháng sinh:

enrofloxacin (84%), colistin (82%), norfloxacin (70%) Một số kháng sinh bị kháng với tỷ lệ cao là acid nalidixic (100%), streptomycin (84%), trimethoprin (48%), neomycin và ampicillin (52%), kanamycin (48%), gentamycin (28%)

2.3.3 Một số hội chứng do E coli gây ra trên gà

infections)

(http://www.thepoultrysite.com/publications/6/diseases-of-poultry/178/escherichia-coli-Viêm rốn (Colifrorm Omphalitis) Những chủng thuộc serotype O1a:K1:H7 gây

tử vong cao ở gà 1 ngày tuổi với triệu chứng viêm cuốn rốn Trường hợp gia cầm sống trên 4 ngày tuổi bệnh tích thường thấy là viêm màng bao tim, túi lòng đỏ không tiêu, viêm phúc mạc (Hình 2.4)

Quá trình hấp thu túi noãn hoàng (lòng đỏ) bị trì hoãn là một điều kiện thuận lợi cho sự nhiễm E coli và gây ra viêm phúc mạc.Ở giai đoạn sau của bệnh, quá trình hoại tử lòng đỏ trong khoang phúc mạc, làm bụng gà phình to

Gây thoái hoá nang buồng trứng, viêm ống dẫn trứng (Colifrorm Salpingitis) do

vi khuẩn E coli cũng được phát hiện thấy ở gia cầm và số lượng ngày càng tăng Ống dẫn trứng bị giãn ra, mỏng và chứa đầy dịch rỉ casein dọc theo chiều dài của ống dẫn trứng

Trong một số trường hợp ở gia cầm trưởng thành, ở vùng đầu, dịch rỉ thanh dịch fibrin dày đặc, gây sưng phù đầu

E coli gây nhiễm trùng huyết (Colisepticemia) Gà con ảnh hưởng 24 - 48 giờ

sau khi nở Tỷ lệ tử vong cao trong mười ngày đầu tiên và có thể đạt 5-6% Túi Faricius teo hoặc viêm, viêm màng bao tiêm, bao tim dày, viêm cơ tim, bao tim dày đục do tích tụ dịch tiết có fibrin, túi noãn hoàng là không được hấp thu, lách

sưng to Ở thể cấp tính, E coli nhiễm trùng huyết ở gà mái trưởng thành Về

hình thái học và lâm sàng, thì trường hợp nhiễm trùng huyết cấp tính có thể giống như bệnh dịch tả gà (Fowl cholera) hay thương hàn gà (Fowl typhoid) Bệnh cũng xảy ra ở cả hai gà con và trưởng thành Gà mái đẻ gặp các yếu tố gây stress trong giai đoạn đầu của quá trình đẻ trứng được coi là một yếu tố quan trọng tạo điều kiện cho bệnh tiến triển Các nhu mô của các nội được mở rộng và sung huyết Đôi khi, gan có màu xanh và lốm đốm với nhiều ổ hoại tử nhỏ Ngoài ra, viêm màng ngoài tim, viêm phúc mạc (Hình 2.5)

Trong trường hợp nhiễm trùng huyết có do viêm đường hô hấp của gà (Respiratory - ogirin colisepticemia), các niêm mạc đường hô hấp bị hư hại bởi các tác nhân truyền nhiễm và không truyền nhiễm (ND bao gồm các chủng virus làm vac-xin, IB, TRT, mycoplasma, nồng độ amoniac cao) Bệnh tích chủ yếu được quan sát thấy ở đường hô hấp trong (khí quản, phổi và túi khí), màng tim, màng bụng cũng bị ảnh hưởng Hầu hết, gia cầm chết sau 5 ngày nhiễm bệnh, trường hợp kéo dài gia cầm thường kém ăn, gầy gòm, suy nhược rồi chết

E coli gây nhiễm trùng huyết thứ phát (Entero - ogirin colisepticemia) dẫn đến

viêm ruột và phổ biến nhất ở gà tây Niêm mạc ruột bị hư hại do một loại virut viêm ruột xuất huyết (giống như bệnh gây ra do Adenovirus), là cửa ra vào của nhiễm E coli Các tổn thương điển hình nhất là sung huyết, xuất huyết và hoại tử

ở gan và lách

Viêm tế bào (Colifrorm Cellulitis), viêm mô dưới da và ảnh hưởng đến các mô phía trên cùng của da Nó chiếm ưu thế trong gà thịt và được phát hiện chủ yếu ở các lò giết mổ Tổn thương ở mức độ vĩ mô, các tổn thương có màu vàng nâu Vùng bị ảnh hưởng chủ yếu vùng da lưng và đùi (Hình 2.6)

E coli sản sinh độc tố ruột, gây tiêu chảy (Diarrheal disease) gây ra sự tiết và

lưu giữ dịch trong vòng ruột và đặc biệt là manh tràng Gây tiêu chảy và mất nước, ruột trở nên nhạt màu và căng bọng, đặc biệt là các manh tràng chứa dịch tiết và bọt khí (Hình 2.7) Triệu chứng tiêu chảy là do những type vi khuẩn có

độc tố gây bệnh đường ruột (ETEC - Enterotoxigenic E.coli), vi khuẩn gây bệnh

lý đường ruột (EHEC - Enterohemorrhagic E.coli), vi khuẩn gây xuất huyết đường ruột (EPEC - Enteropathohegenic E.coli), hay vi khuẩn E.coli có thể xâm nhập qua ruột (EIEC - Enteroinvaseive E.coli), các type này có các yếu tố độc

lực riêng Những chủng thuộc type EHEC và EPEC gọi chung là AEEC

(Attaching and effacing E.coli) gây bệnh dựa trên các yếu tố bám dính ETEC tiết

độc tố làm rút nước từ các mô ruột vào trong lòng ruột gây ra hiện tượng tiêu chảy

Ngoài ra, E coli gây viêm các mô của nhãn cầu (Panophthalmitis - Hình 2.8),

viêm khớp, tuỷ xương và hoại tử xương làm gà què quặt, mất nước và chậm lớn

Có trường hợp, xuất hiện nhiều u hạt trong đường ruột (Hjarre's disease), màng treo ruột và gan, nhưng không xuất hiện ở lách Bệnh tích quan sát tương tự như trong bệnh lao (Hình 2.6)

Hình 2.4 Lòng đỏ không tiêu,

viêm phúc mạc do E coli

(http://www.thepoultrysite.com)

Hình 2.5 Nhiễm trùng huyết cấp tính, gan hoại tử lốm đốm có

màu xám xanh do E coli

2.3 Phương pháp xác định MIC

2.3.1 Mục đích

Đối với phương pháp làm kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby Bauer chỉ cho kết quả theo định tính Muốn biết được nồng độ ức chế tối thiểu là bao nhiêu thì cần phải dùng đến phương pháp pha loãng liên tiếp Dựa trên sự tương quan giữa nồng độ pha loãng của kháng sinh đối với sự tăng trưởng của vi khuẩn trong mỗi nồng độ kháng sinh khác nhau mà ta xác định được nồng độ ức chế tối thiểu của kháng sinh có khả năng ngăn chặn sự tăng trưởng của vi khuẩn Người ta dùng phương pháp pha loãng liên tiếp để thực hiện những nghiên cứu chuyên sâu

về độ nhạy của vi khuẩn đối với kháng sinh, những thảo dược có hoạt chất kháng khuẩn hoặc để kiểm chứng lại phương pháp Kirby - Bauer , thường sử dụng môi trường NB (Nutrient Broth) hoặc môi trường BHI Bằng phương pháp này người

ta có thể xác định được giá trị MIC của một loại kháng sinh hay những thảo dược

có những hoạt chất kháng khuẩn đối với từng loại vi khuẩn

Kỹ thuật xác định nồng độ ức chế tối thiểu vi khuẩn có thể áp dụng cho các phòng thí nghiệm vi sinh Phương pháp chuẩn thức nhằm xác định nồng độ kháng sinh hay những chất có khả năng kháng khuẩn nhỏ nhất ức chế được sự phát triển của vi khuẩn để tính toán và đưa ra liều lượng điều trị thích hợp Phương pháp này sử dụng để giám sát dịch tể học nhằm đánh giá về tình trạng kháng thuốc của vi khuẩn nhằm đưa ra các biện pháp để khống chế và ngăn chặn

sự lây lan của vi khuẩn kháng thuốc trong cộng đồng

2.3.2 Nguyên lý

MIC là hàm lượng tối thiểu có thể ức chế sự phát triển của một loại vi khuẩn nhất định trong điều kiện nhất định (nuôi cấy ở nhiệt độ 370C / 24 giờ) Với phương pháp xác định MIC của kháng sinh dược liệu thì nồng độ kháng sinh được pha theo phương thức nồng độ kháng sinh trước khi pha sẽ giảm hoặc tăng 1/2 so với

Hình 2.8 Viêm mô nhãn cầu do E Coli

(http://www.thepoultrysite.com)

Hình 2.9 Dạng u hạt đường ruột do E coli

(http://www.thepoultrysite.com)

nồng độ sau khi pha.Tùy vào hàm lượng hoạt chất kháng khuẩn trong loại dược liệu cần thử nghiệm mà lượng dịch chiết dược liệu dùng cho thử nghiệm nhiều hay ít

Phương pháp này thường pha loãng kháng sinh theo 3 cách : một dãy ống nghiệm liên tiếp, trên các đĩa Petri chứa thạch MHA hay trên các giếng nhựa cứng

Nồng độ kháng sinh trong môi trường nuôi cấy khi đạt đến một nồng độ nhất định nó sẽ ức chế được sự phát triển của vi khuẩn, và bằng mắt thường đã có thể xác định được điều này Các chuẩn vi khuẩn nhất thiết phải được định danh và thuần khiết

2.4 Kỹ thuật chăm sóc nuôi dưỡng gà thịt thương phẩm

Úm gà con (sơ sinh đến 4 tuần tuổi): chuồng có chiều dài 2m, cao 0,9m kể cả chân Đáy là lưới sắt ô vuông 1 cm2, xung quanh chuồng dùng nẹp tre, gỗ hoặc lưới mắt cáo để bao quanh Mật độ nuôi úm: 1 ngày tuổi đến 2 tuần, nuôi 50 con/m2; 2 đến 4 tuần tuổi nuôi 25 con/m2 Vệ sinh và sát trùng chuồng úm, máng

ăn, máng uống 5-7 ngày trước khi nuôi, lót sàn bằng giấy báo suốt 3 ngày đầu, thay giấy mỗi ngày 1 lần

Gà thịt nặng cân có tốc độ sinh trưởng cao nên trong 2 tuần đầu có nhu cầu protein cao 22 – 23 %, sau đó giảm dần.Trong ngày đầu cho gà tập ăn trên khay bằng bắp hoặc tấm để gà con quen với việc mổ thức ăn và tiêu nhanh lòng đỏ trong ổ bụng Trong 3 tuần đầu cho ăn tự do suốt ngày đêm, như vậy gà con có thể nhận lượng thức ăn tối đa mà chúng có thể nhận để kích thích sự phát triển bộ máy tiêu hóa Cung cấp nước uống ngay từ đầu Cho gà ăn 12-18 giờ sau khi đưa vào úm Sưởi ấm: dùng bóng đèn điện 75W cho 1 m2 chuồng úm, trong suốt tuần đầu phải che kính xung quanh Điều chỉnh nhiệt độ sưởi ấm: khi nhiệt độ nóng quá mức (gà con tản xa đèn sưởi) thì nâng cao hoặc tắt bớt đèn sưởi, ngược lại nếu quá lạnh (gà con tụ lại dưới đèn) thì hạ thấp đèn, nhiệt độ sưởi vừa đủ là khi

gà con tản đều ở trong chuồng Sau 2 tuần, chỉ cần đèn chiếu sáng để gà ăn ban

đêm (Lê Thanh Hải và ctv., 2000) Ánh sáng cần để gà nhận biết và lấy thức ăn

Gà con trong tuần đầu cần chiếu sáng 23 giờ mỗi ngày, sau đó mỗi tuần giảm 2 -

3 giờ chiếu sáng mỗi ngày cho đến khi thời gian chiếu sáng còn 12 giờ/ngày và

ổn định suốt trong thời kỳ sinh trưởng (http://uv-vietnam.com.vn)

Bảng 2.2 Nhu cầu dinh dưỡng cơ bản của gà thịt

Chất dinh dưỡng Đơn vị 0 -2 tuần 3 -5 tuần Sau 5 tuần

(Nguồn: Bùi Đức Dũng và Lê Thị Hồng Mận, 1999)

Bảng 2.3 Nhiệt độ, ẩm độ trong chuồng úm gà con

Tuần tuổi Nhiệt độ dưới đèn (%) Nhiệt độ chuồng (o

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Phương tiện nghiên cứu

3.1.1 Thời gian, địa điểm, đối tượng nghiên cứu

Thời gian thực hiện từ tháng 08 năm 2014 đến tháng 12 năm 2014

Thử nghiệm MIC tại phòng thí nghiệm của Bộ môn Thú y, Khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ

Bố trí thí nghiệm tại hộ chăn nuôi gà ở phường Long Hòa, quận Bình Thủy, thành phố Cần Thơ

Đối tượng nghiên cứu : Giống gà Tàu lai Lương Phượng mua từ trại gà giống Hai

On ở thành phố Cần Thơ

3.1.2 Vật liệu và dụng cụ nghiên cứu

Mẫu vật thí nghiệm: Gà Tàu vàng lai gà Lương phượng, tỏi tươi

Hóa chất gồm có : Nước cất, NaCl 0,9%, BaCl2.2H2O, dung dịch H2S04 đậm đặc,

NA, NB, men Balasa

Dụng cụ thí nghiệm: Autoclave, microwave, micropipette, máy trộn Voltex, giấy lọc Whatman, tủ ấm, tủ sấy, tủ lạnh, cân điện tử, đĩa petri, que cấy, đèn cồn, ống nghiệm, ống đong, ống hút và một số dụng cụ khác

Thuốc và vắc-xin phòng bệnh: vắc-xin Lacsota (công ty Navetco), H5N1Subtupe-Re-5-Strain (công ty QHY- Trung Quốc), Newcastle, Đậu gà (Phân viện Thú y miền Trung), Canxi-Phos, Vimecox (công ty Vemedim), Glucose KC (Công ty Vemedim), Terra-colivet (công ty Vemedime)

-Hình 3.1 Terra-colivet (công ty Vemedim)

3.2 Phương pháp nghiên cứu

3.2.1 Xác định hàm lượng vật chất khô của tỏi

Ta có : % Vật chất khô = 100 - % Ẩm độ

Vì vậy, ta cần phải xác định hàm lượng nước có trong tỏi (ẩm độ hay thuỷ phần)

Nguyên lý xác định hàm lượng nước: dùng sức nóng để làm bay hơi hết hơi nước

có trong củ tỏi tươi Cân trọng lượng mẫu trước khi sấy khô, từ đó tính được phần trăm nước có trong củ tỏi tươi

Xác định trọng lượng vật chứa : chén sứ được đánh số và tráng bằng nước cất, sau đó được đem đi sấy ở nhiệt độ 105 0C trong 2 giờ Sau đó lấy ra và đặt chén

sứ vào bình hút ẩm để cân ngay ta được trọng lượng P1 Tiếp tục sấy ở nhiệt độ

30 °C trong 30 phút và cân trọng lượng lần hai là P2 Nếu P1 - P2 < 0.001g, ta

có trọng lượng chén sứ là P2

Cân mẫu vật: Cân 1g tỏi tươi đã được giã nhỏ (W) vào chén sứ đã được xác định trọng lượng P2 và đem đi sấy ở nhiệt độ 105 °C trong 5 giờ Sau đó lấy ra và đặt chén sứ vào bình hút ẩm để cân ngay ta được trọng lượng P’1 Tiếp tục sấy ở nhiệt độ 30 °C trong 30 phút và cân trọng lượng lần hai là P’2 Nếu P’1 - P’2 < 0.003g, ta có trọng lượng chén sứ và tỏi tươi là P’2

Hàm lượng nước còn lại:

3.2.2 Xác định MIC của tỏi trên vi khuẩn E coli

Chuẩn bị dịch chiết tỏi 20%

Pha dung dịch kháng sinh gốc ở nồng độ tiêu chuẩn là 200µg/ml

Lấy 30 gam tép tỏi tươi đã lột vỏ ngoài và rửa sạch với nước cất vô trùng Sau đó xay nhuyễn Cho nước cất vô trùng vào vừa đủ 150 ml ta được dịch chiết tỏi 20% Sau đó lọc qua giấy lọc Whatman với đường kính lỗ lọc 2 µm, ta được dịch chiết tỏi cần dùng

Pha dung dịch chuẩn độ đục MacFarland 0.5

Độ đục chuẩn MacFarland 0,5 được sử dụng để điều chỉnh độ đục của huyền dịch nuôi cấy vi khuẩn cho thử nghiệm tính nhạy cảm kháng sinh

Pha 100 ml dung dịch BaCl2 1,175 % (cân 1,175 gam BaCl2.2H2O pha với 100

ml nước cất)

Pha 100 ml dung dịch H2S04 1% (hút 1 ml dung dịch H2S04 đậm đặc pha với 100

ml nước cất) Hút 0,5 ml dung dịch BaCl2 1,175 % cho vào 99,5 ml dung dịch

100)22'(

W

P P

