Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của loài nguyệt quế ( Murraya paniculata (L..) Jack) và loài trầm bông đỏ ( Callistemon citrinus (Curtis) Skeel) ở Việt Nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ PHẠM NGỌC KHANH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LOÀI NGUYỆT

Trang 1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ

CÔNG NGHỆ VIỆT NAM

HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

PHẠM NGỌC KHANH

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LOÀI NGUYỆT QUẾ

(Murraya paniculata (L.) JACK) VÀ LOÀI

SKEELS) Ở VIỆT NAM

LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC

Hà Nội, 2015

Trang 2

(Murraya paniculata (L.) JACK) VÀ LOÀI

TRÀM BÔNG ĐỎ (Callistemon citrinus (CURTIS)

SKEELS) Ở VIỆT NAM

LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC

Chuyên ngành: Hóa học các hợp chất thiên nhiên

Mã số chuyên ngành: 62.44.01.17

Người hướng dẫn khoa học: 1 PGS.TS Nguyễn Mạnh Cường

2 GS.TS Young Ho Kim

Hà Nội, 2015

Trang 3

MỤC LỤC

Trang LỜI CAM ĐOAN

1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỌ CAM CHANH RUTACEAE VÀ CHI MURRAYA 3

1.1.1 Giới thiệu tổng quan về họ Cam chanh Rutaceae và chi Murraya 3

1.1.2 Tình hình nghiên cứu về hóa học của chi Murraya trên thế giới 5

1.2.1 Giới thiệu tổng quan về họ Sim Myrtaceae và chi Callistemon 20

1.2.2 Các nghiên cứu về thành phần hóa học của chi Callistemon trên thế

Trang 4

1.3.2 Phương pháp thử nghiệm tác dụng giãn mạch 28 1.3.3 Phương pháp ức chế enzyme epoxide hydrolase hòa tan (sEH) 29 1.3.4 Phương pháp xác định hoạt tính kháng viêm qua yếu tố NO 30

CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32

2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu 33 2.1.2 Phương pháp phân lập các hợp chất từ các dịch chiết 33 2.1.3 Các phương pháp xác định cấu trúc hóa học các hợp chất 33

2.2.1 Phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào 34

2.2.3 Phương pháp thử hoạt tính ức chế enzyme thủy phân epoxide hòa tan 36

2.3.1.1 Phân lập các chất từ cặn dịch chiết chloroform 39 2.3.1.2 Phân lập các chất từ cặn dịch chiết n-hexane 40

2.3.2.2 Phân lập các chất từ cặn dịch chiết EtOAc 43

2.3.2.3 Phân lập các chất từ cặn dịch chiết n-hexane 44

Trang 5

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50

3.1 THÀNH PHẦN HÓA HỌC LOÀi NGUYỆT QUẾ Murraya paniculata 50

3.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC LOÀI TRÀM BÔNG ĐỎ Callistemon

citrinus

67

3.4.1 Khảo sát hoạt tính độc tế bào của các dịch chiết cây trên dòng tế bào

ung thư gan HepG2

3.4.4 Tác dụng ức chế enzyme sEH của các hợp chất chiết tách từ loài Tràm

bông đỏ Callistemon citrinus

Trang 6

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan:

Đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi

Các số liệu và kết quả thu được trong luận án là hoàn toàn trung thực và chưa được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác

Tác giả luận án

Phạm Ngọc Khanh

Trang 7

Tôi xin trân trọng cảm ơn sự quan tâm giúp đỡ của Ban lãnh đạo Viện Hóa học

và Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên đã tạo điều kiện và giúp đỡ tôi hoàn thành luận án

Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới tập thể cán bộ Phòng Hoạt chất sinh học, Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên đã giúp đỡ tôi nhiệt tình trong suốt thời gian thực hiện luận án Tôi xin gửi lời cám ơn đặc biệt tới Th.S Hồ Việt Đức cho sự giúp

đỡ quý báu của Thạc sỹ trong quá trình tôi thực hiện luận án này

Tôi cũng cám ơn các đề tài nghiên cứu số 104.01-2010.25 do quỹ Phát triển Khoa học và Công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) và đề tài Hợp tác Nghị định thư Việt Nam – Hàn Quốc số 52/2011/NĐT của Bộ Khoa học và Công nghệ (MOST) đã tài trợ cho các nghiên cứu trong luận án này

Tôi xin chân thành cảm ơn đến các đồng nghiệp, bạn bè gần xa đã cổ vũ, động viên tôi hoàn thành tốt luận án này

Cuối cùng, tôi xin gửi lòng kính trọng và sự biết ơn sâu sắc đến gia đình tôi, đến bố mẹ đẻ và bố mẹ chồng tôi, đến chồng và con gái tôi, những người đã không ngại khó khăn, vất vả, đã luôn giúp đỡ tôi, tạo điều kiện cho tôi thực hiện tốt luận án

Tôi xin trân trọng cảm ơn!

Hà Nội, ngày tháng năm 2015

Tác giả luận án

Phạm Ngọc Khanh

Trang 8

dodecanoic acid

1-ylamino)carbonyl]amino]-chất chuẩn dương cho thử nghiệm ức chế enzyme sEH

ESI-MS Electron Spray

Tế bào ung thư gan người

HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác dị nhân qua nhiều

Trang 9

Correlation liên kết (HMBC) HSQC Heteronuclear Single Quantum

Coherence

Phổ tương tác dị nhân qua 1 liên kết (HSQC)

HR-ESI-MS High Resolution Electron

Spray Ionization Mass Spectroscopy

Phổ khối phân giải cao ion hóa bằng phun mù điện tử

IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế tối thiểu 50%

IR Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại

MTT

3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide

thuốc nhuộm dạng muối tetrazolium thử hoạt tính độc tế bào

NOESY Nuclear Overhauser Effect

Spectroscopy

Phổ NOESY

PHOME Chất phát huỳnh quang

3-phenyl-cyano(6-methoxy-2-naphthalenyl)methyl oxiraneacetic acid

Trang 10

DANH MỤC CÁC BẢNG

Trang

Bảng 1.1: Danh mục của các loài thuộc chi Murraya được chính thức công

nhận danh pháp khoa học trên trang web http://theplantlist.org (đến thời điểm

tháng 1.2015)

3

Bảng 1.2: Một số các hợp chất coumarin chiết tách từ cây M.exotica 6

Bảng 1.3:Các alkaloids chiết tách từ các loài thực vật chi Murraya 11

Bảng 1.4: Các PMFs chiết tách từ Murraya paniculata 14

Bảng 1.5:Hoạt tính sinh học của các dịch chiết cây và hoạt chất chiết tách

thuộc chi Murraya

15

Bảng 1.6: Hoạt tính sinh học của các coumarin chiết tách từ M paniculata 17

Bảng 1.7: Hoạt tính sinh học của các alkaloid chiết tách từ chi Murraya 18

Bảng 1.8: Danh mục của các loài thuộc chi Callistemon được chính thức công

nhận danh pháp khoa học trên trang web http://theplantlist.org (đến thời điểm

tháng 1.2015)

21

Bảng 1.9: Các triterpenoids chiết tách từ các loài thực vật chi Callistemon 24

Bảng 1.10: Hoạt tính sinh học của các dịch chiết cây thuộc chi Callistemon 25

Bảng 3.1: Dữ kiện phổ 1D- và 2D-NMR của MP.01 54

Bảng 3.2: Dữ liệu phổ NMR của MP.02 và so sánh với TLTK 56

Bảng 3.3: Dữ liệu phổ NMRcủa MP.03 và so sánh với TLTK 58

Bảng 3.4: Dữ kiện phổ 1H- và 13C-NMR của MP.04 và so sánh với TLTK 62

Bảng 3.5: Dữ liệu phổ 1D- và 2D-NMR của chất MP.05và so với TLTK 64

Bảng 3.6: Thông số phổ NMR của hợp chất MP.06 và của TLTK 66

Bảng 3.7: Phổ NMR của hợp chất CC.01 và so sánh với TLTK 69

Bảng 3.8: Số liệu phổ NMR của hợp chất CC.02 72

Bảng 3.9.Các thông số phổ NMR của hợp chất CC.03 và so sánh với TLTK 75

Bảng 3.10: Thông số phổ của hợp chất CC.04 và so sánh với TLTK 78

Bảng 3.11: Số liệu phổ NMR của hợp chất CC.05 và so sánh với TLTK 81

Trang 11

Bảng 3.16 : Số liệu phổ NMR của hợp chất CC.12 và so sánh với TLTK 101

Bảng 3.17 : Số liệu phổ NMR của các hợp chất Callocitrinone A (CC.13), B

(CC.14) trong MeOD, và Gallomyrtucommulone A (CC.12) trong DMSO-d6

104

Bảng 3.25: Dữ liệu phổ NMR của hợp chất CC.23 và CC.24 133

Bảng 3.26: Thông số NMR của hợp chất CC.25 và so sánh với TLTK 135

Bảng 3.29: Kết quả thử hoạt tính độc tế bào của các cây thuốc 142

Bảng 3.30: Giá trị IC50 và kiểu liên kết của các hợp chất coumarins MP.01-05

vào enzyme sEH

144

Bảng 3.31: Tác dụng ức chế sEH của các hợp chất chiết tách từ cây

Callistemon citrinus

149

Trang 12

Hình 1.2: A Hình vẽ mô tả đặc điểm thực vật và B Ảnh chụp cây Tràm Bông đỏ

(Callistemon citrinus (Curtis) Skeels)

22

Hình 1.3: Cấu trúc thành động mạch (Wikipedia) 30

Hình 1.4: Lộ trình chuyển hóa từ acid arachidonic thành các eicosanoids EETs có

khả năng điều trị bệnh tim mạch và bệnh viêm và tác dụng thủy phân của enzyme

sEH trên phân tử PHOME phát huỳnh quang DHETs, dihydroxyeicosatrienoic

Hình 3.4: Phổ proton 1H-NMR giãn của hợp chất MP.01 51

Hình 3.5:Phổ carbon 13C-DEPT của hợp chất MP.01 52

Hình 3.13:Phổ khối ESI-MS của hợp chất MP.04 59

Hình 3.14: Phổ HR-ESI-MS phân giải cao của hợp chất MP.04 59

Hình 3.15: Phổ proton 1H-NMR của hợp chất MP.04 60

Hình 3.16: Phổ 13C-NMR và DEPT của hợp chất MP.04 61

Hình 3.17: Phổ HMBC của hợp chất MP.04 61

Trang 13

Hình 3.30: Phổ HMBC và các tương tác HMBC trong phân tử CC.02 72

Hình 3.31: Phổ khối ESI-MS của hợp chất CC.03 73

Hình 3.32: Phổ 1H-NMR của hợp chất CC.03 74

Hình 3.33: Phổ 13C-DEPT-NMR của hợp chất CC.03 74

Hình 3.34: Phổ HMBC và các tương tác HMBC trong phân tử CC.03 75

Hình 3.35: Phổ khối ESI-MS của hợp chất CC.04 77

Hình 3.37: Phổ 13C-NMR của hợp chất CC.04 78

Hình 3.38: Phổ HMBC và các tín hiệu tương tác HMBC trong phân tử CC.04 78

Hình 3.39:Phổ khối ESI-MS của hợp chất CC.05 80

Hình 3.40:Phổ giãn 1H-NMR của hợp chất CC.05 80

Hình 3.42: Phổ HMBC và các tương tác HMBC của hợp chất CC.05 81

Hình 3.43: Phổ NOESY và các tương tác NOESY của hợp chất CC.05 81

Hình 3.44: Phổ khối ESI-MS của hợp chất CC.06 83

Hình 3.47: Phổ khối ESI-MS của hợp chất CC.07 85

Trang 14

Hình 3.60: Phổ NOESY và các tương tác NOESY trong hợp chất CC.09 93

Hình 3.61: Cấu trúc dạng hỗ biến của các phân tử hợp chất CC.08 và CC.09 94

Trang 15

Hình 3.81: Phổ HMBC vàcác tương tác HMBC chính của hợp chất CC.16 114

Hình 3.82: Phổ COSY và NOESY trong phân tử CC.16 115

Hình 3.83: Phổ khối lượng ESI-MS của hợp chất CC.18 116

Hình 3.104:Ảnh hưởng của dịch chiết metanol lên vòng động mạch chuột đã bị

gây co thắt trước bằng phenylephrine (Phe)- hoặc dung dịch muối K+ 60 mM

144

Hình 3.105: Ảnh hưởng của các hợp chất MP-01 và MP-02 đến sự giãn mạch

của vòng động mạch chuột gây co trước bằng dung dịch muối K+ 60 mM (n=4-8)

144

Hình 3.106: Tác động ức chế enzyme sEH của các hợp chất coumarins

(MP.01-05) xác định bằng phương pháp huỳnh quang

145

Hình 3.107: Ảnh hưởng của các hợp chất coumarins MP.04, 03 và 01 đến hoạt 149

Trang 16

độ enzyme sEH trong phản ứng thủy phân cơ chất PHOME

Hình 3.108: Cấu trúc thành mạch máu với 3 lớp tế bào 147

Hình 3.109: Mô phỏng tương tác của các coumarin với phân tử enzyme sEH 148

Hình 3.109: Tính toán năng lượng liên kết của các coumarin với các acid amin

cấu thành phân tử enzyme sEH

148

Hình 3.111: Tác dụng ức chế NO của các flavonoid 151

Hình 3.112: Tác dụng ức chế NO của các triterpenoid 151

Trang 17

DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ

Trang

Sơ đồ 1: Qui trình chiết và phân lập sơ bộ các chất trong lá và cành cây Nguyệt

quế (Murraya paniculata)

38

Sơ đồ 2: Qui trình phân lập các hợp chất từ dịch chiết chloroform từ lá và cành

cây Nguyệt quế (M paniculata)

42

Sơ đồ 3: Qui trình phân lập các hợp chất từ dịch chiết n-hexane từ lá và cành cây

Nguyệt quế (Murraya paniculata)

40

Sơ đồ 4: Quy trình chiết và phân lập sơ bộ các chất trong lá và cành cây Tràm

bông đỏ

41

Sơ đồ 5:Quy trình chiết và phân lập các chất từ cặn dịch chiết DCM 42

Sơ đồ 6:Quy trình phân lập các chất từ cặn dịch chiết EtOAc 43

Sơ đồ 7: Quy trình phân lập các chất từ cặn dịch chiết n-hexane 44

Trang 18

MỞ ĐẦU

Đất nước Việt Nam chúng ta có diện tích khoảng 330000 km2, trải dài 1650 km qua 15o vĩ, có khí hậu nhiệt đới gió mùa, hai mùa nóng ẩm, với hệ động thực vật đa dạng phong phú về chủng loại, quanh năm xanh tốt, và có nhiều công dụng phục vụ cuộc sống con người như là lương thực, chế biến đồ dùng nội ngoại thất, làm cảnh, làm thuốc,…Theo số liệu thống kê, hệ thực vật Việt Nam có trên 10000 loài, trong đó

có khoảng 3200 loài cây được sử dụng trong y học dân tộc Việc sử dụng các hợp chất thiên nhiên và các sản phẩm có nguồn gốc thiên nhiên làm thuốc chữa bệnh đang ngày càng hút sự quan tâm của các nhà khoa học cũng như của những nhà sản xuất dược phẩm Thuốc có nguồn gốc thiên nhiên thường có ưu điểm là độc tính thấp, ít tác dụng phụ, dễ hấp thu và chuyển hóa trong cơ thể hơn các sản phẩm tổng hợp

Cho đến ngày nay dân số thế giới đã đạt được bảy tỷ người, một con số rất lớn

và nhu cầu về chăm sóc sức khỏe, khám chữa bệnh vì thế cũng tăng theo Sự gia tăng

số người mắc bệnh, đặc biệt ở các nước nghèo, nơi nền y tế chưa phát triển nhưng lại cần các loại thuốc chữa bệnh hiệu quả, giá thành rẻ là những đòi hỏi cấp bách đối với các nhà khoa học

Hiện nay, được sự đầu tư của nhà nước, các phòng thí nghiệm đã được trang bị nhiều thiết bị hiện đại, phục vụ cho việc nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các loại cây thuốc thực vật, đóng góp cho việc định hướng sử dụng và phát triển nguồn tài nguyên thực vật trong đời sống dân sinh Sự phát triển vượt bậc của ngành sinh học phân tử cũng giúp cho việc sàng lọc, khảo sát các hoạt tính sinh học quý từ các cây thuốc và từ các hợp chất hóa học quen biết

Trong luận án, này, nhiệm vụ đặt ra là nghiên cứu thành phần hóa học các loại cây ở nước ta mà chưa được nghiên cứu ở Việt nam, đồng thời đánh giá hoạt tính sinh học của những chất thành phần được tách ra đó Trên cơ sở chọn lọc các loại cây thuốc đang được sử dụng trongy học dân gian để chữa bệnh; chọn lọc các loài cây trong các chi chứa nhiều hoạt chất có hoạt tính sinh học tốt đã được phân lập; và chủ yếu là dựa trên kết quả sàng lọc hoạt tính sinh học các dịch chiết thể hiện tác dụng sinh họctiềm năng, hai loài cây Nguyệt quế và Tràm bông đỏ đã được lựa chọn làm đối tượng nghiên cứu của luận án

Trang 19

Trong y học dân gian, loài Nguyệt quế (Murraya paniculata (L.) Jack) (lá) dùng

để hạ nhiệt, làm thuốc bổ, trị bệnh đi ngoài, trị đau người, trị bệnh kiết lỵ, làm hạ sốt

Loài Tràm bông đỏ (Callistemon citrinus (Curtis) Skeels, rễ và lá thường được dùng để

trị cảm lạnh,cảm sốt, ho, có tác dụng khử đờm, tiêu viêm Nhờ sự đa dạng về thành phần hóa học và tác dụng sinh học mà các loài cây này đã được nhận được sự quan tâm nghiên cứu của nhiều nhà khoa học trên thế giới Tuy nhiên, tính đến thời điểm luận án được công bố, chưa có công trình nào nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các loài trên ở Việt Nam

Nhằm mục đích đi sâu nghiên cứu về thành phần hóa học và tác dụng dược lý của hai loài cây này, chúng tôi đã lựa chọn đề tài:

“Nghiên cứu Thành phần Hóa học và Hoạt tính Sinh học của loài Nguyệt quế

(Murraya paniculata (L.) Jack) và loài Tràm bông đỏ (Callistemon citrinus

(Curtis) Skeels) ở Việt Nam''

được thực hiện nhờ có sự định hướng dẫn đường của các kết quả nghiên cứu tác dụng sinh học dịch chiết ban đầu, có nội dung nghiên cứu như sau:

1 Thu mẫu của hai loài nghiên cứu; điều chế cặn chiết và phân đoạn của hai loài nghiên cứu

2 Nghiên cứu thành phần hóa học của hai loài trên; phân lập và tinh chế các hợp chất thành phần từ cặn chiết

3 Xác định cấu trúc hóa học của các hoạt chất phân lập được

4 Đánh giá hoạt tính sinh học (độc tế bào, tác dụng tim mạch, kháng viêm) của một số hợp chất phân lập được

Trang 20

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỌ CAM CHANH RUTACEAE VÀ CHI MURRAYA

1.1.1 Khái quát về họ Cam chanh Rutaceae và chi Murraya

Họ Cam chanh (Rutaceae) là một họ thực vật trong bộ Bồ hòn (Sapindales) Các loài của họ này nói chung có hoa thường có mùi thơm, lá thường có tuyến tinh dầu, thân cây có kích thước từ cây thân thảo tới cây bụi và cây thân gỗ nhỏ Họ này trên thế giới có khoảng 161 chi và 2.070 loài, phân bố ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới Theo tác giả Nguyễn Tiến Bân, họ Rutaceae ở Việt Nam bao gồm khoảng 30 chi, 110

loài [1] Các chi như Clausena, Glycosmis, Micromelum, Zanthoxylum, và Murraya

phân bố khá phổ biến khắp cả ba miền Việt Nam [2] và có nhiều công dụng trong cuộc sống: về mặt kinh tế và thương mại (quả ăn được), công dụng trong mỹ phẩm và làm thuốc (tinh dầu, thành phần cây)

Các loài thuộc chi Murraya là loài cây bụi thấp, thân hóa gỗ, trồng làm cảnh vì

cây lá xanh quanh năm và hoa có mùi thơm ngát, thường nở thành chùm Cây được trồng và mọc hoang chủ yếu ở châu Á, từ Trung Quốc và Nam Ấn cho đến New Caledonia và châu Úc [3] và các đảo ở Thái Bình Dương, ở miền nam Trung Quốc và

vùng Đông Nam Á [4, 5] Theo tác giả Waterman & cs., trên thế giới, chi Murraya có

khoảng 13 loài [3] Bên cạnh đó, trung tâm dữ liệu thực vật Tropicos đã liệt kê 23 loài

Murraya, trong đó một số loài giống nhau về danh pháp khoa học nhưng khác nhau về

tên tác giả xác định Còn trang web http://theplantlist.org đã liệt kê có tới 34 loài

thuộc chi Murraya, tuy nhiên chỉ có 8/34 loài này được chính thức công nhận danh

pháp khoa học (bảng 1.1)

Bảng 1.1 Danh mục của 8/34 loài thuộc chi Murraya được chính thức công nhận trên

trang web http://theplantlist.org (đến thời điểm tháng 1.2015)

1 Murraya alata Drake 1892

2 Murraya crenulata (Turcz.) Oliv 1861

3 Murraya euchrestifolia Hayata 1916

4 Murraya koenigii (L.) Spreng 1817

5 Murraya kwangsiensis C.C Huang 1978

Trang 21

6 Murraya microphylla (Merr & Chun) Swingle 1942

7 Murraya paniculata (L.) Jack 1820

8 Murraya tetramera C.C Huang 1959

Trong số các loài thuộc chi Murraya, loài Nguyệt quế M paniculata là loài phân

bố rộng rãi nhất, cả ở khu vực nhiệt đới và cận nhiệt đới Ngoài tác dụng làm cảnh,

các loài Murraya còn có tác dụng làm thuốc chữa bệnh, làm gia vị nấu ăn Lá cây M koenigii còn là nguồn nguyên liệu để sản xuất cà ri, một loại gia vị phổ biến tại các

nước Nam Á như Ấn độ, Pakistan, Bangladesh, Srilanka

Ở Việt nam, theo Phạm Hoàng Hộ, có 4 loài Nguyệt quế gồm:1 Murraya paniculata (L.) Jack.: Nguyệt quế Cây gỗ nhỏ, cao 2-4m, lá kép mang 7 lá phụ, hoa trắng, chùm, thơm ngát về đêm;(2) Murraya alata Drake.: Nguyệt quế cánh; (3) Murraya glabra (Guill.) Sw.: Nguyệt quế nhẵn (Vương tùng); và (4) Murraya koenigii (L.) Spreng.: Nguyệt quế koenig, lá cà ri [6] Các loài thuộc chi Murraya

phân bố khá rộng rãi khắp đất nước Tất cả các thành phần của cây: lá, hoa, quả, thân cành, rễ đều được sử dụng cho các mục đích khác nhau như làm thuốc chữa bệnh, làm

gia vị thức ăn, phục vụ cho các nghi lễ tôn giáo, vv Lá nguyệt quế cánh M alata và glabra dùng để nấu canh, trái ăn được Lá cây cà ri M koenigii dùng làm gia vị cà ri

để tăng hương vị của món ăn, vỏ làm thuốc bổ, lá quả trị bệnh kiết lỵ, hạ nhiệt

Murraya paniculata

Loài Murraya paniculata còn có tên là Nguyệt quế hay Nguyệt quới, Nguyệt

quý, Nhâm hôi Cây có tên trong tiếng Anh là Orange jasmine, Chinese myrtle

Mô tả: Cây nhỏ hay cây nhỡ, cao 3-8m Thân và cành hình trụ, có vỏ mỏng màu

vàng nhạt Lá kép lông chim lẻ, dài 8-14 cm, gồm 5-9 lá chét mọc so le, hình trái xoan hoặc gần tròn, dài 2-8cm, rộng 1.2-3.5 cm, gốc hình nêm, đầu tù, mép nguyên, hai mặt nhẵn, gân thường mờ, chỉ gân chính rõ Cụm hoa mọc ở kẽ lá và đầu cành thành xim; Hoa màu trắng, hơi vàng, rất thơm; tương đối giống hoa chanh; đài có 5 răng nhỏ, có lông, tuyến; tràng có 5 cánh mỏng rời nhau, mọc cong xuống; nhị 10; chỉ nhị hình sợi, phình ở gốc, bao phấn nhỏ có 4 ngăn xếp chéo chữ thập; bầu thuôn,

2 ô Quả thịt, hình cầu hoặc hình trứng, có chấm nhỏ là những tuyến, có đài, khi chín màu đỏ; 1-2 hạt Mùa quả từ tháng 11 đến tháng 1 (hình 1.1)

Trang 22

Hình 1.1: A Hình vẽ cành mang quả và B ảnh chụp cây Nguyệt quế (Murraya

paniculata (L.) Jack) (nguồn ảnh: Wikipedia) Sinh thái: Cây ưa sáng và hơi chịu bóng Cây ra hoa quả nhiều hàng năm, tái

sinh tự nhiên chủ yếu từ hạt Sau khi chặt, phần thân và cành còn lại tái sinh chồi khỏe Cây trồng được bằng cành chiết hay giâm cành

Phân bố: chủ yếu ở các vùng nhiệt đới và á nhiệt đới Nam Á đến các nước ở vùng Đông và Đông Nam châu Á và xuống đến Australia Ở Việt Nam, M paniculata

mọc tự nhiên rải rác ở rừng cây bụi thấp vùng ven biển miền Trung Cây được trồng ở khắp mọi nơi với nhiều mục đích sử dụng khác nhau: làm thuốc, làm cảnh, làm hàng rào, uốn theo các thế chim thú tại các vườn cảnh

Sử dụng:Theo kinh nghiệm dân gian Việt nam, lá dùng để hạ nhiệt, trị đi ngoài,

chống thụ thai, trị đau nhức, chống bầm máu, làm thuốc trị đau răng [7] Trong nông nghiệp cây được sử dụng để bảo vệ cây trồng do có khả năng dẫn dụ loài rầy chổng

cánh (Diaphorina citri kuwayama) gây hại cây trồng

1.2.2 Tình hình nghiên cứu về hóa học của chi Murraya trên thế giới

Cho đến nay đã có các nghiên cứu hóa học của 13 loài chi Murraya, bao gồm M paniculata, M alata, M glabra, M gleinei, M koenigii, M exotica, M siamensis, M euchrestifolia, M crenulata, M microphylla, M ovatifoliolata, M stenocarpa, M omphalocarpa, vv Những loài trên được thu hái ở các nước như Srilanka, Thái lan,

Ấn độ, Đài loan, Malaysia, Nhật và Việt Nam Nghiên cứu thành phần hóa học của

loài Murraya đã cho thấy trong cây gồm có indol akaloid [8], flavonoid [9], tinh dầu

[10], và một số lượng lớn các coumarin [11-13] Cho tới nay đã có hơn 200 chất được

Trang 23

tách từ các loài thuộc chi Murraya, trong đó có hơn 94 chất lần đầu được phát hiện

trong tự nhiên Hầu hết các chất được phân lập từ lá, vỏ rễ, thân rễ và hoa

1.2.2.1 Các hợp chất coumarin từ chi Murraya

Các hợp chất coumarin phân lập từ chi Murraya chủ yếu từ các loài như M gleinei,

M paniculata M omphalocarpa, M exotica, vv khá phong phú Tác giả Ito và

Furukawa trong bài công bố năm 1987 [14, 15] đã phân lập và xác định cấu trúc của

17 coumarin trong đó có 8 chất mới từ lá loài M exotica (dịch chiết aceton), phân tách

trên cột silicagel với các dung môi rửa giải khác nhau như benzene (8 chất), benzene – i-Pr2O (2:1 và 1:1) (7 chất và 8 chất) và benzene-acetone (3:1) (3 chất) (bảng 1.2)

Bảng 1.2: Một số các hợp chất coumarin chiết tách từ cây M.exotica

Dung môi chiết benzene benzene – i-Pr 2 O (2:1) benzene – i-Pr 2 O (1:1) benzene-acetone (3:1)

chloticol (7) murralongin (20) murrangatin acetate (22) murranganon (24) murrayatin (26) murraol (28)

2’-oxo-3’-methylbutyl)

7-methoxy-8-(1’-acetoxy-coumarin (43) scopoletin (69)

meranzin hydrate

(12) minumicrolin (13) murrangatin (21)

Còn từ lá, hoa và rễ của loài Murraya paniculata có tới 59 coumarin đã được phân

lập

Từ lá M paniculata: Auraptenol (1), coumurrin (3), epimurpaniculol senecioate

(5), hainanmurpanin (6), isomurralonginol isovalerate (7), isomeranzin (10), meranzin

(11), meranzin hydrate (12), minumicrolin (13), minumicrolin acetonide (14),

microminulin (15), murpanidin (16), murpaniculol (17), murpaniculol senecioate (18), murracarpin (19), murralongin (20), murrangatin (21), murrangatin acetate (22), murrangatin isovalerate (23), murranganon (24), murrangonone (25), murrayatin (26), murrayacarpin A (27), murraol (28), omphalopinol (29), osthol (30), paniculatin (34), paniculin (35), panicunolol isovalerate (36), peroxymurraol (37), phebalosin (alosin) (39), yuehgesin A (40), yuehgesin B (40a), 2'-O-ethyl murrangatin (41), 7-methoxy-8- formylcoumarin (42), 7-methoxy-8-oxo-3'-methyl butoxy coumarin (44), 7-methoxy-

Trang 24

8-(1’-ethoxy-2’-hydroxy-3’-methyl-butenyl) coumarin (45),

7-methoxy-8-(2-hydroxy-1-methoxy-3-methyl-3-butyl) coumarin (46), methylpropyl) coumarin (47); Các coumarin bị thế hai lần: mexoticin (48), coumurrayin (49), isomexoticin (50), murraculatin (51), murrayacarpin B (52), omphalocarpin (53), omphalocarpin acetate (54), omphamurin isovalerate (55), 5- methoxy- murrayatin (56), 5,7-dimethoxy-8-(3’-methyl-2’-oxobutyl) coumarin (57), omphamurrayone (58), omphamurrayin (59), omphamurin (Sibirinol) (60), sibiricin (Isoaculeatin) (61), 8-formyllimettin (62), toddalenone (63); braylin (64), auraptene (65), umbelliferone (66), ayapanin (Hernierin) (67), sibiricol (68), scopoletin (69), murragleinin (70), murrayanone (71) [11, 16-20]

7-methoxy-8-(2-formyl-2-Từ hoa: Murrangatin (21), Murracarpin (19), omphalocarpin (53), scopolin (69a),

scopoletin (69), 5,7-dimethoxy-8-(3-methyl-2-oxobutyl)coumarin (57), murpanidin (16) [21]

Từ vỏ rễ: chiết tách được meranzin hydrate (12), meranzin (11), murrangatin

isovalerate (23), coumurrayin (49), omphamurin isovalerate (55), omphalocarpin (53), murragleinin (70) [8]

Auraptenol (1) casegravol (2) coumurrin (3) chloticol (4) epimurpaniculol

senecioate (5)

O

O O hainanmurpanin

Trang 25

murpanidin (16) murpaniculol (17) murpaniculol

phebalosin (alosin) (39)

yuehgesin A (40)

7-methoxy-8-(42)

(1’-acetoxy-2’- oxo-3’-methyl butyl)coumarin

7-methoxy-8-(43)

oxo-3'-methyl butoxy

7-methoxy-8-(2-coumarin (46)

formyl-2- methylpropyl)

7-methoxy-8-(2-coumarin (47)

Braylin (64)

R=OH, Umbelliferone

(66), R=OMe, Ayapanin (67)

Trang 26

auraptene (65) sibiricol (68)

R= OH scopoletin

(69), R= glc scopolin (69a)

5,7-dimethoxy-8-oxobutyl) coumarin (57)

(61)

Toddalenone (63)

Từ rễ loài Murraya alata Drake (Nguyệt quế nhẵn) thu hái tại khu vực Đông

Đông dương và Hải nam Trung quốc đã phân lập các coumarins phebalosin (39), coumurrayin (49), isomexoticin (50), sibiricin (61) và đặc biệt còn thu được lượng lớn alkaloid yuehchukene (114) [22]

M siamensis cũng là một loài thuộc chi Murraya, phổ biến ở Thái lan và Trung

Quốc, sử dụng trong y học dân tộc làm thuốc chữa lỵ, chất làm se, giảm đau, giảm sốt Các coumarin được chiết tách từ loài này bao gồm 7,8- dioxygenated coumarins

(Murrayacoumarin A (72), B (73) và C (74)), 5-geranyloxy-7-hydroxy-coumarin (75), furanocoumarin: columbianetin acetate (76) và coumarin đơn giản (77, 78) [23, 24]

Trang 27

Dimer coumarin hay bicoumarins là lớp chất coumarin mới Đến năm 2012, đã có

289 bicoumarin với cấu trúc đa dạng và hoạt tính sinh học phong phú đã được công bố [25]

Các bicoumarin là các hợp chất phổ biến trong các chi Citrinus và chi Murraya,

họ Rutaceae Biscoumarin bao gồm toddasin (79) và murramarin A (80) và

bismurrangatin (81) được chiết từ cây M exotica [26] Murramarin A (80) là sản

phẩm cộng hợp của hai coumarin đơn là meranzin hydrate (34) và hainanmurpanin (49) nối với nhau qua cầu ortho-ester [26] Tương tự, bismurrangatin (81) được tạo thành từ hai coumarin là murrangatin (6) và minumicrolin (6a) thông qua một cầu liên

kết ether [26]

Bismurrangatin (81) Murrangatin (21) Minumicrolin (13)

Trang 28

1.2.2.2 Các hợp chất alkaloid

Các carbazole alkaloid là thành phần chủ yếu của các loài Murraya như M

euchrestifolia, M koenigii Murrayafoline A-B (87, 87b) [27], murrayamine O (89) [28], Pyrayaquinone A-C (91a-c) từ cây M euchrestifolia [29] [30] Ngoài ra, trong thành phần cây M euchrestifolia có chứa rất nhiều alkaloid bao gồm girinimbine (82),

dihydroxygirinimbine (83), murrayaquinone A-D (90a-d), euchrestin A-E (84, 84b);

isomurrayafoline (86), (+)-murrayazoline (88) [31] Siamenol (110) được chiết từ M

siamensis [24] Các alkaloid chiết tách từ các loài thực vật chi Murraya được trình bày

trên bảng 1.3

Bảng 1.3 Các alkaloids chiết tách từ các loài thực vật chi Murraya

Tên cây và carbazole alkaloids

Murrayaquinone A-D (90a-d),

Pyrayaquinone A-C (91a-c)

Pyrrayafoline A-D (92a-d)

mahanimbinol (96), mahanimboline (96b)

mahanine (97); mahanimbicine (97a) Murrayacine (98)

murrayanine (99) Murrayastine (100); 1-Hydroxy-6,7- dimethoxy-3-methylcarbazole (100a) 3-Formylcarbazol (101); 3-Formyl-7- Hydroxycarbazol (101a)

kurryam (102) koenimbine (102a); koenine (102b)

5 Murraya siamensis Murrayacarine (112) [8]

Siamenol (110) [23] Tamynine (113) yuehchukene (114) [41]

Trang 30

Murrayacine (98) Murrayanine (99) R=OMe: Murrayastine

(100)

R= OH: dimethoxy-3-

1-Hydroxy-6,7-methylcarbazole (100a)

R=H:

3-Formylcarbazol (101)

R=OH: Hydroxycarbazol

3-Formyl-7-(101a)

Murrapanine (111) Murrayacarine (112) exozoline (109) Siamenol (110)

Tamynine (113) Yuehchukene (114) R 1 =OH, R 2 =R 3=OMe Kurryam (102)

R 1 = R 3 =H, R 2= OMe Koenimbine (102a)

R 1 = R 3 =H, R 2= OH Koenine (102b) Các bisalkaloid (±)-murrafoline (103), murranimbine (104), oxydimurrayafoline (105), murrastifoline A (106), bismurrayafolinol (107), bismurrayafoline A (108a)

được phân tách từ loàiM euchrestifolia [42] Bismurrayafoline B-E (108b-e) [38] và bismahanine (97c), Bispyrrafoline (92e) [39] được phân lập từ rễ câyM koenigii

(+)-murrafoline (103) Murranimbine (104) Oxydimurrayafolin

bis-7 A (82a)

hydroxygirinimbine

Trang 31

1.2.2.3 Các hợp chất flavonoid

Từ cây M paniculata trồng tại Indonesia, Kinoshita và cs đã chiết tách được các

hợp chất flavonoid [43] Do các vị trí trong vòng A và B của khung flavonoid bị thế rất nhiều bởi các nhóm methoxy, do vậy, các flavon này được gọi là các polymethoxyflavones (PMFs) [44] (bảng 1.4)

Bảng 1.4: Các PMFs chiết tách từ Murraya paniculata

trihydroxy-trimethoxyflavone

[43]

(umhengerin)

[45]

122 OMe OMe OMe OMe OMe OMe OMe heptamethoxyflavone

123 OMe OMe OMe OMe OMe OMe OMe heptamethoxyflavone

124 OMe OMe OMe OMe OMe OMe OMe heptamethoxyflavone

127 OMe OMe OMe OMe OMe OMe OMe 5’-methoxynobiletin [45]

Trang 32

Phần lớn các hợp chất PMF này được phân lập từ các bộ phận khác nhau của cây

Nguyệt quế Murraya paniculata bằng phương pháp HPLC-MS Ngoài ra, trong cây

Nguyệt quế còn có chứa các chalcone (137, 137a) đa nhóm thế methoxy

Từ tinh dầu lá cây M paniculata và M koenigii thu hái tại Bangladesh đã phát

hiện được 58 và 39 hợp chất [46] Công bố của tác giả Ng (Malaysia) [17] cho thấy

có đến 125 chất trong thành phần tinh dầu lá cây Các chất có thành phần cụ thể như

-elemene; (Z), (E)-famesene, linalool, azulene, ocimene, α-, β-pinene,

1,8-cineol (eucalypton), β-ocimene,  -terpinene, terpinene 4-ol , α-terpineol, vv

1.2.2.5 Các hợp chất khác

Murraxonin (138) Methyl 2-methoxy-5-hydroxy cinnamate (139) R=CH3

Methyl 2,5-dihydroxy cinnamate (139a) R=H

Một vài hợp chất khác như murraxonin (138) được chiết tách từ cây Murraya exotica Còn các hợp chất cinnamate (139, 139a) cũng đã được phân lập từ cây M paniculata

[45, 47]

1.2.3 Hoạt tính sinh học của các dịch chiết và hợp chất phân lập từ chi Murraya

Hoạt tính sinh học của các dịch chiết cây và hoạt chất chiết tách thuộc chi

Murrayađược trình bày trong bảng sau

Bảng 1.5: Hoạt tính sinh học của các dịch chiết cây và hoạt chất chiết tách thuộc chi

[48]

[49]

Trang 33

2 chống ung thư vú M koenigii carbazole alkaloids [50]

3 Hạ đường và mỡ máu (trị

tiểu đường và mỡ máu)

M koenigii carbazole alkaloids

[51-54]

4 chống thoái hóa thần

kinh, bệnh Alzheimer vv

M koenigii carbazole alkaloids [55]

5 Tác dụng giãn mạch M paniculata coumarins [56]

6 Chống oxy hóa M koenigii

M exotica

flavones coumarins

[57] [58]

[59]

Dịch chiết cây M euchrestifolia với thành phần chính là các carbazole alkaloids

có tác dụng gây sự chết theo chương trình cho các tế bào ung thư bạch cầu HL-60

[48] Trong khi đó, dịch chiết lá cây nguyệt quế M koenigii có tác dụng hạ hàm lượng

mỡ, cholesterol và đường trong máu chuột béo phì [51]; hạ lượng đường trong nước tiểu còn tương đương bậc 2 trên chuột bị gây bệnh tiểu đường độ 4 [52, 53] Dịch

chiết lá cây M koenigii còn có tác dụng chống oxy hóa, kìm hãm proteasome, ức chế

sự tăng sinh và gây chết cho các tế bào ung thư vú [50], loại trừ gốc tự do in vitro và làm giảm stress oxy hóa in vivo, nên được sử dụng làm thực phẩm bổ trợ sức khỏe đặc

biệt cho đối tượng người cao tuổi chống lại các bệnh mãn tính liên quan đến gốc tự do như bệnh thoái hóa thần kinh, bệnh Alzheimer vv.[55]

Các hợp chất được tìm thấy chủ yếu trong chi Murraya chủ yếu thuộc lớp chất

coumarin, alkaloid và flavonoid Về mặt y học, chúng thể hiện phổ hoạt tính khá rộng bao gồm chống đông máu, kháng khuẩn, kháng nấm Về mặt đời sống thực tiễn, chúng còn được dùng làm hương thơm tự nhiên, chất kháng khuẩn, chất tạo màu thiên nhiên

Coumarin: Coumarin là những hợp chất phổ biến trong tự nhiên, chúng được tìm

thấy khá nhiều trong các loài thuộc chi Murraya đặc biệt là trong cây M paniculata

(bảng 1.6)

- Chống bệnh thoái hóa, bệnh ung thư: Auraptene (65) là một monoterpene coumarin

ether có tác dụng chống thoái hóa, chống ung thư [60] Ngoài ra, chất còn có nhiều tác

Định dạng
Số trang	66
Dung lượng	36,32 MB