Nghiên cứu cấu trúc và hoạt tính sinh học một số hợp chất phân lập từ cây cọ hạ long (Livistona halongensis) và cây rau má (Centella asiatica)

Nghiên cứu cấu trúc và hoạt tính sinh học một số hợp chất phân lập từ cây cọ hạ long (Livistona halongensis) và cây rau má (Centella asiatica), luận án hoá học dành cho các bạn học tập, nghiên cứu cũng như tìm hiểu trong quá trình học.

MỞ ĐẦU Công nghiệp phát triển, đời sống người nâng cao mặt trái thảm họa môi trường Dẫn đến, người gặp phải chứng bệnh nan y ung thư, HIV/AIDS, bệnh tim mạch dịch bệnh phức tạp, nguy hiểm xuất gần đây: viêm đường hô hấp cấp SARS, cúm gia cầm H5N1, cúm lợn H1N 1, v.v đồng thời số loài động, thực vật bị đưa vào sách đỏ tuyệt chủng Thực tế thúc đẩy nhà khoa học phải tìm thuốc chữa bệnh có tác dụng chọn lọc, hiệu cao giá thành rẻ để điều trị bệnh hiểm nghèo tìm cách bảo vệ, bảo tồn loài động thực vật quý Một đường hữu hiệu để phát chất có hoạt tính tiềm năng, phát triển thành thuốc chữa bệnh cho người, gia súc trồng từ hợp chất thiên nhiên Trải qua hàng triệu năm tiến hóa hợp chất thiên nhiên có khả tương thích với dễ dàng, tương đối phù hợp với thể sống, độc đặc biệt thân thiện với môi trường Từ thiên nhiên người ta phân lập nhiều hợp chất có hoạt tính q để làm thuốc chữa bệnh phục vụ cho đời sống xã hội Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sử dụng trực tiếp để làm thuốc, chúng cịn dùng làm "Mơ hình" cho nghiên cứu tổng hợp bán tổng hợp loại thuốc "Mô tự nhiên" đường đặc biệt hiệu kinh tế để tìm loại thuốc nhằm chữa bệnh cho người, gia súc trồng để tạo loại biệt dược, thực phẩm bổ dưỡng phục vụ đời sống người "Nghiên cứu sàng lọc mặt hóa học nguồn tài nguyên thiên nhiên" hướng nghiên cứu nhà khoa học nước đặc biệt quan tâm Việt Nam nước nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nên có nguồn thực vật đa dạng phong phú với khoảng 12.000 lồi, nguồn tài ngun thiên nhiên vơ quý giá Trong số có nhiều loại cỏ sử dụng để làm thuốc chữa bệnh cho người, gia súc trồng, nhiên hiệu kinh tế hạn chế việc khai thác sử dụng dựa vào kinh nghiệm dân gian Trong năm gần đây, ngành hóa học hợp chất thiên nhiên trang bị nhiều phương tiện đại, phương pháp nghiên cứu tiên tiến áp dụng nên nhiều cơng trình khoa học nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số chi, loài, họ thực vật Việt Nam cơng bố, góp phần làm sáng tỏ tính tăng cường hiệu khai thác sử dụng nguồn tài nguyên thiên nhiên Qua tra cứu họ Cau, giới có khoảng 236 chi, 3500 loài Ở Việt Nam bao gồm phân họ, tơng, 15 phân tơng, 39 chi, 103 lồi, thứ Theo thống kê TS Trần Thị Phương Anh [1] họ Cau Việt Nam có 39 chi, 103 lồi thứ, phát thêm 26 loài họ Cau thấy Việt Nam, đồng thời bổ sung thêm số loài cho khoa học, có nhiều lồi đặc hữu Việt Nam, nhiều loài đứng trước nguy tuyệt chủng ghi Sách đỏ Việt Nam Trong họ Cau có nhiều gắn liền với đời sống nhân dân ta từ lâu đời Ví dụ: Cây cau, dừa, cọ, song, mây, Bao đời nay, người Việt Nam số nơi giới Trung Quốc, Australia, sử dụng loài họ cau để làm nhà, sản xuất đồ thủ công mỹ nghệ, làm thuốc, làm thực phẩm vv Tuy nhiên có cơng trình nghiên cứu cấu trúc hố học hoạt tính sinh học họ Cau Việt Nam công bố Cây rau má loài thường thấy vùng có khí hậu nhiệt đới Trong dân gian rau má sử dụng để làm rau ăn, làm nước giải khát đặc biệt sử dụng nhiều thuốc để trị số chứng bệnh thường gặp người gia súc Ở Việt Nam, rau má quen thuộc với Xuất phát từ vấn đề trên, chọn đề tài “Nghiên cứu cấu trúc hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ cọ hạ long (Livistona halongensis T.H Nguyen & Kiew) Rau má [Centella asiatica (Linn.) Urban]” Với mục tiêu trên, luận án đặt nhiệm vụ là: - Thu thập mẫu thực vật xử lý mẫu - Điều chế cao chiết từ mẫu thực vật - Phân lập hợp chất từ cao chiết mẫu thực vật - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập - Thử hoạt tính số dịch chiết hợp chất phân lập Chương TỔNG QUAN 1.1 Chi Cọ (Livistona R Br ) Trên giới, chi Cọ (Livistona R.Br.) thuộc họ Cau (Arecaceae) có khoảng 36 lồi, phân bố Nam Đơng Nam châu Á, Oxtrâylia, Châu Phi rải rác số khu vực giới [2] Ở Việt Nam, cọ mọc hoang phổ biến vùng đồi núi, trung du Chúng trồng làm cảnh nhiều nơi, gồm có bốn lồi sau : - Cọ hạ long (Livistona halongensis T.H Nguyen & Kiew) - Cọ [Livistona saribus (Lour.) Merrie ex A Chev.], có tên kè đỏ - Cọ xẻ [Livistona chinensis (Jacq.) R.Br.], gọi kè tàu - Kè bắc (Livistona tonkinensis Magalon) Sau xin giới thiệu tóm tắt số lồi chi cọ: 1.1.1 Đặc điểm thực vật ứng dụng chi Cọ 1.1.1.1 Cây cọ xẻ (Livistona chinensis): Cây cọ xẻ giới thiệu hình 1.1 Hình 1.1 Cây cọ xẻ Cây cọ xẻ cịn gọi kè tàu có nguồn gốc Nam Trung Quốc, Ấn Độ, Nam Nhật Bản, Đài Loan Việt Nam, trồng rộng rãi nhiều vùng nhiệt đới, nhiệt đới nhiều đảo biển Ở Việt Nam, phân bố Yên Bái, Tuyên Quang (Chạm Chu), Bắc Kạn, (Chợ Đồn), Thái Nguyên (Thần Sa, Đại Từ), Quảng Ninh (Ba Mùn), Hà Nội, Ninh Bình ), Kon Tum (Đắc Glei) Tên gọi Livistona chinensis nhà khoa học người Áo Nicolaus Joseph von Jacquin phát lần Trung Quốc công bố tên khoa học Latania chinensis Jacq (1801) Về sau nhà khoa học người Anh Robert Brown nhà khoa học người Đức Karl Friedrich Philipp von Martius công bố lại tên Livistona chinensis (Jacq.) R.Br ex Mart (1838); tính ngữ “chinensis” có nghĩa Trung Quốc, tên tiếng Anh Chinese fan palm Chinese fountain palm Ở Trung Quốc gọi Bồ Quì [3] Cây mọc đơn độc cao – 15 m, đường kính 20 – 30 cm, hình trụ, nhẵn, có nhiều vịng sẹo để lại Lá hình quạt, xẻ thuỳ hình chân vịt thành nhiều thuỳ Bẹ có sợi, mép có gai dẹp, cong Lưỡi gốc phiến hình bán nguyệt có chóp Thuỳ hình đường, đỉnh thuỳ xẻ đơi sâu 10 – 15 (30) cm, thuỳ rủ xuống Cụm hoa phân nhánh – lần, bắc cỡ 26 x cm, sống, xẻ bên, lơng, nhánh mảnh, dài 10 – 15 cm Hoa thành nhóm – hoa đính mấu lồi Hoa hình cầu, có cạnh, đường kính khoảng mm; đài 3, tràng hợp gốc, xẻ thùy, hình tam giác; nhị 6, nhị ngắn, bao phấn hình bầu dục; bầu hình trứng ngược; vịi nhuỵ ngắn Quả hình bầu dục, cỡ – 1,5 x 0,8 – cm có màu xanh lục Hạt 1, hình bầu dục [1] Cây hoa tháng 4, có tháng – [4] Thu hái hạt suốt mùa thu, mùa đông, thu hái rễ quanh năm, rửa sạch, phơi khô 1.1.1.2 Cây cọ (Livistona saribus (Lour.) Merrie ex A Chev.): Cây cọ giới thiệu hình 1.2 Hình 1.2 Cây cọ Là loài mọc đơn độc, thân cột, mang tập trung đỉnh thân tạo thành vịm tán hình cầu Thân cao 20 – 25 m, đường kính 15 – 30 cm, hình trụ, non có nhiều cuống cịn tồn tại, sau nhẵn, có sẹo để lại Về tên gọi, ngồi cọ cịn có nhiều tên khác cọ đỏ, cọ nam, kè, gồi…, tên tiếng Trung Đại diệp Bồ quì, tên tiếng Anh Taraw palm Xét nguồn gốc, vào kỉ 19 người ta cho loài phát Việt Nam Năm 1836, nhà khoa học người Hà Lan Karl Ludwig von Blume công bố tên khoa học Saribus cochinchinensis Đến năm 1837, nhà khoa học người Đức Karl Friedrich Philipp von Martius công bố lại tên khoa học Livistona cochinchinensis Năm 1919, nhà khoa học người Hoa Kỳ Elmer Drew Merril nhà khoa học người Pháp Auguste Jean Baptiste Chevalier công bố lại tên khoa học Livistona saribus [5] Ở nước ta, mọc hoang vùng đồi trung du miền Bắc miền Trung, đặc sắc rừng ven suối, đất ẩm vùng núi tới 1500m Cây Phân bố rải rác rừng nhiệt đới Hà Giang (Bắc Quang), Bắc Kạn (Na Rì), n Bái, Phú Thọ, Vĩnh Phúc, Hải Phịng (Cát Bà), Thái Nguyên, Hà Tây (Ba Vì: Thủ Pháp), Hà Nội, Quảng Trị, Lâm Đồng (Langbiang), Đồng Nai (Biên Hồ), TP Hồ Chí Minh (Thủ Đức) Cây có dáng đẹp trồng trang trí khu du lịch, resort, công viên làm cảnh nhỏ trồng chậu dùng trang trí nội thất Cây hoa vào tháng 12-2, vào tháng 5-7 hàng năm [4] 1.1.1.3 Cây cọ bắc (Livistona tonkinensis): Là đặc hữu Việt Nam Thân thẳng, cao 25 – 30 m, đường kính khoảng 25 cm Khi non có nhiều cuống cịn tồn tại, sau nhẵn, có sẹo để lại Lá xẻ thuỳ hình chân vịt cách gốc 80 – 90 cm thành 50 – 60 thuỳ Bẹ có sợi Mép cuống có gai dài 2,5 cm, lưỡi gốc phiến hình bán nguyệt có chóp, cỡ x cm Thuỳ hình đường, thuỳ to cỡ 130 – 150 x cm, đỉnh thuỳ xẻ đôi sâu khoảng cm, thuỳ thẳng đứng Cụm hoa dài 60 – 70 cm; bắc cỡ 18 x cm, sống, xẻ bên, có lơng rải rác Nhánh dài khoảng 20 cm, mảnh, hoa mọc mẫu lồi Quả bầu dục, cỡ – x – 1,5 cm, xanh màu ơliu, có cuống dài khoảng mm Cây mọc đồi, núi đất, có vào tháng đến tháng 10 Cây trồng nhiều Bắc Việt Nam: Bắc Kạn (Chợ Đồn), Sơn La (Xuân Nha), Lào Cai (Bảo Thắng), Tuyên Quang (Chạm Chu), Phú Thọ (Xuân Sơn), Thanh Hoá (Bá Thước, Quan Hoa) [1] 1.1.1.4 Cây cọ hạ long (Livistona halongensis): Cây cọ hạ long giới thiệu hình 1.3 Đây 13 loài thực vật đặc hữu Vịnh Hạ Long, phát từ năm 1999, loài cho khoa học, đặc trưng cho hệ sinh thái rừng núi đá đảo miền Bắc Việt Nam Cây đơn độc, cao đến 10 m, đường kính khoảng 20 cm Lá xẻ thuỳ hình chân vịt thành nhiều thuỳ; bẹ có sợi, mép có gai, mặt có sọc màu vàng; lưỡi gốc phiến xẻ thùy tròn Cụm hoa thẳng, dài Cuống cụm hoa kéo dài nên cụm hoa dài lá; bắc hình ống Hoa nhỏ, hình trứng, màu vàng kem nhạt, vươn lên tán; đài nhẵn, hình ống, đỉnh xẻ thuỳ Tràng dài khoảng mm, xẻ thuỳ; nhị dài khoảng mm; bầu hình bầu dục, vịi nhuỵ nhỏ Quả hình cầu, đường kính – 1,2 cm, màu xanh đậm sáng Hình 1.3 Cây cọ hạ long Cây hoa từ tháng đến tháng 6, có vào tháng [1] Cây có hình thái đẹp, thích hợp làm cảnh, trồng khu du lịch nên có giá trị kinh tế cao, số lượng cịn lại [6] 1.1.1.5 Ứng dụng số loài chi cọ: Các loại cọ xẻ (Livistona chinensis) kè nam (Livistona saribus; L cochinchinensis Mart.) có hình dáng đẹp nên nước ta số nước trồng chủ yếu để làm đai xanh, tôn tạo cảnh quan cho nhiều không gian xanh đô thị, thường gặp công viên, khu văn hóa, biệt thự Ở vài vùng cọ xẻ, kè nam mọc tự nhiên, người dân lấy non chầm nón, kết áo mưa (tơi); già dùng để lợp nhà, đan túi xách, đan mũ, dệt chiếu, làm quạt Thân già dùng làm cột, làm máng nước Gốc chồi dùng làm rau ăn Quả cọ nấu chín để ăn ép lấy dầu, đặc sản miền tây Nghệ An [10] Rễ kè nam dùng chữa bạch đới, khí hư, thường phối hợp với vị khác rễ cau, rễ tre, rễ móc với lượng nhau, sắc đặc uống làm lần ngày Liều dùng hàng ngày - 12 g [11] Theo đông y, cọ xẻ (Livistona chinensis) có vị chát, tính bình, hạt làm tiêu ung thư, khối u, rễ có tác dụng giảm đau [11, 12] Y học dân gian Trung Quốc dùng hạt cọ xẻ chữa ung thư mũi, họng, thực quản, ung thư rau, bệnh bạch cầu Rễ dùng để trị hen suyễn, giảm đau tiêm Liều dùng 15-30 g, dạng thuốc sắc Lá để trị chảy máu tử cung 1, 11] Đơn thuốc chứa cọ xẻ Trung Quốc: - Chữa ác tính: Dùng hạt cọ xẻ 30 g, nấu với thịt lợn nạc 30 g - Chảy máu tử cung: Dùng cuống cọ xẻ đốt thành tro, hoà vào nước uống, lên nấu nước uống - Trong vị thuốc dân gian, hạt cọ xẻ L chinensis R.Br có tên “Quỳ thụ tử” 1.1.2 Tình hình nghiên cứu chi cọ 1.1.2.1 Thành phần hóa học * Nghiên cứu nước: Trước đây, chưa có cơng trình nước nghiên cứu thuộc chi cọ Đầu năm 2011, Giang Thị Kim Liên cộng thơng báo tạp chí Hoá học phân lập hợp chất từ dịch chiết cọ xẻ (Livistona chinensis), gồm: 5,7,4’-trihydroxy–3’,5’–dimetoxy– flavon (tricin, 1), 2–(hydroxy–metyl) phenyl–D–glucopyranosid (salicin, 2), stigmast–5,22–dien–3β–O–β–D–glucopyranosid (stigmasterol glucosid, 3), saccharose (4) [13] OCH3 3' 2' HO O 4' OH 5' 1' OCH3 6' 10 OH O Tricin HO HO O O OH HO OH Salicin 29 28 22 21 24 27 25 19 12 13 14 15 10 H HO 5' 4' O H O HO HO 16 H 6' 23 17 11 18 20 1' 2' 3' HO Stigmasterol glucosid 10 26 Bảng 3.7 Số liệu phổ 1H- 13C-NMR chất 82, 83, axit asiatic axit madecassic TT Chất 82 (RM1) C 48,0 69,7 78,2 10 11 12 44,1 48,2 19,1 33,6 40,7 48,5 38,9 24,5 126,6 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 139,8 43,4 29,1 25,3 48,7 54,3 40,4 40,4 31,6 38,1 66,3 24 25 26 27 28 29 30 13,9 17,6 17,7 24,1 181,5 17,8 21,5 H (Hz) 3,71 (1H, m) 3,38 (d, J = 9,5Hz) 5,26 (1H, br.s) 3,29 (d, J =11,0Hz) 3,53 (d, J=11,0Hz) Axit asiatic [79, 80] C 47,8 69,4 78,2 43,8 48,2 18,5 32,9 40,2 47,9 38,3 23,8 125,9 139,2 42,8 28,6 24,8 48,4 53,7 39,8 39,7 30,9 37,4 66,4 H (Hz) 3,64 (1H, m) 3,30 (d, J = 9,6Hz) 5,16 (1H, br.s) 3,23 (d, J = 11,2Hz) 3,30 (d, J = 11,2Hz) 14,2 17,4 17,4 23,8 180,8 17,3 21,3 Chất 83 (RM2) C 50,3 69,6 78,2 44,7 48,5 68,4 41,2 39,7 48,7 38,1 24,2 126,9 139,0 43,8 28,8 24,5 48,6 54,3 40,4 40,4 31,6 38,5 65,9 15,3 19,2 19,1 23,9 181,6 17,6 21,5 104 H (Hz) 3,7 (1H, m) 3,6 (1H, d, J = 11,0Hz) 4,4 (1H, m) 5,3 (1H, m) 3,30 (d, J = 11,0Hz) 3,54 (d, J = 11,0Hz) Axit madecassic [81] C 50,5 69,1 4,2 (1H, m) 78,5 3,4 (d, J = 10,4Hz) 44,5 48,7 67,7 41,1 39,7 48,8 38,1 24,0 126,5 H ( Hz) 4,8 (1H, m) 5,5 (dd, J=3,4; 3,7Hz) 138,4 43,2 28,8 24,8 48,6 53,4 39,5 39,6 30,9 37,4 66,2 3,29 (d, J=11,0Hz) 3,54 (d, J=11,0Hz) 15,9 19,4 19,3 23,8 180,8 17,3 21,2 Các chất tách xác định cấu trúc hóa học luận án đưa bảng 3.8 đây: Bảng 3.8 Công thức hợp chất phân lập từ cọ hạ long rau má STT KÝ HIỆU CÔNG THỨC TÊN GỌI Cyclomusalenon Lần phân lập 67 từ chi Cọ, họ Cau LHVn6 Cycloleucadenon Lần phân lập 68 từ chi Cọ, họ Cau LHVn5a 3β- Cyclomusalenol Lần phân lập 69 từ chi Cọ, họ Cau LHVn4 105 Stigmast-4-en-3-on Lần phân lập LHRn7 70 từ chi Cọ, họ Cau = LHRn3 Stigmasterol Lần phân lập 71 từ chi Cọ, họ Cau CT1 β-Sitosterol Lần phân lập 72 từ chi Cọ, họ Cau LHVH2 6-O-acetyl-2R,8-dimetyl-2(4R,8R,11-trimetyltridecence- 73 12)chroman LHRn2 Chất 106 Stigmast-4-en-3-on LHRn3 74 Lần phân lập = từ chi Cọ, họ Cau LHRn7 3,5,3’,5’-tetrahydroxy-4metoxystilben 75 LHRm1 2S,3S-3,5,7,3’tetrahydroxy-5’metoxyflavan 76 LHRm2 Chất β-sitosterol-3-O-β–Dglucopyranosid 77 (β-sitosterol glucosid) LHRm3 107 2R,3R-3,7,3’-trihydroxy-5’metoxyflavan 5-O-- 78 glucopyranosid LHRm4 Chất 79 LHRm6 Sacharose octaacetat 82 RM1 Axit asiatic 83 RM2 Axit madecassic 108 3.3 Kết thử hoạt tính sinh học 3.3.1 Kết thử hoạt tính sinh học dịch chiết từ cọ hạ long Các mẫu thử ký hiệu bảng 3.9: Bảng 3.9 Ký hiệu mẫu dịch chiết SỐ TT MẪU DỊCH CHIẾT BỘ PHẬN THỰC VẬT DUNG MÔI CHIẾT LHVn Vỏ n-hexan LHVd Vỏ diclometan LHVm Vỏ metanol LHRn Rễ n-hexan LHRd Rễ diclometan LHRm Rễ metanol *) Hoạt tính gây độc tế bào (Bảng 3.10) Bảng 3.10 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dịch chiết Kết quả: giá trị IC50 (g/ml) STT Tên mẫu KB LU MCF7 HepG2 LHRm >128 >128 >128 >128 LHRd 104,96 24,15 >128 96,48 LHRn >128 >128 >128 >128 LHVm >128 >128 >128 >128 LHVd >128 >128 >128 >128 LHVn >128 >128 >128 >128 CTK Ellipticin 0,31-0,62 0,31-0,62 0,31-0,62 0,31-0,62 - Qua kết bảng 3.10 cho thấy: Dịch chiết diclometan (LHRd) từ rễ cọ hạ long có hoạt tính ức chế phát triển dòng tế bào ung thư thử nghiệm KB (tế bào ung thư biểu mô), LU ( tế bào ung thư phổi), HepG2 (tế bào ung thư gan) Trong hoạt tính ức chế tế bào ung thư phổi mạnh nhất, với IC50=24,15 (g/ml), sau đến hoạt tính tế bào ung thư gan (IC50=96,48 109 g/ml) Các dịch chiết khác hoạt tính dịng tế bào ung thư thử nghiệm (IC50>128 g/ml) *) Hoạt tính chống oxi hố (Bảng 3.11) Bảng 3.11 Kết thử hoạt tính chống oxi hoá dịch chiết Nồng độ chất thử % ức chế hoạt động enzim (g/ml) LHRm LHRd LHRn LHVm LHVd LHVn RES 128 71 35 100 34 34 100 32 51 10 25 11 88 0 8 58 0 0 0 35 0,5 0 0 0 23 >128 >128 >128 104,00 5,91 31,47 76,39 IC50(g/ml) Ghichú: Chất tham khảo RES: Resveratrol Kết bảng 3.11 cho thấy: Dịch chiết metanol rễ, dịch chiết nhexan dịch chiết metanol vỏ cọ hạ long có hoạt tính kháng oxi hoá mức độ IC50 : 31,47; 76,39 104,0 μg/ml tương ứng Các dịch chiết khác hoạt tính chống oxy hóa (IC50>128 μg/ml) *) Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (Bảng 3.12) Bảng 3.12 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Nồng độ ức chế 50% phát triển vi sinh vật nấm IC50(μg/ml) STT Tên mẫu Gram (-) Gram (+) Nấm Lactobacillus fermentum Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Salmonella enterica Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Candida albicans LHRn >256 >256 186,75 >256 >256 >256 >256 LHRd 12,57 155,83 56,68 >256 >256 >256 >256 LHRm 112 >256 >256 >256 >256 >256 >256 LHVn >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 LHVd >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 LHVm >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 110 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định dịch chiết bảng 3.12 cho thấy: - Dịch chiết diclometan rễ cọ hạ long (LHRd) thể khả kháng chủng vi khuẩn kiểm định Gram (+) Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis Staphylococcus aureus, với giá trị IC50 12,57; 155,83 56,68 μg/ml tương ứng - Dịch chiết n-hexan rễ cọ hạ long (LHRn) thể khả kháng vi khuẩn Gram (+) Staphylococcus aureus với giá trị IC50 : 186,75 μg/ml Các dịch chiết khác khơng thể hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (IC50>256 μg/ml) 3.3.2 Kết thử hoạt tính sinh học hợp chất mới: LHRn2 LHRm2, LHRm4 Chúng tiến hành thử hoạt tính sinh học chất tách từ cọ hạ long, kết sau: *) Hoạt tính gây độc tế bào (Bảng 3.13) Bảng 3.13 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào chất 76 78 Kết quả: giá trị IC50 (g/ml) STT Tên mẫu KB LU MCF7 HepG2 76 (LHRm2) 53,0 68,37 85 72,29 78 (LHRm4) >128 >128 >128 >128 CTK Ellipticin 0,62 – 1,25 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư người bảng 3.13 cho thấy: Chất 76 (LHRm2) có hoạt tính gây độc với dòng tế bào ung thư thử nghiệm KB, LU, MCF7 HepG2 với giá trị IC50 tương ứng là: 53,0; 68,37; 85; 72,29 g/ml Chất 78 (LHRm4) khơng thể hoạt tính (IC50>128 111 g/ml) Chất 73 (LHRn2) khơng thử lượng mẫu thu Điều đáng ý là: Chất LHRm2 LHRm4 khác gốc đường βD-glucose gắn vị trí 5-OH Ở chất LHR.m2 gốc 5-OH tự ( aglycon), chất LHR.m4 gốc 5-OH bị glucosid hóa Song khác hoạt tính gây độc tế bào rõ rệt Aglycon (LHRm2) ức chế dòng tế bào ung thư thử nghiệm, glucosid (LHRm4) hồn tồn khơng Như sơ kết luận nhóm 5-OH tự đóng vai trị quan trọng cho hoạt tính gây độc tế bào lớp chất *) Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (Bảng 3.14) Bảng 3.14 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật chất 76 78 Nồng độ ức chế 50% phát triển vi sinh vật nấm IC50 (μg/ml) Gram (-) Gram (+) STT Nấm Tên mẫu Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Lactobacillus fermentum Salmonella enterica Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Candida albicans 78 (LHRm4) 27,76 >128 >128 >128 >128 >128 >128 76 (LHRm2) >128 >128 >128 >128 >128 >128 >128 Kết bảng 3.14 cho thấy: Chất 78 (LHRm4) thể khả kháng cách chọn lọc chủng vi khuẩn Gram (+) Staphylococcus aureus với giá trị IC50 : 27,76 μg/ml Đặc biệt, giới chủng vi khuẩn Gram (+) Staphylococcus aureus kháng lại với hầu hết kháng sinh mạnh sử dụng Trong chất 78 LHRm4 lại thể hoạt tính kháng sinh chọn lọc loại vi khuẩn Đây kết đáng quan tâm chất gợi ý việc nghiên cứu sâu rộng hoạt tính kháng sinh LHRm4 Chất 76 (LHRm2) khơng thể hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Nếu so sánh với 112 hoạt tính gây độc tế bào (Bảng 3.12), ta thấy chất 76 (LHRm2) ngược lại thể hoạt tính với dòng tế bào ung thư thử nghiệm, chất 78 LHRm4 khơng có hoạt tính với dịng Ở có vấn đề lý thú tương quan hoạt tính sinh học cấu trúc phân tử LHRm4 (glucosid) LHR.m2 (aglycon), cần tiếp tục nghiên cứu sâu *) Hoạt tính chống oxi hố chất 73 Chất 73 (LHRn2) có cấu trúc phân tử tương đối giống -tocopherol (Vitamin E), hợp chất thiên nhiên có tính chất chống oxy hóa mạnh Sự khác vitamin E chất 73 mạnh nhánh nhóm 6-OH Mạch nhánh chất 73 có chứa nhóm isopropenyl thay nhóm isopropyl vitamin E Nhóm 6-OH vitamin E bị acetyl hóa chất 73 Chúng tơi tiến hành thử hoạt tính kháng oxy hóa chất 73, kết đưa bảng 3.15 Bảng 3.15 Kết thử hoạt tính chống oxi hoá chất 73 STT Ký hiệu IC50 mẫu (μg/ml) 73 (LHRn2) >128 Đối chứng Resveratrol 5,24 dương Kết thử hoạt tính chống oxi hố bảng 4.15 cho thấy: Chất 73 (LHRn2) khơng có hoạt tính chống oxi hố (IC50>128 g/ml) Như mạch nhánh nhóm 6-OH tự đóng vai trị quan trọng hoạt tính kháng oxy hóa -tocopherol 3.3.3 Kết thử hoạt tính sinh học dịch chiết chất từ rau má *) Hoạt tính gây độc tế bào (Bảng 3.16) 113 Bảng 3.16 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dịch chiết rau má chất 82, 83 STT Tên mẫu IC50 (μg/ml) KB Dịch chiết (RM) HepG2 120 128 30,22 32,0 79,28 90,10 82 (RM1) Axit asiatic 83 (RM2) Axit madecassic Kết thử hoạt tính gây độc tế bào Bảng 3.16 cho thấy: Dịch chiết methanol (RM) có hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư thử nghiệm KB (ung thư biểu mô) HepG2 (ung thư gan), yếu Chất 82 (RM1) chất 83 (RM2) có hoạt tính ức chế phát triển dòng tế bào ung thư thử nghiệm KB HepG2 Trong chất 82 (axit asiatic RM1) có hoạt tính tương đối mạnh với IC50= 30,22 32,0 μg/ml, tương ứng Kết phù hợp với kinh nghiệm dân gian dùng rau má để chữa bệnh gan, làm mát gan *) Hoạt tính chống oxi hố (Bảng 3.17) Bảng 3.17 Kết thử hoạt tính chống oxi hố dịch chiết rau má chất 82, 83 STT Ký hiệu mẫu IC50 (μg/ml) Dịch chiết (RM) 88 82 (RM1) >128 83 (RM2) >128 Kết thử hoạt tính chống oxi hố bảng 3.17 cho thấy: Dịch chiết methanol RM rau má có hoạt tính chống oxi hố mức độ trung bình 114 (IC50= 88 μg/ml) Các chất 82 (RM1) 83 (RM2) khơng thể hoạt tính chống oxy hố *) Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (Bảng 3.18) Bảng 3.18 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định dịch chiết rau má chất 82, 83 Tên chủng vi sinh vật nấm TT Tên mẫu Giá trị μg/ml Gram (+) Gram (-) Nấm RM2 Escheri Pseudomo Candida subtilis coccus aureus enterica chia coli nas aeruginosa albicans >128 103,2 113,35 >128 >128 >128 >128 MIC >128 >128 >128 >128 >128 >128 >128 54,37 17,18 2,197 >128 >128 >128 >128 MIC 128 32 32 >128 >128 >128 >128 IC50 RM1 Salmonella IC50 Staphylo IC50 RM Bacillus fermentum Lactobacillus >128 68,82 16,22 >128 >128 >128 >128 MIC >128 128 128 >128 >128 >128 >128 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định bảng 3.18 cho thấy: Dịch chiết methanol (RM) axit madecassic 83 (RM2) có hoạt tính kháng vi khuẩn Gram (+) B subtilis S aureus mức độ yếu (IC50 = 103,2; 113,35 68,82; 16,22 μg/ml tương ứng) Axit asiatic 82 (RM1) có hoạt tính mạnh với loại vi khuẩn Gram (+) L fermentum, B subtilis S aureus (IC50 = 54,37; 17,18 2,197 μg/ml tương ứng) Đáng quan tâm hoạt tính tương đối mạnh kháng chủng vi khuẩn S aureus với IC50 = 2,197 μg/ml 115 KẾT LUẬN 1./ Về hóa học *) Từ vỏ rễ cọ hạ long (Livistona halongensis), loài phát đặc hữu Vịnh Hạ Long, phân lập 12 hợp chất, có hợp chất lần phân lập từ thiên nhiên là: 6-O-acetyl2R,8-dimetyl-2-(4R,8R,11-trimetyltridecence-12)chroman 73 (tách từ phân đoạn acetyl hóa), 2S,3S-3,5,7,3’-tetrahydroxy-5’-metoxyflavan 76 2R,3R-3,7,3’trihydroxy-5’-metoxyflavan 5-O- -glucopyranosid 78 Đã tổng hợp dẫn xuất 80 81 từ hai chất Trong số chất trên, có chất lần phân lập từ chi Cọ là: Cyclomusalenon 67, Cycloleucadenon 68, 3βcyclomusalenol 69, Stigmast-4-en-3-on 70, Stigmasterol 71, β-sitosterol 72 Đây kết thành phần hóa học cọ hạ long *) Từ rau má phân lập chất triterpen chính: Axit asiatic 82 (3,4 g, 0,37% so với trọng lượng khô), axit madecassic 83 (3,95 g, 0,43% so với trọng lượng khô) với hỗn hợp stigmasterol glucosid + β-sitosterol glucosid 84 (0,85 g, 0,096%) 2./ Về hoạt tính sinh học: *) Các dịch chiết hợp chất phân lập từ cọ hạ long: - Dịch chiết diclometan LHRd từ rễ cọ hạ long có hoạt tính ức chế phát triển dòng tế bào ung thư thử nghiệm KB (tế bào ung thư biểu mô), LU ( tế bào ung thư phổi) HepG2 (tế bào ung thư gan) mức đáng quan tâm Đồng thời dịch chiết thể khả kháng chủng vi khuẩn Gram (+) Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis Staphylococcus aureus, với giá trị IC50 12,57; 155,83 56,68 μg/ml tương ứng 116 - Các dịch chiết methanol rễ vỏ dịch chiết n-hexan vỏ cọ hạ long có hoạt tính kháng oxi hố với giá trị IC50 : 31,47; 76,39 104,0 μg/ml tương ứng - Dịch chiết n-hexan rễ cọ hạ long có hoạt tính kháng vi khuẩn Gram(+) Staphylococcus aureus với giá trị IC50 : 186,75 μg/ml *) Các hợp chất mới: 73, 76 78: - Chất 76 có hoạt tính gây độc với dịng tế bào ung thư thử nghiệm là: KB, LU, MCF7, HepG2 với giá trị IC50 tương ứng 53,0; 68,37; 85; 72,29 g/ml - Chất 78 thể khả kháng chủng vi khuẩn Gram(+) Staphylococcus aureus với giá trị IC50 : 27,76 μg/ml *) Các dịch chiết hợp chất phân lập từ rau má: - Dịch chiết methanol (RM), axit asiatic 82 axit madecassic 83 có hoạt tính ức chế phát triển dòng tế bào ung thư thử nghiệm KB (ung thư biểu mô) HepG2 (ung thư gan) Trong axit asiatic có hoạt tính đáng ý, với IC50 = 30,22 32,0 μg/ml, tương ứng - Dịch chiết methanol (RM) rau má có hoạt tính chống oxi hố mức độ trung bình (IC50= 88 μg/ml) - Dịch chiết methanol (RM) axit madecassic 83 có hoạt tính kháng vi khuẩn Gram (+) B.subtilis S.aureus mức độ yếu (IC50= 103,2 113,35 μg/ml) Axit asiatic 82 có hoạt tính mạnh với loại vi khuẩn Gram(+) L.fermentum, B.subtilis S.aureus, với IC50 = 54,37; 17,18 2,197 μg/ml tương ứng 117 KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học dịch chiết khác từ cọ hạ long loài cọ khác Việt Nam Đặc biệt phân lập thử hoạt tính chất từ dịch chiết diclometan rễ cọ hạ long (LHRd) dịch chiết chúng có hoạt tính ức chế phát triển dòng tế bào ung thư thử nghiệm KB (tế bào ung thư biểu mô), LU (tế bào ung thư phổi), HepG2 (tế bào ung thư gan) mức độ đáng quan tâm, đồng thời dịch chiết thể khả kháng chủng vi khuẩn Gram (+) với giá trị IC50 khoảng từ 12,57 – 155,83 μg/ml - Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học dịch chiết n-hexan, CH2Cl2 rau má [Centella asiatica (Linn) Urban.] Việt Nam Tiếp tục thử chức bảo vệ gan dịch chiết chất phân lập - Nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất từ tritecpen phân lập từ rau má đồng thời thử hoạt tính sinh học chúng 118 ... 2.1 Phân lập chất từ vỏ cọ hạ long (L halongensis) 42 Từ cao chiết n-hexan vỏ cọ hạ long phân lập chất sạch, bao gồm: 2.3.1.2 Số liệu phổ chất tách từ cao chiết n-hexan vỏ cọ hạ long *) Chất. .. trị số chứng bệnh thường gặp người gia súc Ở Việt Nam, rau má quen thuộc với Xuất phát từ vấn đề trên, chọn đề tài ? ?Nghiên cứu cấu trúc hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ cọ hạ long (Livistona. .. thực vật - Phân lập hợp chất từ cao chiết mẫu thực vật - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập - Thử hoạt tính số dịch chiết hợp chất phân lập Chương TỔNG QUAN 1.1 Chi Cọ (Livistona R Br