M. koenigii chống oxy hóa nhờ khả năng quét gốc tự do DPPH
5 Tác dụng kháng viêm chống viêm, chống ph ù n ề
1.3.4. Phương pháp xác định hoạt tính kháng viêm qua yếu tố NO
Với sự tiến bộ của công nghệ sinh học hiện đại, hiện nay đã có nhiều các phương pháp thử nghiệm ở mức độ sinh học phân tử nhằm phát hiện và phát triển các hoạt chất điều trị nhiều loại bệnh trong đó có bệnh viêm và tim mạch nói riêng.
Viêm là một đáp ứng tự nhiên của hệ miễn dịch, bảo vệ cơ thể trước sự tấn công của các tác nhân bên ngoài như vi khuẩn, vi sinh vật, tác nhân hóa, lý hoặc của tác nhân bên trong như các phản ứng miễn dịch, sự hoại tử do thiếu máu cục bộ, các bệnh tự miễn. Quá trình viêm thường kèm theo các triệu chứng sưng, nóng, đỏ và đau, do các mạch máu giãn nở, đưa nhiều máu đến nơi tổn thương. Tuy nhiên quá trình viêm và hồi phục có thể gây hại cho cơ thể do các hóa chất kích hoạt viêm (cytokine) có thể tác động lâu dài gây nên phản ứng quá mẫn, phản ứng viêm cấp tính và tình trạng viêm mạn tính. Nghiên cứu cho thấy mối liên hệ giữa viêm mãn tính với sự bệnh sinh
31
nhiều bệnh tật tim mạch, ung thư, tiểu đường, thoái hóa thần kinh vv. Do vậy vấn đề đặt ra cho các nhà khoa học hiện nay là phát hiện được các thuốc, dược phẩm có khả năng chống viêm đặc biệt là viêm mãn tính, giúp việc kiểm soát phát sinh các bệnh tật liên quan như ung thư, tim mạch, làm giảm gánh nặng cho cộng đồng.
Trong quá trình viêm, các tế bào viêm bị hoạt hóa (neutrophils, đại thực bào, vv) sẽ sản sinh ra nhiều nitric oxide (NO), các cytokines viêm như interleukin (IL-1, IL- 6), vv để tiêu diệt hoặc trung hòa các tác nhân gây tổn thương, gây bất hoạt các độc tố và khôi phục lại các mô bị tổn thương. Trong các nghiên cứu tìm kiếm các hợp chất thiên nhiên có tác dụng kháng viêm thườngđược tiến hành trên cơ sở ức chế sự sản sinh NO và ức chế các enzyme gây viêm là iNOS và COX-2 trên dòng tế bào đại thực bào RAW264.7 bị gây viêm bằng nội độc tố LPS. Hoạt tính kháng viêm của chất nghiên cứu được xác định thông qua khả năng làm giảm lượng NO sinh ra (giá trị IC50 mg/mL) và nồng độ enzyme iNOS và COX-2 giảm so với đối chứng. Lượng NO sinh ra được định lượng theo phản ứng Griess. Các enzyme iNOS, COX-2 được xác định nhờ phương pháp Western blotting. Các chất nghiên cứu có thể là dịch chiết như dịch chiết hoặc các hợp chất tinh khiết.
32
CHƯƠNG 2
THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU