M. koenigii chống oxy hóa nhờ khả năng quét gốc tự do DPPH
2.3.2.1.Phân lập các chất từ cặn dịch chiết DCM
5 Tác dụng kháng viêm chống viêm, chống ph ù n ề
2.3.2.1.Phân lập các chất từ cặn dịch chiết DCM
63.0 g cặn dịch chiết dichlormethane được hoà tan bằng một lượng CH3OH vừa đủ. Dung dịch thu được đem trộn với một lượng silica gel Merck (1/1, m/m), cô quay khô, nghiền thành dạng bột mịn. Bột silica gel có tẩm dịch chiết này được đưa lên cột sắc ký đường kính 3,6 cm, được nhồi 250 g silica gel Merck (loại 400 – 630 mesh) theo phương pháp nhồi cột khô. Cột sau khi đã tương đối ổn định, bột silica gel tẩm dịch chiết được đưa lên đầu cột, với hệ gradient dung môi rửa giải là DCM – MeOH tăng dần độ phân cực theo các tỷ lệ 1/0; 40/1; 20/1; 10/1; 5/1; 2.5/1; 1/1 và 0/1 (1,5L / gradient, v/v), thu được 6 phân đoạn (D1-D6).
Phân đoạn D1 được tiếp tục phân tách trên cột CC, silicagel với hệ dung môi n- hexane-CH2Cl2-Me2O (1/2/0.1), thu được 12 phân đoạn (D1A-D1L). Phân đoạn D1C được phân tách trên cột silica gel, rửa giải bằng dung môi n-hexane-DCM (1/3-1/4, v/v) để thu được hợp chất CC.07 (6.1 mg), CC.08 và CC.09 (157.3 mg). Phân đoạn D1D chiết tách trên cột cột silicagel, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane-Me2CO (6/1, v/v) thu được 2 phân đoạn D1DA và D1DB. Tiến hành rửa giải phân đoạn D1DA trên cột pha đảo RP-18 với hệ dung môi Me2CO-MeOH (1/2, v/v) thu được 3 phân đoạn D1DA1-A3. Phân đoạn D1D-A3 được chiết tách tiếp tục trên cột silicagel bằng hệ dung môi n-hexane-DCM-Me2CO (5/1/0.2, v/v/v) thu được chất CC.19 (20 mg) dưới dạng chất rắn trắng (3-Acetylmorolic acid). Phân đoạn D1-G được phân tách trên cột silica gel, rửa giải bằng n-hexan – aceton (5/1, v/v) thu được 4 phân đoạn (D1G-1 đến -4). Phân đoạn D1G-4 được tách tiếp trên cột silica gel với hệ dung môin- hexan-EtOAc-MeOH (4:1:0.1, v/v/v) để thu được 2 phân đoạn (D1G4-A và -B). Kết tủa trong phân đoạn D1G4-B được lọc, rửa bằng n-hexan và MeOH (2 x 1 ml) thu được hợp chấtCC.21 (10.4 mg) (diospyrolide) (sơ đồ 5).
42
Sơ đồ 5:Quy trình chiết và phân lập các chất từ cặn dịch chiết DCM
Phân đoạn D1I được tiếp tục phân tách trên cột silicagel với hệ dung môi rửa giải n-hexane-EtOAc (3/1) thu được 2 phân đoạn I2A và I2B. Phân đoạn I2A phân tách trên cột silicagel CC, rửa giải bằng CHCl3-Me2CO (15/1) thu được phân đoạn I2A1. Phân đoạn I2A1 này lại tiếp tục được tinh chế trên cột pha đảo RP-18 với MeOH-H2O (8/1) để thu được 2 phân đoạn I2A1A và I2A1B. Tinh chế phân đoạn I2A1B trên cột silicagel, rửa giải bằng dung môi n-hexane-Me2CO (5.5/1) thu được chất CC.20 (18.3 mg) dạng chất rắn không màu (11,12-Dehydroursolic acid lactone). Phân đoạn D1J được tách trên cột silica gel với hệ dung môi n-hexane-acetone (5/1, v/v) thu được chất CC.01 và CC.02 (17.9 mg, dạng bột màu vàng) (sơ đồ 5).Phân tách phân đoạn D4 trên cột silica gel với dung môi n-hexan-aceton (3:1, v/v) thu được 2 phân đoạn D4-A và -B. Tách tiếp phân đoạn D4-A trên cột silica gel bằng n-hexan-EtOAc (4:1, v/v) thu được 2 phân đoạn D4-A1 và D4-A2. Tách D4A1 trên cột silicagel với dung môi CHCl3-EtOAc (4:1, v/v) thu được hợp chất CC.18 (79.0 mg) (acid betulinic) và từ phân đoạn D4-A2 với dung môi CH2Cl2-aceton (12/1, v/v) thu được hợp chất
43