M. koenigii chống oxy hóa nhờ khả năng quét gốc tự do DPPH
5 Tác dụng kháng viêm chống viêm, chống ph ù n ề
2.3.1. Cây Nguyệt quế Murraya paniculata
Lá cành loài Nguyệt quế M. paniculata(3,2 kg) đem phơi khô, nghiền nhỏ được ngâm chiết với metanol ở nhiệt độ phòng (3 lần x 3 l), lọc và cô cất trong chân không. Phần cặn metanol (120g) được hoà trong lượng tương đương H2O (tỉ lệ 1 : 1). Và chiết lần lượt bằng các dung môi n – hexan, chloroform, etyl axetat và nước cho các cặn chiết tương ứng là các cặn n- hexane (1,6g), chloroform (7,0 g), ethyl acetate (2,6 g) và nước (90 mL) (Sơ đồ 1).
Sơ đồ 1: Qui trình chiết và phân lập sơ bộ các chất trong lá và cành cây Nguyệt quế (Murraya paniculata)
39
2.3.1.1. Phân lập các chất từ cặn dịch chiết chloroform
Cặn dịch chiết chloroform (7,0 g) được hoà tan bằng một lượng CH3OH vừa đủ. Dung dịch thu được đem trộn với một lượng vừa đủ silica gel Merck, cô quay khô, nghiền thành dạng bột mịn. Bột silica gel có tẩm dịch chiết này được đưa lên cột sắc ký đường kính 3,6 cm, được nhồi 250 g silica gel Merck (loại 400 – 630 mesh) theo phương pháp nhồi cột ướt. Cột sau khi đã tương đối ổn định, bột silica gel tẩm dịch chiết được đưa lên đầu cột, với hệ dung môi rửa giải là n-hexane / EtOAc: 1/0 – 0/1; EtOAc / MeOH: 1/0 – 0/1) tăng dần độ phân cực (gradient dung môi), thu được 9 phân đoạn khác nhau (ký hiệu F-2A ÷ F-2I).
Phân đoạn F-2B (3,1g) sau đó được tiếp tục tách bằng sắc ký cột trên chất hấp phụ silica gel (230-400 mesh), triển khai theo chế độ gradient dung môi n-hexan-EtOAc (1/0 – 0/1, v/v), thu được 29 phân đoạn khác nhau (F-2B-1 ÷ F-2B-29). Phân đoạn F- 2B-8 (55 mg), sau khi cất loại dung môi thu được chất dầu màu nâu, đem hòa tan trong hỗn hợp n-hexan / EtOAc (2/1, v/v) thu được kết tủa rắn màu trắng. Rửa 3 lần bằng n-hexan (1 mL) thu được hợp chất MP.01 (42 mg) (sơ đồ 2).
Sơ đồ 2: Qui trình phân lập các hợp chất từ dịch chiết chloroform từ lá và cành cây Nguyệt quế (M. paniculata)
Phân đoạn F-2B-11 (111,3 mg) được làm khô tự nhiên ở nhiệt độ phòng.Chất rắn trắng tách ra đem rửa 3 lần bằng MeOH lạnh thu được hợp chất sạch ký hiệu là MP.02
(35mg). Phân đoạn F-2C (1.2 g) tiếp tục tinh chế bằng sắc ký cột silica gel pha thường (230-400 mesh), rửa giải với hệ dung môi n-hexan – EtOAc (2:1, v/v) thu được 5 phân đoạn. Kết tủa trắng trong phân đoạn F-2C-2 (50 mg) được lọc, rửa hai lần bằng MeOH
40
lạnh (1 mL) thu được hợp chất MP.03 (23 mg). Phân đoạn F-2E (0.9 g) được tiếp tục tinh chế trên cột silicagel pha thường (230-400 mesh) với hệ dung môi rửa giải là n- hexan-aceton (5/1 - 1/1, v/v) thu được 4 phân đoạn. Phân đoạn F-2E-2 (55 mg) được kết tinh chậm ở nhiệt độ thấp. Tinh thể thu được đem lọc tách, rửa thu được hợp chất
MP.05 (20 mg). Phân đoạn F-2E-3 (30 mg) được tiếp tục phân tách trên cột silica-gel với hệ dung môi n-hexan - aceton (3/1, v/v) thu được hợp chất MP.04 (17 mg) (sơ đồ 2).
2.3.1.2. Phân lập các chất từ cặn dịch chiết n-hexane
Sơ đồ 3: Qui trình phân lập các hợp chất từ dịch chiết n-hexan từ lá và cành cây Nguyệt quế (Murraya paniculata)
Phần cặn chiết n-hexane (màu nâu đỏ, 1,6 g) được phân tách trên cột silica gel pha thường với hệ gradient dung môi n-hexan-aceton (40/1 ÷ 1/1, v/v) để thu được 10 phân đoạn. Phân đoạn H4 được tiếp tục phân tách trên cột silica gel với dung môi rửa giải n-hexan-aceton, (3.5/1, v/v) để thu được hợp chất MP.06 (10 mg) và dịch phân đoạn H41.Chất rắn màu trắng kết tinh trong dịch H41 được lọc rửa, kết tinh lại trong
n-hexan để thu được hợp chấtMP.07 (5 mg) (Sơ đồ 3).