Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học của hạt cần tây (apium graveolens l)

ĐẶT VẤN ĐỀXã hội ngày càng phát triển, cuộc sống của con người ngày càng sung túc, đầy đủ. Đi kèm theo đó là sự phát triển ngày càng gia tăng của một sốbệnh liên quan đến chuyển hóa như béo phì, gút, cao huyết áp, xơ vữa động mạch, rối loạn chuyển hóa lipid… Chế độ sinh hoạt không hợp lý cùng với việc sử dụng quá nhiều đồ ăn nhanh, giàu chất béo, lười vận động là nguyên nhân trực tiếp gây ra tình trạng trên.Từ xa xưa, con người đã biết khai thác và sử dụng nhiều loài thảo dược để chữa bệnh. Cây Cần tây thuộc họ Cần (Apiaceae), có nguồn gốc từ châu Âu, được du nhập vào Việt Nam và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi. Tại Việt Nam, Cần tây từ lâu đã được sử dụng làm rau ăn, gia vị và làm thuốc. Cần tây có mặt trong nhiều bài thuốc dân gian (chữa thống phong, cao huyết áp, phong thấp…). Một số kết quả nghiên cứu đã chứng minh rằng cây Cần tây có tác dụng tốt trong điều trị các bệnh liên quan đến chuyển hoá như các bệnh về khớp (viêm khớp, gút), cao huyết áp 29, rối loạn chuyển hóa lipid, xơ vữa động mạch 38…Bên cạnh đó, dịch chiết từ hạt Cần tây còn có tác dụng bảo vệ tế bào gan trước các tác nhân gây hại như Acrylamid, giúp chống lại sự hình thành các khối u ở chuột thí nghiệm 17.Nhận thức rõ vai trò và ứng dụng của Cần tây trong y học, một sốcông trình nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây đã được thực hiện nhưng chưa đầy đủ. Vì vậy, việc tiếp tục nghiên cứu để xác định những thành phần hóa học mới có hoạt tính sinh học từ cây Cần tây là cần thiết.Với mục tiêu nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây, chúng tôi tiến hành đề tài “Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học của hạt Cần tây(Apium graveolens L.)” với những nội dung sau:1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây.

B Ộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

HÀ N ỘI – 2013

Hà Nội), người thầy đã luôn ở bên dìu dắt, động viên và khích lệ tôi trong

suốt quãng thời gian tôi thực hiện khóa luận tốt nghiệp này Cô đã chỉ dạy cho tôi nhiều điều, truyền cho tôi niềm đam mê với công việc và tình yêu với cây

Trong phạm vi hạn chế của khóa luận, những kết quả thu được mới chỉ là bước đầu và trong quá trình làm việc khó tránh khỏi những thiếu sót, tôi rất mong nhận được sự góp ý của thầy cô giáo và các bạn bè

Hà Nội tháng 05 năm 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

Hà Nội), người thầy đã luôn ở bên dìu dắt, động viên và khích lệ tôi trong

suốt quãng thời gian tôi thực hiện khóa luận tốt nghiệp này Cô đã chỉ dạy cho tôi nhiều điều, truyền cho tôi niềm đam mê với công việc và tình yêu với cây

Trong phạm vi hạn chế của khóa luận, những kết quả thu được mới chỉ là bước đầu và trong quá trình làm việc khó tránh khỏi những thiếu sót, tôi rất mong nhận được sự góp ý của thầy cô giáo và các bạn bè

Hà Nội tháng 05 năm 2013 Sinh viên

Nguyễn Hùng Mạnh

MỤC LỤC

L ỜI CẢM ƠN

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU – CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH M ỤC CÁC BẢNG

DANH M ỤC CÁC HÌNH

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 TỔNG QUAN 3

1.1.V ề thực vật 3

1.1.1 Tên gọi 3

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố loài Apium graveolens L 3

1.2 Thành ph ần hóa học của hạt Cần tây 4

1.2.1 Tinh d ầu 4

1.2.2 Flavonoid 6

1.2.3 Coumarin 8

1.2.4 M ột số chất khác 12

1.3 Tác d ụng sinh học của hạt Cần tây 13

1.3.1 Tác dụng hạ huyết áp 13

1.3.2 Tác dụng chống viêm 13

1.3.3 Tác d ụng hạ acid uric huyết thanh 14

1.3.4 Tác d ụng giải độc 14

1.3.5 Tác d ụng chống ung thư 15

1.3.6 Tác dụng kháng khuẩn 15

1.4 Công d ụng 15

Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.1 Nguyên v ật liệu, thiết bị 16

2.1.1 Nguyên li ệu 16

2.1.2 Hóa chất và dụng cụ 16

2.1.3 Thiết bị nghiên cứu 16

2.2 N ội dung nghiên cứu 18

2.3 Phương pháp nghiên cứu 18

Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20

3.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây 20

3.1.1 Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây 20

3.1.2 Nghiên c ứu thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây bằng phương pháp GC/MS 20

3.2 Chi ết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây 26

3.3 Phân l ập chất từ phân đoạn dịch chiết n-hexan của hạt Cần tây 29

3.3.1 S ắc ký cột hấp phụ 29

3.3.2 S ắc ký chế hóa phân đoạn 2 (PĐ 2) 33

3.4 Bàn lu ận 37

KẾT LUẬN 39

ĐỀ XUẤT 39 TÀI LI ỆU THAM KHẢO

PH Ụ LỤC

DANH M ỤC CÁC KÝ HIỆU – CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Bảng 1.1: Thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây 4

Bảng 1.4: Một số hợp chất khác trong hạt cây Cần tây 12 Bảng 3.1: Kết quả phân tích thành phần hóa học của tinh dầu

Hình 3.1: Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết xuất các phân đoạn

Hình 3.2: Ảnh chụp sắc ký đồ chất M1 ở 3 hệ dung môi

31 Hình 3.3: Ảnh chụp tinh thể M1dưới kính hiển vi

32 Hình 3.4: Ảnh chụp sắc ký đồ của M2với 3 hệ dung môi 35

Hình 3.6: Tóm tắt quy trình phân lập chất từ phân đoạn

ĐẶT VẤN ĐỀ

Xã hội ngày càng phát triển, cuộc sống của con người ngày càng sung túc, đầy đủ Đi kèm theo đó là sự phát triển ngày càng gia tăng của một số

bệnh liên quan đến chuyển hóa như béo phì, gút, cao huyết áp, xơ vữa động

mạch, rối loạn chuyển hóa lipid… Chế độ sinh hoạt không hợp lý cùng với

việc sử dụng quá nhiều đồ ăn nhanh, giàu chất béo, lười vận động là nguyên nhân trực tiếp gây ra tình trạng trên

Từ xa xưa, con người đã biết khai thác và sử dụng nhiều loài thảo dược

để chữa bệnh Cây Cần tây thuộc họ Cần (Apiaceae), có nguồn gốc từ châu

Âu, được du nhập vào Việt Nam và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi Tại Việt Nam, Cần tây từ lâu đã được sử dụng làm rau ăn, gia vị và làm thuốc Cần tây

có mặt trong nhiều bài thuốc dân gian (chữa thống phong, cao huyết áp, phong thấp…) Một số kết quả nghiên cứu đã chứng minh rằng cây Cần tây

có tác dụng tốt trong điều trị các bệnh liên quan đến chuyển hoá như các

bệnh về khớp (viêm khớp, gút), cao huyết áp [29], rối loạn chuyển hóa lipid,

xơ vữa động mạch [38]…Bên cạnh đó, dịch chiết từ hạt Cần tây còn có tác

dụng bảo vệ tế bào gan trước các tác nhân gây hại như Acrylamid, giúp chống

lại sự hình thành các khối u ở chuột thí nghiệm [17]

Nhận thức rõ vai trò và ứng dụng của Cần tây trong y học, một số công trình nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây đã được thực

hiện nhưng chưa đầy đủ Vì vậy, việc tiếp tục nghiên cứu để xác định những thành phần hóa học mới có hoạt tính sinh học từ cây Cần tây là cần thiết

Với mục tiêu nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây, chúng tôi tiến hành đề tài “Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học của hạt Cần tây

(Apium graveolens L.)” với những nội dung sau:

1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây

2 Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây

3 Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết n-hexan hạt Cần tây và sơ bộ nhận

dạng các chất phân lập được

Chương 1 TỔNG QUAN

1 1.Về thực vật

1.1.1 Tên gọi

- Tên khoa học của cây Cần tây: Apium graveolens L., họ Cần (Apiaceae)

- Tên đồng nghĩa: Apium dulce Mill, Apium graveolens subsp dulce (Mill.)

Schübl & G Martens

- Tên tiếng Anh: Celery

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố loài Apium graveolens L

Cây thảo, cao từ 15-150cm, có mùi thơm mạnh Lá ở gốc có hình thuôn hay hình trứng ngược, kích thước lá 7-18cm x 3.5-8cm, lá xẻ ba hay chia ba thùy, thùy cuối cùng có dạng hình thoi, kích thước 1.2-2.5cm x 0.8-2.5cm, có khía tai bèo hay có răng cưa Các lá phía trên có cuống ngắn, phiến

lá hình tam giác thường xẻ 3, thùy cuối cùng có hình trứng ngược Cụm hoa tán thường mọc đối diện với lá, kích thước 1.5-4cm theo chiều ngang, cuống hoa thường mập và ngắn, dài 4-15mm ít khi bị teo đi Các cánh hoa bao bọc phía ngoài của cụm hoa có 3-8(-16) cánh hoa mảnh, kích thước 0.5-2.5cm Các tán hoa có 7-25 hoa, hoa có kích thước 6-9mm theo chiều ngang Cuống

quả dài 1-1.5mm, quả có kích thước 1.3-1.5 x 1-2mm Ra hoa và ra quả từ

tháng 4 đến tháng 7 [19]

Loài Apium graveolens L có nguồn gốc từ châu Á và châu Âu, được

du nhập và trồng rộng rãi ở khắp nơi trên thế giới Từ thời cổ đại, cây đã được

trồng và sử dụng như một loại rau ăn và là một vị thuốc phổ biến trong nhiều

nền y học cổ truyền [19]

Ở Việt Nam, loài A.graveolens L thường gọi là cây Cần tây Cây mới

di nhập vào nước ta và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi để làm rau ăn, làm thuốc chữa cao huyết áp [8]

1.2 T hành phần hóa học của hạt Cần tây

1 2.1 Tinh dầu

Hạt Cần tây chứa 2-3% tinh dầu [13], trong đó có d-limonen (60%); selinen (10%); các phthalid; santalol; α và β-eudesmol; hydrocarvon Các phthalid gồm 3-n-butyl phthalid; sedanenolid; sedanolid; anhydrid sedanonic [13]

Thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây được tổng kết ở bảng 1.1

Bảng 1.1: Thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây

Ký

hiệu

chất Tên chất

Hàm lượng (%) (nếu có)

Tác dụng sinh học (nếu có)

Tài

liệu trích

[13] [50]

Làm giảm độc tính của Acrylamid

[17] [28] [33] [40]

[26] [40]

Nhận xét: Cho đến nay đã phát hiện 23 chất có trong thành phần tinh

dầu hạt Cần tây Trong số đó, thành phần chính là d-limonen (60%), selinen (10%)

1.2.2 Flavonoid

Các flavonoid trong hạt Cần tây được tổng kết ở bảng 1.2

B ảng 1.2: Các flavonoid có trong hạt Cần tây

Ký

hiệu

Tác dụng sinh học (nếu có)

Tài

liệu trích

[24] [25]

Nhận xét: Từ bảng 1.2 cho thấy có 8 flavonoid được công bố có trong

hạt Cần tây, chủ yếu là dẫn chất của Apigenin và Luteolin

1.2.3 Coumarin

Các Coumarin trong hạt Cần tây được tổng kết ở bảng 1.3

B ảng 1.3: Các Coumarin trong hạt Cần tây

Ký

hiệu

Tài liệu trích dẫn

(51) Syringin

[(cis,cis)-9,12-octadecadienoyl]

Nhận xét chung: Cho đến nay đã phát hiện khoảng 61 chất có trong hạt

Cần tây, chủ yếu thuộc các nhóm tinh dầu, flavonoid, coumarin Trong đó có

hai nhóm chất rất được quan tâm nghiên cứu và được coi là hoạt chất chính

của hạt Cần tây là tinh dầu và flavonoid

1.3 Tác dụng sinh học của hạt Cần tây

1.3.1 Tác d ụng hạ huyết áp

Tác dụng hạ huyết áp của hạt Cần tây (A graveolens L.) là do

3-n-butylphthalid (3nB) - một thành phần có trong tinh dầu hạt Cần tây gây nên

Cơ chế tác dụng của (3nB) tương tự như một thuốc lợi tiểu và giãn

mạch, nó tác động lên sự tổng hợp Prostagladin làm giảm thể tích tuần hoàn

và gây giãn mạch dẫn đến hạ huyết áp Ngoài ra nó còn tác động như một thuốc chẹn kênh Ca++

làm cho các tế bào cơ được nghỉ ngơi và làm giảm nguy

cơ co thắt động mạch Bên cạnh đó, 3nB còn có tác dụng hạ cholesterol máu, làm giảm nguy cơ hình thành các mảng vữa xơ động mạch, làm tăng tính đàn

hồi của các mạch máu, giảm sức cản ngoại vi và giảm huyết áp [29]

Tiêm phúc mạc 13 ngày 3nB với liều 2.0 và 4.0mg/ngày cho thấy hiệu

quả hạ huyết áp đáng kể trong khi liều 0.5mg/ngày cho hiệu quả giảm huyết

áp đáng kể chỉ vào ngày thứ 12 [37]

1.3.2 Tác dụng chống viêm

Dịch chiết ether dầu hỏa, dịch chiết methanol từ hạt Cần tây có tác

dụng chống viêm Nghiên cứu được thực hiện trên 4 lô chuột, mỗi lô gồm 6 chuột cống trắng trọng lượng 150 + 6,049 g 3 lô được tiêm màng bụng kali oxonat liều 250 mg/kg Một giờ sau, trong 3 lô đã tiêm kali oxanat, 1 lô được

uống dịch chiết ete dầu hỏa từ hạt Cần tây liều 500 mg/kg, 1 lô được uống

dịch chiết methanol từ hạt Cần tây liều 500 mg/kg Sau 3h và 6h, lấy máu từ tĩnh mạch mắt chuột để xác định tốc độ lắng hồng cầu (ESR), nồng độ nitric oxid (chất trung gian gây viêm) [44]

Kết quả: Lô uống dịch chiết ete dầu hỏa, nồng độ nitric oxid giảm 19% sau 3h, giảm 29% sau 6h so với lô chứng, chỉ số ESR giảm 40% sau 3h, giảm

36% sau 6h so với nhóm chứng Lô uống dịch chiết methanol, nồng độ nitric oxid giảm 13% sau 3h, giảm 23% sau 6h so với lô chứng, chỉ số ESR giảm 18% sau 3h, giảm 26% sau 6h so với nhóm chứng

Dựa vào các kết quả trên ta thấy, dịch chiết ete dầu hỏa và dịch chiết methanol từ hạt cần tây làm giảm đáng kể viêm nhiễm (giảm nitric oxid, giảm ESR), dịch chiết ete dầu hỏa có tác dụng mạnh hơn dịch chiết methanol [44]

1.3.3 Tác d ụng hạ acid uric huyết thanh

Dịch chiết ether dầu hỏa, dịch chiết methanol từ hạt Cần tây có tác dụng

hạ acid uric huyết thanh Nghiên cứu được thực hiện trên 4 lô chuột, mỗi lô

gồm 6 chuột cống trắng trọng lượng 150 + 6,049 g 3 lô được tiêm màng bụng kali oxonat liều 250 mg/kg Một giờ sau, trong 3 lô đã tiêm kali oxanat, 1 lô được uống dịch chiết ete dầu hỏa từ hạt Cần tây liều 500 mg/kg, 1 lô được

uống dịch chiết methanol từ hạt Cần tây liều 500 mg/kg Sau 3h và 6 h, lấy máu từ tĩnh mạch mắt chuột để định lượng acid uric huyết thanh [44]

Kết quả: Lô uống dịch chiết ete dầu hỏa, acid uric huyết thanh giảm 41% sau 3h, giảm 44% sau 6h so với lô chứng Lô uống dịch chiết methanol, acid uric huyết thanh giảm 38% sau 3h, giảm 31% sau 6h so với lô chứng

Dựa vào các kết quả trên ta thấy, dịch chiết ete dầu hỏa và dịch chiết methanol từ hạt cần tây có tác dụng hạ acid uric huyết thanh, dịch chiết ete

dầu hỏa có tác dụng mạnh hơn dịch chiết methanol [44]

1.3.4 Tác dụng giải độc

Dịch chiết nước từ rễ, lá và hạt cây Cần tây có tác dụng làm giảm độc tính của Acrylamid Ngiên cứu được thực hiện trên 6 lô chuột, mỗi lô gồm 5 chuột cống trắng 3 tháng tuổi có cân nặng trung bình là 221,4 g để so sánh các

dịch chiết với lô chứng và lô trắng Tác dụng này được đánh giá qua các thông số: thông số hủy tế bào gan (ASAT, ALAT, lactat dehydrogenase), thông số tổng hợp protein (cholinesterase, protein toàn phần, albumins) Kết

quả cho thấy dịch chiết từ hạt Cần tây có khả năng bảo vệ gan mạnh nhất [17]

1.3.5 Tác dụng chống ung thư

Dịch chiết methanol của hạt Cần tây có tác dụng chống ung thư gan, oxi hóa trên chuột Wistar [34]

Các dịch chiết ether dầu hỏa, methanol, aceton của cây Cần tây có tác

dụng chống ung thư gan và làm giảm độc gan trên chuột albino Tác dụng được xác định bằng các thông số SGOT, SGPT, alkalin phosphotase, protein toàn phần, albumin Trong đó dịch chiết methanol có tác dụng mạnh nhất [14]

Dịch chiết cồn hạt Cần tây được chiết phân đoạn bằng các dung môi

hữu cơ, sắc ký cột và HPLC Các phân đoạn dịch chiết đều có khả năng chống

lại vi khuẩn Helicobacter pylori với nồng độ ức chế tối thiểu và nồng độ diệt

khuẩn tối thiểu là 3,15µg/ml và 6,25-12,5 µg/ml [43]

Tinh dầu Cần tây có tác dụng ức chế một số chủng vi khuẩn

Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes và Listeria ivanovii strains

Cặn chiết choloroform của hạt Cần tây có tính kháng vi sinh vật yếu, chỉ kháng một số vi khuẩn Gram (-) là P.aeruginosa với nồng độ ức chế tối thiểu

là 200µg/ml [5]

1.4 Công d ụng

Hạt Cần tây được dùng để chữa một số bệnh về khớp (thấp khớp, viêm

khớp, đau xương khớp) [13] Hạt Cần tây có tác dụng lợi tiểu nhẹ và tác dụng kháng khuẩn, do đó được dùng điều trị bệnh viêm bàng quang [1] Ngoài ra,

hạt Cần tây còn làm giảm triệu chứng các bệnh phổi như bệnh suyễn, viêm

phế quản [1], kết hợp với các thảo dược khác làm giảm huyết áp [1]

Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.1.1 Nguyên liệu

- Hạt Cần tây được thu hái tại xã Hải Nam - Hải Hậu - Nam Định

- Thời gian thu mẫu: tháng 12 năm 2012

- Mẫu cây Cần tây có hoa đã được làm tiêu bản lưu giữ tại Phòng tiêu bản, Bộ

môn thực vật với số hiệu là HNIP/17860/13 và được xác định tên khoa học là

Apium graveolens L., họ Cần (Apiaceae)

- Xử lý mẫu: Hạt Cần tây thu hái về được phơi khô trong bóng râm, sau đó

được bảo quản trong túi nilon kín, để nơi khô ráo, thoáng mát

2.1.2 Hóa chất và dụng cụ

Hóa chất dùng cho nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích, gồm có:

- Các dung môi hữu cơ: chloroform, ethyl acetat, cồn tuyệt đối, methanol, n-hexan…

- Silicagel dùng cho sắc ký cột cỡ hạt 0,040-0,063 mm (Merck)

2.1.3 Thiết bị nghiên cứu

- Cân phân tích Mettler Toledo AB204-S9 (Thụy Sĩ)

- Máy cất quay Buchi Rotavapor R-200 (Đức)

- Tủ sấy Memmert (Đức)

- Kính hiển vi Leica (Đức)

- Máy sắc ký khí kết hợp khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 7890A

- Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu cải tiến

Hình 2.1: Ảnh chụp cây Cần tây tại thực địa

Hình 2.2: Ảnh chụp hạt Cần tây

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây

- Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây

- Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết n-hexan hạt Cần tây và sơ bộ nhận

dạng các chất phân lập được

2.3 Phương pháp nghiên cứu

- Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây

Nguyên tắc: Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây bằng phương pháp

cất kéo hơi nước sử dụng bộ định lượng tinh dầu cải tiến, ống hứng tinh dầu

nhẹ hơn nước (Hình 2.3) Từ lượng tinh dầu (gam hay ml) thu được trên một lượng dược liệu xác định, tính ra hàm lượng phần trăm (kl/kl hay tt/kl) tinh

dầu có trong dược liệu

Phương pháp cất kéo hơi nước dựa trên nguyên tắc cất một hỗn hợp 2

chất lỏng bay hơi được, không trộn lẫn vào nhau (nước và tinh dầu) Khi áp

suất hơi bão hòa bằng áp suất khí quyển, hỗn hợp bắt đầu sôi và hơi nước kéo theo hơi tinh dầu

A Bình cầu đựng dược liệu B Ống nối C Sinh hàn

D Bộ phận hứng tinh dầu nhẹ hơn nước

Hình 2.3 Sơ đồ bộ dụng cụ định lượng tinh dầu cải tiến

D

- Phân tích thành phần tinh dầu hạt Cần tây bằng phương pháp sắc ký khí kết

hợp khối phổ (GC/MS) với sự hỗ trợ của phần mềm INSTRUMENT I và DATA ANALYSIS Xác định hàm lượng tương đối của các thành phần dựa trên diện tích pic Nhận dạng các thành phần bằng thời gian lưu và đối chiếu thư viện phổ khối Hai thư viện phổ khối sử dụng để đối chiếu là FLAVOR2

và NIST 08

- Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết bằng phương pháp ngấm kiệt với cồn 96º ở nhiệt độ phòng Dịch chiết thu được đem cất quay thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được dịch chiết đặc Thêm đồng lượng nước cất đun nóng rồi đem lắc phân đoạn với các dung môi hữu cơ theo thứ tự tăng dần độ phân cực: n-hexan, CHCl3, ethyl acetat, n-butanol Các dịch chiết phân đoạn thu được đem cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được các cắn phân đoạn tương ứng

- Phân lập một số chất có trong phân đoạn n-hexan bằng sắc ký cột hấp phụ

và bằng sắc ký bản mỏng chế hóa

Nguyên tắc sắc ký cột hấp phụ : Mẫu được nạp lên cột chứa chất hấp

phụ Cột chứa chất hấp phụ đóng vai trò là pha tĩnh Dung môi khai triển (pha động) di chuyển dọc theo cột sẽ làm di chuyển các chất trong mẫu Do các

chất này có độ phân cực khác nhau nên ái lực của chúng đối với pha tĩnh cũng khác nhau, tạo thành các băng có vị trí khác nhau, ra khỏi cột tại các thời điểm khác nhau

- Sơ bộ nhận dạng các chất phân lập được dựa trên độ tan, phản ứng định tính

và dữ liệu phổ khối phân giải cao (MS) Phổ khối phân giải cao được đo trên máy Varian MS tại Viện Hóa học – Viện Khoa Học và Công nghệ Việt Nam

Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây

3.1.1 Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây

• Tiến hành

Hạt Cần tây tán thành bột thô bằng máy xay, đem đo độ ẩm Cân 100,04 g bột hạt Cần tây, cho vào bình cầu đựng dược liệu (A), thêm 400 ml nước cất Lắp bộ dụng cụ định lượng tinh dầu, ống hứng tinh dầu nhẹ hơn nước Cất trong 5 giờ đến khi mức tinh dầu thu được trong bộ phận hứng tinh

dầu không thay đổi

• K ết quả

Độ ẩm: a = 9,27%

Thể tích tinh dầu thu được: b = 2,3 ml

Hàm lượng tinh dầu (% tt/kl): X = 2,53%

3.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây bằng phương pháp GC/MS

Tiến hành trên máy sắc ký khí khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 7890A với các điều kiện:

+ Cột sắc ký 19091S-433HP-5MS kích thước 30m x 250µm x 0,25µm

+ Hệ thống tiêm mẫu tự động

+ Detector: Khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 5975C

+ Khí mang: Heli

chloroform (MERCK) rồi cho vào chai thủy tinh 2 ml có nắp chuyên dụng,

lắc đều, đậy nắp, đặt vào vị trí mẫu trên khay của hệ thống tiêm mẫu tự động

- Khởi động thiết bị:

+ Mở bình khí Heli: mở van tổng và van bi

+ Bật công tắc điện khởi động GC

+ Bật máy tính

+ Khởi động MS

- Thiết lập phương pháp phân tích:

Khởi động phần mềm INSTRUMENT I và cài đặt các thông số:

+ Injector: Thể tích tiêm mẫu: 1µl

Trước khi tiêm mẫu: Rửa kim 3 lần với dung môi B

Rửa kim 3 lần với dung dịch mẫu

Sau khi tiêm mẫu: Rửa kim 3 lần với dung môi A

Rửa kim 1 lần với dung môi B

+ Inlet: Khí mang Heli

Mode: Split (tiêm mẫu chia dòng)

+ Oven: Nhiệt độ ban đầu 60o

C trong 2 phút, sau đó tăng lên 220o

C với tốc

độ 6o

C/min, giữ trong 2 phút Sau khi ngừng phân tích, giữ nhiệt độ 250o

C trong 1phút Tổng thời gian phân tích mẫu khoảng 35 phút

Tune File: Stune U

Acquistion mode: Scan

+ MS Information:

Solvent Delay: 4,50 min (thời gian cắt bỏ dung môi)

+ Scan parameters:

Low Mass: 30,0

High Mass: 300,0

Lưu phương pháp đã thiết lập

- Ch ạy mẫu:

Chờ GS đạt tất cả các điều kiện cài đặt

Chọn Sequence/ Edit Sequence

Gọi phương pháp đã thiết lập, bấm Ok

Chọn Run Sequence

Khai báo các dữ liệu về mẫu phân tích mẫu vào bảng, bấm OK

để bắt đầu phân tích mẫu

của các pic ghi nhận được với thư viện phổ khối FLAVOR2 và NIST 08 để

nhận dạng các thành phần của tinh dầu Hàm lượng % tương đối của các thành phần được tính dựa trên diện tích pic

bảng 3.1

B ảng 3.1: Kết quả phân tích thành phần hóa học của tinh dầu

Tên chất

Độ trùng lặp

1 6,708 0,51

β-Pinen α-Pinen Myrcen

95

87

83

β-Pinen β-Pinen 4-methylen-1-(1-

format Sabinen

96

45

37

β- Myrcen 1-cyclopropyl-2-(4-

pyridinyl) ethanone β-Pinen

acetat δ-3-Caren

98

59

27

D-Limonen D-Limonen

Limonen

94

94

91 Limonen

4 11,036 1,73

δ-3-Caren

α-Pinen Linalyl

2,3,3a,4,5,7a-hexahydro-3-methyl-1,3,5-hexatrien Bicyclo [4.1.0] hept-2-