hiệu quả đối kháng với vi khuẩn erwinia sp gây bệnh thối gốc trên lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ trong điều kiện in vitro

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG DANH TUẤN HIỆU QUẢ ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN ERWINIA SP. GÂY BỆNH THỐI GỐC TRÊN LÚA CỦA MỘT SỐ NÔNG DƯỢC VÀ VI KHUẨN VÙNG RỄ TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NGÀNH: BẢO VỆ THỰC VẬT Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT Tên đề tài: HIỆU QUẢ ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN ERWINIA SP. GÂY BỆNH THỐI GỐC TRÊN LÚA CỦA MỘT SỐ NÔNG DƯỢC VÀ VI KHUẨN VÙNG RỄ TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Giảng viên hướng dẫn: TS. Trần Vũ Phến Sinh viên thực hiện: Danh Tuấn MSSV: 3093417 Lớp: BVTV K35 Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT Chứng nhận luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo vệ Thực vật với đề tài: “HIỆU QUẢ ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN ERWINIA SP. GÂY BỆNH THỐI GỐC TRÊN LÚA CỦA MỘT SỐ NÔNG DƯỢC VÀ VI KHUẨN VÙNG RỄ TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO” Do sinh viên Danh Tuấn thực Kính trình lên hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp Cần Thơ, ngày tháng 10 năm 2013 Cán hướng dẫn TS. Trần Vũ Phến TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp chấp nhận luận văn tốt nghiệp kỹ sư ngành Bảo vệ Thực vật với tên: “HIỆU QUẢ ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN ERWINIA SP. GÂY BỆNH THỐI GỐC TRÊN LÚA CỦA MỘT SỐ NÔNG DƯỢC VÀ VI KHUẨN VÙNG RỄ TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO” Do sinh viên Danh Tuấn thực bảo vệ trước hội đồng Ý kiến hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp: . . Luận văn tốt nghiệp hội đồng đánh giá mức: . DUYỆT KHOA Cần Thơ, ngày .tháng 10 năm 2013 Chủ tịch Hội Đồng LƯỢC SỬ CÁ NHÂN I. LƯỢC SỬ Họ tên: DANH TUẤN Giới tính: Nam Ngày, tháng, năm sinh: 11/01/1988 Nơi sinh: Cờ Đỏ - Cần Thơ Quê quán: Ấp thới thạnh, Xã thới xuân, Huyện Cờ Đỏ, TP CT Dân tộc: khmer Tôn giáo: Phật Chổ riêng địa liên lạc: Số nhà 822 Ấp Thới thạnh, Xã Thới Xuân Huyện Cờ Đỏ, Thành phố Cần Thơ Điện thoại: 01634509740 Cha: Danh Sách Sinh năm: 1950 Mẹ: Đào thi Trọng Sinh năm: 1953 II. QUÁ TRÌNH HỌC TẬP Từ năm 1996-2001 học Trường tiểu học Thới Đông Từ năm 2001-2004 học Trường PTTH Hà Huy Giáp Từ năm 2004-2005 học Trường THCS Thới Đông Từ năm 2005-2008 học Trường PTTH Dân tộc Nội Trú, Quận Ô Môn T.p Cần Thơ Từ năm 2009-2013 học trường Đại học Cần Thơ. i LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan công trình nghiên cứu thân thầy hướng dẫn, số liệu kết trình bày luận văn tốt nghiệp trung thực chưa công bố nghiên cứu trước đây. Người thực Danh Tuấn ii LỜI CẢM TẠ Kính dâng, Cha, Mẹ suốt đời tận tụy nghiệp tương lai con. Những người thân giúp đỡ, động viên suốt thời gian qua. Thành kính ghi ơn, Thầy Trần Vũ Phến tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian thực hoàn thành luận văn này. Cô cố vấn học tập Lê thị Ngọc Xuân giúp đỡ, động viên em suốt khóa học. Quý thầy cô khoa Nông Nghiệp Sinh học ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ dạy dỗ truyền đạt kiến thức cho em thời gian học trường. Chân thành biết ơn, Anh Huỳnh Văn Nghi anh chị môn Bảo vệ Thực vật đóng góp ý kiến quý báu tạo điều kiện cho em hoàn thành tốt thí nghiệm. Thành thật cảm ơn, Cảm ơn bạn Nguyến Tuấn Anh, Nguyễn Trần Quang Nguyễn Quốc Phong bạn lớp Bảo vệ Thực vật K35 giúp đỡ thời gian thực đề tài Trân trọng! Danh Tuấn iii MỤC LỤC Nội dung Trang Lược sử cá nhân i Lời cam đoan .ii Lời cảm tạ .iii Mục lục .iv Danh sách chữ viết tắt .vii Danh sách bảng .viii Danh sách hình ix Tóm lược .x Mở đầu CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 Những đặc tính chung vi khuẩn Erwinia sp .2 1.1.1. Sơ lược nguyên cứu vi khuẩn Erwinia sp 1.2. Sơ lược tác nhân thử đối kháng phòng thí nghiệm .4 1.2.1. Các nông dược sử dụng phòng thí nghiệm 1.2.1.1.LUSATEX 5SL .4 1.2.1.2.AVALON 8WP .5 1.21.3.STANER 2WP .5 1.21.4.ANTI - Xo 200WP .6 1.2.1.5.Agofast.80WP .7 1,21.6.Kasumin.2L (HokkoChemin Co,Ltd.) .7 1.2.1.7.Stepguard 200TB .8 iv 1.2.2. Đặc điểm vi khuẩn thuộc chi Bacillus 1.2.2.1.Bacillus amyloliquefaciens .10 1.2.2.2.Brevibacillus brevis .11 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 12 2.1 Phương tiện 12 2.1.1 Địa điểm thời gian thí nghiệm 12 2.1.2 Vật liệu thiết bị 12 2.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 12 2.2 Phương pháp 13 2.2.1 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp. -1 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ .14 * Bố trí thí nghiệm .14 * Tiến hành thí nghiệm 15 * Ghi nhận tiêu 15 2.2.2 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp. -2 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ .15 * Tiến hành thí nghiệm 15 2.2.3 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp. -3 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ .15 * Tiến hành thí nghiệm 15 .3 XỬ LÝ SỐ LIỆU 15 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16 3.1 Phân lập vi khuẩn Erwinia sp. từ mẫu lúa nhiễm bệnh thối thân từ An Giang Cần Thơ 16 v 3.2 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-1 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ 18 3.3 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-2 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ 20 3.4 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-3 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ 23 CHƯƠNG KẾT LUẬN - ĐỀ NGHỊ 27 4.1 Kết luận 27 4.2 Đề nghị .27 TÀI LIỆU THAM KHẢO .28 PHỤ CHƯƠNG vi 3.2 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-1 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ Kết trình bày (Bảng 3.1) cho thấy: Các nghiệm thức thử nghiệm với Starner 20WP, Avalon 8WP, Stepguard 200TB Bacillus amyloliquefaciens có hiệu ức chế vi khuẩn gây bệnh nồng độ, nhìn chung, trừ thời điểm 12 72 GSTN, hiệu ức chế nồng độ N2 thường cao so với nồng độ N1. Các loại thuốc lại hoàn toàn hiệu qua thời điểm khảo sát, nồng độ gấp đôi khuyến cáo. Thuốc Avalon 8WP cho hiệu ức chế nồng độ gấp đôi khuyến cáo mạnh nồng độ khuyến cáo 34 thời điểm (12, 24 48 GSTN). Ở nồng độ khuyến cáo bán kính vành khăn vùng ức chế nghiệm thức tăng từ thời điểm 12 GSTN đến thời điểm 48 GSTN giảm thời điểm 72 GSTN. Hiệu biểu mạnh thời điểm 48 GSTN với bán kính vành khăn vùng ức chế 5,50 mm. Ở nồng độ gấp đôi khuyến cáo, hiệu ức chế dòng Erwinia sp.-1 tăng đến thời điểm 48 GSTN với bán kính vành khăn vùng ức chế 6,80 mm. Starner 20WP-N2 Starner 20WP-N2 Stepguard-N2 Stepguard-N2 Avalon 8WP-N2 Hình 3.4 Kết in vitro thời điểm 48 sau thử nghiệm, cho thấy Starner 20WP, Avalon 8WP Stepguard có tác động ức chế trực tiếp phát triển vi khuẩn Erwinia sp. -1 18 Bảng 3.1 Bán kính vùng vi khuẩn Erwinia sp. - bị ức chế (mm) qua thời điểm sau thử nghiệm Bán kính vòng vô khuẩn qua thời điểm (mm) Nghiệm thức 12h Lusatex 5SL Avalon 8WP Starner 20WP 24h 48h 72h -N1 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N2 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N1 4,93 a 5.15 bcd 5,50 bc 4,30 ab -N2 6,15 a 6,75 a 6,80 a 5,65 a -N1 5,35 a 4,85 bcd 5,80 b 4,90 bc -N2 5,73 a 5,45 bc 5,75 b 4,70 c Anti_XO 200WP -N1 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N2 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N1 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N2 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N1 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N2 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d Agofast 80WP Kasumin 2SL Stepguard 200TB -N1 3,73 b 4,70 -N2 5,88 a 5,55 b -N1 2,23 c 3,70 -N2 3,80 b 4,70 -N1 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d -N2 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d 0,00 d 0,00 f 0,00 e 0,00 d Bacillus Brevibacillus Đối chứng Mức ý nghĩa CV (%) cd 4,85 d 4,30 ab 5,65 bc 5,20 ab e 5,15 4,30 ab d 5,60 bc cd 5,70 a ** ** ** ** 13,41 8,46 5,52 21,10 Ghi chú: Trong cột số liệu trung bình theo sau hay chữ giống khác biệt ý nghĩa thống kê phép thử Duncan, - ** khác biệt mức ý nghĩa 1%, - N1:Nồng độ thuốc khuyến cáo;N2:nồng độ thuốcgấp đôi khuyến cáo - h: sau thí nghiệm - Số liệu chuyển sang (x+0,5) phân tích thống kê. Thuốc Starner 20WP, qua thời điểm thí nghiệm có hiệu ức chế nồng độ không khác biệt mặt thống kê, bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế nồng độ khuyến cáo gấp đôi khuyến cáo tăng từ thời điểm 12 GSTN đến 19 thời điểm 48 GSTN giảm thời điểm 72 GSTN. Tại thời điểm 48 GSTN nồng độ khuyến cáo hiệu ức chế nghiệm thức Starner 20WP nồng độ khuyến cáo mạnh so với thời điểm khác với bán kính vòng vô khuẩn 5,80 mm gấp đôi khuyến cáo 5,75 mm không khác biệt ý nghĩa nồng độ. Thuốc Stepguard 200TB có hiệu ức chế thời điểm 12, 24 36 GSTN nồng độ N2 cao nồng độ N1, khác biệt ý nghĩa thống kê 1%, với bán kính vùng vi khuẩn bị vùng ức chế 5,65 mm nồng độ gấp đôi khuyến cáo nồng độ khuyến cáo 4,85 mm. Đến thời điểm 72 GSTN hiệu giảm giửa nồng độ khác biệt ý nghĩa. Hiệu ức chế vi khuẩn B. amyloliquefaciens lên vi khuẩn gây bệnh kéo dài đến thời điểm 48 GSTN, đến thời điểm 72 GSTN diễn biến bán kính vành khăn vùng ức chế tiếp tục tăng . Ở mật số 108 cfu/cm, bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế lớn thời điểm 48 GSTN 5,60 mm, sau tăng thời điểm 72 GSTN. Qua kết thí nghiệm (Bảng 3.1) cho thấy khác biệt khả ức chế nồng độ mật số 108 cfu/cm cho hiệu ức chế mạnh so với mật số 106 cfu/cm. Tóm lại, thí nghiệm hiệu ức chế số nông dược vi khuẩn vùng rễ vi khuẩn Erwinia sp.-1 qua thời điểm cho thấy nghiệm thức Starner 20WP, Avalon 8WP, Stepguard 200TB tác nhân phòng trừ sinh học B. amyloliquefaciens có khả ức chế phát triển vi khuẩn gây bệnh với mức độ khác thể qua bán kính vùng vi khuẩn Erwinia sp.-1 bị ức chế. Tuy nhiên, Avalon 8WP cho hiệu cao với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế 6,80 mm thời điểm 48 GSTN. 3.3 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-2 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ Qua kết thí nghiệm (Bảng 3.2 Hình 3.2) cho thấy nghiệm thức Starner 20WP, Avalon 8WP Stepguard tác động trực tiếp lên vi khuẩn Erwinia sp.-2 nồng độ. 20 Hiệu ức chế Avalon 8WP vi khuẩn Erwinia sp.-2 có khuynh hướng giảm từ thời điểm 48 GSTN, nhiên đến thời điểm 72 GSTN thuốc không hiệu ức chế vi khuẩn gây bệnh. Nhìn chung, vi khuẩn gây bệnh chịu tác động nồng độ gấp đôi khuyến cáo mạnh nồng độ khuyến cáo thời điểm 12 , 24 48 GSTN khác biệt ý nghĩa thống kê 1% nồng độ. Trong đó, thời điểm 48 GSTN cho hiệu mạnh với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế nồng độ gấp đôi khuyến cáo 5,13 mm nồng độ khuyến cáo 5,03 mm. Stepguard-N2 Stepguard-N2 Hình 3.5 Kết in vitro thời điểm 72 sau thử nghiệm, động ức chế trực tiếp Stepguard 200TB lên phát triển vi khuẩn Erwinia sp. -2 Thuốc Stepguard 200TB vi khuẩn gây bệnh Erwinia sp.-2 khác biệt nồng độ thời điểm 12, 24 48 GSTN, thời điểm 72GSTN có khác biệt ý nghĩa 1%. Tương tự nghiệm thức Avalon 8WP, nghiệm thức Stepguard 200TB cho hiệu ức chế mạnh thời điểm 48GSTN với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế 6,0 mm nồng độ gấp đôi khuyến cáo, nồng độ khuyến cáo 5,13 mm, giảm từ 48 GSTN. Dòng vi khuẩn Erwinia sp.-2 không chịu tác động ức chế loại thuốc Starner 20WP, Lusatex 5SL, Anti XO 200WP, Agofast 80WP Kasumin 2SL nồng độ tác nhân phòng trừ sinh học mật số. 21 Bảng 3.2 Bán kính vùng vi khuẩn Erwinia sp. - bị ức chế (mm) qua thời điểm sau thử nghiệm Bán kính vòng vô khuẩn qua thời điểm (mm) Nghiệm thức 12h Lusatex 5SL 24h 48h 72h -N1 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N1 1,31 1,22 b 5,03 c 0,00 c -N2 4,53 a 5,03 a 5,13 b 0,00 c -N1 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c Anti_XO 200WP -N1 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N1 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N1 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c -N1 1,84 bc 5,13 a 5,13 a 2,31 b -N2 3,31 ab 4,09 a 6,00 a 3,12 a -N1 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 d 0,00 -N1 0,00 d -N2 0,00 0,00 Avalon 8WP Starner 20WP Agofast 80WP Kasumin 2SL Stepguard Bacillus Brevibacillus Đối chứng Mức ý nghĩa CV (%) c 0,00 d 0,00 c c 0,00 d 0,00 c 0,00 c 0,00 d 0,00 c d 0,00 c 0,00 d 0,00 c d 0,00 c 0,00 d 0,00 c ** ** ** ** 33,26 26,80 21,14 2,89 Ghi chú: Trong cột số liệu trung bình theo sau hay chữ giống khác biệt ý nghĩa thống kê phép thử Duncan, - ** khác biệt mức ý nghĩa 1%, - N1:Nồng độ thuốc khuyến cáo;N2:nồng độ thuốcgấp đôi khuyến cáo - h: sau thí nghiệm - Số liệu chuyển sang (x+0,5) phân tích thống kê. 22 Kết Bảng 3.2, cho phép nhận xét hiệu ức chế vi khuẩn Erwinia sp. – loại thuốc theo thời gian sau: - Ở thời điểm 24 sau thử thuốc hiệu ức chế vi khuẩn Avalon 8WP-N2, Stepguard-N1 Stepguard-N2 cao nhất. - Ở thời điểm 48 sau thử thuốc hiệu cao Stepguard-N2 với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế 6,00 mm Stepguard-N1 5,13 mm. - Ở thời điểm 72 sau thử Stepguard biểu hiệu ức chế vi khuẩn gây bệnh. Tuy nhiên hiệu ức chế giảm thấp. 3.4 Hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-3 gây bệnh thối gốc thân lúa số nông dược vi khuẩn vùng rễ Qua kết thí nghiệm (Bảng 3.3) cho thấy loại thuốc Avalon 8WP, Starner 20WP, Stepguard 200TB, vi khuẩn Brevibacillus brevis có hiệu ức chế vi khuẩn gây bệnh, nhiên hiệu phụ thuộc nhiều vào nồng độ mật số thử nghiệm. Các nghiệm thức Starner 20WP – N2, Avalon 8WP – N2, Stepguard 200TB –N2 Brevibacillus brevis mật số 108 cfu/ml thể qua bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế. Các loại thuốc Lusatex 5SL, Anti_XO 200WP, Agofast 80WP Kasumin SL, vi khuẩn Bacillus amyloliquefaciens, không biểu khả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp.-3, vi khuẩn Brevibacillus brevis có hiệu ức chế vi khuẩn Erwinia sp.-3 mật số 108 cfu/ml. - Nghiệm thức Avalon 8WP-N2 cho hiệu ức chế kéo dài đến 72 GSTN, hiệu ức chế giảm dần thời điểm 24 GSTN với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế thời điểm 11,20 mm, bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế giảm dần đến 72 GSTN 7,40 mm. Các thời điểm khác biệt ý nghĩa thống kê 1% so với nồng độ khuyến cáo (Avalon 8WP-N1). Nghiệm thức Avalon 8WP-N1 cho hiệu ức chế vi khuẩn thời điểm 24 GSTN với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế 1,60 mm, không hiệu thời điểm tiếp theo. - Qua thời điểm thí nghiệm ta ghi nhận hiệu ức chế nồng độ nghiệm thức Starner 20WP khác biệt ý nghĩa với nhau. Diễn biến bán kính vành khăn vùng ức chế nồng độ gấp đôi khuyến cáo tăng từ 12 GSTN đến 48 GSTN, 23 thời điểm 72 GSTN thuốc không hiệu ức chế vi khuẩn, hiệu ức chế mạnh thời điểm 48 GSTN với bán kính vành vô khuẩn 14,10 mm. Ở nồng độ khuyến cáo hiệu ức chế biểu thời điểm 12 GSTN với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế 8,30 mm, thời điểm 24, 48 72 GSTN không hiệu ức chế vi khuẩn. - Nghiệm thức Stepguard 200TB hiệu ức chế vi khuẩn gây bệnh có khác biệt nồng độ, nồng độ gấp đôi khuyến cáo có hiệu ức chế dòng vi khuẩn gây bệnh Erwinia sp.-3, Stepguard 200TB-N2 cho hiệu ức chế vi khuẩn kéo dài đến 48 GSTN bắt đầu giảm hiệu ức chế với bán kính vùng vi khuẩn bị ức chế thời điểm 48 GSTN 9,00 mm, bắt đầu giảm hiệu thời điểm 72 GSTN. Starner 20WP-N2 Avalon 8WP-N2 Avalon 8WP-N2 Starner 20WP-N2 Brevi-1 Stepguard -N2 Stepguard -N2 Brevi-1 Hình 3.6 Kết in vitro Avalon 8WP, Starner 20WP, Stepguard 200TB Brevibacillus brevis thời điểm 48 GSTN 24 Bảng 3.3 Bán kính vùng vi khuẩn Erwinia sp. - bị ức chế (mm) qua thời điểm sau thử nghiệm Nghiệm thức Lusatex 5SL Avalon 8WP Bán kính vòng vô khuẩn qua thời điểm (mm) 12h 24h 72h -N1 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N1 0,00 e 1,60 0,00 d 0,00 c -N2 11,20 b Starner 20WP 48h -N1 e 11,20 b 0,83 cd -N2 13,70 a 0,00 10,70 a f 14,10 a 7,40 b 0,00 d 0,00 c 3,00 c 0,00 c Anti_XO 200WP -N1 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N1 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N1 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N1 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N2 1,20 c -N1 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N2 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N1 0,00 e 0,00 f 0,00 d 0,00 c -N2 7,50 d 0,00 d 0,00 c 0,00 d 0,00 c Agofast 80WP Kasumin 2SL Stepguard Bacillus Brevi bacillus Đối chứng Mức ý nghĩa CV (%) 0,00 8,90 6,6 e c 9,00 b d 0,00 f 8,50 a ** ** ** ** 2,79 5,81 6,03 1,82 Ghi chú: Trong cột số liệu trung bình theo sau hay chữ giống khác biệt ý nghĩa thống kê phép thử Duncan, - ** khác biệt mức ý nghĩa 1%, - N1:Nồng độ thuốc khuyến cáo;N2:nồng độ thuốcgấp đôi khuyến cáo - h: sau thí nghiệm - Số liệu chuyển sang (x+0,5) phân tích thống kê. 25 Nghiệm thức Brevibacillus brevis có tác động trực tiếp vi khuẩn Erwinia sp.-3 số 108 cfu/ml, với bán kính vùng ức chế thời điểm 12 GSTN 7,50 mm giảm thời điểm 24 GSTN 6,60 mm; nhiên, không hiệu thời điểm tiếp theo. Tóm lại, qua kết bảng 3.3 ta nhận thấy, Starner 20WP – N2, Avalon 8WP – N2, Stepguard 200TB –N2 Brevibacillus brevis mật số 108 cfu/ml có hiệu ức chế vi khuẩn Erwinia sp.-3. Trong nghiệm thức Starner 20WP-N2 tác động lên vi khuẩn gây bệnh mạnh thời điểm 12, 24 GSTN, nhiên đến thời điểm 48 nghiệm thức Avalon 8WP-N2 có hiệu ức chế vi khuẩn cao nhất, cao có ý nghĩa thống kê so với Starner 20WP nồng độ N2, Stepguard 200TB nồng độ N2. Nghiệm thức Stepguard 200TB-N2 có hiệu ức chế vi khuẩn kéo dài đến 72 GSTN, có hiệu cao thời điểm nầy. 26 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Các loại thuốc Stepguard 200TB, Avalon 8WP nồng độ gấp đôi khuyến cáo cho hiệu cao trì hiệu lâu so với nghiệm thức lại dòng Erwinia sp.-1, -2, -3. Starner 20WP cho hiệu ức chế vi khuẩn dòng vi khuẩn Erwinia sp.-1 Erwinia sp.-3. Vi khuẩn vùng rễ Bacillus amyloliquefaciens cho hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-1. Brevibacillus brevis cho hiệu ức chế dòng vi khuẩn Erwinia sp.-3, khả ức chế trực tiếp dòng vi khuẩn thối thân lại. Các loại thuốc Lusatex 5SL, Anti_XO 200WP, Agofast 80WP Kasumin 2L khả ức chế vi khuẩn gây bệnh điều kiện in vitro. 4.2 Đề nghị Khảo sát hiệu phòng trị bệnh thối gốc thân lúa điều kiện nhà lưới loại nông dược, vi khuẩn vùng rễ có hiệu ức chế vi khuẩn gây bệnh. 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Vệt Ngô Tự Thành, Bùi Việt Hà, Vũ Minh Đức, Chu Văn Mẫn, 2009. Nghiên cứu hoạt tính enzyme ngoại bào số chủng Bacillus phân lập khả ứng dụng chúng xử lý nước thải. Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 25: 101-106. Nguyễn Mạnh Chinh ctv., 2012. Cẩm nang sử dụng thuốc bảo vệ thực vât, Nhà xuất nông nghiệp tp. Hồ Chí Minh, 748 trang. Phạm Văn Kim, 2002. Kết nghiên cứu ứng dụng nguyên lý kích kháng quản lý bệnh lúa. Hội thảo kích thích tính kháng bệnh lưu dẫn, chiến lượt thâm thiện với môi trường để quản lý bệnh lúa. Trường Đại Học Cần Thơ 27-12-2002. Phạm Văn Kim, 2000. Bài giảng nguyên lí bệnh hại trồng, Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ. Phạm Văn Kim, 2006. Vi sinh vật chuyển hóa vật chất đất. Giáo trình giành cho ngành Trồng Trọt, Khoa Học Đất, Nông Học. Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ. Pham Van Kim, V. Smedeg AAR-P Eterson, E.D Eneergard and H.L.Jo Ergensen. 2003. Úng dụng nguyên lý kích thích tính kháng bệnh lưu dẫn biện pháp sinh học đối phó với bệnh đạo ôn (Pyricularia grisea ) Đồng Bằng Sông Cửu Long. :Tập chí khoa Học.Đại Học Cần Thơ, chuyên ngành Bảo Vể Thực Vật.trang:94-96. Trần Thị Thúy Ái, 2011. Đánh giá hiệu vi khuẩn vùng rễ phòng trừ bệnh vàng thối củ gừng nấm Fusarium spp. Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Đại Học Cần Thơ. Trần Văn Hai, 2003. Hóa bảo vệ thực vật, Tủ sách Đại Học Cần Thơ. 28 Trần Văn Nhã, 2011. Đánh giá hiệu lực vi khuẩn vùng rễ phòng trừ bệnh thối củ gừng vi khuẩn Ralstonia solanacearum. Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Đại Học Cần Thơ. Võ Thanh Hoàng, Nguyễn Thị Nghiêm, 1993. Bệnh hại lương thực thực phẩm. Bệnh chuyên khoa, Tủ sách Đại Học Cần Thơ: 65 – 74. Tiếng Anh Agrios, G.N. 2005. Plant Pathology. Derparment of plant pathology, University of Florida, 4th edition. pp 948. Arguelles-Arias A., Ongena M., Halimi B., Lara Y., Brans A., Joris B. and Fickers P., 2009. Bacillus amyloliquefaciens GA1 as a source of potent antibiotics and other secondary metabolites for biocontrol of plant pathogens. Microbial Cell Factories 8: 2859-2863. Chandel S., Allanz E. J., Woodwardz S., 2010. Biological Control of Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici on Tomato by Brevibacillus brevis. J Phytopathol 158: 470–478. Garrity, G.M., Bell, J.A. and Lilburn, T.G. 2004. Bergey’s manual of systemic bacteriology, Second edition. Springer Press. Pp 5685. Gupta R.,Begand Q. K. and Lorenz P., 2002. Bacterial alkaline proteases: molecular approaches and industrial applications. Appl Microbiol Biotechnol 59: 15– 32. Hardoim P. R., Overbeek L. S. V. and Elas J. D. V., 2008. Properties of bacterial endophytes and their proposed role in plant growth, Trends in Microbiology 16 (10): 463 -471. Jayamani M. S. A., 2006. Studies on the antagonistic effect of rhizobacteria against soilborne Phytophthora species on strawberry. The Ph.D. thesis, Hannover University. Park K., Kim E. S., Bae Y. S. and Kim H. C., 2003. Plant growth promotion and bioprotection against multiple plant pathogens by a selected pgpr-mediated ISR, Bacillus amyloliquefaciens extn-1. th International PGPR Workshop, 29 5- 10 October 2003, Calicut, India, Session VII – Mechanisms of Biological Control. Phạm Văn Dư, 2011: http://nongnghiep.vn/nongnghiepvn/72/45/45/88122/Vikhuan-hai-lua-thach-thuc-muc-tieu-XK-gao-vung-DBSCL.aspx Schaad, N.W. 1988. Laboratory guide for identification og plant pathogenic bacteria (2nd Ed.). APS Press, St Paul, Minesota 55121, USA Yoshida S., Sugie H., Yada H., Hiradate S., and Fujii Y., 2002. Mulberry anthracnose antagonists (iturin) produced by Bacillus amyloliquefaciens RC-2. Phytochemistry 61: 693-698. 30 PHỤ CHƯƠNG Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 58.938 3.274 98.934 0.0000 Within 76 2.515 0.033 -------------------------------------------------------------------------Total 94 61.454 Coefficient of Variation = 5.52% Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 63.995 3.555 253.147 0.0000 Within 76 1.067 0.014 Total 94 65.062 Coefficient of Variation = 21.10% Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 72.537 4.030 629.447 0.0000 Within 76 0.487 0.006 -------------------------------------------------------------------------Total 94 73.024 Coefficient of Variation = 5.52% Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 53.844 2.991 37.747 0.0000 Within 76 6.023 0.079 -------------------------------------------------------------------------Total 94 59.867 Coefficient of Variation = 21.10% Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 15.952 0.886 9.742 0.0000 Within 76 6.914 0.091 -------------------------------------------------------------------------Total 94 22.866 Coefficient of Variation = 33.26% Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 27.138 1.508 22.528 0.0000 Within 76 5.086 0.067 -------------------------------------------------------------------------Total 94 32.224 Coefficient of Variation = 26.80% Phu bang A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 30.169 1.676 39.555 0.0000 Within 76 3.220 0.042 -------------------------------------------------------------------------Total 94 33.389 Coefficient of Variation = 21.14% Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 10.321 0.573 1020.434 0.0000 Within 76 0.043 0.001 -------------------------------------------------------------------------Total 94 10.364 Coefficient of Variation = 2.89% Phụ bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 5.009 0.278 506.411 0.0000 Within 76 0.042 0.001 -------------------------------------------------------------------------Total 94 5.051 Coefficient of Variation = 2.79% Phụ bảng 10 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 4.469 0.248 109.138 0.0000 Within 76 0.173 0.002 -------------------------------------------------------------------------Total 94 4.642 Coefficient of Variation = 5.81% Phụ bảng 11 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 2.335 0.130 60.604 0.0000 Within 76 0.163 0.002 -------------------------------------------------------------------------Total 94 2.498 Coefficient of Variation = 6.03% Phụ bảng 12 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob. -------------------------------------------------------------------------Between 18 1.667 0.093 493.153 0.0000 Within 76 0.014 0.000 -------------------------------------------------------------------------Total 94 1.681 Coefficient of Variation = 1.82% [...]... đó, vi c vấn đề rất cần thiết và cấp bách sẽ góp phần làm cơ sở cho vi c tìm biện pháp phòng trị bệnh đạt hiệu quả và bền vững Đó là lý do mà đề tài Hiệu quả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối gốc trên lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ trong điều kiện in vitro được thực hiện nhằm chọn lọc những loại nông dược và vi khuẩn đối kháng có hiệu quả trong phòng trị bệnh thối gốc. .. tài: Hiệu quả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp, gây bệnh thối thân gốc lúa của một số loại nông dược và vi khuẩn vùng rễ trong điều kiện in vitro được thực hiện từ tháng 6/2012 đến tháng 10/2013 tại Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp và Sinh học ứng dụng, nhằm đánh giá chọn loại nông dược và vi khuẩn vùng rễ có hiệu quả ức chế đối với 3 dòng vi khuẩn Erwinia sp Các thí nghiệm được thực hiện trong. .. đường thẳng vuông gốc tại tâm vào các thời điểm 12, 24, 48, 72 giờ sau khi thí nghiệm 2.2.2 Hiệu quả ức chế đối với dòng vi khuẩn Erwinia sp -2 gây bệnh thối gốc thân lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ * Tiến hành thí nghiệm: (Tương tự thí nghiệm 1) 2.2.3 Hiệu quả ức chế đối với dòng vi khuẩn Erwinia sp -3 gây bệnh thối gốc thân lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ * Tiến hành thí... phát triển của vi khuẩn Erwinia sp -2 21 Hình 3.6 Kết quả in vitro của Avalon 8WP, Starner 20WP, Stepguard 200TB và Brevibacillus brevis ở thời điểm 48 GSTN 24 ix Danh Tuấn 2013 Hiệu quả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối gốc trên lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ trong điều kiện in vitro Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp và Sinh học ứng... vùng vi khuẩn bị ức chế là 6,80 mm ở thời điểm 48 GSTN 3.3 Hiệu quả ức chế đối với dòng vi khuẩn Erwinia sp. -2 gây bệnh thối gốc thân lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ Qua kết quả thí nghiệm (Bảng 3.2 và Hình 3.2) cho thấy các nghiệm thức Starner 20WP, Avalon 8WP và Stepguard tác động trực tiếp lên vi khuẩn Erwinia sp. -2 ở cả 2 nồng độ 20 Hiệu quả ức chế của Avalon 8WP đối với vi khuẩn Erwinia. .. dòng Erwinia sp. -1, Erwinia sp. -2 và Erwinia sp. -3 ở nồng độ gấp đôi khuyến cáo Ở các nghiệm thức Lusatex 5SL, Anti_XO 200WP, Agofast 80WP và Kasumin 2SL không có khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh, chỉ riêng ngiệm thức Starner 20WP cho hiệu quả ức chế vi khuẩn trên 2 dòng vi khuẩn Erwinia sp. -1 và Erwinia sp. -3 Hiệu quả ức chế của vi khuẩn vùng rễ Bacillus amyloliquefaciens chỉ cho hiệu quả ức chế trên. .. kính có độ phóng đại X100 Từ kết quả quan sát số roi của vi khuẩn xác định vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh 2.2.1 Hiệu quả ức chế đối với dòng vi khuẩn Erwinia sp -1 gây bệnh thối gốc thân lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ * Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm được tiến hành trong đĩa petri, bố trí hoàn toàn ngẩu nhiên, 19 nghiệm thức (9 loại thuốc x 2 nồng độ thuốc và đối chứng), 5 lặp lại (1 đĩa petri)... các đặc điểm của giống vi khuẩn Erwinia theo khóa phân loại vi khuẩn của Garrity và ctv., (2004) và cũng được mô tả bởi các tác giả Schaad (1998), Phạm Văn Kim (2000) và Agrios (2005) 17 3.2 Hiệu quả ức chế đối với dòng vi khuẩn Erwinia sp. -1 gây bệnh thối gốc thân lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ Kết quả trình bày ở (Bảng 3.1) cho thấy: Các nghiệm thức thử nghiệm với Starner 20WP, Avalon... dòng vi khuẩn Erwinia sp. -1 Đối với vi khuẩn vùng rễ Brevibacillus brevis thì cho hiệu quả ức chế trên dòng vi khuẩn Erwinia sp. -3, không có khả năng ức chế trực tiếp 2 dòng vi khuẩn thối thân còn lại x MỞ ĐẦU Lúa là một trong năm loại cây lương thực chính của thế giới, đã góp phần nuôi sống hơn phân nửa dân số thế giới Ở Vi t Nam, lúa là cây trồng chính và quan trọng nhất trong hệ thống canh tác nông. .. trong điều kiện in vitro Các nghiệm thức được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẩu nhiên, 5 lặp lại Đánh giá hiệu quả của các loại nông dược và vi khuẩn vùng rễ đối với 3 dòng Erwinia sp được phân lập trên giống lúa Jasmine 85, và OM 4218 Kết quả thí nghiệm cho thấy nghiệm thức Stepguard 200TB, Avalon 20WP cho hiệu quả mạnh nhất và duy trì hiệu quả lâu nhất so với các nghiệm thức còn lại đối với 3 dòng Erwinia . 3.3 Hiệu quả ức chế đối với dòng vi khuẩn Erwinia sp 2 gây bệnh thối gốc thân lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ 20 3.4 Hiệu quả ức chế đối với dòng vi khuẩn Erwinia sp 3 gây bệnh thối. tài: HIỆU QUẢ ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN ERWINIA SP. GÂY BỆNH THỐI GỐC TRÊN LÚA CỦA MỘT SỐ NÔNG DƯỢC VÀ VI KHUẨN VÙNG RỄ TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Giảng vi n hướng dẫn: Sinh vi n thực. tài Hiệu quả đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp. gây bệnh thối gốc trên lúa của một số nông dược và vi khuẩn vùng rễ trong điều kiện in vitro được thực hiện nhằm chọn lọc những loại nông dược