khảo sát hiệu quả của một số loại thuốc hoá học và dịch trích thực vật đối với nấm fusarium sp. và nấm rhizopus sp. gây bệnh lem lép hạt lúa trong điệu kiện in vitro

... HIỆU QUẢ CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC HOÁ HỌC VÀ DỊCH TRÍCH THỰC VẬT ĐỐI VỚI NẤM Fusarium sp VÀ NẤM Rhizopus sp GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA TRONG ĐIỆU KIỆN IN VITRO Do sinh viên Hồ Minh Thuyền thực bảo... nghiệm Khảo sát hiệu loại thuốc hoá học nấm Fusarium sp nấm Rhizopus sp gây lem lép hạt lúa điều kiện in vitro 18 2.2.2 Thí nghiệm Khảo sát hiệu loại dịch trích thực vật đối nấm Fusarium sp nấm Rhizopus. .. MINH THUYỀN, 2014.“KHẢO SÁT HIỆU QUẢ MỘT SỐ LOẠI DỊCH TRÍCH THỰC VẬT VÀ THUỐC HOÁ HỌC ĐỐI VỚI NẤM Fusarium sp VÀ NẤM Rhizopus sp GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA TRONG ĐIỆU KIỆN IN VITRO Luận văn tốt nghiệp

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

HỒ MINH THUYỀN

KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC HOÁ HỌC VÀ DỊCH TRÍCH THỰC VẬT ĐỐI VỚI NẤM

Fusarium sp VÀ NẤM Rhizopus sp

GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA

TRONG ĐIỆU KIỆN

IN VITRO

Luận văn tốt nghiệp đại học Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT

Cần Thơ, 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

Luận văn tốt nghiệp đại học Ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT

Tên đề tài:

KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC HOÁ HỌC VÀ DỊCH TRÍCH THỰC VẬT ĐỐI VỚI NẤM

Fusarium sp VÀ NẤM Rhizopus sp

GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA

TRONG ĐIỆU KIỆN

IN VITRO

Lớp: TT1073A1

Cần Thơ, 2013

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT

Chứng nhận luận văn tốt nghiệp với đề tài:

KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC HÓA

HỌC VÀ DỊCH TRÍCH THỰC VẬT ĐỐI VỚI NẤM

FUSARIUM SP VÀ RHIZOPUS SP.GÂY BỆNH

LEM LÉP HẠT LÚA TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO

Do sinh viên Hồ Minh Thuyền thực hiện và đề nạp

Kính trình Hội Đồng chấm luận văn tốt nghiệp xem xét

Cần Thơ, ngày tháng năm 2014

Cán bộ hướng dẫn

ThS Lê Thanh Toàn

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA

TRONG ĐIỆU KIỆN

IN VITRO

Do sinh viên Hồ Minh Thuyền thực hiện và bảo vệ trước Hội đồng, ngày… tháng… năm 2014

Luận văn đã được Hội đồng đánh giá ở mức:……… điểm

Ý KIẾN CỦA HỘI ĐỒNG ……….………

………

………

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014

CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG DUYỆT KHOA NN & SHƯD

CHỦ NHIỆM KHOA

TIỂU SỬ CÁ NHÂN

Họ và tên sinh viên: Hồ Minh Thuyền Giới tính: Nam

Ngày sinh: 10/01/1992 Dân tộc: Khơ-me Nơi sinh: Sóc Trăng

Quê quán: 150, ấp Tắc Bướm, xã Thạnh Thới An, huyện Trần Đề, tỉnh Sóc Trăng Quá trình học tập:

Năm 1998-2003: học tại trường Tiểu Học Thạnh Thới An 1

Năm 2003-2007: học tại trường Trung Học Cơ Sở Tài Văn

Năm 2007-2010: học tại trường Trung Học Phổ Thông Mỹ Xuyên

Năm 2010-2014: học tại trường Đại học Cần Thơ Chuyên ngành Bảo Vệ Thực Vật, khóa 36, khoa Nông Nghiệp Và Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của bản thân Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình luận văn nào trước đây

Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cảm ơn

và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014

Tác giả luận văn

LỜI CẢM ƠN

Kính dâng cha, mẹ vì sự nghiệp tương lai của con

Hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, ngoài sự cố gắng, nỗ lực của bản thân, tôi đã nhận được nhiều lời động viên từ người thân, sự quan tâm, giúp đỡ của thầy cô và bạn bè

Thành kính biết ơn cô PGS.TS Trần Thị Thu Thủy và Ths Lê Thanh Toàn đã tận tình chỉ bảo, giúp đỡ, hướng dẫn tôi trong quá trình thực hiện và hoàn thành đề tài tốt nghiệp

Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cố vấn học tập, quý thầy cô trong Khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng – những người đã giảng dạy, truyền đạt nhiều kiến thức bổ ích trong suốt quá trình học tập

Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến chị Nguyễn Thị Hàn Ni, các anh chị học viên cao học khóa 20 và các bạn trong phòng thí nghiệm Nedo đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài Gửi đến các bạn thuộc lớp Bảo vệ Thực vật khóa 36

đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập

HỒ MINH THUYỀN

MỤC LỤC

TIỂU SỬ CÁ NHÂN iii

LỜI CAM ĐOAN iv

LỜI CẢM ƠN v

MỤC LỤC vi

DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT viii

DANH SÁCH BẢNG ix

DANH SÁCH HÌNH x

TÓM LƯỢC xi

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

1.1 SƠ LƯỢC VỀ BỆNH LEM LÉP HẠT DO NẤM 2

1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ DỊCH TRÍCH THỰC VẬT VÀ THUỐC HOÁ HỌC TRONG PHÒNG TRỪ BỆNH HẠI LÚA 3

1.2.1 Những nghiên cứu trên thế giới 3

1.2.2 Những nghiên cứu trong nước 4

1.3 SƠ LƯỢC VỀ NẤM Fusarium sp VÀ NẤM Rhizopus sp GÂY LEM LÉP HẠT LÚA 4

1.3.1 Nấm Fusarium sp 4

1.3.2 Nấm Rhizopus sp 8

1.4 SƠ LƯỢC VỀ BỐN LOẠI THỰC VẬT DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM 9

1.4.1 Cây cỏ hôi 9

1.4.2 Cây Neem 10

1.4.3 Cây Lược vàng 11

1.4.4 Cây Húng tây 12

1.5 SƠ LƯỢC VỀ BỐN LOẠI THUỐC HOÁ HỌC DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM 13

1.5.1 Comcat 150WP 13

1.5.2 Tilt Super 300EC 13

1.5.3 Binhnomyl 50WP 14

1.5.4 Amistar 250SC 15

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 17

2.1 PHƯƠNG TIỆN 17

2.1.1 Thời gian và địa điểm 17

2.1.2 Vật liệu thí nghiệm 17

2.2 PHƯƠNG PHÁP 18

2.2.1 Thí nghiệm 1 Khảo sát hiệu quả của các loại thuốc hoá học đối với nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp gây lem lép hạt lúa trong điều kiện in vitro 18

2.2.2 Thí nghiệm 2 Khảo sát hiệu quả của các loại dịch trích thực vật đối nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp gây lem lép hạt lúa trong điều kiện in vitro 19

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22

3.1 HIỆU QUẢ CỦA BỐN LOẠI THUỐC HOÁ HỌC ĐỐI VỚI NẤM Fusarium sp VÀ NẤM Rhizopus sp 22

3.1.1 Hiệu quả của bốn loại thuốc hoá học đối với nấm Fusarium sp 22

3.1.2 Hiệu quả của bốn loại thuốc hoá học đối với nấm Rhizopus sp 27

3.2 HIỆU QUẢ CỦA BỐN LOẠI DỊCH TRÍCH THỰC VẬT ĐỐI VỚI NẤM Fusarium sp VÀ NẤM Rhizopus sp 31

3.1.1 Hiệu quả của bốn loại dịch trích thực vật đối với nấm Fusarium sp 31

3.1.2 Hiệu quả của bốn loại dịch trích thực vật đối với nấm Rhizopus sp 37

CHƯƠNG 4 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42

TÀI LIỆU THAM KHẢO 43

DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT

ĐBSCL: Đồng bằng sông Cửu Long

GSĐKT: giờ sau hi đ t hoanh hu n ty

RTSV: Rice tungro spherical virus

RTBV: Rice tungro bacillifrom virus

RGDV: Rice gall dwarf virus

RLACV: Rice transitory yellowing virus

RBSDV: Rice black streak dwarf mosaic virus

RDV: Rice dwarf virus

RStV: Rice stripe virus

ĐKKT: Đường kính khu n ty

ctv: Cộng tác viên

PDA: Môi trường Potato Dextrose Agar

DANH SÁCH BẢNG

2.1 Nồng độ các loại thuốc và dịch tr ch thực vật được sử dụng trong các th

nghiệm 17 3.1 Đường kính (cm) khu n ty nấm Fusarium sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả

của 4 loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro 23

3.2 Hiệu quả ức chế (%) nấm Fusarium sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả của 4

loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro 26

3.3 Đường kính (cm) khu n ty nấm Rhizopus sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả

của 4 loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro 28

3.4 Hiệu quả ức chế (%) nấm Rhizopus sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả của 4

loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro 31

3.5 Đường kính (cm) khu n ty nấm Fusarium sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả

của 4 loại dịch trích thực vật trong điều kiện in vitro 33

3.6 Hiệu quả ức chế (%) nấm Fusarium sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả của 4

loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro 36

3.7 Đường kính (cm) khu n ty nấm Rhizopus sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả

của 4 loại dịch trích thực vật trong điều kiện in vitro 38

3.8 Hiệu quả ức chế (%) nấm Rhizopus sp ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả của 4

loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro 41

DANH SÁCH HÌNH

Hình Tên hình trang 2.1 Sơ đồ bố trí thử nghiệm hiệu quả của các loại thuốc hóa học đối với nấm

Fusarium sp (nấm Rhizopus sp.) gây lem lép hạt lúa 19

2.2 Sơ đồ bố trí thử nghiệm hiệu quả của các loại dịch trích thực vật đối với

nấm Fusarium sp (nấm Rhizopus sp.) gây lem lép hạt lúa 20 3.1 Hiệu quả của bốn loại thuốc hoá học đối với nấm Fusarium sp ở thời điểm

HỒ MINH THUYỀN, 2014.“KHẢO SÁT HIỆU QUẢ MỘT SỐ LOẠI DỊCH

TRÍCH THỰC VẬT VÀ THUỐC HOÁ HỌC ĐỐI VỚI NẤM Fusarium sp

VÀ NẤM Rhizopus sp GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA TRONG ĐIỆU KIỆN IN VITRO” Luận văn tốt nghiệp kỹ sư ngành Bảo vệ Thực vật, khoa Nông

Nghiệp & Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ, cán bộ hướng dẫn khoa

học: Ths Lê Thanh Toàn

TÓM LƯỢC

Đề tài “Khảo sát hiệu quả một số loại dịch trích thực vật và thuốc hoá học đối với

nấm Fusarium sp và Rhizopus sp gây bệnh lem lép hạt lúa trong điều kiện in vitro”

được thực hiện từ tháng 2 năm 2013 đến tháng 12 năm 2013 tại phòng thí nghiệm Nedo, Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng, Trường Đại Học Cần Thơ nhằm: (1) Tìm ra dịch trích thực vật và nồng độ có hiệu quả ức

chế sự phát triển của hai loại nấm trong điều kiện in vitro, (2) Tìm ra thuốc hoá học

và nồng độ có hiệu quả ức chế sự phát triển của hai loại nấm trong điều kiện in vitr

Kết quả thí nghiệm cho biết hai loại dịch trích lá Neem và lá Cỏ hôi có hiệu

quả đối với nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp trong bốn loại dịch trích thực

vật khảo sát trong thí nghiệm

Kết quả thí nghiệm cho biết ba loại thuốc Binhnomyl 50WP, Tilt Super

300EC và Amistar 250SC có hiệu quả đối với nấm Fusarium sp và Rhizopus sp

trong bốn loại thuốc hoá học khảo sát trong thí nghiệm

MỞ ĐẦU

Lúa (Oryza sativa L.) là một trong năm loại cây lương thực chính của thế

giới Lúa được trồng ở tất cả các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới trên thế giới

Ngành sản xuất lúa gạo đã giúp Việt Nam từ một nước thiếu lương thực trở thành một trong những nước xuất khẩu gạo hàng đầu thế giới Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL) là vựa lúa lớn nhất cả nước, hàng năm đóng góp hơn 50% sản lượng lúa

và hơn 90% sản lượng gạo xuất khẩu của nước ta Trong những năm gần đây, tình hình sản xuất lúa gạo ngày càng phát triển nên việc thâm canh tăng vụ cùng với điều kiện khí hậu nóng ẩm, tập quán canh tác sạ dày và sử dụng nhiều phân đạm là điều kiện thuận lợi cho bệnh hại phát triển Trong đó, bệnh lem lép hạt là một trong những nguyên nhân chính làm thất thu năng suất và phẩm chất lúa gạo

Nhiều nghiên cứu về thành phần nấm gây bệnh lem lép hạt đã được thực hiện

và đã xác định một số loại nấm gây bệnh lem lép hạt Theo kết quả nghiên cứu của Trần Văn Hai (1999), có 11 loài nấm đã được ghi nhận trên các mẫu lúa thu ở

các tỉnh ĐBSCL là Curvularia lunata, Aspergillus spp., Alternaria sp., Mucor sp., Tilletia barclayana, Rhizopus sp., Penicillium sp., Helminthosporium oryzae, Pyricularia oryzae, Fusarium moniliforme và Ustilago sp Đến năm 2011,

kết quả nghiên cứu của Trần Thị Thu Thủy đã ghi nhận 11 loài nấm hiện diện trên

các mẫu lúa thu thập tại 8 tỉnh thuộc ĐBSCL gồm Fusarium sp., Curvularia lunata, Trichoconis padwickii, Helminthosporium oryzae, Nigrospora oryzae, Tilletia barclayana, Trichothecium sp., Cercospora oryzae, Pyricularia oryzae, Alternaria sp., Diplodina sp Trong đó, nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp hiện

diện với tần số cao Đó là lí do đề tài “ Khảo sát hiệu quả hiệu quả một số loại

dịch trích thực vật và thuốc hoá học đối với nấm Fusarium sp và nấm

Rhizopus sp gây bệnh lem lép hạt lúa trong điều kiện in vitro” đã được thực

hiện, với mục tiêu:

(1) Đánh giá hiệu quả các loại dịch trích thực vật đối với hai loại nấm

Fusarium sp và Rhizopus sp nhằm tìm ra loại dịch trích thực vật có hiệu quả nhất

(2) Đánh giá hiệu quả các loại thuốc hoá học đối với hai loại nấm Fusarium

sp và Rhizopus sp nhằm tìm ra loại thuốc hoá học có hiệu quả nhất

CHƯƠNG 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU1.1 SƠ LƯỢC VỀ BỆNH LEM LÉP HẠT DO NẤM

Năm 1991, bệnh lem lép hạt đã được phát hiện miền Trung, đến năm 1992 bệnh xuất hiện tại Đồng bằng sông Hồng (Phạm Văn Dư và ctv., 2001) Ở ĐBSCL, bệnh cũng khá phổ biến, gây hại đáng kể cho vụ Hè-Thu và Thu-Đông; ở một số nơi tỉ lệ hạt nhiễm trên gié khoảng 5-20%, trung bình khoảng 10% (Võ Thanh Hoàng, 1993) Bệnh có thể làm cho 100% số hạt bị lem, hạt lúa không thể làm giống được (Phạm Văn Kim, 2006)

Trần Văn Hai (1999) cho biết bệnh đã trở nên nghiêm trọng và gây thiệt hại lớn, có nơi ước tính từ 20-50% hạt bị lép, lửng và diện tích gây hại hàng năm trên 12.000 ha Bệnh đã gây hại nặng cho hai vụ lúa Hè-Thu và Thu-Đông tại ĐBSCL

Hiện nay, theo IRRI có tới khoảng 43 loài nấm gây hại hạt lúa trong tổng số

53 loài nấm có thể gây hại trong các giai đoạn phát triển của cây lúa ở tất cả các nước trồng lúa trên thế giới (Mew và Misra, 1994) Sự tồn tại và phát triển của các loài nấm này đã được quan tâm từ rất sớm (từ cuối thế kỷ 18) (Ou, 1985) Tuy nhiên, sự tồn tại của nấm trên hạt đến giữa thế kỷ 19 mới được nghiên cứu kỹ, cuối thế kỷ 19 đã có nhiều công bố về bệnh trên hạt của Richarson (1981), Ou (1985),

Nấm gây hại trên hạt thể hiện nhiều tác hại khác nhau Nhóm nấm nhiễm vào hạt trước khi thu hoạch thường làm giảm phẩm chất và giảm sức nảy mầm của hạt sau khi gieo, mạ có thể bị nhiễm bệnh (Ou, 1983) Nấm có thể gây hoại tử mô hạt giống (Khanzada và ctv., 2002), giảm hoặc ngăn cản khả năng nảy mầm cũng như làm thiệt hại cây con (Nghiep và ctv., 2001)

Lương Minh Châu và ctv (1998) đã cho biết khi gieo hạt giống nhiễm nấm bệnh thì năng suất lúa bị giảm 5-30%, làm cho lúa ít bông, ít hạt chắc/bông, tỉ lệ hạt lép tăng 4-6% so với hạt sạch và trọng lượng cũng giảm, nhẹ cân hơn Khi gieo hạt lúa bị nhiễm bệnh thì cường lực mạ bị giảm làm tốc độ phát triển chiều cao cây bị chậm lại với hạt sạch bệnh hay hạt có xử lý nước nóng Gieo hạt giống sạch bệnh cũng làm tăng năng suất 1,3 tấn/ha (41,9%) so với hạt nhiễm bệnh

Nhiều kết quả nghiên cứu cho thấy một số loài nấm làm biến màu hạt, ảnh hưởng đến chất lượng hạt (Mathur và Olgar Kongsdal, 2000) Hiện tượng biến màu hạt có thể chỉ xuất hiện trên vỏ trấu hoặc trên hạt gạo hay cả vỏ và hạt gạo đều bị bệnh Biểu hiện bệnh trên vỏ hạt thay đổi tùy loài nấm và tùy mức độ nhiễm, đôi khi triệu chứng chỉ là những vết đen nhỏ trên vùng vỏ bình thường hay trên vùng vỏ

bị biến màu (Ou, 1983) Triệu chứng của bệnh cũng có thể là những mảng màu nâu đen bao phủ phần lớn hay cả vỏ hạt, tâm vết bệnh có thể nâu nhạt hay xám, viền nâu

sậm Hạt gạo bên trong bị đổi sang màu đen, đỏ, cam, xanh,… (Võ Thanh Hoàng, 1993)

Theo thống kê của IRRI có khoảng 43 loài nấm được xác định là có truyền qua hạt giống (Mew và Misra, 1994) Nấm gây bệnh truyền qua hạt giống có ý nghĩa đặc biệt với cây lúa sau này, gồm nhiều loài khác nhau, thay đổi tuỳ theo từng vùng và từng thời kỳ sinh trưởng của lúa (Suzuki, 1976) Tại Việt Nam, Phạm Văn

Kim (2006) cho biết có 13 loài nấm gây hại trên hạt lúa bao gồm: Fusarium moniliforme, Alternaria padwickii, Sarocladium oryzae, Helminthosporium opryzae, Curvularia lunata, Nigrospora oryzae, Pyricularia grisea, Cercospora oryzae, Pinatubo oryzae, Fusarium equiseti, Phoma shorghina và Trichothecium roseum

1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ DỊCH TRÍCH THỰC VẬT VÀ THUỐC HOÁ HỌC TRONG PHÒNG TRỪ NẤM BỆNH GÂY HẠI LÚA

1.2.1 Những nguyên cứu trên thế giới

Amadioha (2000) cho biết dịch trích từ lá neem có khả năng hạn chế được sự

phát triển của sợi nấm Pyricularia oryzae trong điều kiện in vitro và giảm sự lây lan

của bệnh trong điều kiện nhà lưới

Dịch trích lá cây cà độc dược làm chậm sự phát triển của nấm Rhizoctonia solani trong điều kiện in vitro Ở điều kiện nhà lưới khi phun dịch trích cây cà độc

dược lên lúa thì giảm được bệnh đốm vằn và bệnh cháy bìa lá lúa (Kagale và ctv., 2004)

Venkateswarlu và Chauhan (2005) cho rằng các hoạt chất hóa học carbendazim, benomyl, mancozeb có thể phòng trị tốt bệnh thối bẹ và lem lép hạt lúa thông qua trọng lượng một ngàn hạt và số lượng hạt khỏe khi sử dụng các hoạt chất hóa học trên

Yasmin và ctv (2008) cho biết khi nghiên cứu 55 loại dịch trích thực vật ảnh

hưởng đến nấm Fusarium moniliforme thì dịch trích cỏ cứt heo và cây sống đời cho

hiệu quả ức chế nấm cao nhất

Ba loại tinh dầu chiết xuất từ cây sả, hương nhu trắng và hoa môi có khả

năng chống lại sự xâm nhiễm của Alternaria padwickii, Bipolaris oryzae và Fusarium moniliforme gây bệnh trên hạt lúa Ba loại tinh dầu này còn giúp tăng độ

nảy mầm của hạt giống và giúp cây lúa sinh trưởng tốt hơn (Nguefack và ctv., 2008)

Hạt lúa giống ngâm với dịch trích từ củ tỏi và lá cây hoàng anh giúp hạt giống nảy mầm tốt và giảm đáng kể sự xuất hiện của các loài nấm trên hạt lúa như:

Bipolaris oryzae, Curvularia oryzae, Nigrospora oryzae, Aspergillus flavus,

Aspergillus niger, Penicillium sp và Fusarium moniliforme (Yeasmin và ctv.,

2012)

1.2.2 Những nghiên cứu trong nước

Theo Trần Văn Hai (1999), trong điều kiện phòng thí nghiệm các loại thuốc hóa học như Tilt 250EC, Appencarb supesr 50FL và Anvil 5SC có hiệu quả ức chế

bốn loài nấm gây bệnh lem lép hạt lúa gồm có Fusarium moniliforme, Alternaria

padwicki, Cuvularia lunata và Helminthosporium oryzae

Vũ Đăng Khánh và ctv (2007) công bố sản phẩm chiết suất từ nhân hạt neem trong ethanol, methanol và nước đều có tác dụng ức chế sử sinh trưởng đối

với 3 loài nấm gây bệnh cây là Rhizoctonia solani, Seclerotium rolfsii và Fusarium oxysporum Trong đó, tác dụng ức chế mạnh nhất là sản phẩm chiết xuất với

ethanol, kế đến là methanol và yếu nhất là nước

Khi ngâm hạt với dịch trích cây sống đời, cỏ cứt heo hay áo hạt bằng cỏ cứt

heo các nghiệm thức đều có hiệu quả đối với bệnh đốm nâu do Bipolaris oryzae,

trong đó hai nghiệm thức ngâm hạt với cỏ cứt heo 4% và áo hạt 2% cho hiệu quả giảm bệnh trên 50% (Phan Thị Hồng Thuý, 2009)

Theo Cao Thị Cẩm Tú (2010) cho thấy phương pháp áo hạt kết hợp phun qua

lá với dịch trích lá neem 8% có khả năng hạn chế chiều dài vết bệnh và hiệu hiệu

giảm bệnh cháy bìa lá (Xanthomonas oryzae) cao

Bằng cách ngâm hạt kết hợp phun dịch trích vào giai đoạn 55 ngày sau khi

gieo, dịch trích cỏ cứt heo (Ageratum conyzoides L.) có khả năng hạn chế ba bệnh đạo ôn (Pyriculariaoryzea), đốm nâu (Bipolaris oryzae) và cháy bìa lá (Xanthomonas oryzae) Dịch trích cỏ hôi (Eupatorium odoratum L ) cũng có khả năng hạn chế tốt bệnh đạo ôn (Pyricularia oryzea) trên lúa (Dương Hoàng Thanh,

Nấm Fusarium moniliforme được phát hiện từ rất sớm, được ghi nhận đầu

tiên ở Nhật Bản vào năm 1828 (Ito và Kimura, 1931, trích dẫn từ Vũ Triệu Mân, 2007) Nhưng mãi đến năm 1898, bệnh mới được Hori mô tả đầu tiên và được đặt

tên nấm là Fusarium Đến năm 1919, Sawada đã tìm thấy giai đoạn hữu tính của nấm này và đặt tên là Lisae fujikuroi (Vũ Triệu Mân, 2007) Wineland (1924) đã mô

tả Gibberella moniliforme và đề nghị dùng tên này Cuối cùng, Ito và Kimura

(1931) xác định tên nấm là Gibberella fujikuroi và giai đoạn vô tính là Fusarium moniliforme (Ou, 1983; Vũ Triệu Mân, 2007) Nấm thuộc nghành Eumycota,

nghành phụ Deuteromycotina, lớp Hypphomycetes (Deuteromycetes), bộ Moniliales, họ Tuberculariaceae (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1999)

Nấm Fusarium moniliforme được phát hiện thấy ở tất cả các nước trồng lúa

Nấm này cũng được xác định là có mặt phổ biến tại hầu hết ở các nước châu Á (Ou, 1985) Ở Trung Quốc bệnh được gọi là “White Stalk”; ở Philippin và Guyana, bệnh được gọi là “lúa đực” (Võ Thanh Hoàng, 1993)

Theo Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề (1998) thì Bourgnicourt là người đầu

tiên nghiên cứu và xác nhận nấm Fusarium moniliforme tại Việt Nam vào 1943 Tuy được phát hiện từ lâu nhưng những nghiên cứu về Fusarium moniliforme chỉ

được thực hiện ở mức độ giới hạn Nấm gây hại cho nhiều tỉnh ở miền Bắc (Vũ Triệu Mân, 2007) cũng như ở các tỉnh ĐBSCL (Phạm Văn Kim và Lê Thị Sen, 1993)

Ở ĐBSCL, nấm Fusarium moniliforme có mặt ở nhiều nơi, đặc biệt gần đây nấm đã gây hại thành dịch tại một số tỉnh trong vùng Fusarium moniliforme gây

thiệt hại nặng nhất là vụ Đông-Xuân, mức độ thiệt hại tuỳ theo giống và tuỳ theo năm (Võ Thanh Hoàng, 1993) Theo báo cáo của Trung tâm Bảo vệ Thực vật phía

Nam (2008), diện tích và mức độ thiệt hại do nấm Fusarium moniliforme được ghi

nhận ở tỉnh An Giang vụ Đông-Xuân 2006-2007 là 8.282 ha Sau đó, nấm tiếp tục phát triển lây lan sang nhiều nơi, trong vụ Đông-Xuân 2007-2008 đã có 6 tỉnh ĐBSCL bị nhiễm là An Giang, Đồng Tháp, Vĩnh Long, Kiên Giang, Cần Thơ và Sóc Trăng với tổng diện tích nhiễm bệnh là 11.046 ha (trích dẫn từ Nguyễn Thanh Nam, 2012)

Ou (1983) đã ước tính sự thất thu do nấm Fusarium moniliforme; trong đó

thất thu năng suất 20% ở Hokkaido của Nhật Bản, thậm chí sự thất thu lên đến 50% ở vùng Kinkichugoku của Nhật Bản, ở Ấn Độ thất thu 15%, ở miền Bắc và trung tâm Thái Lan thất thu 3,7-14,7%, tại Philippin thất thu năng suất từ 1-13%

40-Theo Mew và Misra (1994), dưới sự kiểm tra hạt lúa một cách tổng quát của

IRRI thì mức độ nhiễm Fusarium moniliforme là trên 25% Đến năm 2002, Mew và

Gonzales cho biết 100% số hạt đều có nấm xuất hiện

Tại Việt Nam, nấm Fusarium moniliforme gây hại ở nhiều nơi với mức độ

nặng Năm 1956, nấm đã gây hại nặng trên diện rộng ở vùng Đồng bằng sông Hồng, có nơi thiệt hại tới 2/3 sản lượng (Vũ Triệu Mân, 2007) Vụ Đông-Xuân 2003-2004 nấm đã gây hại nặng ở tỉnh Nam Định (Viện Bảo vệ Thực vật, 2006)

Năm 2006 và vụ Đông-Xuân năm 2006-2007, nấm phát triển mạnh khắp các tỉnh ĐBSCL, nhiều ruộng lúa bị thiệt hại với tỉ lệ bệnh trung bình 10-20%, có nơi lên tới 40-45%, nhất là vùng thâm canh lúa 3 vụ Bệnh có thể làm thất thu từ 3-20% tuỳ nơi và tuỳ lúc (Phạm Văn Kim, 2006) Tại Mỹ Xuyên (Sóc Trăng), tỉ lệ chồi nhiễm bệnh có thể đến 10-20% Nấm có khi thành dịch trên diện rộng, như vào năm

1980 ở Đồng Tháp (Võ Thanh Hoàng, 1993)

Phạm Văn Kim và ctv (2008); Phạm Văn Dư và ctv (2008) đều cho rằng

bào tử nấm Fusarium moniliforme phát tán trong không khí xâm nhập vào giai đoạn lúa trổ bông gây lép hạt và vào giai đoạn nuôi hạt tạo triệu chứng lem hạt Fusarium moniliforme có thể quan sát thấy trên vỏ hạt lúa (khoảng 57%) (Mew và Gonzales,

2002)

Hạt bị bệnh thường lửng lép, vỏ hạt màu xám, trên vỏ hạt có thể quan sát thấy lớp nấm phân trắng phớt hồng trong điều kiện ẩm ướt Trong điều kiện khô, vỏ hạt có chấm nhỏ li ti màu xanh đen, đó là quả thể của nấm (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

Triệu chứng dễ thấy và phổ biến nhất là chồi hoặc cây con ốm, kéo dài màu vàng xanh Trên cây trưởng thành, cây nhiễm bệnh sẽ có một vài chồi vươn cao với

lá cờ màu xanh nhạt, lá khô từ dưới lên và cuối cùng chết Nếu cây bệnh còn sống thì sẽ tạo ra các bông lúa mang hạt bị lép (Mew và Gonzales, 2002)

Theo Võ Thanh Hoàng (1993), nấm không thấy có tạo bì bào tử, có thể có hay không tạo hạch nấm có hình cầu màu xanh đậm, kích thước 80x100 μm Trong

khi đó, Phạm Văn Kim (2009) đã chứng minh Fusarium moniliforme có sinh ra bào

tử áo (chlamydiasores) với vách dày

Khuẩn lạc trên môi trường PDA ở nhiệt độ phòng (28-300C) phát triển tương đối nhanh và có đường kính là 5,2 cm sau 5 ngày nuôi cấy Chúng là các khoanh màu trắng với tâm màu hồng, sợi nấm hơi bện chặt Mặt sau đĩa petri, chúng là các khoanh nấm màu trắng với tâm tím nhạt (Mew và Gonzales, 2002)

Nấm tồn tại chủ yếu ở dạng sợi và bào tử hữu tính trên tàn dư cây bệnh ở trong đất và hạt giống (Ou, 1983) Hạch nấm là cơ quan lưu tồn, giúp nấm tồn tại

khá lâu trong đất, có thể hơn 2 năm (Phạm Văn Kim, 2000) Fusarium moniliforme

có khả năng lưu tồn đến 26 tháng khi xâm nhiễm trên hạt lúa và 28 tháng trên gốc rạ

khô (CABI, 2003) Loài Fusarium moniliforme có khả năng sống qua mùa hè trên

hạt hay phần thân nhiễm bệnh

Nấm Fusarium moniliforme là loài nấm đa thực, phạm vi ký chủ ngày càng

mở rộng trên nhiều loại cây trồng khác nhau như lúa, bắp, vải, cà, chuối, táo, mía,

đậu (Agrios, 2005) Ở Nhật Bản, các nhà khoa học đã phát hiện nấm Fusarium

moniliforme trong nhiều loài cỏ họ hoà bản (Panicum miliaceum L.), trên lúa mạch,

bắp, lúa miến và mía đường

 Nấm Fusarium solani

Lần đầu tiên được Mew và Gonzales (2002) mô tả trên hạt lúa

Nấm Fusarium solani gây hại trên hạt lúa ở tần số thấp Nấm này có thể làm

cho hạt lúa bị biến màu Tuy nhiên, nó được tìm thấy trên hạt từ nhiều khu vực và

hệ sinh thái khác nhau (Mew và Gonzales, 2002)

Fusarium solani có thể tìm thấy trên hạt sau 5 ngày ủ ở nhiệt độ 210C trong

điều kiện ánh sáng cực tím Tần số xuất hiện trung bình trên hạt <1% Fusarium solani được tìm thấy trên vỏ hạt lúa (khoảng 48%) (Mew và Gonzales, 2002)

Đính bào đài ngắn, mọc đơn đến phân nhiều nhánh, không màu (Mew và Gonzales, 2002) Bào tử nhỏ hình bầu dục, đơn bào không màu Bào tử lớn hình lưỡi liềm với hai đầu nhọn, bào tử không màu, có từ 3-5 vách ngăn Bào tử 3 vách ngăn, kích thước 4,5-5,5 μm x 30-45 μm (Roger, 1953)

Khuẩn lạc nấm trên môi trường PDA ở nhiệt độ phòng (28-300C) phát triển khá nhanh, mịn, đạt được đường kính 5,81cm sau 5 ngày nuôi cấy Chúng là các khoanh màu vàng nhạt, mép đều Ở mặt sau đĩa petri, chúng là các khoanh màu vàng (Mew và Gonzales, 2002)

Nấm có ký chủ rất rộng, bao gồm nhiều loài khác nhau: đậu bắp, hành tây, súp lơ, dưa hấu, nho, đậu đũa… (CABI, 2003)

 Nấm Fusarium graminearums

Nấm Fusarium graminearum được Cattaneo (1877) phát hiện thấy trên hạt

và lá lúa ở Italia và đặt tên nấm là Botryosphaeria saubinetii Miyate phát hiện thấy nấm ở Nhật Bản năm 1910 và gọi tên nấm là Giberella saubinetii Nấm Fusarium graminearum phân bố nhiều ở các nước nhiệt đới (CMI Decription of pathogenic

Fungi and Bacteria No 384, 1973)

Nấm Fusarium graminearum gây bệnh nâu đen trên hạt lúa Bệnh này

thường không gây tổn thất nhiều đến năng suất lúa gạo nhưng trong điều kiện ẩm độ cao, bệnh phát triển mạnh, sự gây hại tăng cao (Agarwal và ctv., 1989)

Nấm gây ra bệnh trên hạt lúa hoặc làm hạt bị biến màu, lúc đầu có màu trắng

về sau có màu vàng, màu hồng hoặc đỏ son Các vết bệnh đó sinh ra những lớp nấm

và bào tử Hạt bị bệnh trở nên nhẹ, co hẹp và vỡ nát và thường không nảy mầm, các hạt có sức nảy mầm sẽ mọc ra những cây con bị bệnh Nấm cũng có thể hại ở các đốt thân làm cho chúng bị đen, thân cây bị héo và gãy (Ou, 1923 trích dẫn từ Kasai, 1983)

Nấm Fusarium graminearum có giai đoạn sinh sản hữu tính là Gibberella zeae (Schw.) Petch (Ou, 1983) Wollenweber và Reinking (1935) đã mô tả nấm này

như sau (trích dẫn từ Ou, 1983): Bào tử vô tính có màu trắng hoặc trắng hồng, vàng kim, vàng đỏ hoặc màu hung pha đỏ son, một phần chìm lan, ít hoặc nhiều được bao phủ một lớp sợi nấm nổi hơi xốp, có dạng hạch, giống như các lớp bào tử hoặc tản nấm sinh bào tử màu vàng đỏ đến vàng cam rực rỡ Bào tử hình thoi hoặc lưỡi liềm, cong vừa phải hoặc thon nhọn ở 2 đầu, có 3-5 vách ngăn, đôi khi 1-2 hoặc 6-9 vách ngăn Các tác giả còn mô tả bào tử nang màu xanh đen Hình trái xoan hoặc tròn, có hoặc không có lỗ miệng hình nón, nang có kích thước 37-84 μm x 8-15 μm; tử nang bào tử xếp thành hàng một hoặc hàng đôi không rõ ràng, hình con thoi, hơi cong hoặc thẳng, hai đầu tù hoặc hình chóp non, 3 vách ngăn, kích thước 22,7 μm x 4,0

μm, đôi khi có 4 vách ngăn (Ou,1983)

Nấm Fusarium graminearum gây hại chính trên ngô, lúa miến, lúa mạch, đầu

nành Ngoài ra, còn gây hại trên hoa cẩm chướng, xoài, chuối, lục bình… (CABI, 2003)

1.3.2 Nấm Rhizopus sp

Nấm thuộc họ Mucoraceae, bộ Mucorales, ngành phụ nấm tiếp hợp

(Zygomycotina) Hầu hết những loài Rhizopus là những loài thực vật hoại sinh, chúng phát triển khuẩn ty bao phủ bên bề ngoài của cơ chất Giống Rhizopus có ít nhất 120 loài và Rhizopus stolonifer là loài phổ biến trong thiên nhiên và được mô

tả tương đối kỹ (Nguyễn Văn Bá và ctv., 2005)

Trên hạt lúa nấm mọc từ một điểm và lan ra rất nhanh bao phủ cả hạt, lúc đầu sợi nấm có màu trắng như bông gòn, về sau xuất hiện cọng mang bào tử mọc thẳng lên không (Nguyễn Thanh Nam, 2012)

Võ Thanh Hoàng (1993), cho biết tuỳ theo điều kiện nhiệt độ, các loài nấm

Rhizopus được chia làm hai nhóm nấm:

- Nhóm phát triển trong điều kiện nhiệt độ cao (30-320C và có thể lên đến

420C) như các loài Rhizopus tricici, Rhizopus nodosus, Rhizopus oryzae và Rhizopus maydis

- Nhóm phát triển ở nhiệt độ thấp (18-240C và ngừng sinh trưởng ở 30-320C)

như các loài Rhizopus nigricans, Rhizopus reflexus và Rhizopus artocarpi

 Nấm Rhizopus stolonifer

Khuẩn ty của Rhizopus stolonifer có màu trắng, phân nhánh, đa nhân và

không có vách ngăn ngang Hầu hết các sợi khuẩn ty có dạng như sợi bông vải khi còn non, sau đó phát triển sâu vào cơ chất thì phân chia thành 3 dạng khuẩn ty:

khuẩn căn (rhizoid), khuẩn ngang (stolon) và cọng mang túi bào tử (sporangiophores) (Nguyễn Văn Bá và ctv., 2005)

- Khuẩn căn là khuẩn lạc ăn sâu vào cơ chất tương tự như rễ cây ăn sâu vào đất nhưng chúng phát triển cạn hơn

- Khuẩn ngang là khuẩn lạc nhưng phát triển chiều ngang, bên trên bề mặt cơ chất, chúng nối từng nhóm nấm với nhau

- Cọng mang túi bào tử là khuẩn lạc mọc thẳng lên không, chúng phát triển từ trung tâm điểm xuất phát của khuẩn ngang và khuẩn căn, mọi cọng mang túi bào tử tận cùng là túi bào tử (sporangium), đây là giai đoạn sinh sản vô tính

 Nấm Rhizopus nigricans

Sợi nấm không màu lúc còn non, về sau có màu hơi vàng; từ đó, mọc thẳng

ra bào đài (sporangiophores), bào đài rất dài (2-4 mm) Bào tử phòng (sporangiospores) hình cầu, màu nâu bề mặt có dạng hình mạng lưới, đường kính: 10-15 μm Các sợi nấm giao phối nhau tạo thành các hợp bào tử (zygospores) màu nâu sậm, hình cầu với đường kính: 160-220 μm, bề mặt có gai Nấm phát triển mạnh trong điều kiện ẩm độ cao Lúc đầu, nấm sống hoại sinh trên các vết thương, tiết ra men Diastaza làm chết tế bào xung quanh, rồi lan dần ra (Võ Thanh Hoàng, 1993)

1.4 SƠ LƯỢC VỀ BỐN LOẠI THỰC VẬT DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM 1.4.1 Cây cỏ hôi

 Đặc điểm hình thái

Cỏ hôi có nguồn gốc ở đảo Antiles, sau đó phát tán qua nhiều nước nhiệt đới khác, đặc biệc là ở các nước Đông Nam và phía Nam châu Á Ở Việt Nam chi

Chromlaena có khoảng 10 loài Trong đó, cỏ hôi là cây quen thuộc nhất, cỏ hôi

phân bố ở các tỉnh vùng Đồng Bằng, Trung Du và vùng núi thấp Cây ưa sáng, chịu hạn và có thể sống được trên mọi loại đất, mọc tương đối tập trung trên những diện tích lớn ở đồi, nhất là đất nương rẫy đã bỏ hoang Cỏ hôi ra hoa kết quả hàng năm với số lượng nhiều, phát tán nhờ gió nên có khả năng chiếm lĩnh và mở rộng vùng phân bố cực nhanh (Đỗ Huy Bích và ctv., 2004)

 Thành phần hoá học

Nghiên cứu của Đỗ Huy Bích và ctv (2004) cho rằng cỏ hôi chứa tinh dầu, tanmin, flavanoid, coumarin, alkaloid,… Trong lá chứa 0,16% tinh dầu gồm 2,6% α-pinen, 0,6% sabinen, 2,6% β-pinen, 0,9% myreen, α-terinen (vết), β-cymen (vết), 0,5% limonene, 0,5% (Z)-β-ocimen, 0,5%(E)-β-ocimen, 0,1% (Z)-sabinen hydrat, camphor (vết), 4,9% geijieren đồng phân, 4,25% geijieren, 0,2% (terpinen-4-ol, α-

terpinen), 3,5% bomyl acetate, 0,4% δ-elemen, 1% α-copaen, 0,2% β-bourbonen, 1,4% β-elemen, 0,4% geijierol, 7,4% β-caryophylen, 1,9% α-humulen, 12,5% β-eubelnen, 1,3% γ-elemen hoặc germeeren, 0,5% alcol sesquiterpen, 2,1% δ-cadinen, 2,0% elemen, 0,9% α-ionon, caryophynen oxyd, 0,2% viridiflorol, 0,3% epiglobulol, 0,2% δ-cadinon (toreyol), 0,6% α-cadinon Ngoài ra, lá có hôi còn chứa acid anisic, isosakuranetin, odoratin, kaempferol, sakuranetin, tamarixetin, salvigerin, 7-methyl-isokuranetin, 4’,5-dihydroxy-3’,7-dimethyl flavon và epoxylupeol

Trog cây có chứa khoảng 0,16% tinh dầu đặc, tỉ trong 1,19, αD=1020, chỉ số acid 0,9, chỉ số ester 11,2 ( Đỗ Tất Lợi, 2003)

 Công dụng

Dùng lá tươi để cầm máu vết thương, chữa bệnh tiêu chảy của trẻ em, chữa ghẻ lỡ, nhọt và viêm đại tràng Nước sắc cỏ hôi có tác dụng kháng khuẩn, ức chế được vi khuẩn gây mủ trên vết thương (Võ Văn Chi và Trần Hợp, 1997)

1.4.2 Cây neem

 Đặc điểm hình thái

Cây thân gỗ cao 10-15 m Lá mọc so le, dài 20-30 cm, một lần kép gồm 6-15 đôi lá chét mọc đối, không lông, hình ngọn giáo với gốc không cân đối, mép có răng tù Chuỳ hoa ở nách lá và ngắn hơn lá Hoa thơm, màu trắng, cao 5-6 mm Đài

có lông; nhị 10 dính thành ống với 10 phiến dạng lưỡi, mang bao phấn ở chỗ đính của các lưỡi này; đầu nhuỵ phình có 3 góc; bầu có 3 ô, 2 noãn trong mỗi ô Quả

hạch giống quả trám, dài 2 cm, thịt quả khi chín màu đen (Phạm Hoàng Hộ, 2003)

 Phân bố

Cây neem có ở Ấn Độ, Sri Lanca, Thái Lan, Lào, campuchia, Việt Nam, Inđônêxia Ở nước ta gặp nhiều ở An Giang, Kiên Giang và Ninh Thuận, cây cũng thường trồng ở các tỉnh Đồng bằng sông Cửu Long Trong tự nhiên cây mọc ở rừng,

ở đồng bằng vào tháng 2-3 cây có hoa và lá non (Phạm Hoàng Hộ, 2003)

 Thành phần hoá học

Hạt và lá cây neem chứa chất Azadirachtin Ngoài ra còn chứa nhiều hợp chất độc khác như Toosendanin, Volkensin, Meliantriol, Salanin… (Trần Quang Hùng, 1999)

 Công dụng

Vỏ cây được dùng để trị sốt rét, sốt vàng da; vỏ rễ cũng được dùng nhưng hiểu quả không cao Lá được dùng trị bong gân, trị đau cơ, đinh nhọt và eczema Nước sắc vỏ thân, lá, hoa, thân non dùng rửa vết thương, vết loét Vỏ, gôm, lá và

hạt đều được dùng trị rắn cắn và bò cạp đốt Dầu hạt dùng trị giun và xoa trị thấp khớp,vết thương, ghẻ và các bệnh ngoài da Ngoài ra, hạt chứa nhiều chất đắng được dùng làm thuốc diệt côn trùng có kết quả tốt (Phạm Hoàng Hộ, 2003)

 Các nghiên cứu về cây neem

Người dân địa phương ở các nơi neem mọc đã biết cách sử dụng dịch trích chiết từ các bộ phận của cây neem để bảo vệ mùa màng, nông sản, vật dụng và làm thuốc trừ bệnh từ rất lâu nhưng mãi đến năm 1928 mới có bài báo cáo đầu tiên nói

về khả năng xua đổi côn trùng của cây neem Đến năm 1958, những nghiên cứu về tiềm năng của cây neem trong kiểm soát dịch hại mới được quan tâm nghiên cứu có

hệ thống (Diệp Quỳnh Như, 2006)

Theo Vũ Văn Độ và ctv (2006), Salanin là hoạt chất chiếc xuất từ cây Neem không có tác dụng gây độc trên tế bào người nhưng lại có hoạt tính kháng lại các vi

sinh vật như vi khuẩn B subtillis, nấm Aspergillus niger, Fusarium oxysporum, C albican,…

Vũ Đăng Khánh và ctv (2007) công bố sản phẩm chiết suất từ nhân hạt neem trong ethanol, methanol và nước đều có tác dụng ức chế sử sinh trưởng đối

với 3 loài nấm gây bệnh cây là Rhizoctonia solani, Seclerotium rolfsii và Fusarium oxysporum Trong đó, tác dụng ức chế mạnh nhất là sản phẩm chiết xuất với

ethanol, kế đến là methanol và yếu nhất là nước

1.4.3 Cây lược vàng

 Đặc điểm hình thái

Cây lược vàng là cây thân thảo nhiều năm thân mọng nước, nó có thể dài tới

1 m, phân nhánh từ thân ở gốc như các vòi vươn ra ngoài Lá cây lược vàng tập trung mọc ở ngọn thân, rải rác ở phía dưới, dạng mác thuôn, dài 18-25 cm, rộng 3,5-4,0 cm, cuống lá có gân rõ, ôm thân, có lông mịn và thường có sọc tía Hoa mọc thành cụm 2-3 hoa dạng sim trên phát hoa hình chuỳ dài tới 60 cm, mọi cặp sim được ôm bởi các lá bắc dạng răng cưa (3 răng cưa) dài 10-15 cm Lá đài trong suốt, màu trắng, khô xác, dạng mác, dài 5-6 mm Cánh hoa bóng, trong suốt, màu trắng mỏng, có dạng trứng hẹp Ra hoa vào mùa xuân (Trần Thị Ánh Hồng, 2011)

 Phân bố

Trên thế giới, họ Thài lài có 40 chi và 625 loài sống chủ yếu ở các vùng nhiệt đới, một số ít sống ở vùng cận nhiệt đới và ôn đới nóng Cây phân bố ở các bãi hoang, đất ẩm, bờ nước, một số ít làm cảnh Ở Việt Nam, theo thống kê của các nhà thực vật học họ này có 15 chi và 47 loài, theo Phạm Hoàng Hộ đã công bố họ này gồm 13 chi và 60 loài Còn theo như công trình “Danh mục các loại thực vật Việt Nam” tập 3 do các nhà khoa học thuộc Đại học quốc gia Hà Nội và Viện Sinh thái

và Tài nguyên sinh vật đã thông kê họ này có 15 chi và 58 loài (trích dẫn từ Trần Thị Ánh Hồng, 2011)

 Thành phần hoá học

Theo kết quả nghiên cứu của Trần Thị Ánh Hồng (2011)khi tiến hành ngâm chiết mẫu thường sử dụng những dung môi hữu cơ có độ phân cực tăng dần, kết quả thu được cặn hexan 18,4 g chiếm 1,53%, cặn etyl axetat 45,3 g chiếm 3,77% và cặn methanol 109,6 g chiếm 9,13% so với mẫu khô nghiên cứu ban đầu

Chernenko và ctv (2007) cho biết lá và thân bò của nó có chứa chất hoạt tính sinh học flavonoid và phytosteroid Vitamin C, PP và B2 và một ít các chất Fe, Cr,

Ni và Cu được tìm thấy trong dịch trích lá và thân bò của chúng Các thành phần này gồm có lipid, acid hữu cơ, chlorophyll và sắc tố carotenoid và vitamin C Lipid

là thành phần được quan sát thấy hiện diện nhiều nhất trên thân bò Tất cả các thành phần như sắc tố carotenoid, chlorophyll và acid ascorbic chiểm ưu thế trên lá

1.4.4 Cây húng tây

 Đặc điểm hình thái

Húng tây là một loại cỏ, gốc hoá gỗ có thể cao 25-75 cm Thân mọc đứng,

có lông Lá có cuống mọc đối, rộng, hình bầu dục, dày, trông như mọng nước Lá dài 7-10 cm, rộng 4-6 cm, mặt trên có lông đơn, mặt dưới lá nhiều lông hơn, gân nổi

rõ Hoa màu tím, nhỏ, mọc thành hoa tự, tận cùng dài gồm các vòng hoa mọc sít nhau gồm 20-40 hoa (Đỗ Tất Lợi, 2003)

 Phân bố

Cây húng tây có nguồn ở đảo Moluquesơm, được trồng khắp nơi ở Viêt Nam

để lấy lá, có mùi thơm dễ chịu như mùi chanh, dùng làm gia vị Thường chỉ dùng tươi, hái lá hay cành non để dùng (Đỗ Tất Lợi, 2003)

(Trích dẫn từ Đỗ Tất Lợi, 2003)

 Công dụng và liều dùng

Húng tây có tác dụng trị cảm cúm, chữa ho Còn dùng để đắp lên những vết

do rết và bọ cạp cắn Thường dùng tươi với liều lượng 10-16 g một ngày Dùng 5-7

lá húng chanh, rửa sạch ngâm nước muối Sau đó nhai và ngậm (Đỗ Tất Lợi, 2003)

1.5 SƠ LƯỢC VỀ BỐN LOẠI THUỐC HOÁ HỌC DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM

1.5.1 Comcat 150WP

Công ty sản xuất: Công ty TNHH Hoá Nông Lúa Vàng

Thành phần: Lychnis viscaria 15% w/w + chất phụ gia 85% w/w

Hoạt chất: Lychnis viscaria

 Đặc tính: Là chất điều hoà sinh trưởng

 Công dụng:

Thuốc có tác dụng ức chế bệnh vàng lùn, lùn xoắn lá, giúp lúa phục hồi khi bệnh Giúp cây gia tăng sức đề kháng đối với sự tấn công của các mầm bệnh, điều kiện bất lợi của môi trường Thuốc giúp cây phục hồi nhanh khi cây bị ngộ độc hữu

cơ, ngô độc phèn, ngộ độc thuốc BVTV hoặc sâu bệnh gây hại nặng Ngoài ra, khi phun thuốc vào lúc lúa trổ thoát, bông dài, tăng tỉ lệ hạt chắc (Bảo vệ cây trồng, 2013)

1.5.2 Tilt super 300EC

Công ty sản xuất: Công ty Syngenta Việt Nam

Thành phần hoá học: Propiconazole 150g/l + Difenoconazole 150g/l + chất phụ gia

Hoạt chất: Propiconazole, Difenoconazole

 Sử dụng:

Propiconazole là loại thuốc trứ nấm bệnh có tác dụng nội hấp Thuốc được gia công thành nhiều dạng như sữa 250 EC, 100 EC , dạng dung dịch 125SC và các dạng hỗn hợp với nhiều loại thuốc trừ bệnh khác Chế phẩm 250 EC chứa 250 g hoạt chất/lít, dùng để trị bệnh gỉ sắt, phấn trắng trên hoa hồng và cây cảnh, bệnh

khô vằn, tiêm lửa, đốm nâu, đạo ôn hại lúa, trừ bệnh đốm sọc Cercospora coffeicola

và bệnh gỉ sắt hại cà phê Ngoài ra thuốc còn trừ bệnh thối quả trên cây ăn quả, bệnh phấn trắng và gỉ sắt trên lúa mì Liều sử dụng từ 0,5- 1,0 lít chế phẩm/ha (Trần Quang Hùng, 1999)

 Phương thức tác động và công dụng:

Difenconazole là thuốc trừ nấm tiếp xúc và nội hấp Sự phá huỷ của vi sinh vật gây bệnh tăng khi có hàm lượng ergosterol tăng Hoạt chất difenocazole có trong thuốc đã kìm hãm quá trình sinh tổng hợp ergosterol, ngăn chặn sự hình thành đĩa bám, sự sinh trưởng và phát triển sợi nấm Có tác dụng phòng và trừ bệnh , có thể dùng thuốc bón gốc, phun lên lá hoặc xử lý hạt giống, hiệu lực kéo dài Thuốc được sử dụng để phòng trừ nhiều loại bệnh cho nhiều loại cây trồng do các nấm như

Alternaria, Ascochyta, Cercospora, Cercosporidium, Colletotrichum, Guirnardia, Phoma, Septoria, Ventura, Erysiphaceae, Uredinales gây nên trên cam, chuối,

khoai tây, rau, ngũ cốc (Trần Quang Hùng, 1999)

 Đặc tính:

Benomyl tinh khiết ở dạng tinh thể không màu, không tan trong nước, tan ít trong dung môi hữu cơ, phân huỷ trong môi trường axit, kiềm mạnh, trong môi trường bảo quản ẩm và không ăn mòn kim loại Thuốc thuộc nhóm độc IV, LD50 qua miệng: >10.000 mg/kg, LD50 qua da: >10.000 mg/kg Thuốc ít độc đối với cá, không độc đối với ong mật

 Phương thức tác động và sử dụng:

Là loại thuốc trừ nấm bệnh có tác dụng nội hấp, có phổ tác dụng rộng Sau khi được cây hấp thụ, benomyl được phân huỷ thành 2 phân tử: butyl carbamate và methyl-2-benzimidazole carbamate (MBC) Butyl carbamate được bốc hơi thành chất độc butyl isothiocyanate MBC là chất khá bền trong mô cây và là chất diệt nấm Được sử dụng như thuốc khử độc hạt giống, phun lên lá và khử độc đất (Phạm Văn Kim, 2000) Trừ được nhiều bệnh hại trên rau, màu, cây công nghiệp, cây ăn quả, cây cảnh và hoa Thuốc còn trừ nhện đỏ Ngoài ra thuốc có tác dụng ức chế bệnh khô vằn và bệnh đạo ôn phát triển Thời gian cách ly 17 ngày (Trần Quang Hùng, 1999)

 Sử dụng:

Azoxystrobin là hợp chất tổng hợp hoá học có cấu trúc đồng đẳng với strobilurins và oudemansins là chất chuyển hoá nấm khuẩn có trong tự nhiên Azoxystrobin có tác dụng tiếp xúc và nội hấp, ức chế bào tử nấm nảy mầm và sợi nấm phát triển, ức chế sự hình thành bào tử nấm khuẩn Thuốc có phổ tác dụng rất rộng, dùng để phòng và trừ nhiều loại bệnh nấm như phấn trăng, gỉ sắt hại ngũ cốc, đạo ôn, khô vằn hại lúa, nhiều bệnh hại cà phê, chè, rau, chuối, cam,… Liều lượng

sử dụng từ 100-375 g/ha (Trần Quang Hùng, 1999)

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1 PHƯƠNG TIỆN

2.1.1 Thời gian và địa điểm

Thí nghiệm được thực hiện từ tháng 2/2013 đến tháng 6/2013

Thí nghiệm đánh giá độ hiệu lực của bốn loại dịch trích thực vật và bốn loại

thuốc hóa học đối với hai loại nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp được bố trí

tại phòng thí nghiệm Phòng trừ Sinh học bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông

nghiệp & Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ

2.1.2 Vật liệu thí nghiệm

Các loại thuốc dùng trong thí nghiệm: Comcat 150WP, Tilt Super 300EC, Binhnomyl 50WP, Amistar 250SC Các loại dịch trích thực vật được sử dụng: lá Cỏ hôi, lá Neem, lá Húng tây, lá Lược vàng

2 Tilt Super 300EC 46,9 μl/100 ml

PDA

93,8 μl/100 ml PDA

187,6 μl/100 ml PDA

3 Binhnomyl

50WP

50 mg/100 ml PDA

100 mg /100 ml PDA

200 mg/100 ml PDA

6 Lá cỏ hôi 2% 4% 8%

7 Lá húng tây 2% 4% 8%

8 Lá lược vàng 2% 4% 8%

Nguồn nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp được cung cấp từ Bộ môn

Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ

 Các dụng cụ thí nghiệm: Đĩa petri, beaker, bình tam giác, que cấy nấm, cân

điện tử, micropipet,…

 Các thiết bị thí nghiệm: Tủ thanh trùng ướt, tủ thanh trùng khô, kính hiển

vi,…

 Công thức môi trường PDA được dùng trong bố trí thí nghiệm:

Khoai tây 200 gram

Đường Dextrose 20 gram

Agar 20 gram

Nước cất 1000 ml

pH 6,5-6,8

2.2 PHƯƠNG PHÁP

2.2.1 Thí nghiệm 1 Khảo sát hiệu quả của các loại thuốc hoá học đối với nấm

Fusarium sp và nấm Rhizopus sp gây lem lep hạt lúa trong điều kiện in vitro

 Mục đích: đánh giá hiệu quả của các loại thuốc hóa học đối với hai loại nấm

Fusarium sp và nấm Rhizopus sp gây bệnh lem lép hạt lúa

 Thực hiện thí nghiệm:

Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 13 nghiệm thức (12 nghiệm thức sử dụng thuốc hóa học và 1 nghiệm thức đối chứng), 5 lần lặp lại Loại thuốc và nồng độ thuốc được trình bày trong Bảng 2.1 Nghiệm thức đối chứng là môi trường PDA không có chứa thuốc hóa học

Chuẩn bị nguồn nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp.: nấm được nuôi cấy

trong đĩa petri khoảng 10 ngày trước khi tiến hành thí nghiệm Khuẩn ty nấm sẽ được đục thành các khoanh có đường kính khoảng 5 mm khi thực hiện thí nghiệm

Các loại thuốc hóa học được tính toán liều lượng sao cho khi hòa tan vào chai thủy tinh chứa 100 ml môi trường PDA sẽ đạt được nồng độ đã định sẳn Nấu tan môi trường PDA Khi chai môi trường đạt nhiệt độ khoảng 55-60oC thì đưa lượng thuốc hóa học đã chuẩn bị vào chai, lắc chai môi trường để thuốc hòa tan đều vào môi trường Sau đó, môi trường trong chai sẽ được đổ vào các đĩa Petri (khoảng

10 ml môi trường/ đĩa petri) Sau khi môi trường đặc lại, đặt các khoanh khuẩn ty

nấm đã chuẩn bị vào chính giữa đĩa petri (Hình 2.1)

Cách bố trí trên đĩa peptri: theo phương phápDhinggra và Sinclair (1995)

Hình 2.1: S đ bố trí th nghiệm hiệu quả của thuốc h a học đối với nấm Fusarium sp (nấm Rhizopus sp.) gây lem lép hạt lúa

Ch tiêu ghi nhận: ghi nhận đường kính khuẩn ty của nấm vào các thời điểm

24, 48, 72, 96 168 giờ sau đặt khoanh khuẩn ty (GSĐKT) Chỉ tiêu được ngừng ghi nhận khi khuẩn ty của nấm phát triển 168 GSĐKT hoặc đến mép đĩa petri

Hiệu quả của thuốc được tính theo công thức Abbott:

(ĐKKTđc – ĐKKTi) HQT(%) = x 100%

ĐKKTđc

Trong đó: ĐKKTđc: Đường kính khuẩn ty của nghiệm thức đối chứng

ĐKKTi: Đường kính khuẩn ty của nghiệm thức thuốc i

2.2.2 Thí nghiệm 2 Khảo sát hiệu quả của các loại dịch trích thực vật đối với

nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp gây lem lep hạt lúa trong điều kiện in

vitro

 Mục đích: đánh giá hiệu quả của các loại dịch trích thực vật đối với hai loại

nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp gây bệnh lem lép hạt lúa

 Thực hiện thí nghiệm:

Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 13 nghiệm thức (12 nghiệm thức sử dụng dịch trích thực vật và 1 nghiệm thức đối chứng), 5 lần lặp lại Loại dịch trích thực vật và nồng độ dịch trích được trình bày trong Bảng 2.1 Nghiệm thức đối chứng là môi trường PDA không có chứa dịch trích thực vật

Khoanh khuẩn ty nấm gây bệnh lem lép hạt (đường kính khoảng 5 mm)

Môi trường đã có thuốc hóa học theo nồng độ tính sẵn

Chuẩn bị nguồn nấm Fusarium sp và nấm Rhizopus sp.: tương tự Thí

nghiệm 1

Các loại dịch trích thực vật được tính toán khối lượng sao cho khi hòa tan vào chai thủy tinh chứa 95 ml môi trường PDA sẽ đạt được nồng độ đã định sẳn Thực vật sau khi thu về sẽ được rửa sạch đất cát, để ráo, cân thực vật theo khối lượng đã tính rồi nghiền với 5 ml nước cất thanh trùng trong cối và chày thủy tinh

đã thanh trùng khô Sau đó, rót phần dịch trích thu được qua giấy lọc Whatman (có đường kính lỗ lọc 0,2 m) vào 1 cốc thủy tinh đã thanh trùng khô Dùng bọc nilong bao cả bộ cốc thủy tinh và giấy lọc bên trên

Nấu tan môi trường PDA Khi chai môi trường đạt nhiệt độ khoảng 55-60oC thì đưa 5 ml dịch trích thực vật đã chuẩn bị sẳn vào chai môi trường, lắc chai môi trường để dịch trích hòa tan đều vào môi trường Sau đó, môi trường trong chai sẽ được đổ vào các đĩa Petri (khoảng 10 ml môi trường/ đĩa petri) Sau khi môi trường đặc lại, đặt các khoanh khuẩn ty nấm đã chuẩn bị vào chính giữa đĩa petri (Hình

2.2)

Cách bố trí trên đĩa peptri: theo phương phápDhinggra và Sinclair (1995)

Hình 2.2: S đ bố trí th nghiệm hiệu quả của dịch trích thực vật đối với nấm

Fusarium sp (nấm Rhizopus sp gây lem lép hạt lúa

Ch tiêu ghi nhận: ghi nhận đường kính khuẩn ty của nấm vào các thời điểm

24, 48, 72, 96, ,168 GSĐKT Chỉ tiêu được ngừng ghi nhận khi khuẩn ty của nấm phát triển 168 GSĐKT hoặc đến mép đĩa petri

Khoanh khuẩn ty nấm gây bệnh lem lép hạt (đường kính khoảng 5 mm)

Môi trường đã có dịch trích thực vật theo nồng

độ tính sẵn