Fusarium sp. và nấm Rhizopus sp. gây lem lep hạt lúa trong điều kiện in vitro
Mục đích: đánh giá hiệu quả của các loại thuốc hóa học đối với hai loại nấm
Fusarium sp. và nấm Rhizopus sp. gây bệnh lem lép hạt lúa
Thực hiện thí nghiệm:
Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 13 nghiệm thức (12 nghiệm thức sử dụng thuốc hóa học và 1 nghiệm thức đối chứng), 5 lần lặp lại. Loại thuốc và nồng độ thuốc được trình bày trong Bảng 2.1. Nghiệm thức đối chứng là môi trường PDA không có chứa thuốc hóa học.
Chuẩn bị nguồn nấm Fusarium sp. và nấm Rhizopus sp.: nấm được nuôi cấy trong đĩa petri khoảng 10 ngày trước khi tiến hành thí nghiệm. Khuẩn ty nấm sẽ được đục thành các khoanh có đường kính khoảng 5 mm khi thực hiện thí nghiệm.
Các loại thuốc hóa học được tính toán liều lượng sao cho khi hòa tan vào chai thủy tinh chứa 100 ml môi trường PDA sẽ đạt được nồng độ đã định sẳn. Nấu tan môi trường PDA. Khi chai môi trường đạt nhiệt độ khoảng 55-60oC thì đưa lượng thuốc hóa học đã chuẩn bị vào chai, lắc chai môi trường để thuốc hòa tan đều vào môi trường. Sau đó, môi trường trong chai sẽ được đổ vào các đĩa Petri (khoảng 10 ml môi trường/ đĩa petri). Sau khi môi trường đặc lại, đặt các khoanh khuẩn ty nấm đã chuẩn bị vào chính giữa đĩa petri (Hình 2.1).
Cách bố trí trên đĩa peptri: theo phương phápDhinggra và Sinclair (1995).
Hình 2.1: S đ bố trí th nghiệm hiệu quả của thuốc h a học đối với nấm Fusarium sp. (nấm Rhizopus sp.) gây lem lép hạt lúa
Ch tiêu ghi nhận: ghi nhận đường kính khuẩn ty của nấm vào các thời điểm 24, 48, 72, 96..168 giờ sau đặt khoanh khuẩn ty (GSĐKT). Chỉ tiêu được ngừng ghi nhận khi khuẩn ty của nấm phát triển 168 GSĐKT hoặc đến mép đĩa petri.
Hiệu quả của thuốc được tính theo công thức Abbott: (ĐKKTđc – ĐKKTi)
HQT(%) = x 100% ĐKKTđc
Trong đó: ĐKKTđc: Đường kính khuẩn ty của nghiệm thức đối chứng ĐKKTi: Đường kính khuẩn ty của nghiệm thức thuốc i
2.2.2 Thí nghiệm 2. Khảo sát hiệu quả của các loại dịch trích thực vật đối với nấm Fusarium sp. và nấm Rhizopus sp. gây lem lep hạt lúa trong điều kiện in vitro
Mục đích: đánh giá hiệu quả của các loại dịch trích thực vật đối với hai loại
nấm Fusarium sp. và nấm Rhizopus sp. gây bệnh lem lép hạt lúa.
Thực hiện thí nghiệm:
Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 13 nghiệm thức (12 nghiệm thức sử dụng dịch trích thực vật và 1 nghiệm thức đối chứng), 5 lần lặp lại. Loại dịch trích thực vật và nồng độ dịch trích được trình bày trong Bảng 2.1. Nghiệm thức đối chứng là môi trường PDA không có chứa dịch trích thực vật.
Khoanh khuẩn ty nấm gây bệnh lem lép hạt (đường kính khoảng 5 mm)
Môi trường đã có thuốc hóa học theo nồng độ tính sẵn
Chuẩn bị nguồn nấm Fusarium sp. và nấm Rhizopus sp.: tương tự Thí nghiệm 1.
Các loại dịch trích thực vật được tính toán khối lượng sao cho khi hòa tan vào chai thủy tinh chứa 95 ml môi trường PDA sẽ đạt được nồng độ đã định sẳn. Thực vật sau khi thu về sẽ được rửa sạch đất cát, để ráo, cân thực vật theo khối lượng đã tính rồi nghiền với 5 ml nước cất thanh trùng trong cối và chày thủy tinh đã thanh trùng khô. Sau đó, rót phần dịch trích thu được qua giấy lọc Whatman (có đường kính lỗ lọc 0,2 m) vào 1 cốc thủy tinh đã thanh trùng khô. Dùng bọc nilong bao cả bộ cốc thủy tinh và giấy lọc bên trên.
Nấu tan môi trường PDA. Khi chai môi trường đạt nhiệt độ khoảng 55-60oC thì đưa 5 ml dịch trích thực vật đã chuẩn bị sẳn vào chai môi trường, lắc chai môi trường để dịch trích hòa tan đều vào môi trường. Sau đó, môi trường trong chai sẽ được đổ vào các đĩa Petri (khoảng 10 ml môi trường/ đĩa petri). Sau khi môi trường đặc lại, đặt các khoanh khuẩn ty nấm đã chuẩn bị vào chính giữa đĩa petri (Hình 2.2).
Cách bố trí trên đĩa peptri: theo phương phápDhinggra và Sinclair (1995).
Hình 2.2: S đ bố trí th nghiệm hiệu quả của dịch trích thực vật đối với nấm
Fusarium sp. (nấm Rhizopus sp. gây lem lép hạt lúa
Ch tiêu ghi nhận: ghi nhận đường kính khuẩn ty của nấm vào các thời điểm 24, 48, 72, 96,..,168 GSĐKT. Chỉ tiêu được ngừng ghi nhận khi khuẩn ty của nấm phát triển 168 GSĐKT hoặc đến mép đĩa petri.
Khoanh khuẩn ty nấm gây bệnh lem lép hạt (đường kính khoảng 5 mm)
Môi trường đã có dịch trích thực vật theo nồng độ tính sẵn
Hiệu quả của dịch trích được tính theo công thức Abbott: (ĐKKTđc – ĐKKTi)
HQT(%) = x 100% ĐKKTđc
Trong đó: ĐKKTđc: Đường kính khuẩn ty của nghiệm thức đối chứng ĐKKTi: Đường kính khuẩn ty của nghiệm thức dịch trích thứ i
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1 HIỆU QUẢ BỐN LOẠI THUỐC HOÁ HỌC ĐỐI VỚI NẤM Fusarium sp. VÀ NẤM Rhizopus sp.
3.1.1 Hiệu quả của bốn loại thuốc hoá học đối với nấm Fusarium sp.
Kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP, Tilt Super 300EC và Amistar 250SC đều có khả năng ức chế sự phát triển đường kính khuẩn ty (ĐKKT) của nấm Fusarium sp. và khác biệt có ý nghĩa so với đối chứng qua các thời điểm khảo sát. Các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP ức chế hoàn toàn sự phát triển ĐKKT của nấm (ĐKKT của cả 3 nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP đều là 0,5 cm ở tất các thời điểm quan sát). Các nghiệm thức xử lý Tilt Super 300EC có khả năng ức chế sự phát triển ĐKKT của nấm thấp hơn các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP và hiệu quả ức chế khác nhau tuỳ nồng độ; ở các thời điểm từ 48 đến 168 GSĐKT nghiệm thức xử lý thuốc với nồng độ 187,6 μl/100 ml ức chế sự phát triển ĐKKT nấm cao hơn nồng độ 93,8 μl/100 ml và ở nồng độ 46,9 μl/100 ml thì ức chế ĐKKT thấp nhất. Các nghiệm thức xử lý Amistar 250SC ức chế ĐKKT của nấm thấp hơn các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP và Tilt Super 300EC; nghiệm thức xử lý ở nồng độ 66,67 μl/100 ml ức chế ĐKKT nấm cao hơn hai nghiệm thức xử lý ở nồng độ 37,52 μl/100 ml và 133,33 μl/100 ml; tuy nhiên ở thời điểm 72 và 168 GSĐKT, nghiệm thức xử lý nồng độ 37,52 μl/100 ml ức chế ĐKKT nấm thấp hơn nghiệm thức xử lý nồng độ 133,33 μl/100 ml (ĐKKT nấm của hai nghiệm thức ở thời điểm 168 GSĐKT lần lượt là 6,0 cm và 5,8 cm). Tuy nhiên, hai nghiệm thức xử lý Comcat 150WP ở nồng độ 15,625 mg/100 ml và 31,25 mg/100 ml không ức chế sự phát triển ĐKKT nấm và không khác biệt so với đối chứng nhưng nghiệm thức xử lý ở nồng độ 62,5 mg/100 ml kích thích ĐKKT nấm phát triển nhanh hơn so với đối chứng (Bảng 3.1 và Hình 3.1).
Như vậy, các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP đều có khả năng ức chế hoàn toàn sự phát triển ĐKKT nấm Fusarium sp. và có hiệu quả cao hơn các loại thuốc khác. Các nghiệm thức xử lý Tilt Super 300EC có khả năng ức chế sự phát triển ĐKKT nấm nhưng thấp hơn. Các nghiệm thức xử lý Amistar 250SC cũng có khả năng ức chế sự phát triển ĐKKT nấm nhưng thấp nhất. Các nghiệm thức xử lý Comcat 150WP không có khả năng ức chế nấm sự phát triển ĐKKT nấm.
Bảng 3.1. Đường kính (cm) khuẩn ty nấm Fusarium sp. ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả của 4 loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro
Nghiệm thức Thời điểm quan sát GSĐKT
Loại thuốc N ng độ 24h 48h 72h 96h 120h 144h 168h
Comcat 150WP 15,625 mg/100 ml PDA 1,6 b 3,0 a 4.4 b 5,8 bc 7,2 b 8,4 b 9,0 a
Comcat 150WP 31,25 mg/100 ml PDA 1,6 b 3,0 a 4.4 b 5,8 bc 7,2 b 8,4 b 9,0 a
Comcat 150WP 62,5 mg/100 ml PDA 1,7 a 3,1 a 4.6 a 6,0 a 7,4 a 8,6 a 9,0 a
Tilt Super 300EC 46,9 μl/100 ml PDA 0,5 e 0,7 c 1,0 e 1,3 f 1,5 e 1,8 e 2,2 e
Tilt Super 300EC 93,8 μl/100 ml PDA 0,5 e 0,7 c 0,9 f 1,2 f 1,4 f 1,6 f 1,8 f
Tilt Super 300EC 187,6 μl/100 ml PDA 0,5 e 0,6 d 0,8 g 1,0 g 1,1 g 1,2 g 1,4 g
Amistar 250SC 37,52 μl/100 ml PDA 0,9 c 1,6 b 2,3 c 3,2 d 4,1 c 5,0 c 6,0 b Amistar 250SC 66,67 μl/100 ml PDA 0,9 c 1,5 b 2,1 d 2,9 e 3,8 d 4,5 d 5,4 d Amistar 250SC 133,33 μl/100 ml PDA 0,8 d 1,5 b 2,2 d 3,1 d 4,0 c 4,9 c 5,8 c Binhnomyl 50WP 50 mg/100 ml PDA 0,5 e 0,5 e 0,5 h 0,5 h 0,5 h 0,5 h 0,5 h Binhnomyl 50WP 100 mg/100 ml PDA 0,5 e 0,5 e 0,5 h 0,5 h 0,5 h 0,5 h 0,5 h Binhnomyl 50WP 200 mg/100 ml PDA 0,5 e 0,5 e 0,5 h 0,5 h 0,5 h 0,5 h 0,5 h Dc 1,6 b 3,1 a 4,4 b 5,7 c 7,1 b 8,3 b 9,0 a Mức ý nghĩa * * * * * * * CV (%) 5,15 3,39 3,10 3,22 2,73 2,26 1,14
Ghi chú *: số liệu khác biệt ở mức ý nghĩa 5 % ns: khác biệt không ý nghĩa thống kê Trong cùng một cột, những số có cùng chữ số theo sau thì khác biệt không ý nghĩa ở mức 5%
Đc C
A B
D
Hình 3.1. Hiệu quả của bốn loại thuốc hoá học đối với nấm Fusarium sp. ở thời điểm 168 GSĐKT
Đc: Đối chứng.
(A)Hiệu quả của Binhnomyl 50WP ở nồng độ 50 mg/100 ml đối với nấm Fusarium sp. (B)Hiệu quả của Tilt Super 300EC ở nồng độ 187,6 μl/100 ml đối với nấm Fusarium sp. (C)Hiệu quả của Amistar 250SC ở nồng độ 66,67 μl/100 ml đối với nấm Fusarium sp. (D)Hiệu quả của Comcat 150WP ở nồng độ15,625 mg/100 ml đối với nấm Fusarium sp.
Hiệu quả ức chế (%) của các loại thuốc hoá học đối với nấm Fusarium sp. trong điều kiện in vitro được trình bày trong Bảng 3.2. Kết quả cho thấy các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP, Tilt Super 300EC và Amistar 250SC đều cho hiệu quả ức chế đối với nấm Fusarium sp. và khác biệt có ý nghĩa so với đối chứng. Các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP có hiệu quả ức chế cao hơn các nghiệm thức khác và có hiệu quả ức chế ở thời điểm 168 GSĐKT là 94,4%; các nghiệm thức xử lý Tilt Super 300EC cho hiệu quả ức chế thấp hơn, nghiệm thức xử lý ở nồng độ 187,6 μl/100 ml có hiệu quả ức chế khuẩn ty nấm cao hơn hai nồng độ còn lại và có hiệu quả ức chế là 84,4%, ở hai nồng độ 93,8 μl/100 ml và 46,9 μl/100 ml có hiệu quả ức chế thấp (hiệu quả ức chế lần lượt là 80,0 và 76,0); các nghiệm thức xử lý Amistar 250SC cũng cho hiệu quả ức chế sự phát triển khuẩn ty của nấm nhưng thấp hơn các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP và Tilt Super 300EC; nghiệm thức xử lý ở nồng độ 66,67 μl/100 ml cho hiệu quả ức chế nấm cao (ở thời điểm 168 GSĐKT hiệu quả ức chế 40,4%), nghiệm thức xử lý ở nồng độ 133,33 μl/100 ml cho hiệu quả thấp hơn (35,3%) và nghiệm thức xử lý ở nồng độ 37,52 μl/100 ml thấp nhất (33,8%). Ngoài ra, các nghiệm thức xử lý Comcat 150WP không cho hiệu quả ức chế nấm và không khác biệt so với đối chứng (Bảng 3.2).
Như vậy, các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP, Tilt Super 300EC và Amistar 250SC đều cho hiệu quả ức chế khuẩn ty nấm Fusarium sp., trong đó Binhnomyl cho hiệu quả cao hơn. Các nghiệm thức xử lý Comcat 150WP không có hiệu quả ức chế và không khác biệt so với đối chứng.
Bảng 3.2. Hiệu quả ức chế (%) nấm Fusarium sp. ở thí nghiệm khảo sát hiệu quả của 4 loại thuốc hoá học trong điều kiện in vitro
Nghiệm thức Thời điểm quan sát giờ sau đặt khoanh khuẩn ty
Loại thuốc N ng độ 24h 48h 72h 96h 120h 144h 168h
Comcat 150WP 15,625mg/100 ml PDA 2,3 b 1,9 c 0,4 e 0,0 e 0,0 c 0,0 c 0,0 h
Comcat 150WP 31,25 mg/100 ml PDA 2,4 b 1,9 c 0,0 e 0,0 e 0,0 c 0,0 c 0,0 h
Comcat 150WP 62,5 mg/100 ml PDA 0,0 b 0,0 c 0,0 e 0,0 e 0,0 c 0,0 c 0,0 h
Tilt Super 300EC 46,9 μl/100 ml PDA 68,7 a 76,1 ab 77,4 abc 77,9 abc 78,6 a 79,0 a 76,0 d
Tilt Super 300EC 93,8 μl/100 ml PDA 68,7 a 77,4 ab 79,6 ab 78,9 abc 80,8 a 81,2 a 80,0 c
Tilt Super 300EC 187,6 μl/100 ml PDA 68,7 a 80,6 a 81,9 ab 82,4 ab 84,5 a 85,6 a 84,4 b
Amistar 250SC 37,52μl/100 ml PDA 44,8 a 49,0 b 48,9 d 44,2 d 42,0 b 40,1 b 33,8 g Amistar 250SC 66,67μl/100 ml PDA 46,1 a 50,3 b 52,9 bcd 48,7 bcd 46,8 b 45,4 b 40,4 e Amistar 250SC 133,33 μl/100 ml PDA 50,0 a 50,3 b 51,1 cd 45,6 cd 43,6 b 41,3 b 35,3 f Binhnomyl 50WP 50 mg/100 ml PDA 68,7 a 83,9 a 88,7 a 91,2 a 93,0 a 94,0 a 94,4 a Binhnomyl 50WP 100 mg/100 ml PDA 68,7 a 83,9 a 88,7 a 91,2 a 93,0 a 94,0 a 94,4 a Binhnomyl 50WP 200 mg/100 ml PDA 68,7 a 83,9 a 88,7 a 91,2 a 93,0 a 94,0 a 94,4 a Dc 0,0 b 0,0 c 0,0 e 0,0 e 0,0 c 0,0 c 0,0 h Mức ý nghĩa * * * * * * * CV (%) 8,93 7,90 7,30 8,54 7,49 6,86 0,50
Ghi chú *: số liệu khác biệt ở mức ý nghĩa 5 % ns : khác biệt không ý nghĩa thống kê Trong cùng một cột, những số có cùng chữ số theo sau thì khác biệt không ý nghĩa ở mức 5 %.
Tóm lại, các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP (benomyl), Tilt Super 300EC (Propiconazole + Difenoconazole) và Amistar 250SC (Azoxystrobin) đều có hiệu quả ức nấm Fusarium sp. và khác biệt so với đối chứng trong điều kiện in
vitro; các nghiệm thức xử lý Comcat 150WP (Lychnis viscaria) không cho hiệu quả
ức chế nấm Fusarium sp. Trong đó, các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP ở cả ba nồng độ đều có hiệu quả ức chế cao và tương đương nhau. Kết quả này cũng phù hợp với nghiên cứu trước đây của Mamza và ctv. (2008), cho rằng hoạt chất benomyl có hiệu quả nhất trong việc hạn chế sự phát triển khuẩn ty nấm Fusarium
palidoroseum trong điều kiện in vitro. Các nghiệm thức xử lý Tilt Super 300EC
cũng có hiệu quả ức chế nấm Fusarium sp. cao, điều này phù hợp với nghiên cứu của Thái Hiền (2007), cho rằng Tilt Super 300EC (Propiconazole + Difenaconazole) có hiệu quả cao với nấm Fusarium sp. trong điều kiện in vitro. Các nghiệm thức xử lý Amistar 250SC có hiệu quả ức chế nấm không cao. Theo kết quả nghiên cứu của Fravel ctv. (2005), hoạt chất Azoxystrobin làm giảm sự phát triển khuẩn ty nấm Fusarium oxysporum, điều này cho thấy hoạt chất Azoxystrobin đã được ghi nhận là có hiệu quả đối với nấm Fusarium sp.
3.1.2 Hiệu quả của bốn loại thuốc hoá học đối với nấm Rhizopus sp.
Kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm thức xử lý Tilt Super 300EC, Amistar 250SC và Binhnomyl 50WP đều có hiệu quả ức chế sự phát triển ĐKKT của nấm Rhizopus sp. Trong đó, các nghiệm thức xử lý Tilt Super 300EC ở cả ba nồng độ 46,9μl/100 ml, 93,8μl/100 ml và 187,6 μl/100 ml đều có khả năng ức chế hoàn toàn sự phát triển ĐKKT nấm (ĐKKT đều là 0,5 cm). Các nghiệm thức xử lý thuốc Amistar 250SC đều có khả năng ức chế sự phát triển ĐKKT nhưng thấp hơn các nghiệm thức xử lý Tilt Super 300EC; ở thời điểm 48 GSĐKT hai nghiệm thức xử lý Amistar 250SC ở nồng độ 37,52 μl/100 ml và 66,67 μl/100 ml đều có khả năng ức chế ĐKKT nấm tương đương nhau (ĐKKT đều là 1,7 cm), nghiệm thức xử lý ở nồng độ 133,33 μl/100 ml cũng có khả năng ức chế ĐKKT nhưng thấp hơn (ĐKKT là 2,2 cm). Các nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP đều ức chế khuẩn ty của nấm nhưng thấp hơn các nghiệm thức xử lý Amistar 250SC. Nghiệm thức xử lý Binhnomyl 50WP ở nồng độ 200 mg/100 ml ức chế khuẩn ty nấm cao nhất (ĐKKT ở thời điểm 48 GSĐKT là 5,0 cm); nghiệm thức xử lý ở nồng độ 100 mg/100 ml cũng ức chế khuẩn ty nấm nhưng thấp hơn (ĐKKT ở thời điểm 48 GSĐKT là 5,8 cm); nghiệm thức xử lý ở nồng độ 50 mg/100 ml ức chế khuẩn ty nấm nhưng thấp