đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và nấm kí sinh trên bọ või voi (diocalandra frumenti fabricius) hại dừa trong điều kiện phõng thí nghiệm và nhà lưới

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG Chứng nhận luận văn tốt nghiệp với đề tài: “Đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và nấm kí

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỌ VÕI VOI (DIOCALANDRA FRUMENTI

FABRICIUS) HẠI DỪA TRONG ĐIỀU KIỆN PHÕNG THÍ NGHIỆM VÀ NHÀ LƯỚI

Cần Thơ, 2014

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỌ VÕI VOI (DIOCALANDRA FRUMENTI

FABRICIUS) HẠI DỪA TRONG ĐIỀU KIỆN PHÕNG THÍ NGHIỆM VÀ NHÀ LƯỚI

Cần Thơ, 2014

Sinh viên thực hiện:

Nguyễn Thị Hồng Hạnh MSSV: 3113428

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

Chứng nhận luận văn tốt nghiệp với đề tài: “Đánh giá hiệu lực của một số loại

thuốc hóa học và nấm kí sinh trên bọ vòi voi (Diocalandra frumenti Fabricius)

hại dừa trong điều kiện phòng thí nghiệm và nhà lưới”

Do sinh viên Nguyễn Thị Hồng Hạnh thực hiện và đề nạp

Kính trình lên hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp

Cần Thơ, ngày tháng năm 2014

Cán bộ hướng dẫn

Ts Lê Văn Vàng

Ks Châu Nguyễn Quốc Khánh

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT

o0o

Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp đã chấp nhận luận văn tốt nghiệp kỹ sư ngành

Bảo vệ thực vật với đề tài: “Đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và

nấm kí sinh trên bọ vòi voi (Diocalandra frumenti Fabricius) hại dừa trong

điều kiện phòng thí nghiệm và nhà lưới”

Do sinh viên Nguyễn Thị Hồng Hạnh thực hiện và bảo vệ trước hội đồng

Ý kiến của hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp:

Luận văn tốt nghiệp hội đồng đánh giá ở mức ………

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014

BCN khoa Nông Nghiệp

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của bản thân Các số liệu, kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình luận văn nào trước đây

Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2014

Người viết

Nguyễn Thị Hồng Hạnh

LỜI CẢM TẠ

Kính dâng!

Cha, mẹ suốt đời hết lòng tận tụy vì sự nghiệp và tương lai của con

Thành kính ghi ơn!

Thầy Lê Văn Vàng và anh Châu Nguyễn Quốc Khánh đã tận tình hướng dẫn

và giúp đỡ em trong suốt thời gian thực hiện và hoàn thành luận văn tốt nghiệp

Tỏ lòng biết ơn sâu sắc!

Thầy cố vấn học tập Nguyễn Chí Cương cùng toàn thể thầy cô khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ đã truyền đạt những kiến thức và tâm huyết vô cùng quý báu cho em trong suốt thời gian em học tại trường Đặc biệt là quý thầy cô thuộc Bộ môn Bảo vệ thực vật đã tận tình chỉ bảo và tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành luận văn

Chân thành cảm ơn!

Chị Xuân nghiên cứu sinh phòng NEDO, chị Trúc lớp Bảo vệ thực vật khóa

18 đã chia sẻ kinh nghiệm trong lúc làm em luận văn

Các bạn sinh viên lớp Bảo vệ thực vật khóa 37 đã giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập, đặc biệt là các bạn Duy Khánh, Xuân Khoa, Ánh Hồng, Diễm Quỳnh, anh Tài và các anh chị cao học lớp Bảo vệ thực vật khóa 19 đã nhiệt tình giúp đỡ tôi thực hiện và hoàn thành luận văn này

TIỂU SỬ CÁ NHÂN

I LÝ LỊCH SƠ LƢỢC

Họ và tên: Nguyễn Thị Hồng Hạnh Giới tính: Nữ

Quê quán: ấp Hòa Định, xã Tân Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp Cha Nguyễn Cao Bằng và mẹ Nguyễn Thị Như Ý

II SƠ LƢỢC QUÁ TRÌNH HỌC TẬP

Từ năm 1999 – 2004: học tại trường Tiểu học Vĩnh Thới 1, xã Vĩnh Thới, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp

Từ năm 2004 – 2008: học tại trường Trung học cơ sở Tân Hòa, xã Tân Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp

Từ năm 2008 – 2011: học tại trường Trung học phổ thông Lai Vung 2, xã Tân Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp

Từ năm 2011 – 2014: học tại trường Đại học Cần Thơ, ngành Bảo vệ thực vật khóa 37, khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng

Nguyễn Thị Hồng Hạnh, 2014 “Đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học

và nấm kí sinh trên bọ vòi voi (Diocalandra frumenti Fabricius) hại dừa trong

điều kiện phòng thí nghiệm và nhà lưới” Luận văn tốt nghiệp kỹ sư ngành Bảo vệ

thực vât, khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ

TÓM LƯỢC

Đề tài “Đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và nấm kí sinh

trên bọ vòi voi (Diocalandra frumenti Fabricius) hại dừa trong điều kiện phòng

thí nghiệm và nhà lưới” được thực hiện trong phòng thí nghiệm côn trùng và nhà

lưới Bộ môn Bảo vệ thực vật, khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ từ tháng 02 đến tháng 07 năm 2014 đạt được những kết quả sau:

 Hiệu lực thuốc hóa học đối với bọ vòi voi D frumenti trong điều kiện

phòng thí nghiệm và nhà lưới

Khi phun thuốc hóa học trực tiếp lên thành trùng và gián tiếp lên thức ăn của

bọ vòi voi trong điều kiện phòng thí nghiệm thì trong 7 loại thuốc có 4 loại cho hiệu lực phòng trừ bọ vòi voi nhanh và cao theo thứ tự lần lượt: Bassa 50ND, Dragon 585EC, SecSaigon 50EC và Abatimec 3.6EC gây chết tối đa 100% thành trùng bọ voi voi sau 72 giờ xử lý

Khi phun thuốc ngoài nhà lưới thì hiệu lực của 4 loại thuốc Bassa 50ND, Abatimec 3.6EC, Dragon 585EC, SecSaigon 50EC rất cao Trong đó thuốc Dragon 585EC cho hiệu lực nhanh sau 1 ngày phun với độ hữu hiệu 100%

 Hiệu lực nấm kí sinh đối với bọ vòi voi D frumenti trong điều kiện

phòng thí nghiệm

Nấm Metarhizium anisopliae có hiệu lực cao nhất (84,4%) ở mật số 109

bt/ml vào 12 ngày sau khi xử lý và cho tỷ lệ nhiễm nấm trở lại khá cao (90,6%) ở

18 ngày sau khi xử lý

Nấm Beauveria bassiana có hiệu lực cao nhất (35,6%) ở mật số 109 bt/ml vào 12 ngày sau khi xử lý và cho tỷ lệ nhiễm nấm trở lại tương đối cao (65,8%) ở

18 ngày sau khi xử lý

Chế phẩm nấm xanh Metarhizium anisopliae cho hiệu lực cao nhất (48,3%)

ở mật số 109

bt/ml vào 12 ngày sau khi xử lý và cho tỷ lệ nhiễm nấm trở lại khá cao (80,4%) ở 18 ngày sau khi xử lý

MỤC LỤC

TÓM LƯỢC vi

DANH SÁCH BẢNG xi

DANH SÁCH HÌNH xii

DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT ……xiii

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

1.1 BỌ VÕI VOI (Diocalandra frumenti Fab.) 2

1.1.1 Phân bố và ký chủ 2

1.1.2 Đặc điểm hình thái và sinh học 2

1.1.2.1 Thành trùng 2

1.1.2.2 Trứng 3

1.1.2.3 Ấu trùng 3

1.1.2.4 Nhộng 4

1.1.3 Triệu chứng và cách gây hại 5

1.1.4 Biện pháp phòng trị 6

1.2 NẤM KÍ SINH CÔN TRÙNG 6

1.2.1 Nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) 6

1.2.1.1 Lịch sử nghiên cứu 6

1.2.1.2 Đặc điểm hình thái 7

1.2.1.3 Đặc điểm sinh lý – sinh hóa của nấm Metarhizium anisopliae Sorokin 8 1.2.1.4 Khả năng biến đổi các cơ chất khác nhờ vào hệ thống enzyme 8

1.2.1.5 Khả năng sinh độc tố diệt côn trùng 8

1.2.1.6 Cơ chế tác động của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) lên côn trùng 9

1.2.1.7 Một số yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) 10

a) Ảnh hưởng của môi trường và phương pháp nuôi cấy 10

b) Ảnh hưởng của nhiệt độ và độ ẩm 10

Trang

c) Ảnh hưởng của ánh sáng 10

d) Ảnh hưởng của độ thoáng khí 11

e) Ảnh hưởng của hàm lượng nước 11

f) Ảnh hưởng của pH 11

1.2.1.8 Thành tựu và ứng dụng của nấm Metarhizium anisopliae Sorokin11 1.2.2 Nấm trắng Beauveria bassiana Vuill 13

1.2.2.1 Nguồn gốc, phân loại và phân bố 13

1.2.2.2 Đặc điểm hình thái và sinh học 13

1.2.2.3 Khả năng sinh độc tố và cơ chế tác động 14

1.2.2.4 Thành tựu và ứng dụng 14

1.3 ĐẶC TÍNH MỘT SỐ LOẠI THUỐC HÓA HỌC 15

1.3.1 Abamectin 3.6EC 15

1.3.2 Actara 25WG 15

1.3.3 Bassa 50ND 15

1.3.4 Diazan 40EC 15

1.3.5 Dragon 585EC 16

1.3.6 Regent 5SC 16

1.3.7 SecSaigon 50EC 16

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 18

2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 18

2.2 PHƯƠNG TIỆN 18

2.2.1 Vật liệu thí nghiệm 18

2.2.2 Nguồn bọ vòi voi 18

2.2.3 Nguồn nấm 19

2.3 PHƯƠNG PHÁP 21

2.3.1 Đánh giá hiệu lực của một số thuốc hóa học đối với bọ vòi voi D frumenti 21 2.3.1.1 Thí nghiệm 1: Đánh giá hiệu lực của một số thuốc hóa học đối với thành trùng bọ vòi voi D frumenti hại dừa trong điều kiện phòng thí nghiệm 21

a) Đánh giá hiệu lực của thuốc hóa học xử lý bằng cách phun trực tiếp lên thành trùng bọ vòi voi D frumenti 21

b) Đánh giá hiệu lực của thuốc hóa học xử lý bằng cách phun gián tiếp thức

ăn của thành trùng bọ vòi voi D frumenti 22

2.3.1.2 Thí nghiệm 2: Đánh giá hiệu lực của một số thuốc hóa học đối với bọ vòi voi D frumenti trong điều kiện nhà lưới 23

2.3.2 Đánh giá hiệu lực của nấm kí sinh côn trùng đối với bọ vòi voi D

frumenti hại dừa trong điều kiện phòng thí nghiệm 24

2.3.2.1 Thí nghiệm 3: Đánh giá hiệu lực của dãy nồng độ nấm M anisopliae đối với bọ vòi voi D frumenti hại dừa 24

2.3.2.2 Thí nghiệm 4: Đánh giá hiệu lực của dãy nồng độ nấm trắng B

bassiana đối với bọ vòi voi D frumenti hại dừa 24

2.3.2.3 Thí nghiệm 5: Đánh giá hiệu lực của dãy nồng độ chế phẩm nấm xanh

M anisopliae đối với bọ vòi voi D frumenti hại dừa 25

2.3.3 Xử lý số liệu 25

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26

3.1 ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC HÓA HỌC ĐỐI

VỚI BỌ VÕI VOI D FRUMENTI 26

3.1.1 Trong điều kiện phòng thí nghiệm 26

3.1.1.1 Hiệu lực của một số thuốc hóa học xử lý bằng cách phun lên thành

trùng bọ vòi voi D frumenti 26

3.1.1.2 Hiệu lực của một số thuốc hóa học xử lý bằng cách phun lên thức ăn của thành trùng bọ vòi voi D frumenti 28

3.1.2 Hiệu lực của một số thuốc hóa học đối với bọ vòi voi D frumenti trong

điều kiện nhà lưới 30

3.2 ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC CỦA NẤM KÍ SINH TRÊN BỌ VÕI VOI D

FRUMENTI TRONG ĐIỀU KIỆN PHÕNG THÍ NGHIỆM 32

3.2.1 Hiệu lực của nấm M anisopliae trên bọ vòi voi D frumenti hại dừa32

3.2.2 Hiệu lực của nấm B bassiana trên bọ vòi voi D frumenti hại dừa 35

3.2.3 Hiệu lực của chế phẩm nấm xanh M anisopliae trên bọ vòi voi D frumenti37

CHƯƠNG 4 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41

4.1 KẾT LUẬN 41

4.2 ĐỀ NGHỊ 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ CHƯƠNG

DANH SÁCH BẢNG

2.2 Các loại thuốc hóa học được sử dụng trong thí nghiệm 1 22 2.3 Các loại thuốc hóa học sử dụng trong thí nghiệm 2 23 3.1 Độ hữu hiệu (%) của một số loại thuốc hóa học đối với bọ vòi voi

D frumenti qua phun thuốc lên thành trùng trong điều kiện phòng

thí nghiệm, tháng 2/2014

26

3.2 Độ hữu hiệu (%) của một số loại thuốc hóa học đối với bọ vòi voi

D frumenti bằng cách phun lên thức ăn trong điều kiện phòng thí

nghiệm, tháng 2/2014

28

3.3 Độ hữu hiệu (%) của các loại thuốc hóa học đối với bọ vòi voi D

frumenti trong điều kiện nhà lưới, tháng 2/2014

30

3.4 Độ hữu hiệu (%) của nấm M anisopliae trên bọ vòi voi D

frumenti ở các nồng độ khác nhau trong điều kiện PTN, tháng

3/2014

32

3.5 Tỷ lệ (%) bọ vòi voi D frumenti nhiễm nấm M anisopliae trở lại

sau khi chết ở thí nghiệm 3 trong điều kiện PTN, tháng 3/2014

33

3.6 Độ hữu hiệu (%) của nấm B bassiana trên bọ vòi voi D frumenti

ở các nồng độ khác nhau trong điều kiện PTN, tháng 4/2014

35

3.7 Tỷ lệ (%) bọ vòi voi D frumenti nhiễm nấm B.bassiana trở lại sau

khi chết ở thí nghiệm 4 trong điều kiện PTN, tháng 4/2014

36

3.8 Độ hữu hiệu (%) của chế phẩm nấm M anisopliae trên bọ vòi voi

D frumenti ở các nồng độ khác nhau trong điều kiện PTN, tháng

5/2014

37

3.9 Tỷ lệ (%) bọ vòi voi D frumenti nhiễm nấm M anisopliae trở lại

sau khi chết ở thí nghiệm 5 trong điều kiện PTN, tháng 5/2014

38

DANH SÁCH HÌNH

1.5 Triệu chứng và cách gây hại của bọ vòi voi D frumenti 5

2.2 A Đĩa nguồn nấm xanh M.anisopliae được nhân nuôi tại phòng

2.4 B Ghi nhận chỉ tiêu thử nấm kí sinh trên bọ vòi voi D frumenti 25 3.1 Bọ vòi voi D frumenti nhiễm nấm xanh Mertahizium anisopliae 40 3.2 Bọ vòi voi D frumenti nhiễm nấm trắng Beauveria bassiana 40

MỞ ĐẦU

Tại Việt Nam diện tích trồng dừa (Cocos nucifera L) khoảng 155.800 ha và

tập trung chủ yếu ở vùng Đồng bằng sông Cửu Long và một số tỉnh duyên hải miền Trung; sản lượng dừa hàng năm trung bình đạt khoảng 892.000 tấn/năm (Nguyễn Sinh Cúc, 2003) Cây dừa và các nghề có liên quan đến dừa đóng vai trò quan trọng trong nền kinh tế đất nước, vì ngoài việc thu nhập trực tiếp từ sản lượng dừa tươi, cây dừa còn cung cấp nguồn nguyên vật liệu cho các ngành tiểu thủ công nghiệp, góp phần tạo sự ổn định về kinh tế và việc làm cho rất nhiều nguồn lao động từ nông thôn đến thành thị

Với sự phát triển của các nghề đến từ dừa thì diện tích trồng dừa ngày càng tăng, vì vậy nhiều loài côn trùng gây hại trên dừa cũng có cơ hội phát triển Trong

đó, bọ vòi voi Diocalandra frumenti (Coleoptera: Curculionidae) được ghi nhận là loài gây hại quan trọng trên các cây thuộc họ cau dừa (Giblin – Davis, 2001) và là

đối tượng dịch hại mới trên dừa tại Việt Nam Theo trung tâm Bảo vệ thực vật phía Nam, tuy mới xuất hiện tại Kiên Giang từ tháng 11/2011 đến nay nhưng bọ vòi voi

Diocalandra frumenti đã làm giảm 10 – 30% năng suất cũng như chất lượng trái

dừa ở vùng bị dịch hại và gây nhiều thiệt hại kinh tế cho nông dân Để phòng trừ đối tượng dịch hại trên thì việc sử dụng thuốc hóa học là rất cần thiết Bên cạnh đó, việc nghiên cứu nấm kí sinh trên côn trùng cũng là một tác nhân phòng trừ sinh học mang hiệu quả cao đang được sử dụng phổ biến hiện nay như: sử dụng nấm xanh

Mertahizium anisopliae để phòng trừ rầy nâu (Trần Văn Hai, 2008), sùng khoai

lang ở Vĩnh Long và Sóc Trăng (Huỳnh Thị Ngọc Linh, 2010) và nấm trắng

Beauveria bassiana để phòng trừ sùng khoai lang (Nguyễn Thúy Liễu, 2011)

Trên cơ sở đó đề tài “Đánh giá hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và nấm kí

sinh trên bọ vòi voi (Diocalandra frumenti Fabricius) hại dừa trong điều kiện

phòng thí nghiệm và nhà lưới” được thực hiện nhằm chọn ra những loại thuốc có

hiệu quả, cho hiệu lực nhanh đối với bọ vòi voi (Diocalandra frumenti Fab.) Bên

cạnh đó, đánh giá hiệu lực của nấm kí sinh nhằm tìm ra dòng nấm và nồng độ có hiệu lực diệt bọ vòi voi cao để có biện pháp hữu hiệu nhất cho việc quản lý đối tượng này ngoài đồng

CHƯƠNG 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU

1.1 BỌ VÕI VOI (Diocalandra frumenti Fab.)

Ký chủ chính của D frumenti là cây dừa Cocos nucifera và cây cảnh

Phoenix canariensis (Kalshoven, 1981; Salomone et al., 2000) Ngoài ra, loài này

còn có một số ký chủ phụ khác như: Cây đủng đỉnh (Caryota sp.), cau đuôi phượng (Chrysalidocarpus lutescens), cây dừa nước (Nypa fruticans), cau mây (Ptychosperma macarthurii), cau trai (Ravenea rivularis), cau đuôi chuồn (Wodyetia bifurcate), cọ bắp cải (Sabal palmetto)….(Salomone et al., 2000)

1.1.2 Đặc điểm hình thái và sinh học

1.1.2.1 Thành trùng

Thành trùng của D frumenti là loài mọt nhỏ (tên thông thường: mọt dừa 4

đốm, four-spotted coconus weevil) kích thước cơ thể dài từ 6 - 8 mm, màu đen sáng, trên cánh trước có 4 đốm lớn màu vàng nâu hoặc nâu đen, chiếm gần hết diện

tích của cánh Đây là đặc điểm hình thái quan trọng để phân biệt D frumenti với loài mọt có quan hệ rất gần là D taitensis, cơ thể có màu đen hơi đỏ nhạt Trưởng thành đực và trưởng thành cái của D frumenti có một số đặc điểm hình thái hơi

khác nhau, con cái có kích thước lớn hơn con đực với phần cuối bụng hơi bằng, còn con đực có phần bụng thuông tròn, vòi ở trước đầu ngắn nhưng rộng hơn so với con cái (Hill, 1983) Trưởng thành sợ ánh sáng, hoạt động mạnh lúc chiều tối, chúng sống ở nơi tiếp xúc giữa hai trái và gần cuống trái Thời gian sống của thành trùng khoảng 15 - 22 ngày

Hình 1.1 Thành trùng bọ vòi voi D frumenti (Nguồn: Chi cục Bảo vệ thực vật Phú Yên 29/8/2012)

1.1.2.2 Trứng

Trứng được đẻ trong khe nứt hoặc các rãnh ở phần cuối của hệ thống rễ phụ, gốc thân cây, trên hoa, cuống hoa, cuống trái Trứng màu trắng trong, kích thước 0,9 x 0,3 mm và giai đoạn trứng 6-10 ngày (Liao and Chen, 1997) Khi được nuôi

trên mía, thành trùng cái đẻ trung bình là 0,13 trứng/ bọ cái/ ngày (Núñez et al.,

2002) Khả năng này là thấp để tạo sự cân bằng với thời gian sống dài của thành trùng

Hình 1.2 Trứng bọ vòi voi D frumenti (Nguồn: Vũ Bá Quan – Phòng NN & PTNT huyện Kế Sách)

1.1.2.3 Ấu trùng

Ấu trùng màu trắng đến vàng nhạt, có 5 tuổi Tuổi 1 (1 - 2 mm), tuổi 2 (2,1 - 2,6 mm), tuổi 3 (3,3 - 4 mm), tuổi 4 (4,2 - 5,5 mm) và tuổi 5 (5,8 - 7,2 mm) Ấu trùng sống bằng cách đục thành đường hầm trong vỏ trái Khi tăng trưởng hoàn toàn, hàm trên ấu trùng có màu nâu đen và thân phình thon dần về phía hai đầu của

cơ thể Thời gian ấu trùng là 8 - 10 tuần Ấu trùng có thể đục đường hầm ở bất kỳ phần nào của cây: rễ, cuống lá, chùm hoa, lá chét, bẹ lá, trái và ở tất cả độ cao của thân Chúng đục sâu vào thân cây, việc chảy mủ thường được thấy ở miệng lỗ đục

(Hill, 1983; Núñez et al., 2002)

Hình 1.3 Ấu trùng bọ vòi voi D frumenti (Nguồn: Vũ Bá Quan – Phòng NN & PTNT huyện Kế Sách)

Theo Liao và Chen (1997) có thể có từ 10 hay nhiều hơn ấu trùng có thể phát

triển trong mỗi bẹ lá Kết quả nghiên cứu của Salomone et al (2000) cũng đã ghi

nhận được có hàng trăm cá thể được tìm thấy trong mỗi cây dừa

1.1.2.4 Nhộng

Sự hóa nhộng diễn ra trong lỗ đục nhưng không tạo kén Nhộng có màu trắng đục, khi ấu trùng được nuôi trên mía, ổ nhộng được tạo gần biểu bì của mía

(González Núñez et al., 2002), có thể quan sát được một hốc tròn đường kính 1,5

mm được tạo cho bọ chui ra Hốc này được lấp đầy bằng mảnh vụn và lớp biểu bì mỏng của mía Theo Liao và Chen (1997) ấu trùng di chuyển hướng tới gốc bẹ lá

để hóa nhộng Giai đoạn nhộng trong tự nhiên có thể từ 9 - 10 ngày Sau khi vũ hóa, thành trùng dùng vòi gạt những mảnh vụn trong hốc để chui ra ngoài

Hình 1.4 Nhộng bọ vòi voi D frumenti (Nguồn: Vũ Bá Quan – Phòng NN & PTNT huyện Kế Sách)

Theo Hill (1983), vòng đời bọ vòi voi kéo dài từ 10 - 12 tuần Cũng theo ghi nhận của Liao và Chen, (1997) thì vòng đời của bọ vòi voi ứng với các giai đoạn trứng, ấu trùng và nhộng có thời gian lần lượt là 6 - 10, 35 - 40 và 10 - 16 ngày

Điều này cũng phù hợp với nghiên cứu của Núñez et al., (2002) trong điều kiện

phòng thí nghiệm (nhiệt độ 25°C, ẩm độ 70%) bằng cách sử dụng mía làm nguồn thức ăn cũng cho kết quả tương tự

1.1.3 Triệu chứng và cách gây hại

D frumenti được ghi nhận là một dịch hại chính trên cây dừa (Cocos nucifera) và cọ dầu (Elaeis guineensis) Ấu trùng của D frumenti có thể gây chảy

mủ và rụng trái dừa non (Vanderplank,1960) Bọ vòi voi có thể gây thiệt hại ở các

bộ phận như: rễ, lá và cuống trái Bọ vòi voi đã gây chết dừa ở đảo Canaria và cau cảnh ở Úc Sự gây hại của ấu trùng bọ vòi voi có thể gây vàng lá sớm và làm đổ gãy

lá trên ngọn dừa và làm giảm sức sống của cây (Hill, 1983)

Vết đục của ấu trùng có thể gây biến vàng và gãy lá dừa, bắt đầu từ những lá

bên ngoài đi dần vào lá bên trong (Salomone et al., 2000) Sự gây hại được ghi nhận

khi xuất hiện các hốc 1 - 2 mm ở mô lành lặn của các lá cũ, mới và ở các gốc lá Bọ thường tấn công ở phần bị thương, yếu và già của cây, đặc biệt ở phần gốc lá già và nơi bị thương (Zimmerman, 1993) Mủ chảy ở miệng lỗ đục có thể thấy rõ Ở Úc, những gốc lá được cắt từ cây hay lá rách do gió thường là nơi bị tấn công đầu tiên

Ấu trùng đục từ ngoài biên của cuống lá (Howard et al., 2001) Tuy nhiên, loài bọ

này bị hấp thu bởi các chất chất nhựa được tiết ra từ vết thương của thân trái dừa hay vết cắn của các loài côn trùng khác (Kalshoven, 1981)

Hình 1.5 Triệu chứng và cách gây hại của bọ vòi voi D frumenti

(Nguồn: Hiệp hội dừa Bến Tre – 23/9/2013)

Bọ vòi voi cũng tấn công cây cau cảnh (Phoenix dactylifera) ở Úc, tuy nhiên thiệt hại của nó gây ra là chưa đáng kể (Giblin-Davis et al., 2001) Kết quả nghiên cứu của Liao và Chen (1997) thì loài này còn tấn công trên cây Mascarena

verchaffeltii, Roystonea regia với thiệt hại từ 5 - 20%, trong khi thiệt hại trên cây Phoenix loureiri thấp hơn 5%

1.1.4 Biện pháp phòng trị

 Biện pháp canh tác

Việc chặt phá làm tổn thương thân cây, bón phân tưới nước không phù hợp

sẽ làm gia tăng bọ vòi voi, cần tránh việc chặt tỉa cây dừa NGIA (1998) khuyến cáo nhiều phương pháp canh tác ngăn ngừa bọ vòi voi Bao gồm: di chuyển và tiêu hủy các lá già khô để làm giảm nơi sinh sản và nơi trưởng thành ẩn náu, bảo vệ bề mặt bị cắt bằng sơn acrylic hay hắc ín, che phủ rễ bất định ở gốc thân bằng đất để ngăn bọ đến đẻ trứng

 Biện pháp hóa học

Sử dụng hoạt chất Chlorpyrifos có thể làm giảm mật số của D frumenti.

Thuốc tiếp xúc bền sẽ làm giảm sự tấn công của bọ vòi voi ở gốc cây nếu rải thuốc bảo vệ Bảo vệ cuống lá và gốc lá thì khó hơn ngay cả với thuốc đặc hiệu

Salomone Suárezet al (2000) có đề xuất nhiều nghiên cứu để thử nghiệm hiệu quả

của thuốc hóa học với bọ vòi voi và tác động có thể giữa bọ này với bệnh hại liên quan trong những vườn dừa bị hại nghiêm trọng ở đảo Canary

 Biện pháp sinh học

Nhiều tác nhân sinh học tấn công D frumenti nhưng hiệu quả không cao

bằng dùng thuốc hóa học Vanderplank (1953) báo cáo rằng, ở Tanzania, hai loài

kiến Anoplolepis custodiensvà Oecophylla smaragdina có thể ăn loài bọ này trên dừa Trưởng thành và sâu non của bọ Plaesius javanus và sâu non của ruồi Chrysophilus ferruginosus là loài ăn thịt sâu non bọ vòi voi Giblin-Davis

(2001) cho rằng các loài ăn thịt bọ đục mía cũng ăn thịt bọ vòi voi Lever (1969)

báo cáo rằng 40% bọ vòi voi được thấy bị ký sinh bởi ong Spathius apicalis.

Năm 1878, khi nghiên cứu về loài sâu non bộ cánh cứng hại lúa mì Asinoplia

austrinia, nhà khoa học người Nga I I Metschnhikov đã phát hiện thấy một loài

nấm bào tử màu lục có thể gây chết hàng loạt côn trùng Ông xác định loài nấm này

có tên khoa học là Entomophthora anisopliae Về sau, Sorokin kiểm tra lại và thấy loài nấm này không thuộc giống Entomopthora mà thuộc về giống Metarhizium

(Nguyễn Lâm Dũng, 1981)

Vào những năm 1890 – 1897 nhà khoa học Koben người Đức đã thu thập

được nấm Metarhizium ký sinh trên sâu hại từ Hawaii mang về Đức để nghiên cứu

(Phạm Thị Thùy, 2004)

1.2.1.2 Đặc điểm hình thái

Nấm Metarhizium anisopliae Sorokin vì có màu lục hoặc xanh lục nên người

ta thường gọi là nấm lục cương

Nấm Metarhizium anisopliae Sorokin có dạng sợi phân nhánh, có vách ngăn

ngang, đường kính 3 – 4 µm (Trần Thị Thanh, 2000)

Sợi nấm phát triển trên bề mặt côn trùng có màu từ trắng đến hồng, cuống sinh bào tử ngắn mọc tỏa tròn trên đám sợi nấm dày đặc Bào tử trần dạng hình que

có kích thước 3,5 x 6,4 x 7,2 µm, màu từ lục xám đến ôliu – lục, bào tử xếp thành chuỗi khá chặt chẽ và nhìn bằng mắt thường người ta có thể thấy bào tử được tạo ra

trên bề mặt cơ thể côn trùng một lớp phấn khá rõ màu xanh lục Sợi nấm khi phát triển trên bề mặt côn trùng có chiều rộng khoảng 3 – 4 µm, dài khoảng 20 µm, chia thành nhiều tế bào ngắn, trong tế bào có thể thấy rõ nhiều giọt mỡ (Phạm Thị Thùy, 2004)

Nấm Metarhizium anisopliae có bào tử dạng hình trụ, hình hạt đậu, hình bầu

dục, khuẩn lạc màu xanh, thỉnh thoảng có màu tối hoặc màu hồng vỏ quế Loài

Metarhizium anisopliae có hai dạng bào tử nhỏ và lớn, dạng bào tử nhỏ Metarhizium anisopliae var anisopliae có kích thước bào tử 3,5 – 5,0 x 2,5 – 4,5

µm, dạng bào tử lớn là Metarhizium anisopliae var major có kích thước bào tử 10,0

1.2.1.3 Đặc điểm sinh lý – sinh hóa của nấm Metarhizium anisopliae Sorokin

Nấm Metarhizium anisopliae Sorokin thuộc thể sinh trưởng tốt trên nền nấm

không có kitin, chúng sống được ở nhiệt độ thấp 80C, có biên độ và độ ẩm rộng, ở nơi tích lũy nhiều CO2 và thiếu O2 chúng có thể sống tới 445 ngày

Ở nhiệt độ dưới 100

C và trên 450C thì nấm thường không hình thành bào tử Nhiệt độ thích hợp cho sự nảy mầm của nấm là từ 25 – 300C và sẽ bị chết ở 49 –

550C, nhiệt độ cho sự dao động trong khoảng 3,3 – 8,5 Nấm Metarhizium

anisopliae Sorokin có khả năng phân giải tinh bột, xenlulose và kitin (lông và da

côn trùng) (Phạm Thị Thùy, 2004)

Nấm Metarhizium anisopliae Sorokin có thể đồng hóa nhiều nguồn thức ăn

khác nhau Chúng phát triển tốt trên môi trường có chứa glucose và lipid Muốn tạo

thành bào tử, nấm Metarhizium anisopliae Sorokin đòi hỏi phải có ẩm độ không khí

khá cao

Sản phẩm trao đổi chất có thể làm tê liệt ấu trùng của loài sâu hại Galleria

Mellonela và Bombyx mori Trong dịch nuôi cấy người ta đã tách được dung dịch

toxin và xác định bản chất hóa học của chúng là peptid vòng destruxin A, B, C và D (Phạm Thị Thùy, 2004)

1.2.1.4 Khả năng biến đổi các cơ chất khác nhờ vào hệ thống enzyme

Messias (1986) đã nghiên cứu khả năng phân giải kitin của côn trùng thông

qua sự sinh trưởng và phát triển của nấm Metarhizium anisopliae, theo tác giả khi

bổ sung thêm thành phần biểu bì của sâu Dratraea saccharalis vào môi trường nuôi

cấy thì nấm phát triển tốt hơn Tác giả cũng chứng minh được vai trò của enzyme phân giải kitin thông qua sự sinh trưởng và phát triển (Phạm Thị Thùy, 2004)

1.2.1.5 Khả năng sinh độc tố diệt côn trùng

Độc tố là một trong những sản phẩm thứ cấp không ổn định và chúng chỉ có

ở một số chủng vi nấm gây bệnh trên côn trùng hại cây trồng Sản phẩm thứ cấp là một loại hợp chất được sinh ra từ các chất trao đổi sơ cấp nhờ quá trình chuyển hóa sinh hóa đặc biệt Các sản phẩm thứ cấp đó thường được tích lũy vào cuối giai đoạn sinh trưởng của nấm khi các nguồn thức ăn và năng lượng đã cạn dần Khả năng sinh tổng hợp các sản phẩm thứ cấp là đặc tính sinh lý khá ổn định của từng loài nấm gây hại côn trùng (Phạm Thị Thùy, 2004)

Nấm Metarhizium anisopliae có một số ngoại độc tố là các sản phẩm thứ cấp

vòng peptid, L-prolyn, L-leucin, anhydride, L-prolyn-L-valine anhydride và Desmethyl Destruxin B

Theo Lysenko và Kuccera thì nấm Metarhizium anisopliae cũng sinh ra độc

tố Destruxin A và độc tố Destruxin B

Destruxin A và B là hai loại độc tố được tách ra rừ dịch nuôi cấy nấm lục

cương Metarhizium anisopliae (Kodaira, 1961; Suzuki et al., 1999) Một số Destruxin làm tê liệt côn trùng (Dmas et al., 1996) và một số Destruxin khác có thể

ức chế hệ thống miễn dịch (Cerenius et al., 1990)

Độc tố Destruxin A có bản chất hóa học là D – 2hydroxy – 4 – penteNry – L – Prolyn – L – isoleucyl – N –methyl – L – valyl – valyl – N –methyl – L – alanyl –

β – alanyl lacton

Y Kodaira (1961, 1962) đã tách được độc tố Destruxin A và Destruxin B từ

dịch nuôi cấy nấm Metarhizium anisopliae

S Tamara et al (1965 – 1970) đã tiến hành nuôi cấy nấm Metarhizium

anisopliae cũng đã tách được những độc tố trên môi trường Czapek – Dox có chứa

0,5% peptone Từ một lích dung dịch nuôi cấy người ta có thể thu nhận được 13 –

15 mg độc tố Destruxin A và B, dịch lọc được xử lí bằng than hoạt tính rồi được phản hấp thụ bằng N – butanol, sau đó được tách bằng benzene và được làm sạch trên cột nhôm oxit trung tính (Phạm Thị Thùy, 2004)

Theo Trần Thị Thanh (2000) thì người ta đã tổng hợp nhân tạo được

Destruxin B, có khoảng 70 loài côn trùng bị tiệu diệt bởi nấm Metarhizium

anisopliae trong đó có tới 34 loài côn trùng cánh cứng và 5 loài côn trùng cánh vẩy

1.2.1.6 Cơ chế tác động của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin) lên côn trùng

Khi bào tử của nấm Metarhizium anisopliae Sorokin bám lên bề mặt côn

trùng, gặp điều kiện thuận lợi sẽ nảy mầm và mọc thành sợi nấm xuyên qua vỏ kitin của côn trùng Chúng phát triển trong cơ thể côn trùng tạo thành ống mầm xuyên qua vỏ côn trùng, tiếp tục phân nhánh tạo thành mạng sợi chằng chịt bên trong cơ thể côn trùng Côn trùng huy động tất cả các tế bào bạch huyết (lympho – cyte) để

chống đỡ, nhưng nấm Metarhizium anisopliae Sorokin sử dụng độc tố Destruxin A

và B làm cho tế bào bạch huyết lần lượt bị tiêu diệt Khi độc tố nấm đã tiêu diệt hết

các tế bào bạch huyết cũng là lúc côn trùng chết, cơ thể cứng lại là do các sợi nấm đan xen với nhau Cũng có trường hợp khi bị nấm tấn công cơ thể côn trùng bị ngắn lại hoặc bị khô do hệ thống tiêu hóa bị tổn thương hoặc do thiếu nguồn thức ăn Khi

nấm Metarhizium anisopliae Sorokin ký sinh thì tuyến mỡ và các mô khác của côn

trùng bị hòa tan do lipaza và proteaza của nấm tiết ra (Phạm Thị Thùy, 2004)

1.2.1.7 Một số yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm xanh (Metarhizium anisopliae Sorokin)

a) Ảnh hưởng của môi trường và phương pháp nuôi cấy

Môi trường nuôi cấy là yếu tố quan trọng cho nấm sinh trưởng và phát triển, nếu môi trường không tốt, nấm mọc yếu hoặc có thể sẽ không mọc Trong quá trình

nảy mầm để hình thành bào tử nấm Metarhizium anisopliae Sorokin cần các nguồn

carbon, nitơ Sự phát triển của nấm phụ thuộc vào các chất ức chế khác nhau Môi trường thích hợp nhất cho nấm phát triển là môi trường có chứa kitin làm nguồn carbon, nếu bổ sung thêm chất kitin và glucose thì quá trình nuôi cấy nấm

Metarhizium anisopliae Sorokin sẽ thu được số lượng bào tử cao, bởi vì thành phần

kitin trong môi trường nuôi cấy là rất cần thiết đối với loài nấm, nó giúp sự phát triển và hình thành bào tử đính (Conidiospose) và bào tử trần (Blastoospore)

Về phương pháp nuôi cấy theo tác giả Rombach, Basto Cruz và ctv., Hegedus và ctv., Miao và ctv., Jenkins và Prior, Shimanzu và ctv thì sử dụng

phương pháp nuôi cấy chìm để sản xuất nấm thu được kết quả tốt, vì trong nuôi cấy chìm, người ta đã xác định được khả năng sinh bào tử chồi và lượng sinh khối

Metarhizium anisopliae Sorokin là rất cao Bằng phương pháp nuôi cấy chìm (tại

Trung Quốc), Li và ctv đã thí nghiệm tách chiết theo phương pháp bản mỏng và các tác giả đã xác định được độc tố của nấm Metarhizium anisopliae Sorokin là

Destruxin A, B, C, D (trích dẫn bởi Phạm Thị Thùy, 2004)

b) Ảnh hưởng của nhiệt độ và độ ẩm

Nhiệt độ và ẩm độ là hai yếu tố quan trọng có ảnh hưởng đến sự sinh trưởng

và phát triển của nấm Metarhizium anisopliae Sorokin Theo kết quả nghiên cứu

của viện Bảo Vệ Thực Vật xác định phạm vi nhiệt độ thích hợp cho nấm

Metarhizium anisopliae Sorokin phát triển tốt, phát triển đều trong khoảng 25 –

300C Ẩm độ thích hợp trong phạm vi 80 – 90%, trên hoặc dưới ngưỡng nhiệt - ẩm

độ thì nấm sẽ phát triển yếu, khi nhiệt dộ quá cao thì bào tử dễ bị chết hoặc không hình thành bào tử (Phạm Thị Thùy, 2004)

c) Ảnh hưởng của ánh sáng

Ánh sáng có tác dụng xúc tiến bào tử nảy mầm và hình thành bào tử, mặt khác ánh sáng cũng có tác dụng ức chế và diệt ẩm

Qua nhiều năm sản xuất nấm côn trùng, viện Bảo Vệ Thực Vật xác định nấm

Metarhizium anisopliae Sorokin phát triển tốt trong điều kiện ánh sáng yếu, chỉ cần

một lượng ánh sáng nhỏ trong ngày với thời gian 6 – 8 giờ cũng đã đủ cho nấm phát

triển tốt Nếu dưới ánh sáng trực dạ nấm Metarhizium anisopliae Sorokin rất khó

nảy mầm Vì vậy, phòng nuôi cấy nấm cần phải che ánh sáng mặt trời để hạn chế tia

tử ngoại (Phạm Thị Thùy, 2004)

d) Ảnh hưởng của độ thoáng khí

Nấm Metarhizium anisopliae Sorokin thuộc loại hiếu khí, khi nấm phát triển

chúng đòi hỏi điều kiện có hàm lượng oxy thích hợp trong cả biên độ rộng cũng như

trong dụng cụ nuôi cấy Trong quá trình nghiên cứu, Phạm Thị Thùy và ctv đã rút

ra kết luận phạm vi thích hợp cho nấm Metarhizium anisopliae Sorokin phát triển là

0,3 – 0,7 m3 môi trường/m3 không khí Nếu sản xuất lớn cần để độ dày bề mặt (xốp) của nấm trên khay hay nia khoảng 10 – 15 cm, trong phòng sản xuất có không gian thích hợp và điều kiện ẩm độ phù hợp (Phạm Thị Thùy, 2004)

e) Ảnh hưởng của hàm lượng nước

Nấm Metarhizium anisopliae Sorokin đòi hỏi lượng nước thích hợp, nếu quá

khô hoặc quá ẩm thì nấm đều phát triển không tốt, tỷ lệ nước thích hợp trong môi trường để nấm phát triển tốt nhất là 30 – 50% (Phạm Thị Thùy, 2004)

Và theo Issaly và ctv (2005), số lượng bào tử Metarhizium anisopliae

Sorokin đạt cao nhất khi pH=7

1.2.1.8 Thành tựu và ứng dụng của nấm Metarhizium anisopliae Sorokin

 Trên thế giới

Năm 1878, Metschnhikov đã phát hiện và phân lập được nhiều nấm xanh

Metarhizium anisopliae Sorokin trên sâu non bộ cánh cứng hại lúa mì (Anisopliae austrinia) Metschnhikov và Isac Craxinstic, ông đã tiến hành sản xuất bào tử nấm Metarhizium anisopliae Sorokin dạng thuần khiết rồi trộn với chất bột nền và đưa ra

đồng ruộng để diệt trừ sâu non và trưởng thành bọ đầu dài hại củ cải đường

(Bothinoders punctivantris), hiệu quả đạt được 55 – 80% sau 10 – 15 ngày thử

nghiệm (Phạm Thị Thùy, 2004)

Tại Cuba, những năm 1970 – 2002, viện công nghệ sinh học Lahabana đã

nghiên cứu công nghệ sản xuất chế phẩm Metarhizium anisopliae trên môi trường

tấm gạo với dung dịch cacbonat canxi 0,5% bằng phương pháp luộc tấm, gạo rồi sấy khô sau đó nhân giống thuần Phương pháp này đã đạt được kết quả bước đầu trong việc sử dụng nấm diệt một số sâu hại cây trồng Hiện nay nền công nghệ sinh học ở Cuba phát triển rất nhanh, phương pháp nhân giống nấm trên tấm hoặc gạo đã được phát triển quy mô lớn Phương pháp này đã được thử nghiệm ở viện Bảo Vệ Thực Vật (2002), song kết quả thu được không ổn định, mất nhiều thời gian, tốn

công cho luộc và sấy tấm khi sản xuất trong túi nylon dễ bị tạp nhiễm, chất lượng thấp và không ổn định, vì sản xuất rất phức tạp năng suất không cao 107 – 108 bào tử/gam So với lên men xốp của viện Bảo vệ thực vật (1996) thì phương pháp ở Cuba cho năng suất thấp hơn và thời gian nuôi cấy lâu hơn, giá thành đắt hơn mặc

dù có cải tiến nhân giống bằng môi trường dịch thể sau đó nuôi cấy nấm trong túi

PP, nhưng điều quan trọng nhất phải đảm bảo phân loại và xác định đúng chủng giống, nếu sai lầm sẽ không có hiệu quả (Phạm Thị Thùy, 2004)

Farooq A Shah et al (2008) đã dùng bánh hạt neem tạo chế phẩm

Metarhizium anisopliae để phòng trừ ấu trùng mọt đầu dài (Black vine weevil) hại

nho Chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae cũng đã được tạo ra từ việc nuôi cấy trong môi trường sữa (Whey base) (Adane Kassa et al., 2008)

Hiện nay, trên thế giới đã có nhiều nước sản xuất ra nấm Metarhizium có khả

năng thương mại hóa trên thị trường là:

- Bio-Path được sử dụng trong phòng trừ mối tại Mỹ

- BioGreen được dùng khuyến cáo phòng trừ bọ hung đầu đỏ (Adoryphorus

couloni) ở Úc

- Metaquino dung phòng trừ muỗi sốt rét Lubilose, châu chấu (Schistocerra

gregaria) (Kunimi, 2005)

 Tại Việt Nam

Tại Cần Thơ, từ năm 2005 – 2007 đã sử dụng nấm Metarhizium anisopliae

để phòng trừ sâu ăn tạp, rầy mềm, bọ cánh cứng hại dừa, rệp sáp…đạt hiệu quả cao

60 – 70% sau 7 – 12 ngày (Trần Văn Hai và ctv., 2006) Tại Trà Vinh, Sóc Trăng, Viện Nghiên cứu lúa ĐBSCL đã sử dụng nấm Metarhizium anisopliae để phòng trừ

rầy nâu, bọ xít, sâu ăn lá đạt hiệu quả cao (Nguyễn Thị Lộc, 2006)

Trong thời gian 2007 – 2008, Bộ môn Bảo vệ thực vật, khoa Nông nghiệp và SHƯD, trường Đại học Cần Thơ đã nghiên cứu đặc tính sinh học và hiệu quả của

các chủng nấm Metarhizium anisopliae đối với sâu xếp lá hại đậu phộng đã mang

lại một số kết quả khả quan trên vùng đất giồng cát của hai huyện Cầu Ngang và

Trà Cú tỉnh Trà Vinh (Trần Văn Hai và ctv., 2008) Hiện nay Bộ môn Bảo vệ thực

vật – ĐHCT đã nghiên cứu và sản xuất thành công chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học

có nguồn gốc từ nấm Metarhizium anisopliae (Ma – ĐHCT), phun trị sâu ăn lá, sâu

xanh, sâu đo, rầy mềm, rầy nâu, rệp sáp…Tại tỉnh Sóc Trăng thời gian qua đã ứng

dụng biện pháp sinh học bằng các chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae (Viện lúa

ĐBSCL, công ty Sinh Thành) trong phòng trị rầy nâu hại lúa trên diện rộng đã cho

kết quả khả quan (Trần Văn Hai và ctv., 2008)

Tại Việt Nam, nấm Metarhizium anisopliae đã được nghiên cứu và ứng dụng

thành công trong phòng trừ rầy nâu và bọ xít hôi hại lúa, bọ cánh cứng hại dừa, sâu

tơ hại rau cải, châu chấu và mối hại cây trồng…(Nguyễn Thị Lộc, 1997; Nghiep et

al., 1999; Phạm Thị Thùy, 1999) Viện Bảo Vệ Thực Vật đã nghiên cứu và sử dụng

nấm Metarhizium anisopliae để phòng trừ một số loại sâu hại nông nghiệp (Phạm

Thị Thùy, 1996) Nấm Metarhizium anisopliae còn được ứng dụng trừ các loại mối

hại cây công nghiệp, cây ăn trái, hoa cảnh, quản lý sâu rầy hại lúa…(Trần Văn Hai

và ctv., 2008) Khi sử dụng nấm xanh Metarhizium anisopliae trên đồng ruộng để

quản lí sâu rầy hại lúa thì không gây ảnh hưởng xấu đến thiên địch như nhện lớn bắt mồi, nhện lưới, nhện lùn, nhện chân dài, bọ xít mù xanh, bọ xít gai ăn thịt tại

ĐBSCL (Nguyễn Thị Lộc và ctv., 2002)

1.2.2 Nấm trắng (Beauveria bassianaVuill)

1.2.2.1 Nguồn gốc, phân loại và phân bố

Trong những năm 1885 – 1890, tại trung tâm nuôi tằm ở Pháp, nhà bác học

Louis Paster đã phát hiện ra vi sinh vật gây bệnh tằm vôi là nấm Beauveria

bassiana (Phạm Thị Thùy, 2004)

Xếp theo hệ thống phân loại của G C Anisworth, 1966, 1970, 1971 cho rằng

nấm Beauveria bassiana thuộc ngành phụ lớp nấm bất toàn (Deuteromycetes), giống Beauveria Theo Macleod (1954), loài Beauveria bassiana là loài điển hình

trong chi nấm bạch cương Beauveria (Phạm Thị Thùy, 2004)

Nấm Beauveria bassiana hay còn gọi là nấm bạch cương, là loài nấm hại côn

trùng phân bố khắp thế giới, xuất hiện phổ biến trong tự nhiên, có thể phân lập dễ dàng từ côn trùng chết hay được phân lập từ trong đất (Tanada and Kaya, 1993)

1.2.2.2 Đặc điểm hình thái và sinh học

Nấm Beauveria bassiana có sợi nấm từ màu trắng đến màu kem có pha một

ít màu đỏ, da cam, đôi khi có pha một ít màu lục, có thể tiết vào môi trường sắc tố

màu vàng, màu đỏ nhạt hoặc xanh da trời Nấm Beauveria bassiana sinh ra những

bào tử đơn bào không màu, trong suốt, không vách ngăn từ hình cầu đến hình trứng (kích thước 1,5 – 5,5µm) (Phạm Thị Thùy, 2004)

Những bào tử nấm bạch cương thường bay trong không khí khi dính vào da côn trùng, gặp điều kiện thích hợp sẽ nảy mầm và mọc thành sợi nấm đâm xuyên qua vỏ kitin Côn trùng khi bị nấm bạch cương tấn công thì ở chổ bào tử bám vào, nấm sẽ phát triển bên trong thân của sâu non tạo nên một vệt đen không có hình thù nhất định Côn trùng chết đi thường có màu trắng, thân hơi cứng lại do sợi nấm đan xen (Phạm Thị Thùy, 2004)

1.2.2.3 Khả năng sinh độc tố và cơ chế tác động

Năm 1969, Hamill và ctv., đã xác định được độc tố diệt côn trùng của nấm

Beauveria bassiana Butt và Copping, (2000) đã xác định bản chất của độc tố là

vòng peptid có sắc tố màu vàng tenilin và basianin, những sắc tố này có thể do hydroxylat progesterone và những phần tách nhỏ ra từ testosterone sinh ra (Bùi Thị Ngọc Liễu, 2010)

Khi bào tử dính vào côn trùng gặp điều kiện thích hợp sẽ nảy mầm và mọc thành sợi nấm đâm xuyên qua lớp vỏ kitin Chúng phát triển ngay trong cơ thể côn trùng cho đến khi xuất hiện các tế bào nấm đầu tiên, côn trùng phải huy động hết các tế bào bạch huyết (lymphocyte) để chống đỡ, nhưng nấm trắng đã sử dụng vũ

khí hóa học và độc tố Beauvericin, proteaza và một số chất khác làm cho tế bào bạch huyết của côn trùng không chống đỡ nổi nên lần lượt bị tiêu diệt Khi độc tố nấm tiêu diệt hết các tế bào bạch huyết cũng là lúc côn trùng chết, cơ thể côn trùng cứng lại là do các sợi nấm đan xen lại với nhau (Phạm Thị Thùy, 2004)

1.2.2.4 Thành tựu và ứng dụng

Theo Milner (1991), nấm Beauveria bassiana đã được ứng dụng ở nhiều

nước trên thế giới để phòng trừ nhiều đối tượng gây hại cây trồng Năm 1998, tại Nhật Bản một số nhà khoa học đã phòng trừ dòi hại rễ củ cải đường bằng nấm

Beauveria bassiana Ở các nước như Pháp, Mỹ và Ấn Độ đã sản xuất nấm Beauveria bassiana có khả năng thương mại hóa trên thị trường: Boverin do hãng

Glavmikrobioprom (Nga) sản xuất với công dụng diệt bọ hại khoai tây; Botanigard của công ty Arysta Life Science Co (Nhật Bản) với công dụng trừ rầy mềm, bù lạch, sâu tơ,…

Thuốc vi nấm Beauveria bassiana được rất nhiều nước trên thế giới như Mỹ,

Canada, Úc, Philippin và Trung Quốc đã ứng dụng trên nhiều loại cây trồng để phòng trừ nhiều đối tượng gây hại cây trồng thuộc bộ cánh vẩy (Lepidoptera), bộ cánh cứng (Coleoptera), bộ cánh thẳng (Orthoptera) đạt kết quả tốt, đặc biệt những loài sâu hại trên các loại cây rừng như: sâu róm thông, bọ hại dừa, châu chấu,…(Rombach và Agudu, 1998; Milner 1991 được trích dẫn bởi Phạm Thị Thùy, 2004)

Ở Việt Nam, sử dụng chế phẩm nấm Beauveria bassiana đã được tiến hành

từ năm 1979 đến nay tỏ ra có tác dụng đối với sâu róm hại thông và một số loài sâu hại nông nghiệp (Trần Văn Mão, 2002) Các nhà khoa học của viện Bảo vệ thực vật

đã tiến hành sử dụng nấm trừ sâu róm thông Dendrolinus punctatus ở Thanh Hóa và

Sơn La

1.3 ĐẶC TÍNH MỘT SỐ LOẠI THUỐC HÓA HỌC

1.3.1 Abatimec 3.6EC

Abatimec 3.6EC sản phẩm của công ty TNHH – TM Đồng Xanh

- Tên hoạt chất: Abamectin thuộc nhóm thuốc Sinh học

- Nhóm độc: II

- Công dụng: tác động vị độc, tiếp xúc, nội hấp yếu Kích thích hoạt động của GABA gây ngán, côn trùng ngừng ăn và bị chết Thuốc trừ nhện gié, sâu cuốn

lá hại lúa, nhện đỏ trên cam, bọ trĩ trên dưa hấu Độc trung bình đối với ong và cá

- Liều lượng: 9 – 10 ml/10 lít nước Lượng thuốc 0,1 – 0,2 lít/ha, phun 320 –

400 lít nước/ha Thời gian cách ly: 7 ngày

20 )(25/8/2014)

1.3.2 Actara 25WG

Actara 25WG của công ty Syngenta

- Tên hoạt chất: Thiamethoxam

Bassa 50ND sản phẩm của công ty Việt Thắng Bắc Giang

- Tên hoạt chất: Fenobucarb 50% thuộc nhóm Carbamate

- Công thức phân tử: C12H17N02

- Nhóm độc: II

- Công dụng: Có tác động tiếp xúc và vị độc Phòng trừ rầy nâu, bọ xít và sâu keo hại lúa; bọ trĩ, rệp sáp và rầy hại cây có múi; bọ xít hại hồ tiêu; rệp sáp hại bông vải; rệp hại đậu tương, thuốc lá; rệp sáp hại cà phê và cây ăn quả Độc trung bình đối với người, ong mật và cá

- Liều lượng: 15 – 20 ml/10 lít nước Thời gian cách ly: 14 ngày

1.3.4 Diazan 40EC

Diazan 40EC phân phối bởi công ty CP Bảo Vệ Thực Vật An Giang

- Tên hoạt chất: Diazinon thuộc nhóm Lân hữu cơ

- Công thức phân tử: C12H21N2O3PS

- Nhóm độc: II

- Công dụng: thuốc có tác dụng nội hấp, tiếp xúc, vị độc, xông hơi và thấm sâu Trừ hiệu quả sâu cuốn lá nhỏ và bọ trĩ trên lúa Thuốc có phối hợp với các thuốc khác, trừ các thuốc có tính kiềm

- Liều lượng: 1,5 – 2,5 lít/ha, pha 35 – 60 ml/bình 8 lít Phun 4 bình/1000 m2 Thời gian cách ly: 14 ngày

(http://baovecaytrong.com/sanphamchitiet.php?masp=115)

1.3.5 Dragon 585EC

Dragon 585EC phân phối bởi công ty CP Bảo Vệ Thực Vật Sài Gòn

- Tên hoạt chất: Cypermethrin 55g/l + Chlorpyriphos Ethyl 53% + Chất phụ gia 41,5%

- Công thức phân tử Cypermethrin: C22H19Cl2NO3

- Công thức phân tử Chlorpyriphos: C9H11Cl3NO3PS

- Nhóm độc: II

- Ngoại dạng và màu sắc: thuốc ở thể lỏng, trong suốt, dễ bắt lửa cháy nổ

- Công dụng: thuốc có tác dụng tiếp xúc và vị độc, có phổ tác dụng rộng, trừ được nhiều loại sâu và nhện hại, đặc biệt là côn trùng bộ cánh vảy như sâu cuốn lá, sâu đục thân, rệp hại

- Liều lượng: 20-30 ml/bình 16 lít Thời gian cách ly: 14 ngày

(http://en.wikipedia.org/wiki/Chlorpyrifos )

1.3.6 Regent 5SC

Regent 5SC của công ty Bayer

- Tên hoạt chất: Fipronil

- Công thức phân tử: C12H4Cl2F6N4OS

- Nhóm độc: II

- Công dụng: Đặc trị sâu lá, dưỡng cây xanh lá Ngoài ra, trị sâu cuốn lá lúa,

bọ trĩ, sâu đục thân, xử lí giống

- Liều lượng: pha 20 – 30 ml/2 bình 8 lít cho 1000 m2 Pha 80ml xử lí cho lượng giống đủ để xạ cho 1000 m2 Thời gian cách ly: 15 ngày

5sc.html)

(http://www.sieuthinongnghiep.com/san-pham-header/chi-tiet/1093/regent-1.3.7 SecSaigon 50EC

SecSaigon 50EC của công ty CP Bảo Vệ Thực Vật Sài Gòn

- Tên hoạt chất: Cypermethrin thuộc nhóm Cúc tổng hợp

- Công thức phân tử: C22H19Cl2NO3

- Nhóm độc: II

- Công dụng: Thuốc có tác động tiếp xúc, vị độc và còn có tác động gây ngán ăn, có phổ tác động rộng và diệt sâu nhanh, mạnh, diệt cả trứng sâu Thuốc dùng để đặc trị các loại sâu cuốn lá nhỏ trên lúa, sâu khoang trên đậu, nhện đỏ hại bông vải Ít độc với cá, không lưu tồn trong môi trường

- Liều lượng: 0,1 – 0,2 lít/ha, pha 2– 4 ml/bình 8 lít Phun 4 – 5 bình cho

1000 m2 Thời gian cách ly: 14 ngày

(http://www.spchcmc.com.vn/vn/SanPham/QOSHXL125953/JAMKOX02263 3/XTGSJP124317/)

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM

- Mùng, hộp nhựa, chậu nhựa đen, bình phun hóa chất, keo nhựa…

- Beaker, ống đong, lọ thủy tinh, bình tam giác, micropipette, cồn 700, nhiệt

ẩm kế máy phun thuốc, cân điện tử, đũa thủy tinh, kẹp, kéo, bông gòn, giấy thấm, máy ảnh, sổ tay ghi chép, dao…

- Dụng cụ cạo nấm: lamel, nước cất thanh trùng, vải lượt

- Lame đếm hồng cầu hiệu Thoma, micropipette, kính hiển vi

- Cây dừa con cao 60 – 100 cm

- Một số loại thuốc hóa học: Abatimec 3.6EC, Bassa 50ND, Dragon 585EC, Regent 5SC, SecSaigon 50EC, Diazan 40EC, Actara 25WG, chất bám dính Thần

hổ

2.2.2 Nguồn bọ vòi voi

Thu bọ vòi voi từ các vườn dừa bị nhiễm nặng trên địa bàn thuộc hai huyện Long Phú và Cù Lao Dung, tỉnh Sóc Trăng Sau đó, mang về phòng thí nghiệm nhà lưới Bộ môn Bảo vệ thực vật, khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ Thức ăn của bọ vòi voi là bẹ dừa và tạo độ thông thoáng bằng cách đục những lổ nhỏ và tạo ẩm độ bằng bông gòn thấm nước để tránh bọ vòi voi chết

Hình 2.1 Nguồn thành trùng bọ vòi voi D frumenti

2.2.3 Nguồn nấm

Nguồn nấm kí sinh do phòng thí nghiệm NEDO, Bộ môn BVTV, khoa NN

& SHƯD trường ĐHCT phân lập, tách ròng, nhân nuôi, sản xuất và cung cấp

- Đĩa nguồn: Nấm xanh (Metarhizium anisopliae), nấm trắng (Beauveria

bassiana) được nhân nuôi trên môi trường SDAY3 (thành phần môi trường được

trình bày trong (Bảng 2.1) trong khoảng 14 ngày, nhằm đảm bảo có đủ mật số bào

Hình 2.2 A Đĩa nguồn nấm xanh M.anisopliae đƣợc nhân nuôi tại phòng NEDO

B Đĩa nguồn nấm trắng B bassiana đƣợc nhân nuôi tại phòng NEDO

+ Dung dịch nấm xanh và nấm trắng được sử dụng trong thí nghiệm được lấy trực tiếp từ đĩa nguồn Mỗi đĩa cho vào 10 ml nước cất đã được thanh trùng, rồi cạo hết lớp nấm trên bề mặt đĩa và xác định sự hiện diện của bào từ cũng như số lượng bào

tử bằng lame đếm hồng cầu Thoma Mật số bào tử được xác định bằng công thức sau:

CV = C’V’

Trong đó: C : nồng độ của dung dịch gốc (bào tử/ml)

V : thể tích của dung dịch gốc (ml)

C’ : nồng độ của dung dịch cần pha loãng (bào tử/ml)

V’ : thể tích dung dịch cần pha loãng (ml)

- Chế phẩm: nấm xanh (Ma) tươi được nhân nuôi theo qui trình sản xuất chế phẩm nấm xanh (Metarhizium anisopliae) của phòng thí nghiệm NEDO, trường

ĐHCT và được sử dụng trong thí nghiệm

Mục tiêu: nhằm tìm ra các loại thuốc có hiệu lực phòng trị bọ vòi voi D

frumenti hại dừa tốt nhất bằng cách phun trực tiếp lên thành trùng và phun gián tiếp