Nghiên cứu thành phần hóa học chính và tác dụng sinh học chống viêm loét dạ dày tá tràng của dạng cao lỏng của bài thuốc nhị nhân hòa vị

Vì vậy chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài '‘Nghiên cứu thành phần hoá học chính và tác dụng chống loét dạ dày - tá tràng của dạng cao lỏng của bài thuốc “Nhị nhân hoà vị ” ”, với các

(Khoá luặn tốt nghiệp dược sĩ đại học khoá 2002 -y2ÒÒ7)

LỜI CẢM ƠN

Với tất cả lòng biết ơn sâu sắc tôi xin chân thành cảm ơn:

TS Phùng Hoà Bình - Bộ môn DHCT, trường Đại học Dược Hà Nội

DS Nguyễn Kim Phượng - Trưởng phòng Dược lý - sinh hoá Viện Dược liệu

Đã trực tiếp hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua

Nhân dịp này tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô, các kĩ thuật viên

ở bộ môn DHCT, các anh chị nhân viên phòng Dược lý- sinh hoá - Viện dược liệu đã tận tình giúp đỡ tôi hoàn thành khoá luận tốt nghiệp này

Đồng thời tôi xin cảm ơn gia đình và bạn bè tôi đã giúp đỡ tôi hoàn thành tốt quá trình học tập của mình

Hà Nội, ngày 20 tháng 5 năm 2007 Sinh viên

Vũ Thanh Hà

1.2.2 Một sô đặc điểm chính về các vị thuốc 6 1.2.3 Tác dụng dược lý của phương thuốc “Nhị nhân hoà vị” 10 1.2.4 Một sô bài thuốc có cùng tác dụng 11 1.3 MỘT SỐ DẠNG BÀO CHẾ THUỐC c ổ TRUYỂN 11

2.3.2 Nghiên cứu về thành phần hoá học 16

3.1.1 Thăm dò bào chê một sỏ dạng thuốc thể chất rắn 22

ĐẬT VẤN ĐỂ

“Nhị nhân hoà vị” là một phương thuốc được xây dựng dựa trên cơ sở lý luận của YHCT và kinh nghiệm điều trị trên lâm sàng Một số tác giả [1 0],[1 1] đã nghiên cứu và chứng minh được bài thuốc này có tác dụng chống loét dạ dày - tá tràng, đồng thời còn có một số tác dụng hỗ trợ trong quá trình điều trị bệnh loét dạ dày - tá tràng như: giảm đau, an thần, lợi m ật,

Tuy nhiên cho đến nay vẫn chưa có tác giả nào nghiên cứu về các thành phần hoá học chính của bài thuốc này Vì vậy chúng tôi tiến hành thực hiện đề

tài '‘Nghiên cứu thành phần hoá học chính và tác dụng chống loét dạ dày - tá

tràng của dạng cao lỏng của bài thuốc “Nhị nhân hoà vị ” ”, với các mục tiêu

như sau:

1 Nghiên cứu thành phần hoá học giúp cho việc kiểm nghiệm bài thuốc

2 Thăm dò dạng bào chế của phương thuốc

3 Thử một số tác dụng dược lý của dịch sắc sau thời gian bảo quản

Đề tài gồm các nội dung:

1 Định tính, định lượng một số thành phần hoá học trong cao lỏng của phương thuốc “Nhị nhân hoà vị”

2 Thăm dò dạng bào chế đi từ cao lỏng của phương thuốc

3 Thử tác dụng chống loét dạ dày và tác dụng lợi mật của dạng cao lỏng của phương thuốc “Nhị nhân hoà vị” sau thời gian bảo quản

PHẦN 1: TỔNG QUAN

1.1 BỆNH LOÉT DẠ DÀY - TÁ TRÀNG

1.1.1 Quan điểm y học hiện đại:

Loét dạ dày - tá tràng là một bệnh mạn tính, diễn biến có tính chu kỳ [8] Bệnh chiếm tỷ lệ cao so với nhiều bệnh khác, tuỳ theo từng nghiên cứu tỷ

lệ mắc bệnh từ 5%-10% ở một số tỉnh miền Bắc Việt Nam có đến 5,6% dân

số có triệu chứng bệnh [9],[19], tại khoa nội của một số bệnh viện có 26%-

30% bệnh nhân vào viện vì bệnh loét dạ dày - tá tràng Bệnh gặp ở nam giới

nhiều hơn nữ giới, loét tá tràng nhiều hơn loét dạ dày, tỷ lệ loét tá tràng cao

gấp 4 lần loét dạ dày [9],[Ì9[.

1.1.1.1 Nguyên nhân gây bệnh

Cho đến nay vẫn chưa tìm ra một nguyên nhân chung cho loét dạ dày -

tá tràng, có thể xem bệnh do nhiều nguyên nhân gây ra, đôi khi chúng phối hợp nhau để gây bệnh

- Nguyên nhân chủ yếu:

+ do sự mất cân bằng giữa các yếu tố bảo vệ và các yếu tố gây loét [8],[13],[19]

+ Helicobacter Pylori đóng vai trò chủ yếu trong nguyên nhân gây bệnh [8],[9],[20],

- Bên cạnh đó còn có rất nhiều các yếu tố thúc đẩy bệnh loét tiến triển [8],[19]

1.1.1.2 Cơ chế bệnh sinh

Giả thuyết được nhiều người chấp nhận nhất là do sự mất cân bằng giữa hai nhóm yếu tố; yếu tố gây loét (aggressive factor) và yếu tố bảo vệ (protective factor) [8],[9],[19],[20],[38] Các yếu tố tác động đến sinh lý của

dạ dày gây loét được trình bày ở bảng 1.1

Bảng 1.1 Tóm tắt các yếu tố tác động đến sinh lý của dạ dày gây loét.

Các yếu tố gây lo é t: tăng Các yếu tố bảo vệ : giảm

- Acid HCl và Pepsin dịch vị

- Vai trò gây bệnh của H.p

- Thuốc chống viêm phi Steroid,

- Sự toàn vẹn và tái tạo của tế bào biểu

mô và bề mặt niêm mạc dạ dày - tá tràng

Sự phá vỡ cân bằng giữa hai nhóm yếu tố xảy ra khi nhóm yếu tố gây loét tăng cường hoạt động mà không củng cố đúng mức hệ thống bảo vệ, ngược lại hệ thống bảo vệ suy kém nhưng yếu tố tấn công lại không giảm tương ứng [9],[8],[19]

Cho đến nay, vi khuẩn H.p đã được thừa nhận là một nguyên nhân gây bệnh loét dạ dày - tá tràng Loại vi khuẩn này có khả năng di chuyển luồn sâu xuống lớp nhầy của bề mặt niêm mạc dạ dày, làm tổn thương niêm mạc dạ dày tại chỗ bằng cách thoái hoá lớp nhầy bảo vệ niêm mạc, bài tiết các men đáng chú ý nhất là urease làm tổn thương các tế bào niêm mạc,[9],[19],[15]

Các yếu tố thúc đẩy sự tiến triển của bệnh cũng góp phần làm cho bệnh tiến triển từng đợt và ngày càng nặng hơn [8],[9],[19] :

- Yếu tố tinh thần: Stress, chấn động tình cảm

- Lạm dụng rượu, thuốc lá

- Vai trò của một số thuốc: NSAIDs, Corticoid

- Yếu tố di truyền

- Yếu tố ăn uống

- Yếu tố môi trường,

1.1.13 Triệu chứng lâm sàng

* Loét dạ ¿/ữ};;[8],[9],[19],[20],[38]

- Đau vùng thượng vị, đau có tính chất chu kỳ từng đợt, đau sau khi ăn

- Đầy bụng, ợ hơi, nấc và buồn nôn

- Thăm khám lâm sàng trong cơn đau có thể thấy:

+ Co cứng vùng thượng vị, ấn vào vùng này cảm giác đau tăng lên

+ Có thể thấy lóc xóc do ứ đọng thức ăn ở dạ dày

* L o é ttá trà n g :m ,[9 m 9 ]

- Thường đau vào lúc đói hoặc ban đêm, đau quặn thắt, đau ở thượng vị

lan sang phải

- Nôn, buồn nôn ngay cả lúc đói

I.I.IA Điều trị

Điều trị nội khoa đầy đủ và đúng cách, nếu không có kết quả mới điều trị ngoại khoa

* Nguyên tắc điều trị nội khoa: [19],[20]

Dựa trên cơ chế bệnh sinh:

- Giảm acid - pepsin ở dịch vị

- Tăng cường các yếu tố bảo vệ niêm mạc

- Diệt H.p

- Điều trị hỗ trợ, nâng đỡ sức khỏe bệnh nhân theo quan điểm điều trị toàn diện

* Các thuốc điều fr/;[8],[9],[19],[20].

- Giảm yếu tố gây loét:

+ Thuốc trung hoà acid dịch vị (antacid): các hydrocyd và muối của Mg,Al + Thuốc chống bài tiết HCl: Thuốc ức chế thụ thể Hj (cimetidin, ) và thuốc

ức chế bơm Proton (omeprazol, lansoprazol, )

- Tăng cường yếu tố bảo vệ:

+ Thuốc bảo vệ niêm mạc và băng bó ổ loét

+ Thuốc kích thích tiết nhầy, tái tạo tế bào biểu mô.

- Diệt H.p bằng các phác đồ điều trị;

+ Phác đồ bộ 3:

Omeprazol + Amoxicilin + Clarithromycin

Omeprazol + Clarithromycin + Metronidazol

Hoặc bộ ba thuốc mới [30]:

Lansoprazol + Tinidazol + Clarithromycin

+ Phác đồ bộ 4:

Omeprazol + Hợp chất Bismuth + Tetracyclin + Metronidazol

Omeprazol + Hợp chất Bismuth + Tetracyclin + Amoxicilin

1.1.2 Quan điểm y học cổ truyền

Theo quan điểm của y học cổ tmyền, bệnh loét dạ dày - tá tràng thuộc phạm vi chứng vị quản thống, vị thống [17]

1.1.2.1 Nguyên nhân gây bệnh

Do tình chí bị kích thích dẫn đến can khí uất kết, mất khả năng sơ tiết, làm rối loạn khí cơ thăng thanh, giáng trọc của tỳ vị mà gây ra các triệu chứng: đau vùng thượng vị, ợ hơi, ợ chua, hoặc do ăn uống thất thường làm cho tỳ vị tổn thương, mất khả năng kiện vận, hàn tà nhân đó xâm nhập gây khí trệ, huyết ứ, sinh ra các cơn đau [16],[17'

1.1.2.2 Thể can khí phạm vị

Còn gọi là can khí bất hoà, can khắc tỳ [16],[17], thường chia làm 3 thểnhỏ:

* Thể khí trệ (uất)

- Triệu chứng: đau vùng thượng vị từng cơn, đau lan ra hai mạng sườn

xuyên ra sau lưng, bụng đầy chướng, ấn thấy đau, ợ hơi, ợ chua, chất lưỡi hơi

đỏ, rêu lưỡi trắng hoặc vàng mỏng, mạch huyền

- Phưcfng pháp chữa: hoà can lý khí (sơ can giải uất, sơ can hoà vị) [16],[17]

* Thể hoả uất

- Triệu chứng: đau vùng thượng vị nhiều, đau rát, ấn thấy đau, miệng

khô đắng, hay ợ chua, chất lưỡi đỏ, rêu lưỡi vàng, mạch huyền sác

- Phương pháp chữa: sơ can tiết nhiệt, thanh can hoà vị.[16],[17]

* Thê huyết ứ (huyết hư)

- Triệu chứng: đau dữ dội ở một vị trí nhất định vùng thượng vị, ấn thấy

+ Thực chứng: Thông lạc hoạt huyết hay lương huyết chỉ huyết

+ Hư chứng: bổ huyết chỉ huyết [16],[17],

1.1.2.3 Thể tỳ vị hư hàn

- Triệu chứng; đau vùng thượng vị liên miên, nôn nhiều, mệt mỏi, thích xoa bóp và chườm nóng, đầy bụng, nôn ra nước trong, sợ lạnh, tay chân lạnh, đại tiện phân nát, có lúc táo, rêu lưỡi trắng, chất lưỡi nhợt, mạch hư,[16],[17],

- Phưcmg pháp chữa: ôn trung kiện tỳ (ôn bổ tỳ vị, ôn vị kiện trung) [16],[17]

1.2 BÀI THUỐC “NHỊ NHÂN HOÀ VỊ”:

1.2.1 Công thức bài thuốc

Nhân trần Toan táo nhân

Trư ma căn Hoàng liên

Hương phụ

ĩ * *

Hình 1.1 Các vị thuốc trong bài thuốc “Nhị nhân hoà v ị”.

1.2.2 Một sô đặc điểm chính về các vị thuốc

1.2.2.1 Nhân trần (Herba Adenosmatis caeriilei)

- TV: Vị cay, đắng; Tính hơi hàn [17],[6,225],[43].

- QK: tỳ, vị, can, đởm [6],[17],[43], bàng quang,[37],[39]

- CN: thanh nhiệt, khu phong, trừ thấp [17],[6],[43]

- CT: Viêm gan vàng da, viêm túi mật, tiểu tiện vàng đục, ít, phụ nữ sau sinh

ăn chậm tiêu,[6],[17],[43] ở Trung Quốc người ta dùng chữa đau dạ dày [] -LD: 2 0 -4 0 g [6],[17],[43]

- TDDL: tăng tiết mật rõ rệt, chống viêm, kháng khuẩn, ít tác dụng lên dịch vị, không giảm tiết dịch vị, không độc [17], bảo vệ gan, chống oxy hoá [],[6],[37]

- QK: Tâm, phế, tam tiêu [37], can, đởm [6],[17],[39]

- CN: Thanh nhiệt, tả hoả, chỉ huyết, mát huyết, tiêu viêm [6],[17],[37]

- CT; Sốt phiền khát, viêm gan vàng da, thổ huyết, nục huyết, sốt cao phát cuồng, mụn nhọt [6],[17].

-L D :6 -1 2 g [1 7 ],[3 7 ]

- TDDL: tăng tiết mật, kháng khuẩn [6,215],[37], giảm đau, giảm tiết dịch vị,

hạ huyết áp nhẹ, lợi mật, bảo vệ gan [6]

- TPHH chính:

+ Các iridoid glycosid [10,200],[37] + Các sắc tố [10,200],[37].+ Các acid hữu cơ [10,200],[37] + Tanin, tinh dầu, pectin [37]

1.2.23 Hương phụ (Rhizoma Cyperi)

- TV: Vị cay, đắng; Tính bình [17],[37]

- QK: Can, tam tiêu [6,274],[17],[37]

- CN; Hành khí, khai uất, điều kinh, giảm đau [17],[37]

- CT: Kinh nguyệt không đều, thống kinh, đau dạ dày [6],[17],[27,497], viêm

tử cung mạn [12],[37]

-L D :6 -1 2 g [6],[12],[17],[37]

- TDDL; Cao hương phụ ức chế trực tiếp co bóp tử cung xấp xỉ tác dụng của Đương quy [37],giảm đau trên chuột nhắt [37],[53,219], kháng khuẩn, chống viêm [6,275],[26]

- TPHH chính:

+ 0.3 - 2.8% tinh dầu [37][26]

+ Các acid béo, phenol, tinh bột [37]

+ Alcaloid, saponin, Havonoid [12],

1.2.2.4 Trư ma căn (Radix Boehmeriae)

- TV: Vị ngọt; Tính hàn lương [18],[37],[43],

- QK: Can, tâm [18],[37],[43],

- CN: Thanh nhiệt, giải độc, an thai, lợi tiểu [18],[37],[43]

- CT: Động thai, xích bạch đới, lở loét, nước sắc còn chữa chảy máu đường tiêu hoá do viêm loét [12],[27]

- CN: Bổ tâm an thần, ích can đởm, liễm hãn [17],[37].

- CT: Mất ngủ, hồi hộp, hay quên [6],[17],[43], mồ hôi trộm [12],[37],[39]

- LD: 4 - 12g sao đen, 4g sống [6] hoặc 6 - 12g [39]

- TDDL: Nước sắc liều 2.5g/kg và 5g/kg có tác dụng trấn tĩnh và gây ngủ đối với chuột cống [37], kéo dài giấc ngủ do Barbituric [6],[17], còn có tác dụng giảm đau, hạ nhiệt, đối kháng co giật do Strychnin [6],[17] Tác dụng an thần của Táo nhân do hai flavonoid là Swertisin và Spinosin [48]

- TPHH chính:

+ Saponin: Jujubosid A và B, [10,178], chiếm 0.1% có thể đến 2.52% [37].+ Flavonoid [48]

+ Dầu béo, phytosterol [12]

1.2.2.6 Cam thảo (Radix Glycyrrhizae)

- TV: Vị ngọt, tính bình [6,288],[43],

- QK: 12 kinh [6],[43]

- CN: + Cam thảo sống: Giải độc, tả hoả [6],[43]

+ Cam thảo chích: Nhuận phế, ôn trung, điều hoà các vị thuốc [12]

- CT: + Cam thảo sống: cảm, ho mất tiếng, viêm họng, mụn nhọt, ngộ độc thức ăn, đau dạ dày [12],[27,1050],

+ Cam thảo chích; Tỳ vị hư nhược, kém ăn, mệt mỏi [12]

-L D :4 -2 0 g [1 7 ]

- TDDL: Chống loét đường tiêu hoá [6],[37], chống co thắt cơ trofn, bảo vệ gan, tăng tiết mật, trấn tĩnh, giảm ho, ức chế tác dụng kích thích tiết dịch vị của Histamin, chống viêm, chống dị ứng, giải độc, lợi niệu, nhuận tràng, chữa Addison [37]

Cam thảo chữa loét dạ dày chuột thí nghiệm Glycyrrhizin trong cam thảo có tác dụng chống loét dạ dày, ợ hơi, tăng tiết dịch vị Liquiritin, Liquiritigenin có tác dụng ức chế ruột chuột lang cô lập, giải co quắp, chống loét [6]

Có tác dụng như cortizon, giảm tiết acid dịch vị [37]

Làm tăng trí nhớ trên chuột nhắt trắng [23], giải lo lắng [1], chống viêm thận [40]

+ G uralensis [43]

Carbohydrat 4.7 - 10.97% Glycyưhizin 5.49 - 10.04%

Flavonoid: khoảng 20 chất, chất chính là Liquiritin

1.2.2.7 Hoàng liên (Rhizoma coptidis)

- TV: Vị đắng, tính hàn [6,220],[17],[37]

- QK: tâm, tỳ, vị [6],[17]; Tâm, can, đởm, vị, đại tràng [37].

- CN; Thanh nhiệt táo thấp, thanh tâm trừ phiền, thanh can sáng mắt, giải độc, chỉ huyết [6],[17],[37]

- CT: Vị tràng thấp nhiệt dẫn đến tiết tả, lỵ ra máu, lỵ amip, mất ngủ, buồn bực, các chứng nhiệt độc, đau mắt đỏ, nôn ra máu, chảy máu cam [6],[17],[37],

-L D :2 -1 2 g [6],[17],[37],

+ Liều nhỏ: Kiện tỳ, kích thích tiêu hoá [17]

+ Liều lớn: Gây nôn, tổn thương với dịch vị [17]

- TDDL: Tăng cường công năng của bạch huyết cầu, lợi mật, dãn mạch hạ huyết áp [37], hạ nhiệt độ cơ thể (chủ yếu là do Berberin) [6],[17] Berberin làm tăng tạm thời trương lực và sự co bóp của ruột, có tác dụng kích thích tiêu hoá, lợi mật, chữa viêm dạ dày và ruột, chữa lỵ [34].Có phổ kháng khuẩn rộng, ức chế Staphyllococcus aureus, Streptococcus hemolytique, trực khuẩn thương hàn, lỵ, [37],[51] Nước sắc Hoàng Liên làm giảm 16% hoạt tính men urease và ức chế sự phát triển của H.p [46’

Giảm tiết acid ở dạ dày, giải độc gan [53]

- TPHH chính:

Alcaloid 5 - 8% [10,85]; hoặc «7% [12],[37] trong đó chủ yếu là Berberin, còn có Palmatin, Worenin, Coptisin,

1.2.3 Tác dụng dược lý của bài thuốc “Nhị nhân hoà vị”

Một số tác giả [3],[4],[29],[36] đã nghiên cứu và chứng minh được bài thuốc “Nhị nhân hoà vị” có tác dụng chống loét dạ dày - tá tràng, làm giảm tổn thương dạ dày trên chuột thí nghiệm, đồng thời còn có tác dụng lợi mật,

an thần, giảm đau nội tạng, đây là các tác dụng hỗ trợ điều trị bệnh loét dạ dày

- tá tràng Mặt khác lượng acid dịch vị, độ acid giảm không đáng kể - có nghĩa

là chức năng tiêu hoá của dạ dày không bị giảm khi sử dụng thuốc - cho thấy bài thuốc có thể làm giảm loét dạ dày - tá tràng theo cơ chế tăng cường yếu tố

bảo vệ dạ dày “Với cơ chế này phương thuốc “Nhị nhân hoà vị” không chỉ được ứng dụng để điều trị dạ dày đã bị tổn thương mà còn có thể sử dụng trong dự phòng” [3],[4].

Căn cứ trên kết quả nghiên cứu về tác dụng dược lý của dược liệu trong bài thuốc, nhận thấy có nhiều điểm phù hợp với cơ chế sinh lý bệnh học y học hiện đại:

1 Điều chỉnh độ pH: Nhân trần, cam thảo, chi tử

2 Bảo vệ niêm mạc: Cam thảo

3 Kháng khuẩn, chống viêm: Nhân trần, cam thảo, hoàng liên Đặc biệt Hoàng liên có tác dụng ức chế H.p

4 Giảm đau: Hương phụ, cam thảo, táo nhân, chi tử

5 An thần: Táo nhân

1.2.4 Một sô bài thuốc có cùng tác dụng:

Một số bài thuốc có cùng tác dụng được sưu tầm và trình bày trong phụlục 1

1.3 MỘT SỐ DẠNG BÀO CHÊ THUỐC c ổ TRUYỂN

1.3.1 Thuốc thang

* Định nghĩa

Thuốc thang là một trong những dạng thuốc của YHCT được cấu tạo từ các vị thuốc đã được chế biến và phối ngũ theo phương pháp YHCT và được bào chế bằng cách sắc với dung môi là nước sạch với nhiệt độ < 100®c, cũng

có thể ngâm với rượu ở nhiệt độ thường trong thời gian dài [7,27].

* Cấu tạo của thuốc thang

Thường cấu tạo theo nguyên lý của YHCT, dựa trên nguyên tắc một thang phải có đủ các thành phần: Quân, thần, tá, sứ Đôi khi những bài thuốc gia truyền hoặc các phương thuốc trong y học dân gian cũng không hoàn toàn theo nguyên tắc đó, nhưng phải đảm bảo tính hiệu quả và an toàn cho người sử dụng VD: Độc sâm thang, thuỷ lục nhị tiên đơn [7,27"

* Cách bào chế: Thường dùng phương pháp sắc.

- Dụng cụ: Siêu đất, siêu nhôm [6],[7,31], siêu thép không gỉ, ấm điện

có rơle nhiệt điều chỉnh [7]

- Dung môi: Nước sạch, thường đổ nước ngập mặt dược liệu khoảng 2cm là vừa [7]

- Lửa và thời gian sắc: Thưcỉng sắc 3 lần, cách sắc tốt nhất là lần 1 theo phương pháp sắc của thang thuốc lấy khí, các lần sau thì tuỳ theo thang thuốc

mà quyết định [7]

* Đặc điểm:

Dạng dùng là dịch sắc toàn phần của một thang thuốc gồm có nhiều vị

Do vậy, thành phẩn hoá học có trong dịch sắc này rất phức tạp, dịch sắc dễ bị tủa Tuy nhiên, vẫn chưa có một công trình khoa học nào nghiên cứu để chỉ ra rằng tủa đó là hoạt chất có tác dụng điều trị hay đó là các tạp chất không có tác dụng điều trị

* Liều lượng:

- Khối lượng của một thang thuốc thường có sự thay đổi về khối lượng theo độ tuổi [7,33] VD:

Dưới 5 tuổi: ~ 30g Từ 10 đến 15 tuổi: 80 - 120g

Từ 6 - 10 tuổi: 50 - 80g Trên 15 tuổi: 150 - 180g hoặc 200g

- Khối lượng của một thang “cổ phương” lại rất thay đổi VD:

Bổ trung ích khí thang 98g [6,141] (hoặc 6 6g [7])

Bát vị quế phụ 108g [6]

Ma hoàng thang 32g [6,118] (hoặc 44g [7])

Tuy nhiên, trong đơn theo “cổ phương” người ta thường gia giảm nhiều

vị để tăng hiệu quả điều trị

* ƠM điểm - nhược điểm:

- ưu điểm: + Là dạng thuốc thông dụng, thích hợp với nhiều loại

bệnh, các lứa tuổi và các mùa khác nhau trong năm

+ Dễ gia, giảm theo triệu chứng bệnh, do đó có thể đưa lại hiệu quả điều trị bệnh cao.

+ Mang tính đặc trị cho từng cá thể, bởi mỗi bệnh nhân lại

có cơ địa khác nhau do đó ở mỗi bệnh nhân lại có các chứng, bệnh, hội chứng khác nhau dẫn đến cách điều trị cũng có khác nhau

+ Hấp thu nhanh qua đường tiêu hoá

- Nhược điểm: + Thưòỉng dùng chủ yếu cho cá thể nên gặp nhiềuphiền hà trong bào chế do đó dễ tạo tâm lý ngại dùng thuốc

+ Khó bảo quản, dễ bị nấm mốc phát triển

+ Thể tích thang thuốc lớn

+ Liều dùng lớn

Để khắc phục những nhược điểm của thuốc thang, hiện nay người ta bào chế thuốc thang dưới nhiều dạng tiện lợi hơn cho việc sử dụng, bảo quản,

vận chuyển Đặc biệt, ở một số cơ sở điều trị Đông Y người ta chế thuốc thang

dưới dạng dịch sắc đóng túi nilon (bằng hệ thống sắc, đóng túi) có thể sử dụng trong vòng 1 - 2 tuần

1.3.2 Cao thuốc

* Định nghĩa

Cao thuốc là những chế phẩm được nhiều chế bằng cách cô hoặc sấy đến thể chất nhất định dịch chiết thu được từ dược liệu thực vật hoặc động vật với dung môi thích hợp như Ethanol dược dụng, nước sạch, bằng những phương pháp chiết thích hợp [7,75]

* Đặc điểm

- Thường tối màu [7].

- Có thành phần phức tạp, tác dụng của cao là tác dụng tổng thể của các thành phần đó [7]

- Điều chế cao thuốc để giảm khối lượng dược liệu, giảm thể tích của dược liệu, thang thuốc [7]

- Đã được loại bỏ một phần hoặc hoàn toàn các tạp chất (gôm, chất nhầy, chất béo, tạp cơ học ) và tỷ lệ hoạt chất trong cao thường cao hơn hoặc bằng tỷ lệ hoạt chất trong dược liệu [5].

- Cô đặc: Để tạo thành cao lỏng hoặc cao đặc

- Sấy khô: Để tạo thành cao khô

* Yêu cầu chất lượng

- Cao đặc, cao khô:

+ Thể chất khô hoặc mềm dẻo, mịn (cao đặc), có mùi của dược liệu ban đầu.+ Độ ẩm phải đạt: Cao khô < 5% hàm ẩm [18,P.L9]

Cao đặc < 20% hàm ẩm [18,P.L9]

+ Các chỉ tiêu khác: Hàm lượng hoạt chất, độ nhiễm khuẩn,

Phần 2: NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN

- Chuột cống trắng: trưởng thành, khoẻ mạnh, trọng lượng 130g - 150g,

cả hai giống do Viện Quân Y 103 cung cấp

- Chuột nhắt trắng: trưởng thành, khoẻ mạnh, trọng lượng 22g - 25g, cả hai giống do Viện vệ sinh dịch tễ cung cấp

2.2.3 Thiết bị nghiên cứu

- Bản mỏng Silicagel GF254 Merck.

- Các dụng cụ dùng để sắc thuốc

- Cân phân tích Sartorius BP 221 s (Đức), cân phân tích Mettle Toledo

AB 204 (Thụy Sĩ),cân kỹ thuật

- Dụng cụ thuỷ tinh phân tích

- Đèn tử ngoại Camag

- Máy cất chân không Buchi R - 200 (Đức)

- Máy ly tâm Heraeus instruments Labofuge 400 (Đức)

- Tủ sấy Memmert, SHELLAB

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u

2.3.1 Bào chế một số dạng thuốc:

- Thăm dò bào chế dạng thuốc viên nén, cốm thuốc, viên tròn [5]

- Bào chế cao lỏng

+Phương pháp bào chế: theo phương pháp bào chế cao lỏng [5]

+Bảo quản chế phẩm ở điều kiện nhiệt độ thường, định kỳ theo dõi theo tiêu chuẩn chất lượng về cảm quan của cao lỏng được ghi trong DĐVNIII

2.3.2 Nghiên cứu vê thành phần hoá học

Lấy lOOml cao lỏng 3 : 1 “Nhị nhân hoà vị” thêm 200ml nước cất được 300ml mẫu nghiên cứu để tiến hành nghiên cứu thành phần hoá học

- Định tính một số nhóm chất hoá học trong MNC bằng các phản ứng hoá học và SKLM [10],[11],[24]

- Định lượng Aavonoid toàn phần, saponin bằng phương pháp cân [1 0],[1 1]

2.3.3 Nghiên cứu tác dụng dược lý

23.3.1 Thử tác dụng chống loét dạ dày:

* Nguyên tắc của phương pháp:

Tiến hành thực nghiệm theo mô hình Shay [44]: Gây loét dạ dày bằng cách thắt môn vị trên chuột cống, so sánh lô thử thuốc với lô chứng trắng

* Chỉ tiêu theo dõi:

- Lượng dịch vị của từng chuột.

- Độ acid tự do và acid toàn phần của dịch dạ dày

- Số chuột có vết loét trong dạ dày

- Điểm số loét: Tổn thương dạ dày được xác định theo phương pháp tính điểm của Robert và Nezamit Thang điểm như sau:

+ Tổn thương nhỏ hình lấm châm: +

+ Tổn thương như vết ấn móng tay (đường kính 2 - 5mm): ++

+ Tổn thương vết loét ăn sâu (đường kính >5mm): +++

Trong đó: A j: độ acid tự do (ml/lOml)

A 2 độ acid toàn phần (ml/lOml)

n: thể tích dịch vị đem định lượng (ml)n,: thể tích dung dịch NaOH O.IN trung hoà acid tự do (ml)

ĨÌ 2 : thể tích dung dịch NaOH O.IN trung hoà acid toàn phần (ml)

- Mức độ tổn thương:

Mức độ tổn thương dạ dày mỗi chuột được tính là tổng số điểm tổn thương theo thang điểm của Robert và Nezamit

D = A + 2B + 3C Trong đó: D: mức độ tổn thương (điểm)

Trong đó: T: tỷ lệ loét dạ dày của lô chuột thí nghiệm (%),

n^: số chuột có loét của lô thí nghiệm, n: số chuột của lô thí nghiệm

X : giá trị trung bình.

x = x ± t { a , f )

_ 1 n

x = ^ - t x , n Trong đó: n: số súc vật của lô thí nghiệm

a = 0.95: mức ý nghĩa (p=0.05)

f: bậc tự do f = n-1 S: độ lệch chuẩn

5^ =

n - \

+ So sánh các kết quả giữa lô thử và lô chứng bằng t-test.

í

x«2

s

Trong đó: X \ ,X 2 \ giéi trị trung bình của mỗi lô thí nghiệm.

nj,n2: số súc vật của mỗi lô thí nghiệm

S^: phương sai chung

Trong đó : /i /2: bậc tự do của mỗi lô thí nghiệm

81^,82^: phương sai của mỗi lô thí nghiệm

Tra bảng phân bố t-Student, so sánh giá trị t tính được với giá trị t(0.05/|+/2) (so sánh với mức ý nghĩa a(p)=0.05)

- Nếu t>t(0.05/|+/2): kết quả trung bình của các lô khác nhau có ý nghĩa thống kê với p<0.05

- Nếu t<t(0.05/|+/2): kết quả trung bình của các lô khác nhau không có

ý nghĩa thống kê với p>0.05

- So sánh các thông số: Thể tích dịch vị, độ acid tự do, độ acid toàn phần, mức độ tổn thương giữa lô chứng và lô thử theo công thức 6

Công thức 2.6:

Trong đó: X: tỷ lệ thay đổi của lô thử so với lô chứng (%)

X^: giá trị trung bình của thông số ở lô chứng, giá trị trung bình của thông số ở lô thử

- Mức độ ức chế loét của lô thử so với lô chứng tính theo công thức 2.7

T - T

Î7 = iç -^ x l0 0

Tc

T^; tỷ lệ loét ở lô chứng (%)T^: tỷ lệ loét ở lô thử (%)Mức độ ức chế loét của lô thử so với lô chứng càng cao chứng tỏ thuốc

có tác dụng chống loét càng tốt

23.3,2 Thử tác dụng lợi mật

* Nguyên tắc của phương pháp

Tiến hành thực nghiệm theo phương pháp của Rudi [44]: Xác định khối lượng mật sinh ra ở trong túi mật, so sánh lô thử thuốc với lô chứng trắng

* Chỉ tiêu theo dõi

Khối lượng mật ở các lô thử, chứng

* Chỉ tiêu đánh giá

- So sánh khối lượng mật giữa lô thử và lô chứng

- Đánh giá tác dụng lợi mật của thuốc thử thông qua độ lợi mật của lô thử tính theo công thức 2.8

Công thức 2.8:

ntT-m c

mc Trong đó: L: độ lợi mật của lô thử (%)

mr : khối lượng mật trung bình của lô thử (mg)

mc : khối lượng mật trung bình của lô chứng (mg)

Khi khối lượng mật trung bình của lô thử thuốc và lô chứng khác nhau

có ý nghĩa thống kê (p<0.05), L càng lớn, thuốc có tác dụng lợi mật càng tốt.Công thức 2.7:

Trong đó: U: mức độ ức chế loét của lô thử so với lô chứng (%)

Xử ỉý kết quả

Kết quả thực nghiêm được xử lý theo phương pháp thống kê t-test Student

Phần 3: KÊT QUẢ NGHIÊN c ứ u VÀ BÀN LUẬN

- Phương pháp bào chế: xát hạt ướt

+ Cân đủ khối lượng các tá dược, đong cao lỏng 6:1 bằng ống đong.+ Trộn đều lactose và avicel, thêm từ tử cao lỏng 6; 1 vào nhào ẩm khối bột, xát hạt qua rây

+ Sấy hạt ở 60®c/lh, sửa hạt

+ Trộn hạt khô với talc, dập viên

- Kết quả: xát hạt khó, hạt dính bết khi sấy ở 60°c —> không dập viênđược

3.1.12 Côm thuốc

- Công thức bào chế:

- Phương pháp bào chế: xát hạt ướt

Nhào ẩm lactose bằng cao lỏng 6:1, xát hạt, sấy, sửa hạt, đóng gói

- Kết quả: + Tạo được hạt cốm

+ Khi sấy ở 60°c hạt cốm mềm, dính xuống khay sấy ^ mất hoạt chất, bết dính hạt

+ Cốm hút ẩm mạnh, rất dễ ẩm trở lại sau khi sấy

- Phương pháp bào chế: đùn tạo cầu

- Kết quả: công thức 3 (50:10:40) tạo hạt đều khi đùn, khi tạo cầu sau khoảng 1 phút các hạt dính bết tạo hạt rất to

3.1.2 Bào chê cao lỏng

3.1.2.1 Phương pháp bào chế

- Ngâm dược liệu trong nước lạnh trong 1 giờ (Ikg dược liệu; 51ít nước).

- Sắc dược liệu với nước sạch 3 lần, mỗi lần 1 giờ 20 phút tính từ khi nước bắt đầu sôi Trong quá trình sắc thuốc luôn đảm bảo nước ngập mặt dược liệu

- Gộp các dịch sắc của cả 3 lần, cô đến thể tích tương đương cao lỏng 1 : 1 (Iml cao lỏng tương đương với Ig dược liệu)

- Loại tạp bằng EtOH 90°, cho đồng lượng, để lắng 24 giờ, lọc thu dịch trong Cắn rắn tiếp tục thêm EtOH 90° rồi lọc, rửa cắn đến khi dịch chảy xuống trong Gộp dịch lọc, cất thu hồi cồn Dịch sau khi thu hồi cồn (dịch nước) đem cô cách thuỷ đến thể tích tương đương cao lỏng 3 : 1

- Bào chế 8 mẫu cao lỏng theo công thức bào chế:

Bảng 3.1 Các mẫu bào chế cao lỏng.

3.1.2.2 Thăm dò điều kiện bảo quản cao lỏng

- Đóng chai nhựa màu nâu lOOml, bảo quản ở điều kiện thường trong

vòng 100 ngày (từ ngày 01/02/2007 đến ngày 10/05/2007)

- Bảng theo dõi điều kiện khí hậu trong thời gian bảo quản được trình bày trong phụ lục 1 Theo dõi chế phẩm định kỳ 1 tuần/lần

- Kết quả cả 8 mẫu cao:

- Chuẩn bị mẫu: Lấy 20ml MNC cho vào bình gạn, kiềm hoá bằng

NH4 0Hj đến pH =^8-9 (khoảng 2.5ml) Lắc với chloroform 31ần X lOmlAần,

gộp dịch chiết chloroform —^ c ắ n + lOml HCl 5% —> dịch nước acid, kiềm hoá bằng NH4 0H^j đến p / / » 8 - 9 (khoảng 3ml) Lắc với chloroform 31ần X

lOml/lần, gộp dịch chiết, chia làm 2 phần — cắn Một phần hoà tan vào Iml MeOH để chấm sắc ký, phần còn lại hoà tan trong 5ml HCl 5% để định tính bằng phản ứng hoá học.

- Tiến hành:

Cho vào 3 ống nghiệm nhỏ mỗi ống Iml dịch chiết acid, nhỏ vào từng ống nghiệm 2 - 3 giọt lần lượt các thuốc thử sau;

ống 1: thuốc thử May er -> pư (+) nếu có ị màu trắng đến vàng.

ống 2: thuốc thử Bouchardat —> pư (+) nếu có ị nâu.

ống 3: thuốc thử Dragendorff ^ pư (+) nếu có ị đỏ cam

* Flavonoid:

- Chuẩn bị mẫu: Lấy 20ml MNC cho vào bình gạn, loại tạp chất bằng

chloroform SlầnxlOmlAần, bỏ dịch chloroform, thêm ethylacetat vào dịch nước lắc 31ầnx20ml/lần Gộp dịch chiết ethylacetat, chia làm 2 phần, cô cách thuỷ đến cắn, một phần cắn hoà tan trong 5ml EtOH được dung dịch F| để làm định tính bằng phản ứng hoá học, một phần cắn hoà tan trong Iml MeOH được dung dịch p2 để chấm sắc ký

- Tiến hành:

+ Phản ứng Cyanidin:

Iml ddFj + lOmgMg + 3 giọt HClj —^ pư (+) nếu dung dịch có màu đỏ

+ Phản ứng với kiềm:

Iml ddF, + 3 giọt NaOH 10% -> pư (+) nếu màu vàng tăng lên hoặc có

vàng — ị tan tạo thành dung dịch màu vàng.

Nhỏ 1 giọt ddF| lên giấy lọc, để khô, hơ lên miệng lọ NH3 đ -> pư (+) nếu thấy màu vàng tăng lên

+ Phản ứng với FeClji

Iml ddF| + 1 giọt FeClj 5% pư (+) nếu có i xanh đen.

* Saponin

- Chuẩn bị mẫu: Lấy 20ml MNC cho vào bình gạn, lắc với ether dầu

hoả đến khi lớp ether trong Lắc tiếp với n-butanol 31ần X lOml/lần, gộp dịch chiết n-butanol, chia làm 2 phẩn —^ cắn Một phần cắn hoà tan trong H2O được dung dịch s, để làm phản ứng hoá học, phần còn lại hoà tan vào Iml MeOH được dung dịch S2 để chấm sắc ký

- Tiến hành:

+ Quan sát hiện tượng tạo bọt:

ống nghiệm: Iml ddSj + 5ml nước -> lắc kỹ để yên, quan sát pư (+) nếu bọt bền sau 15’

Bảng 3.2 Kết quả định tính một số nhóm chất hoá học trong cao lỏng NNHV

- Mẫu thử; dung dịch alc/ MeOH chiết từ MNC.

- Mẫu đối chứng: dung dịch Berberin hydrochlorid chuẩn và dung dịch Palmatin hydrochlorid chuẩn trong Methanol

- Bản mỏng Silicagel GF254 (Merck), hoạt hoá ở 110°c/lh

- Hệ dung môi khai triển:

(1) Toluen : Aceton : MeOH : NH4ƠH(J

(2) Chloroform : MeOH

(3) Chloroform : MeOH : NH4OH4

(4) Toluen : Ethylacetat: Aceton : Acid formic

(5) n - butanol: Acid acetic ; H2O

(10: 10: 1.5 : 1) ( 9 : 1 )

(20 : 3.5 : 0.5)(5 ; 2 : 2 : 1) (8 : 1 : 1)

- Hiện màu: + Soi dưới đèn uv ở Ả = 365rim.

+ Phun thuốc thử Dragendorff

Qua thăm dò một số hệ dung môi SKLM, kết quả cho thấy hệ (5) tách vết tốt, vết tròn, rõ Kết quả được trình bày ở hình 3.1

Hình 3.1 Sắc ký đồ của dịch chiết alcaloid trong cao lỏng NNHV

a: Hiện màu bằng thuốc thử dragendorff