nghiên cứu so sánh các giá trị chẩn đoán helicobacter pylori bằng týp gen, cim và clo test trong bệnh viêm loét dạ dày tá tràng của bệnh nhân tại khu vực phía nam

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU SO SÁNH CÁC GIÁ TRỊ CHẨN ĐOÁN HELICOBACTER PYLORI BẰNG TÝP GEN, CIM VÀ CLO TEST TRONG BỆNH VIÊM LOÉT DẠ DÀY-TÁ TRÀNG CỦA BỆNH NHÂN TẠI KHU VỰC PHÍA NAM MÃ SỐ: 32/16 Chủ nhiệm đề tài: Trần Thiện Trung Đồng chủ nhiệm đề tài: Trần Anh Minh Cộng tác viên: Nguyễn Tuấn Anh Tp Hồ Chí Minh, 08/2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU SO SÁNH CÁC GIÁ TRỊ CHẨN ĐOÁN HELICOBACTER PYLORI BẰNG TÝP GEN, CIM VÀ CLO TEST TRONG BỆNH VIÊM LOÉT DẠ DÀY-TÁ TRÀNG CỦA BỆNH NHÂN TẠI KHU VỰC PHÍA NAM MÃ SỐ: 32/16 Chủ nhiệm đề tài: Trần Thiện Trung Đồng chủ nhiệm đề tài: Trần Anh Minh Cộng tác viên: Nguyễn Tuấn Anh Tp Hồ Chí Minh, 08/2018 DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU GS TS BS Trần Thiện Trung BS Trần Anh Minh ThS Nguyễn Tuấn Anh MỤC LỤC Trang Danh sách thành viên tham gia nghiên cứu ……………… Mục lục …………………………………………………………………… Danh mục bảng …………………………………………………………… Tóm tắt nghiên cứu – tiếng Việt …………………………………………… Tóm tắt nghiên cứu – tiếng Anh …………………………………………… Tổng quan ………………………………………………………………… Đối tượng phương pháp nghiên cứu …………………………………… Kết …………………………………………………………………… 12 Bàn luận ……………………………………………………………………17 Kết luận ……………………………………………………………………19 Tài liệu tham khảo …………………………………………………………20 DANH MỤC BẢNG Bảng Đặc điểm quần thể mẫu bệnh nhân kết chẩn đoán lâm sàng … 12 Bảng Tính xác chẩn đoán H pylori CLO test ……………… 12 Bảng Tính xác chẩn đốn H pylori CIM test ……………… 13 Bảng Tính xác chẩn đoán H pylori multiplex PCR ……… 14 Bảng Kết chẩn đoán H pylori phương pháp sử dụng ………… 15 Bảng Tỷ lệ chẩn đốn H pylori dương tính phối hợp mù phương pháp ……………………………………………………………………………………15 Bảng Tỷ lệ chẩn đoán H pylori phối hợp phương pháp …………… 16 NGHIÊN CỨU SO SÁNH CÁC GIÁ TRỊ CHẨN ĐOÁN HELICOBACTER PYLORI BẰNG TÝP GEN, CIM VÀ CLO TEST TRONG BỆNH VIÊM LOÉT DẠ DÀY-TÁ TRÀNG CỦA BỆNH NHÂN TẠI KHU VỰC PHÍA NAM Trần Thiện Trung1234, Trần Anh Minh4, Nguyễn Tuấn Anh123 Bệnh viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh - Cơ sở 2 Khoa Điều dưỡng - Kỹ thuật Y học, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Trung tâm Đào tạo Chẩn đoán Y Sinh học Phân tử, Bệnh viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Bộ mơn Ngoại, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: GS.TS.BS Trần Thiện Trung - ĐT: 0903645659 Email: drtranthientrung@ yahoo.com TÓM TẮT Mục tiêu: Đánh giá giá trị xét nghiệm CIM, CLO test multiplex PCR chẩn đoán nhiễm trùng Helicobacter pylori (H pylori) quần thể người Việt Nam Phương pháp: Những bệnh nhân phù hợp cho nghiên cứu chọn lọc Xét nghiệm CIM, CLO test multiplex PCR sử dụng để chẩn đoán nhiễm trùng H pylori Bệnh nhân chẩn đốn H pylori dương tính xét nghiệm dương tính Kết so sánh cặp phương pháp để xác định tình trạng nhiễm H pylori Kết quả: Tổng cộng có 201 bệnh nhân với tuổi trung bình 50,5 tuổi (từ 18 đến 74 tuổi) chấp nhận cho nghiên cứu Có 115 bệnh nhân nữ 86 bệnh nhân nam Trong 201 bệnh nhân, 168 (83,6%) chẩn đốn H pylori dương tính theo tiêu chí xác định Bệnh nhân có H pylori dương tính chẩn đoán CLO test, CIM test multiplex PCR 38,3%, 59,2% 72,1% Tính xác xét nghiệm theo thứ tự 54,7%, 75,6% 88,6% Kết luận: CIM test multiplex PCR có độ nhạy cao chẩn đốn nhiễm trùng vi khuẩn H pylori quần thể bệnh nhân Việt Nam bị viêm dày Những xét nghiệm áp dụng chẩn đốn cận lâm sàng quần thể bệnh nhân Việt Nam CLO test nên sử dụng kết hợp với xét nghiệm khác trường hợp bệnh nhân chẩn đoán âm tính Từ khóa: CIM test, CLO test, Helicobacter pylori, multiplex PCR, Vietnamese Value of CIM, CLO test and multiplex PCR for the diagnosis of Helicobacter pylori infection status in patients with gastritis Tran Thien Trung, Tran Anh Minh, Nguyen Tuan Anh Abtract AIM: To assess the value of CIM test, CLO test and multiplex PCR for the diagnosis of Helicobacter pylori (H pylori) infection in a Vietnamese population METHODS: Targeted suitable patients were recruited CIM test, CLO test and multiplex PCR were used to diagnose the H pylori infection Patients were considered H pylori positive when at least one of the three tests were positive The results were compared in pair between three methods and to the H pylori infection status as defined RESULTS: Totally, there were 201 patients with a mean age of 40.5 (range, 1874) years There were 115 females and 86 males Of the 201 patients, 168 (83.6%) were diagnosed as being H pylori positive according to the definition The positive patients obtained with CLO test, CIM test and multiplex PCR were 38.3%, 59.2% and 72.1%, correspondingly The accuracy of the three tests in order as above were 54.7%, 75.6% and 88.6%, respectively CONCLUSION: CIM test and multiplex PCR have high accuracy for the diagnosis of H pylori infection in the Vietnamase population with gastritis These tests can be clinically applied in Vietnamase population CLO test should be used in combination with the other tests in case of false-negative patients Key words: CIM test, CLO test, Helicobacter pylori, multiplex PCR, Vietnamese TỔNG QUAN H pylori vi khuẩn liên quan đến trình sinh bệnh học nhiều bệnh khác đường tiêu hóa, đặc biệt ung thư dày [1] Tỷ lệ nhiễm H pylori thay đổi tùy theo khu vực giới Tỷ lệ nhiễm H pylori nước phát triển vào khoảng 25% nước phát triển 80% [2] Ở Việt Nam, tỷ lệ lưu hành H pylori khoảng 65,6-74,6% [3, 4] Đặc biệt, Hà Nội, tỷ lệ nhiễm H pylori lên đến 78,8% [5] thành phố Hồ Chí Minh 80,5% [6] Vì việc chẩn đốn có vai trò quan trọng điều trị tiệt trừ H pylori bệnh nhân viêm, loét ung thư dày Điều trị tiệt trừ H pylori liên quan đến sử dụng kết hợp hai ba kháng sinh amoxicillin, metronidazole, tinidazole, furazolidone, clarithromycin levofloxacin với thuốc ức chế bơm proton (omeprazole, lansoprazole, pantoprazole, rabeprazole esomeprazole) [7, 8] Mặc dù phác đồ có hiệu thời gian dài, tỷ lệ điều trị thất bại ngày tăng tuỳ theo vùng miền giới nguyên nhân chủ yếu vi khuẩn kháng thuốc [9] Tuy nhiên, có khả phương pháp dùng để phát H pylori cho kết khơng phản ánh tình trạng nhiễm H pylori bệnh nhân, gây khó khăn q trình điều trị Hiện nay, có nhiều phương pháp chẩn đốn H pylori khác sử dụng chia phương pháp chẩn đoán H pylori thành hai nhóm: nhóm xâm hại nhóm khơng xâm hại Nhóm xâm hại địi hỏi nội soi dày để lấy mẫu sinh thiết Campylobacter-like organism (CLO) test, nuôi cấy, giải phẫu bệnh phương pháp chẩn đoán phân tử (PCR) Nhóm khơng xâm hại bao gồm phát kháng nguyên H pylori từ phân, huyết học nghiệm pháp thở [10] Mỗi phương pháp có ưu nhược điểm riêng Trong thực hành lâm sàng, xét nghiệm thường dùng để chẩn đoán H pylori cho điều trị gồm nội soi dày kết hợp với CLO test, gần PCR Xét nghiệm nuôi cấy định trường hợp kháng thuốc xét nghiệm giải phẫu bệnh chẩn đoán H pylori có nghi ngờ tổn thương ung thư dày Các xét nghiệm không xâm hại huyết học nghiệm pháp thở dùng phổ biến Xét nghiệm huyết học dùng chẩn đoán nghiên cứu dịch tễ học nhược điểm có độ nhạy thấp không dùng để xác định kết tiệt trừ H pylori, xét nghiệm thở lại đắt tiền so với phương pháp chẩn đoán khác Tuy nhiên, gần đây, phương pháp chẩn đốn H pylori khơng xâm hại ngày ưa chuộng ưu điểm chúng [11] Theo hướng dẫn Châu Âu, cần phải có hai thử nghiệm khác để xác định tình trạng nhiễm H pylori bệnh nhân [12] Trong đó, nghiên cứu gần cho thấy tiêu chuẩn vàng để xác định H pylori phương pháp nested PCR, độ nhạy đặc hiệu đạt 100% [13] Tuy nhiên, phương pháp chẩn đoán phù hợp cho tình trạng nhiễm H pylori cịn tùy thuộc vào phổ biến đa dạng chủng H pylori, tính sẵn có phương pháp chẩn đốn tình trạng lâm sàng bệnh nhân [14] Bên cạnh đó, để xác định tiệt trừ thành công H pylori bệnh nhân nhiễm vi khuẩn sau trình điều trị, phương pháp PCR, nghiệm pháp thở phát kháng nguyên H pylori từ phân sử dụng [14] Để chẩn đốn xác nhiễm H pylori xác nhận giá trị thử nghiệm thực hành điều trị Việt Nam, nghiên cứu đánh giá khả chẩn đoán H pylori phương pháp CLO test, CIM multiplex PCR bệnh viêm, loét dày-tá tràng, nhằm cho thấy khả kết hợp phương pháp hoàn cảnh cụ thể bệnh viện Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, sở ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu cắt ngang tiến hành khoảng thời gian từ Tháng 1/2016 đến Tháng 12/2016 bệnh viện Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, sở Bệnh nhân đếm khám tiêu hóa đáp ứng tiêu chuẩn sau: Tiêu chuẩn chọn bệnh Bệnh nhân khu vực Thành phố Hồ Chí Minh tỉnh miền Nam, 16 tuổi, có triệu chứng đến khám đau bụng rốn, đầy hơi, ợ hơi, khó tiêu, rối loạn tiêu phân sống Bệnh nhân nội soi dày-tá tràng chẩn đoán bị viêm, loét dày-tá tràng Bệnh nhân không dùng loại thuốc để triều trị bệnh dày kháng sinh trước tháng Bệnh nhân làm lúc thử nghiệm gồm: nội soi dày làm CLO test, CIM, multiplex PCR Tiêu chuẩn loại trừ Bệnh nhân không làm đầy đủ xét nghiệm lúc nêu Bệnh nhân bị bệnh ung thư dày Bệnh nhân uống thuốc dày thuốc kháng sinh Phương pháp nghiên cứu Hai mẫu sinh thiết niêm mạc dày bệnh nhân qua nội soi, lấy vùng hang vị phía bờ cong lớn, cách môn vị khoảng cm, đánh giá diện H pylori hai phương pháp CLO test multiplex PCR Mẫu huyết từ bệnh nhân tương ứng kiểm tra kháng thể kháng H pylori huyết chẩn đoán CIM Phương pháp CLO test CLO test thực cách đặt mẫu sinh thiết dày vào môi trường thạch chứa sẵn ure chất thị màu Sự diện enzyme urease từ vi khuẩn gây phản ứng biến đổi ure thành ammonia, khiến pH tăng, làm thay đổi màu chất thị từ vàng sang tím cánh sen, dấu hiệu giúp xác định mẫu sinh thiết dương tính với H pylori Phương pháp CIM Phương pháp CIM (current infection marker) ứng dụng kit Assure® H pylori Rapid Test (Genelabs Diagnostics Pty Ltd, Singapore) để chẩn đoán H pylori Xét nghiệm thực theo nguyên lý sắc ký miễn dịch gián tiếp pha rắn, sử dụng kháng nguyên đặc hiệu để phát kháng thể IgG tạo bệnh nhân tình trạng nhiễm H pylori hoạt động (“dấu ấn” biểu thị tình trạng bị nhiễm - CIM) Phương pháp CIM có khả phân biệt tình trạng nhiễm H pylori so với tình trạng nhiễm H pylori khứ Để đảm bảo phát xác tình trạng nhiễm H pylori bệnh nhân, thao tác thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Kết CIM test cho vạch xác định dương tính với CIM [15] Phương pháp multiplex PCR Phương pháp multiplex PCR dùng để chẩn đoán phát H pylori xác định kiểu gene cagA vacA đặc trưng vi khuẩn Nguyên tắc multiplex PCR dựa nhân nhiều vùng gene cagA, vacA s1/s2 vacA m1/m2 H pylori cách sử dụng nhiều cặp mồi đặc hiệu phản ứng Chính thế, độ đặc hiệu độ nhạy phản ứng gia tăng 10 DNA gene H pylori sau tách chiết dùng để tiến hành phản ứng multiplex PCR hệ thống PCR (Bio-Rad) Hỗn hợp phản ứng multiplex PCR bao gồm 1U h-Taq DNA polymerase (Solgent), 200 µM dNTPs, mM MgCl2, 1X PCR Buffer, 200 nM loại mồi xuôi ngược (IDT) gồm mồi cagA [16], vacA s1/s2 [16, 17], vacA m1/m2 [16, 17], 50 nM mồi chứng nội hGSTP (glutathione-Stransferase) [18] µl DNA tách chiết tổng thể tích phản ứng 25µl Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR bao gồm 15 phút 95oC, 40 chu kỳ lặp lại gồm 20 giây 94oC, 40 giây 60oC 40 giây 72oC, cuối phút 72oC Sản phẩm nhân quan sát qua điện di gel agarose 5% nhuộm EcoDye (0.2mg/mL) với thang phân tử 100 bp (Solgent) Định nghĩa bệnh nhân nhiễm không nhiễm H pylori Bệnh nhân nhiễm H pylori có thử nghiệm dương tính Bệnh nhân khơng nhiễm H pylori âm tính Phương pháp phân tích thống kê Phương pháp thống kê mô tả sử dụng để mô tả đặc điểm tuổi, giới tính tỷ lệ kiểu gene vi khuẩn H pylori quần thể mẫu Kiểm định Chi bình phương (χ2) để đánh giá khác biệt tỷ lệ chẩn đoán H pylori phương pháp sử dụng Hệ số kappa (κ) để đánh giá phù hợp kết chẩn đốn ba phương pháp với tình trạng nhiễm H pylori Mức độ phù hợp xem κ ≤ 0,2; yếu 0,2 < κ ≤ 0,4; trung bình 0,4 < κ ≤ 0,6; 0,6 ≤ κ ≤ 0,8; tốt κ > 0,8 [19] Các thơng số chẩn đốn độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị chẩn đoán dương tính âm tính tính tốn theo chương trình Med Calc (http://www.medcalc.org/calc/diagnostic_test.php) với độ tin cậy 95% 11 KẾT QUẢ Mơ tả quần thể mẫu Tổng số có 201 bệnh nhân đủ tiêu chuẩn tham gia nghiên cứu Đặc điểm chi tiết mô tả Bảng Bảng Đặc điểm quần thể mẫu bệnh nhân kết chẩn đoán lâm sàng Đặc điểm H pylori dương tính (n = 168) 40,1 (18-74) H pylori âm tính (n = 33) 42,6 (25-69) Tổng (n = 201) Tuổi trung bình (khoảng 40,5 (18tuổi) 74) Giới tính (Nữ/Nam) 93/75 22/11 115/86 Chẩn đoán Viêm dày 164 29 193 Loét dày 4 Tuổi trung bình bệnh nhân 40,5±11,6 (95% CI: 38,9-42,2), tuổi nhỏ 18, tuổi lớn 74 tuổi Tuổi bệnh nhân tuân theo quy luật phân bố chuẩn (p=0,362; Skewness Test) Tỷ lệ bệnh nhân nam 42,8% (86/201; 95% CI: 36,8-50,7) Tỷ lệ bệnh nhân nữ 57,2% (115/201; 95% CI: 49,3-63,2) Phần lớn bệnh nhân bị viêm dày (96,0%; 193/201), có tỷ lệ nhỏ bị loét dày (4,0%; 8/201) Kết chẩn đoán H pylori CLO test Bảng Tính xác chẩn đốn H pylori CLO test Tình trạng nhiễm H pylori Phương pháp CLO test Tổng Dương tính Âm tính Dương tính 77 77 Âm tính 91 33 124 168 33 201 Tổng 12 Kết Bảng cho thấy có khác biệt có ý nghĩa thống kê chẩn đoán H pylori CLO test so với tình trạng nhiễm H pylori (p