Nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây mán đỉa ( archidendron clypearia (jack ) i neils mimosaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN KHÁNH THÙY LINH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY MÁN ĐỈA ( ARCHIDENDRON CLYPEARIA (JACK.) I. NIELS. MIMOSACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN KHÁNH THÙY LINH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY MÁN ĐỈA (ARCHIDENDRON CLYPEARIA (JACK.) I. NIELS. MIMOSACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS. TS. Nguyễn Thị Hoài HÀ NỘI 2013 Lời cảm ơn Trong quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn này, tôi đã nhận đ-ợc rất nhiều sự giúp đỡ quý báu của các thầy cô giáo, các chuyên gia trong nhiều lĩnh vực cùng đồng nghiệp, bạn bè và gia đình. Tr-ớc hết, tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng Sau Đại học, các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên Bộ môn D-ợc liệu, D-ợc học cổ truyền và Thực vật D-ợc - Tr-ờng Đại học D-ợc Hà Nội đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu. Tiếp theo tôi xin cảm ơn Ban giám hiệu tr-ờng Đại học Y D-ợc Huế, cảm ơn sự giúp đỡ nhiệt tình của các thầy cô giáo, đồng nghiệp, các em sinh viên trong nhóm nghiên cứu ở Khoa D-ợc Tr-ờng Đại học Y D-ợc Huế, nơi đã tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất cho tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn này. Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới PGS.TS. Nguyễn Thị Hoài, ng-ời đã tận tình h-ớng dẫn, hết lòng chỉ bảo, luôn quan tâm và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS. Phan Văn Kiệm, TS. Nguyễn Thế C-ờng, TS. Đỗ Thị Thảo, ThS. Hồ Việt Đức đã giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Cuối cùng, là lời cảm ơn sâu sắc nhất, tôi muốn gửi tới gia đình, bạn bè, những ng-ời luôn ủng hộ và động viên tôi trong học tập cũng nh- trong cuộc sống. Một lần nữa, tôi xin cảm ơn tất cả những sự giúp đỡ quý báu đó! Hu, ngy 26 thỏng 8 nm 2013 Nguyn Khỏnh Thựy Linh MỤC LỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chƣơng 1. TỔNG QUAN 3 1.1. Giới thiệu chung về họ Mimosaceae và chi Archidendron F. Mueller. 3 1.2. Thành phần hóa học một số loài thuộc chi Archidendron F. Mueller 6 1.3. Tác dụng sinh học của chi Archidendron F. Mueller 8 1.4. Cây Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack.) I. Niels, Mimosaceae 9 1.4.1. Vị trí phân loại 9 1.4.2. Đặc điểm thực vật 9 1.4.3. Thành phần hóa học 10 1.4.3.1. Ở trên thế giới 10 1.4.3.2. Ở Việt Nam 12 1.4.4. Tác dụng và công dụng 12 1.4.4.1. Tác dụng dƣợc lý 12 1.4.4.2. Công dụng 14 Chƣơng 2. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1. Đối tƣợng và phƣơng tiện nghiên cứu 15 2.1.1. Nguyên liệu nghiên cứu 15 2.1.2. Động vật thí nghiệm 15 2.1.3. Hóa chất, dụng cụ, máy móc 16 2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 17 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật 17 2.2.1.1. Vi phẫu thân và lá Mán đỉa 17 2.2.1.2. Soi bột thân và lá Mán đỉa 17 2.2.2. Nghiên cứu về hóa học 17 2.2.2.1. Định tính một số nhóm chất hữu cơ 17 2.2.2.2. Chiết xuất và phân lập 19 2.2.2.3. Xác định cấu trúc 20 2.2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu tác dụng sinh học 20 2.2.3.1. Thử độc tính cấp 20 2.2.3.2. Thử tác dụng chống oxy hóa invitro 21 2.2.3.3. Thử tác dụng bảo vệ gan, chống oxy hóa invivo 23 Chƣơng 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 25 3.1. Nghiên cứu về thực vật 25 3.1.1. Đặc điểm vi phẫu 25 3.1.2. Đặc điểm bột 27 3.2. Nghiên cứu về hóa học 28 3.2.1. Định tính các nhóm chất hữu cơ có trong cây Mán đỉa 28 3.2.2. Chiết xuất và phân lập các hợp chất 30 3.2.2.1. Chiết xuất 30 3.2.2.2. Phân lập 31 3.2.3. Nhận dạng các chất phân lập đƣợc 36 3.2.3.1. Nhận dạng chất số 1 (ACE9) 36 3.2.3.2. Nhận dạng chất số 2 (ACE7) 37 3.2.3.3. Nhận dạng chất số 3 (ACE4) 38 3.2.3.4. Nhận dạng chất số 4 (ACE8) 41 3.3. Nghiên cứu về tác dụng sinh học 44 3.3.1. Tác dụng chống oxy hóa cao chiết các phân đoạn của Mán đỉa 44 3.3.2. Thử độc tính cấp 44 3.3.3. Thử tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan invivo 46 3.3.3.1. Hiệu quả bảo vệ gan 46 3.3.3.2. Khối lƣợng gan 48 3.3.3.3. Kết quả kiểm tra trực quan tổn thƣơng gan 49 3.3.3.4. Kết quả xác định hàm lƣợng MDA trong gan 51 3.3.4. Thử tác dụng chống oxy hóa invitro của các hợp chất phân lập đƣợc 52 Chƣơng 4. BÀN LUẬN 54 4.1. Về thực vật 55 4.2. Về thành phần hóa học 56 4.3. Về tác dụng sinh học 59 KẾT LUẬN 64 KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ALT : Alanin Amino Transferase AST : Aspartate Amino Transferase 13 C-NMR : Carbon Nuclear Magnetic Resonance CD 3 OD : Deuterated methanol CDCl 3 : Deuterated chloroform COSY : Correlation spectroscopy DEPT : Distortionless enhancement by polarization transfer DMSO : Dimethyl sulfoxide ED 50 : Effective dose ESI-MS : Electrospray ionisation mass FBS : Fetal bovine serum GSH : Glutathione HMBC : Heteronuclear multiple bond correlation 1 H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance HPLC : High-performance liquid chromatography HSQC : Heteronuclear single quantum correlation HSV-1 : Herpes simplex virus type 1. IC 50 : Inhibition concentration at 50% IFN : Interferon IL-1 : Interleukin 1 LD 50 : Lethal dose 50%. MDA : Malonyl dialdehyd MEME : Minimum Essential Medium Eagle MTT : 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromid NF-κB : Nuclear factor – kappa B NMR : Nuclear magnetic resonance NOESY : Nuclear overhauser effect spectroscopy PBS : Phosphate – Buffered Saline PSF : Penicillin – Streptomicin – Fungizone RP 18 : Reversed phase RSV : Respiratory syncytial virus SKC : Sắc ký cột SKLM : Sắc ký lớp mỏng TNF : Tumor necrosis factor DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1. Các loài trong chi Archidendron có ở Việt Nam 04 Bảng 1.2. Thành phần hóa học một số loài trong chi Archidendron 06 Bảng 1.3. Một số hoạt chất phân lập đƣợc từ Mán đỉa 11 Bảng 3.1. Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ từ phần trên mặt đất của Mán đỉa 29 Bảng 3.2. Số liệu phổ 1 H- NMR của chất số 1 (ACE9) và chất tham khảo 36 Bảng 3.3. Số liệu phổ NMR của chất số 3 (ACE4) và chất tham khảo 39 Bảng 3.4. Số liệu phổ NMR của chất số 4 (ACE8) và chất tham khảo 42 Bảng 3.5. Giá trị ED 50 cao chiết 5 phân đoạn của Mán đỉa 44 Bảng 3.6. Độc tính cấp của cao chiết ethyl acetat trên chuột thí nghiệm 45 Bảng 3.7. Hiệu quả bảo vệ gan của cao chiết ethyl acetat 47 Bảng 3.8. Khối lƣợng gan chuột ở các lô thí nghiệm 48 Bảng 3.9. Quan sát hình thái trực quan gan chuột ở các lô thí nghiệm 49 Bảng 3.10. Hàm lƣợng MDA trong gan 51 Bảng 3.11. Kết quả xác định hoạt tính chống oxi hóa 52 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1. Ảnh cây Mán đỉa. 15 Hình 3.1. Ảnh vi phẫu lá Mán đỉa. 25 Hình 3.2. Ảnh vi phẫu thân Mán đỉa 26 Hình 3.3. Ảnh đặc điểm bột lá Mán đỉa 27 Hình 3.4. Ảnh đặc điểm bột thân Mán đỉa 28 Hình 3.5. Sơ đồ chiết xuất các phân đoạn từ cây Mán đỉa 31 Hình 3.6. Sơ đồ qui trình phân lập các hợp chất ACE9 và ACE7 34 Hình 3.7. Sơ đồ qui trình phân lập các hợp chất ACE4 và ACE8 35 Hình 3.8. Cấu trúc hóa học của chất số 1 (ACE9) 37 Hình 3.9. Cấu trúc hóa học của chất số 2 (ACE7) 37 Hình 3.10. Cấu trúc hóa học của chất số 3 (ACE4) 40 Hình 3.11. Tƣơng tác HMBC chính của chất số 3 (ACE4) 40 Hình 3.12. Cấu trúc hóa học của chất số 4 (ACE8) 42 Hình 3.13. Tƣơng tác HMBC, COSY chính của chất số 4 (ACE8) 43 Hình 3.14. Ảnh chuột thí nghiệm 48 Hình 3.15. Ảnh gan sau quá trình thí nghiệm 50 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Từ đầu những năm 60 của thế kỷ 20, xu hƣớng chung của ngành dƣợc thế giới đã đi sâu nghiên cứu phát triển thuốc từ cây cỏ. Ở nhiều nƣớc có nền tân dƣợc phát triển nhƣ Pháp, Nhật, Mỹ ngƣời ta cũng nhận ra rằng dùng thuốc tân dƣợc để lại cho ngƣời bệnh nhiều tác dụng không mong muốn. Và khi cuộc sống càng phát triển, con ngƣời càng có xu hƣớng muốn quay trở về với thiên nhiên, đặc biệt là các nguồn nguyên liệu tự nhiên làm thuốc. Việc tìm kiếm các hợp chất làm thuốc từ dƣợc liệu luôn là chính sách ƣu tiên trong chiến lƣợc phát triển ngành dƣợc ở nhiều nƣớc. Vốn là một đất nƣớc đƣợc thiên nhiên ƣu đãi, nằm trong vùng nhiệt đới gió mùa, Việt Nam có thảm thực vật vô cùng phong phú và đa dạng. Cho đến nay đã ghi nhận đƣợc ở nƣớc ta có 3.948 loài cây thuốc, thuộc 307 họ của 9 ngành thực vật bậc cao cũng nhƣ bậc thấp (kể cả Nấm). Phần lớn số loài làm thuốc đều xuất phát từ kinh nghiệm sử dụng của cộng đồng dân tộc ở các địa phƣơng trong cả nƣớc [7]. Việt Nam có nhiều dân tộc sinh sống với nhiều ngôn ngữ khác nhau. Mỗi dân tộc có một nhóm các cây thuốc chăm sóc sức khỏe và chữa bệnh đặc thù của dân tộc mình. Tộc ngƣời Pako và Vân Kiều là những cƣ dân có mặt sớm nhất ở vùng Trƣờng Sơn trải dài từ Quảng Nam đến Quảng Bình, nhiều nhất là ở địa bàn miền núi Quảng Trị với hơn 70% ngƣời Pako, Vân Kiều sinh sống. Tri thức bản địa, đặc biệt là tri thức sử dụng cây thuốc có vai trò quan trọng trong đời sống của ngƣời dân. Qua nghiên cứu ban đầu, Mán đỉa là dƣợc liệu đƣợc đồng bào Pako, Vân Kiều ở Quảng Trị dùng chữa các bệnh có liên quan đến tác dụng chống oxy hoá nhƣ viêm gan, xơ gan, bệnh gan mật, tiêu hóa kém Kết quả sàng lọc hoạt tính chống oxy hoá cao chiết methanol của Mán đỉa trên tế bào gan chuột đã phân lập trong thử nghiệm invitro [4], cho thấy dƣợc liệu này có hoạt tính chống oxy hoá mạnh. Cho đến nay, có rất [...]...ít nghiên cứu của Việt Nam cũng nhƣ ở trên thế gi i về thành phần hoá học và tác dụng sinh học của lo i này V i mong muốn làm sáng tỏ kinh nghiệm của đồng bào Pako, Vân Kiều về việc sử dụng dƣợc liệu Mán đỉa, chúng t i tiến hành đề t i: Nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack. ) I Niels Mimosaceae” v i hai mục tiêu chính: - Nghiên cứu thành. .. (Jack. ) I Niels thuộc chi Archidendron, họ Trinh nữ (Mimosaceae), bộ Ngọc lan (Magnoliales), phân lớp Ngọc lan (Magnoliidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) [24] - Mán đỉa (Archidendron clypearia) có nhiều tên đồng nghĩa khác nhƣ cây giác, cây khét, hông linh, lim sẹt, ràng ràng và cũng đƣợc sử dụng v i một số tên khoa học đồng nghĩa nhƣ Pithecellobium clypearia, Abarema clypearia, ... các t i liệu, thành phần hóa học của chi Archidendron F.Mueller có saponin, flavonoid và một số dẫn chất khác Ngo i thành phần hóa học của lo i Archidendron clypearia sẽ đƣợc trình bày ở bảng 1.3 Bảng 1.2 tóm tắt thành phần hóa học một số lo i khác trong chi Archidendron F Mueller Bảng 1.2 Thành phần hóa học một số lo i trong chi Archidendron Nhóm chất Tên chất Có trong lo i TLTK ’ 3 - Prenylapigenine... đến nay theo t i liệu mà chúng t i thu thập đƣợc ở Việt Nam vẫn chƣa có công bố nào nghiên cứu về thành phần hóa học cũng nhƣ tác dụng sinh học cây Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack) I Niels, Mimosaceae 1.4.4 Tác dụng và công dụng 1.4.4.1 Tác dụng dƣợc lý Mán đỉa phân bố ở một v i n i trên thế gi i nhƣ Ấn Độ, Lào, Campuchia, Việt Nam và là cây thuốc trong nền y học dân tộc cổ truyền của Trung Quốc... liệu nghiên cứu đƣợc TS Nguyễn Thế Cƣờng – Viện Sinh th i và T i nguyên sinh vật – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam xác định tên khoa học là Archidendron clypearia (Jack) I Niels, Mimosaceae Hình 2.1 Ảnh cây Mán đỉa (Archidendron clypearia) Bộ phận dùng nghiên cứu là phần trên mặt đất Nguyên liệu sau khi thu h i đƣợc ph i khô, xay thành bột và bảo quản n i khô ráo 2.1.2 Động vật thí nghiệm... Thọ 9 Archidendron eberhardtii Doi Eberhardt I Niels Bắc Cạn, Th i Nguyên, Hà Tây, Hòa Bình, Thanh Hóa 10 Archidendron ellipticum (Bl .) Niels Doi bầu dục Gia Lai, Kon Tum 11 Archidendron kerri (Gagn .) I Niels Doi Kerr Bắc Cạn, Th i Nguyên 12 Archidendron balansae (Oliv) I Niels Cứt ngựa Cao Bằng, Lạng Sơn, Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế 13 Archidendron chevalieri (Kost) I Niels Doi Chevalier Phú... Trị Gia Lai, Kontum, Lâm Đồng 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC MỘT SỐ LO I THUỘC CHI ARCHIDENDRON F MUELLER Do có nhiều l i thế về tác dụng chữa bệnh, chi Archidendron đƣợc chú ý nghiên cứu trong v i năm l i đây, i n hình là các nghiên cứu của Trung Quốc, Ấn Độ và một số nƣớc Đông Nam Á Các nghiên cứu hóa học về chi Archidendron tập trung chủ yếu vào quá trình chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc hóa học của. .. Khánh Hòa 14 Archidendron tonkinensis Doi Bắc Bộ I Niels Quảng Ninh 15 Archidendron robinsonii (Gagn .) I Niels D i heo Cao Bằng, Lạng Sơn, Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, Phú Yên, Khánh Hòa, Đà lạt 16 Archidendron poilanei (Kost .) I Niels Doi Poilane Tam Đảo, Bạch Mã, Kontum, Lâm Đồng 17 Archidendron occultatum Doi ẩn (Gagn .) I Niels 18 Archidendron dalatensis (Kost .) I Niels Doi Đà lạt 5 Bạch... Bình, Thanh Hóa 4 Archidendron quocense (Pierre) I Niels Doi Phú Quốc Phú Quốc, Côn Sơn 5 Archidendron turgidum (Merr .) I Niels Doi phù Hoàng Liên Sơn, Gia Lai, Kontum Archidendron bauchei (Gagn .) I Niels Cổ ƣớm, cổ áo Từ Thanh Hóa, Huế đến Cam Ranh Archidendron lucidum Cổ ôm, giác Quảng Bình, Quảng 6 7 4 (Benth .) I Niels Trị, Thừa Thiên Huế 8 Archidendron utile (Chun Doi hữu ích & How) I Nielsen Vĩnh Phúc,... các nghiên cứu về tác dụng dƣợc lý của Mán đỉa tập trung vào nhóm tác giả Trung Quốc i n hình v i một số tác dụng đã đƣợc chứng minh nhƣ i u trị viêm dạ dày, chống viêm, chống dị ứng và kháng virus - Tác dụng kháng viêm: Cytokine là những glycoprotein có trọng lƣợng phân tử thấp, nó là chất trung gian i u hòa quá trình viêm nhƣ interleukin 1 (IL- 1), yếu tố ho i tử u (TNF ), interferon γ (IFN ) Quá . dƣợc liệu Mán đỉa, chúng t i tiến hành đề t i: Nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack. ) I. Niels. Mimosaceae” v i hai mục tiêu. NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY MÁN ĐỈA (ARCHIDENDRON CLYPEARIA (JACK. ) I. NIELS. MIMOSACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC HỌC. 1.2. Thành phần hóa học một số lo i thuộc chi Archidendron F. Mueller 6 1.3. Tác dụng sinh học của chi Archidendron F. Mueller 8 1.4. Cây Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack. ) I. Niels, Mimosaceae