Nghiên cứu một số dược liệu có tác dụng ức chế enzym lipoxygenase

59 1.1K 1
Nghiên cứu một số dược liệu có tác dụng ức chế enzym lipoxygenase

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THU TRANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM LIPOXYGENASE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THU TRANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM LIPOXYGENASE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Hoàng Quỳnh Hoa Nơi thực hiện: 1. Bộ môn Thực vật 2. Bộ môn Vật lý – Hóa lý Trường Đại Học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Trước hết, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc tới TS. Hoàng Quỳnh Hoa,người thầy đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này. Tôi xin gửi lời cảm ơn tới tập thể giảng viên, kĩ thuật viên Bộ môn Thực vật đã giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi trong thời gian làm thực nghiệm tại Bộ môn Thực vật. Tôi cũng xin cảm ơn các thầy cô Bộ môn Vật lý – Hóa lý đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình sử dụng máy đo quang phổ tại bộ môn Vật lý – Hóa lý. Tôi xin cảm ơn toàn thể cán bộ, giảng viênTrường Đại học Dược Hà Nội đã cho tôi những kiến thức quý báu trong quá trình học tập tại trường. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn vô hạn tới bố mẹ, người thân và bạn bè của tôi – những người đã luôn động viên, chăm sóc và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua. Hà Nội, ngày 20 tháng 5 năm 2013 Sinh viên Đào Thu Trang MỤC LỤC Trang DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ … ……………………………………….………………. 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN………………… ………………………… 3 1.1. T ổng quan về enzym Lipoxygenase ….…………………………… 3 1.1.1. Đị nh nghĩa….…………………………………………………. ……3 1.1.2. P hân loại enzym LOX ……………………………………… ……3 1.1.3. C ơ chế phản ứngcủa enzym LOX và cơ chất……………….…… 4 1.1.4. V ai trò của LOX trong động thực vật … ……………………….… 5 1.1.5. C ác chất ức chế LOX ………………………………………… …6 1.1.6. C ơ chế ức chế LOX….…………………………………………. … 7 1.2. C ác mô hình thử tác dụng ức chế LOX……………………… 7 1.2.1. N guyên lý của các mô hình thử tác dụng ức chế LOX………… 7 1.2.2. C ác mô hình thử tác dụng ức chế LOXdựa trên phương pháp đo độ hấp thụ………………………………………………………… 9 1.3. T ổng quan vềrutin và các dược liệu thực hiện nghiên cứu……… 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…… 18 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị trong nghiên cứu…….…………………… 18 2.2. Nội dung nghiên cứu… …………………………………………… 19 2.3. Phương pháp nghiên cứu……………………………………………. 20 2.3.1. Phương pháp chiết xuất dược liệu……………….………………… 20 2.3.2. Phương pháp lựa chọn điều kiện nghiên cứu……………….…… 20 2.3.3. Phương pháp khảo sát tương tác enzym – chất ức chế……….…… 23 2.3.4. Lựa chọn mô hình thử tác dụng ức chế LOX của dược liệu….…… 24 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN …….…… 27 3.1. Lựa chọn điều kiện nghiên cứu………………………… …………. 27 3.1.1. Xác định hoạt độ enzym …………………………….……….…… 27 3.1.2. Lựa chọn nồng độ enzym………… ……………… …… …… 27 3.1.3. Lựa chọn nồng độ cơ chất……………………………….…….… 29 3.1.4. Lựa chọn thời gian ủ………………………………….……… … 31 3.2. Khảo sát tương tác enzym – chất ức chế………………… …….…. 33 3.3. Thử tác dụng ức chế LOX của dược liệu theo mô hình 6 cuvet.……. 33 3.4. Bàn luận……………………………………………………….…… 35 3.4.1. Về mô hình thử tác dụng ức chế LOX bằng phương pháp đo quang ………………………………………………………………… 35 3.5.2. Về kết quả thử tác dụng ức chế LOX của dược liệu……………… 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…………………………………………… 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT AST Aspartate aminotransferase ALT Alanine aminotransferase DMSO Dimethylsulfoxid LOX Enzym Lipoxygenase LDL Low Density Lipoprotein % ƯC Phần trăm ức chế DANH MỤC CÁC BẢNG STT Số bảng Tên bảng Trang 1 1.1 Bố trí thí nghiệm đánh giá độ ức chế LOX của Cayman 11 2 2.1 Danh mục các mẫu nghiên cứu 18 3 3.1 Độ hấp thụ của mẫu thử so với mẫu trắng ở 5 nồng độ enzym 28 4 3.2 Độ hấp thụ của mẫu thử so với mẫu trắng ở 6 nồng độ cơ chất 30 5 3.3 Độ hấp thụ của mẫu thử so với mẫu trắng theo thời gian ủ 32 6 3.4 Kết quả khảo sát tương tác enzym – chất ức chế 33 7 3.5 Kết quả khảo sát tác dụng ức chế LOX của các mẫu nghiên cứu 34 8 3.6 Kết quả khảo sát tác dụng ức chế LOX của chè dây 35 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Số hình Tên hình Trang 1 1.1 Cơ chất thường gặp của LOX 3 2 1.2 Cấu trúc của 15-LOX ở thỏ 4 3 1.3 Cơ chế xúc tác của LOX 5 4 1.4 Phương pháp đo độ hấp thụ của hydroperoxid 9 5 1.5 Mô hình đĩa 96 giếng của Cayman 11 6 1.6 Cấu trúc hóa học của rutin 14 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong cơ thể người, enzym lipoxygenase (LOX) đóng vai trò quan trọng trong quá trình sinh tổng hợp các chất trung gian hóa học gây ra các phản ứng viêm, dị ứng và phản ứng miễn dịch [17]. Sản phẩm xúc tác của LOX liên quan nhiều bệnh như hen phế quản [23], xơ vữa động mạch [40], [48], ung thư [56], viêm loét đại tràng [21], viêm khớp, viêm cầu thận [17] và bệnh vẩy nến [32]. Các chất ức chế LOX đã được chứng minh có tác dụng ngăn cản nguy cơ ung thư [59] và đã được sử dụng để điều trị ung thư tuyến tụy [36], ung thư dạ dày [66], ung thư vú [25],ung thư gan di căn [28] và ung thư miệng [45], v.v. Một số chất ức chế LOX đã được sử dụng để điều trị hen mạn tính [52], phổi tắc nghẽn mạn tính, bệnh viêm đường hô hấp trên[15], viêm đại tràng [22], [51],viêm khớp gối [29]và bệnh da liễu [15]. Có nhiều chất ức chế LOX đã được nghiên cứu có nguồn gốc từ cây cỏ. Đây là một hướng nghiên cứu rất tiềm năng trong việc sàng lọc và phát triển các sản phẩm chữa bệnh theo cơ chế ức chế enzym LOX. Nhiều phương pháp đã được tìm ra để thử hoạt tính của LOX như: Sử dụng điện cực oxygen [14], gắn đồng vị phóng xạ 14 C [16] hay phương pháp đo màu [65], [38]. Những phương pháp trên yêu cầu các thiết bị chuyên dụng đồng thời lại phức tạp nên không phù hợp với sự sàng lọc nhanh nhiều mẫu. Phương pháp đo quang dựa trên cơ chế hình thành hydroxyperoxid (sản phẩm tạo thành trong phản ứng enzym – cơ chất) có nối đôi liên hợp hấp thụ ánh sáng mạnh nhất ởbước sóng 234nm là phương pháp đơn giản, nhanh chóng và tiết kiệm nhất để đánh giá hoạt tính của LOX [27]. Tuy nhiên, cho tới nay, chúng tôi chưa thu thập được tài liệu nào công bố tại Việt Nam về phương pháp này. Trên thế giới, cũng chưa có một mô hình thống nhất để thử tác dụng ức chế LOX bằng phương pháp đo quang, đồng thời các tài liệu đều [...]... độ enzym, cơ chất hay thời gian ủ phù hợp nhất Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiến hành đề tài nghiên cứu Nghiên cứu một số dược liệu có tác dụng ức chế enzym lipoxygenase với hai mục tiêu sau: Mục tiêu 1: Xây dựng mô hình thử tác dụng dụng ức chế enzym lipoxygenase của dịch chiết dược liệu bằng phương pháp đo quang Mục tiêu 2: Áp dụng mô hình vừa xây dựng để khảo sát tác dụng ức chế enzym lipoxygenase. .. Cơ chế ức chế LOX Enzym LOX được ức chế bằng 2 cách chính: (1) tạo phức chelat với ion ở vị trí hoạt động của enzym, (2) chuyển enzym từ dạng ferric (dạng có hoạt tính) thành dạng ferrous (bất hoạt) [35] Các chất ức chế LOX có thể hoạt động theo một trong 2 cách trên Các mô hình thử tác dụng ức chế LOX 1.2 1.2.1 Nguyên lý của các mô hình thử tác dụng ức chế LOX Các phương pháp thử hoạt tính của lipoxygenase. .. hơn ΔA trắng thì enzym kết hợp với chất ức chế tạo thành sản phẩm hấp thụ ánh sáng ở 234nm Nếu ΔA thử = ΔA trắng thì enzym kết hợp với chất ức chế không tạo thành sản phẩm hấp thụ ánh sáng ở 234nm 2.3.4 Lựa chọn mô hình thử tác dụng ức chế LOX của dược liệu Phương pháp thử tác dụng ức chế LOX của dược liệu là phương pháp đo quang Cắn dược liệu pha trong methanol là dung dịch chất ức chế cần thử Sau... khi khảo sát, hoạt độ enzym đã được xác định, lựa chọn được các điều kiện nghiên cứu bao gồm nồng độ enzym, nồng độ cơ chất, thời gian ủ và áp dụng cho các nghiên cứu sàng lọc tiếp theo 2.3.3 Phương pháp khảo sát tương tác enzym – chất ức chế Chúng tôi tiến hành khảo sát tương tác giữa enzym và các chất ức chế Các chất ức chế bao gồm rutin và cắn của 8 dược liệu pha trong methanol có nồng độ5 mg/ml.Phương... vật Tất cả các nghiên cứu thử hoạt tính của dịch chiết thực vật đều thực hiện ở 25oC Phần lớn các nghiên cứusử dụng máy quang phổ spectrophotometer UV – VIS với cuvet thạch anh và giống nhau ở quy trình thí nghiệm như sau:Phối hợp enzym với chất ức chế Sau 5 phút, thêm cơ chất Đo độ hấp thụ ở 234nm Công thức tính % ức chế của dịch chiết dược liệu so chất ức chế chuẩn: Các mô hình nghiên cứu khác nhau... cholin Mã đề có tác dụng lợi tiểu, chữa ho trừ đờm, ức chế một số vi trùng bệnh ngoài da, đắp lên mụn nhọt đỡ mung mủ và viêm tấy, chữa viêm khí quản, mắt đỏ đau, chữa cao huyết áp và tả lỵ 18 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị trong nghiên cứu 2.1.1 Nguyên vật liệu Danh mục các mẫu nghiên cứu được trình bày trong bảng 2.1 Bảng 2.1 Danh mục các mẫu nghiên cứu STT... Sự xúc tác quá trình oxy hóacác acid béo trong thực phẩm của LOX là một trong những nguyên nhân gây ôi thiu thực phẩmvà làm thay đổi hương vị, màu sắc của thực phẩm Nước chè đã được ứng dụng để bảo quản cá do các hợp chất polyphenol trong chè có tác dụng ức chế LOX tốt [61] 1.1.5 Các chất ức chế LOX Cho tới nay, các nhà khoa học đã tìm ranhiều chất có tác dụng ức chế LOX bao gồm cả các chất có nguồn... mô hình thử phù hợp với từng mẫu nghiên cứu - Thử tác dụng ức chế LOX của các mẫu nghiên cứu 20 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp chiết xuất dược liệu Cân 20g bột dược liệu bằng cân kĩ thuật Thấm ẩm bằng methanol, ngâm trong 300ml methanol trong 1 tuần Gạn lấy dịch chiết Cất thu hồi dung môi thu được cắn.Làm khô cắn, cắn pha trong methanol tạo dung dịch có nồng độ từ1mg/ml đến 10mg/ml 2.3.2... pha trong methanol là dung dịch chất ức chế cần thử Sau khi khảo sát được tương tác enzym – chất ức chế theo phương pháp đã trình bày trong mục 2.3.3, việc thử tác dụng ức chế LOX của dược liệu sẽ được lựa chọntừ một trong 2 mô hình sau: 2.3.4.1 Mô hình 4 cuvet Mô hình 4 cuvet được áp dụng nếu enzym kết hợp với chất ức chế không tạo thành sản phẩm hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 234nm 4 cuvet chứa: mẫu... dây có hàm lượng flavonoidvà tanin cao.Hai flavonoid của lá chè dây là myricetin và dihydromyricetin Tanin trong lá chè dây thuộc loại tannin catechic [12] 15 Chè dây có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, khu phong, lợi thấp, giảm đau, chống viêm[1].Chè dây có tác dụng tốt trong điều trị viêm loét dạ dày – hành tá tràng, có tác dụng kháng khuẩn khá và tác dụng chống oxy hóa mạnh [12] Cao khô chè dây có . HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THU TRANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM LIPOXYGENASE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC. tìm ra nồng độ enzym, cơ chất hay thời gian ủ phù hợp nhất. Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiến hành đề tài nghiên cứu Nghiên cứu một số dược liệu có tác dụng ức chế enzym lipoxygenase . mô hình thử tác dụng dụng ức chế enzym lipoxygenase của dịch chiết dược liệu bằng phương pháp đo quang. Mục tiêu 2: Áp dụng mô hình vừa xây dựng để khảo sát tác dụng ức chế enzym lipoxygenase

Ngày đăng: 28/07/2015, 22:14

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan