Nghiên cứu một số dược liệu có tác dụng ức chế enzym lipoxygenase

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THU TRANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM LIPOXYGENASE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THU TRANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM LIPOXYGENASE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hoàng Quỳnh Hoa Nơi thực hiện: Bộ mơn Thực vật Bộ mơn Vật lý – Hóa lý Trường Đại Học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Hoàng Quỳnh Hoa,người thầy tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn tới tập thể giảng viên, kĩ thuật viên Bộ môn Thực vật giúp đỡ, tạo điều kiện cho thời gian làm thực nghiệm Bộ môn Thực vật Tôi xin cảm ơn thầy cô Bộ môn Vật lý – Hóa lý tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình sử dụng máy đo quang phổ mơn Vật lý – Hóa lý Tơi xin cảm ơn toàn thể cán bộ, giảng viênTrường Đại học Dược Hà Nội cho kiến thức quý báu trình học tập trường Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn vơ hạn tới bố mẹ, người thân bạn bè – người ln động viên, chăm sóc giúp đỡ suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2013 Sinh viên Đào Thu Trang Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi MỤC LỤC Trang DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ … ……………………………………….……………… CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN………………… ………………………… 1.1 T quan enzym Lipoxygenase ….…………………………… Đị 1.1.1 nh nghĩa….………………………………………………… ……3 1.1.2 P hân loại enzym LOX ……………………………………… ……3 1.1.3 C chế phản ứngcủa enzym LOX chất……………….…… 1.1.4 V trò LOX động thực vật … ……………………….… 1.1.5 C ác chất ức chế LOX ………………………………………… …6 1.1.6 C chế ức chế LOX….………………………………………… … 1.2 C ác mơ hình thử tác dụng ức chế LOX……………………… 1.2.1 N gun lý mơ hình thử tác dụng ức chế LOX………… 1.2.2 C ác mô hình thử tác dụng ức chế LOXdựa phương pháp đo độ hấp thụ………………………………………………………… 1.3 T quan vềrutin dược liệu thực nghiên cứu……… 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…… 18 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu…….…………………… 18 2.2 Nội dung nghiên cứu… …………………………………………… 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu…………………………………………… 20 2.3.1 Phương pháp chiết xuất dược liệu……………….………………… 20 2.3.2 Phương pháp lựa chọn điều kiện nghiên cứu……………….…… 20 2.3.3 Phương pháp khảo sát tương tác enzym – chất ức chế……….…… 23 2.3.4 Lựa chọn mơ hình thử tác dụng ức chế LOX dược liệu….…… 24 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN …….…… 27 3.1 Lựa chọn điều kiện nghiên cứu………………………… ………… 27 3.1.1 Xác định hoạt độ enzym …………………………….……….…… 27 3.1.2 Lựa chọn nồng độ enzym………… ……………… …… …… 27 3.1.3 Lựa chọn nồng độ chất……………………………….…….… 29 3.1.4 Lựa chọn thời gian ủ………………………………….……… … 31 3.2 Khảo sát tương tác enzym – chất ức chế………………… …….… 33 3.3 Thử tác dụng ức chế LOX dược liệu theo mơ hình cuvet.…… 33 3.4 Bàn luận……………………………………………………….…… 35 3.4.1 Về mơ hình thử tác dụng ức chế LOX phương pháp đo quang ………………………………………………………………… 35 3.5.2 Về kết thử tác dụng ức chế LOX dược liệu……………… 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…………………………………………… 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT AST Aspartate aminotransferase ALT Alanine aminotransferase DMSO Dimethylsulfoxid LOX Enzym Lipoxygenase LDL Low Density Lipoprotein % ƯC Phần trăm ức chế DANH MỤC CÁC BẢNG STT Số bảng 1.1 2.1 3.1 3.2 3.3 3.4 Tên bảng Bố trí thí nghiệm đánh giá độ ức chế LOX Cayman Danh mục mẫu nghiên cứu Độ hấp thụ mẫu thử so với mẫu trắng nồng độ enzym Độ hấp thụ mẫu thử so với mẫu trắng nồng độ chất Độ hấp thụ mẫu thử so với mẫu trắng theo thời gian ủ Kết khảo sát tương tác enzym – chất ức chế Trang 11 18 28 30 32 33 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 3.5 3.6 Kết khảo sát tác dụng ức chế LOX mẫu nghiên cứu Kết khảo sát tác dụng ức chế LOX chè dây DANH MỤC CÁC HÌNH STT Số hình 1.1 Cơ chất thường gặp LOX 1.2 Cấu trúc 15-LOX thỏ 1.3 Cơ chế xúc tác LOX 1.4 1.5 Mơ hình đĩa 96 giếng Cayman 11 1.6 Cấu trúc hóa học rutin 14 Tên hình Phương pháp đo độ hấp thụ hydroperoxid Trang 34 35 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi ĐẶT VẤN ĐỀ Trong thể người, enzym lipoxygenase (LOX) đóng vai trò quan trọng q trình sinh tổng hợp chất trung gian hóa học gây phản ứng viêm, dị ứng phản ứng miễn dịch [17] Sản phẩm xúc tác LOX liên quan nhiều bệnh hen phế quản [23], xơ vữa động mạch [40], [48], ung thư [56], viêm loét đại tràng [21], viêm khớp, viêm cầu thận [17] bệnh vẩy nến [32] Các chất ức chế LOX chứng minh có tác dụng ngăn cản nguy ung thư [59] sử dụng để điều trị ung thư tuyến tụy [36], ung thư dày [66], ung thư vú [25],ung thư gan di [28] ung thư miệng [45], v.v Một số chất ức chế LOX sử dụng để điều trị hen mạn tính [52], phổi tắc nghẽn mạn tính, bệnh viêm đường hơ hấp trên[15], viêm đại tràng [22], [51],viêm khớp gối [29]và bệnh da liễu [15] Có nhiều chất ức chế LOX nghiên cứu có nguồn gốc từ cỏ Đây hướng nghiên cứu tiềm việc sàng lọc phát triển sản phẩm chữa bệnh theo chế ức chế enzym LOX Nhiều phương pháp tìm để thử hoạt tính LOX như: Sử dụng điện cực oxygen [14], gắn đồng vị phóng xạ 14C [16] hay phương pháp đo màu [65], [38] Những phương pháp yêu cầu thiết bị chuyên dụng đồng thời lại phức tạp nên không phù hợp với sàng lọc nhanh nhiều mẫu Phương pháp đo quang dựa chế hình thành hydroxyperoxid (sản phẩm tạo thành phản ứng enzym – chất) có nối đơi liên hợp hấp thụ ánh sáng mạnh ởbước sóng 234nm phương pháp đơn giản, nhanh chóng tiết kiệm để đánh giá hoạt tính LOX [27] Tuy nhiên, nay, chưa thu thập tài liệu công bố Việt Nam phương pháp Trên giới, chưa có mơ hình thống để thử tác dụng ức chế LOX phương pháp đo quang, đồng thời tài liệu 36 trọng nhằm kiểm tra lại hoạt độ enzym hoạt độ enzym thực tế không hoạt độ ghi nhãn sau trình vận chuyển, mở niêm phong, bảo quản Nhược điểm: Thiết bị sử dụng Máy quang phổ Spectrophotometer U – 1900 UV/VIS model 3J0 – 0003 khơng có chức cố định nhiệt độ 25oC buồng chứa cuvet Mặc dù phòng thí nghiệm điều hòa 25oC nhiên buồng chứa cuvet nhiệt độ khác 25oC trình máy vận hành Mẫu nghiên cứu khơng có chức chiếu hai tia sáng qua mẫu trắng mẫu thử lúc, mẫu trắng sau Autozero đo mẫu thử, chênh lệch thời gian đo mẫu khoảng giây - Về trình khảo sát điều kiện nghiên cứu: So sánh hoạt độ enzym xác địnhđược với hoạt độ ghi nhãn: Hoạt độ enzym ghi nhãn 221700U/mg Sau khảo sát lại cho kết hoạt độ 6862U/mg Như hoạt độ enzym thực tế thấp 32 lần so với hoạt độ ghi nhãn Điều q trình vận chuyển, thời gian sử dụng, bảo quản làm hoạt độ enzym giảm Về trình lựa chọn nồng độ enzym, có hai nồng độ lựa chọn D3=1258U/ml D4=629U/ml So với nồng độ D4, nồng độ D3, enzym hoạt động mạnh nên thời gian ủ ngắn Thời gian ủ ngắn xác thời gian ủ tăng lên, hoạt độ enzym dần giảm môi trường thay đổi (sản phẩm liên tục tạo ra) khơng môi trường tối ưu cho enzym hoạt động.Như lựa chọn nồng độ D3 kết nghiên cứu xác Tuy nhiên, nghiên cứu này, chất ức chế dịch chiết thực vật chưa phải chất tinh khiết, chọn nồng độ enzym cao (D3) lượng chất ức chế phải cần nhiều hơn, lượng dịch chiết nhiều dung dịch có màu, đo quang khơng ổn định bước sóng 234 nm Do nồng độ D4 lựa chọn Trong nghiên cứu sau này, Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 37 phân lập hoạt chất tinh khiết, áp dụng mơ hình với nồng độ enzym D3 Về trình lựa chọn nồng độ chất, theo lý thuyết, giữ nguyên nồng độ enzym tăng dần nồng độ chất tốc độ phản ứng tăng dần, đến nồng độ chất có bão hòa chất enzym, tức tiếp tục tăng nồng độ chấtthì tốc độ phản ứng tăng lên [11].Trong nghiên cứu này, tăng dần nồng độ chất từ C6 lên C5, C4, tốc độ phản ứng tăng dần đạt cực đại nồng độ C4 Khi bão hòa chất, tiếp tục tăng nồng độ chất, tốc độ phản ứng khơng khơng tăng,mà giảm Điều có thểdo nồng độ chất lớn so với nồng độ bão hòa enzym tạo nên môi trường không phù hợp cho enzym hoạt động Như việc lựa chọn nồng độ chất có ưu điểm: Thứ nhất, tiết kiệm chất (vì lựa chọn nồng độ chất thấp để ứng với nồng độ enzym lựa chọn thí nghiệm trạng thái bão hòa chất) Thứ hai, bão hòa chất lựa chọn nồng độ bão hòa chất mà mơi trường phản ứng tạo tối ưu cho enzym hoạt động Thứ ba, tránh việc nồng độ chất cao enzym bị bất hoạt chất ức chế lại trở nên có hoạt tính trở lại(Theo kết nghiên cứu khả ức chế LOX quercetin, nồng độ chất định, enzym bị ức chế bới quercetin, tăng nồng độ chất enzym lại có hoạt tính trở lại [62]) Khi đó, để ức chế enzym cần lượng dịch chiết nhiều hơn, dung dịch có màu, đo quang khơng ổn định bước sóng 234nm Các nghiên cứu sau khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất khả ức chế LOX chất ức chế - Về dung môi pH đệm: Do điều kiện nghiên cứu có hạn, chúng tơi khơng khảo sát mà cố định đệm sử dụng đệm borat pH9,0 Theo kết nghiên cứu khác, 38 có thêm loại đệm sử dụng đệm phosphat pH9,0, đệm Tris-HCl pH8,5 đệm Tris-buffer pH7,4 (xem tổng quan) Như nghiên cứu sau này, khảo sát để chọn loại đệm tối ưu hòa tan enzym chất để enzym có hoạt tính tối đa Đồng thời, dung mơi chiết xuất dược liệu dung mơi hòa tan cắn chúng tơi sử dụng methanol Theo kết nghiên cứu khác (xem tổng quan), dung mơi chiết xuất methanol, ethanol, ethyl acetat Còn dung mơi hòa tan cắn đệm borat pH9,0, đệm Tris-HCl pH8,5, đệm Tris-buffer pH7,4, DMSO, ethanol, methanol Như tiếp tục nghiên cứu sàng lọc dung môi để tìm dung mơi chiết xuất hòa tan cắn cho tỷ lệ phần trăm ức chế LOX lớn 3.4.2 Về kết quảthử tác dụng ức chế LOX dược liệu Cả dược liệu có tác dụng ức chế LOX Ở nồng độ dịch chiết, khả ức chế LOX dược liệu giảm dần theo thứ tự sau: Chè dây > dâu tằm > móng > kim ngân > cườm rụng > cúc áo > mã đề >xạ đen Chúng tơi chia dược liệu thành nhóm: - Nhóm 1: khả ức chế mạnh: Chè dây (Ampelopsis cantoniensis Planch.) - Nhóm 2: khả ức chế mạnh: Dâu tằm(Morus alba L.) - Nhóm 3: khả ức chế trung bình: Lá móng(Lawsonia inermis L.), kim ngân (Lonicera japonica Thunb.), cườm rụng (Ehretia acuminata P Br.) - Nhóm 4: khả ức chếyếu: cúc áo(Spilanthes acmella L Murr.), mã đề (Plantago asiatica L.), xạ đen (Ehretia asperula Zoll et Mor.) Dịch chiết chè dây có khả ức chế LOX mạnh, mạnh hoạt chất tinh khiết rutin Ở nồng độ 1mg/ml, dịch chiết chè dây ức chế 50% enzym nồng độ ≥ mg/ml ức chế 100% enzym Nồng độ mà khả ức chế lipoxygenase 50% dâu tằm 6,5mg/ml, móng Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 39 kim ngân 8mg/ml, cườm rụng 10mg/ml.Cúc áo, mã đề xạ đen nồng độ 10mg/ml khả ức chế LOX < 50% Khả ức chế LOX dược liệu phụ thuộc vào nồng độ Khi nồng độ dịch chiết tăng khả ức chế tăng, nhiên lại không tăng theo tỷ lệ định Như thực nghiên cứu sâu chè dây dâu tằm để phân lập hoạt chất có tác dụng ức chế LOX, thử tác dụng ức chế LOX phận khác để tìm phận có hàm lượng hoạt chất cao Bên cạnh đó, cần sàng lọc thêm nhiều dược liệu để chọn dược liệu có khả ức chế LOX mạnh trước tiến hành phân lập hoạt chất có tác dụng Sau phân lập hoạt chất, dung dịch hoạt chất pha thành nhiều nồng độ gần để từ vẽ đồ thị biểu diễn khả ức chế để xác định IC50, IC100 cách xác Chè dây có tác dụng ức chế LOX mạnh Các nghiên cứu khác (xem tổng quan) chứng minh chè dây có khả chống oxy hóa mạnh chống viêm tốt, tác dụng có ức chế LOX Như tác dụng ức chế LOX mạnh chè dây phù hợp với kết nghiên cứu khác Dâu tằm có khả ức chế LOX mạnh, điều nàu phù hợp với kết luận nghiên cứu trước dâu tằm có tác dụng chống oxy hóa mạnh (xem tổng quan) Xạ đen biết đến vị thuốc điều trị ung thư hiệu (xem tổng quan) Tuy nhiên số dược liệu trên, xạ đen có tác dụng ức chế LOX Như tác dụng điều trị ung thư tốt xạ đen chủ yếu chế khác.Các gốc tự tạo q trình peroxy hóa lipid nguyên nhân gây ung thư Có thể thực thêm nghiên cứu sau để thử khả khử gốc tự xạ đen 40 Cùng thuộc họ Vòi Voi (Boraginaceae) tác dụng ức chế LOX cườm rụng tốt hẳn xạ đen Ở nồng độ 5mg/ml, phần trăm ức chế Cườm Rụng 25,1% gấp khoảng lần xạ đen 8,0% Như chi lồi khác tác dụng ức chế LOX khác Cúc áo có tác dụng chống viêm hiệu quả, đặc biệt viêm Tuy nhiên khả ức chế LOX cúc áo yếu Như tác dụng chống viêm hiệu cúc áo chủ yếu chế khác ví dụ ức chế COX-2, cần tiến hành thêm nghiên cứu thử tác dụng ức chế COX-2 cúc áo Tác dụng ức chế LOX liên quan đến thành phần flavonoid tanin dược liệu Kết thử tác dụng ức chế LOX dược liệu cho thấy chè dây có tác dụng ức chế LOX mạnh phù hợp với việc chè dây có hàm lượng flavonoid tanin cao, dâu tằm có khả ức chế LOX mạnh phù hợp với việc dâu tằm có đến loại flavonoid tanin Trong thành phần móng, kim ngân, cườm rụng - dược liệu ức chế LOX trung bình có flavonoid tanin (xem tổng quan) Bên cạnh đó, Phần 1.1.5 tổng quan tổng hợp hoạt chất có nguồn gốc thiên nhiên chứng minh có tác dụng ức chế LOX Trong đó, flavonoid tanin chiếm đa số: Các flavonoid bao gồm rutin, quercetin, baicalein, esculetin, artemetin, casticin tanin epigallocatechin gallate Như vậy, nghiên cứu sau định lượng hàm lượng flavonoid tanin dược liệu để khẳng định xem tác dụng ức chế LOX có liên quan đến hàm lượng flavonoid tannin dược liệu hay không Nếu có, phân lập hoạt chất có tác dụng ức chế LOX theo chiều hướng phân lập thành phần flavonoid tanin dược liệu Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN - Đã xây dựng mơ hình thử tác dụng ức chế enzym LOX – 1bằng phương pháp đo quang với điều kiện nghiên cứu sau: Nồng độ enzym LOX – 629 U/ml, nồng độ chất acid linoleic 67 µM, thời gian ủ phút, đo quang bước sóng 234 nm, điều kiện nhiệt độ 25oC - Đã áp dụng mơ hình thử tác dụng ức chế enzym LOX phương pháp đo quang để thử tác dụng ức chế enzym LOX-1 mẫu nghiên cứu gồm: Rutin, chè dây (Ampelopsis cantoniensis Planch.), dâu tằm (Morus alba L.), móng (Lawsonia inermis L.), kim ngân (Lonicera japonica Thunb.), cườm rụng (Ehretia acuminata P Br.), cúc áo (Spilanthes acmella L Murr.), mã đề (Plantago asiatica L.), xạ đen (Ehretia asperula Zoll et Mor).Xác định khả ức chế LOX mẫu nghiên cứu nồng độ 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/ml Trong đó, nồng độ 5mg/ml, phần trăm ức chế LOX rutin 67,8%, chè dây 88,5%, dâu tằm 45,0%, móng 30,2%, kim ngân 38,3%, cườm rụng 25,1%, cúc áo 20,9%, mã đề 21,0%, xạ đen 8,0% 42 KIẾN NGHỊ - Sử dụng máy quang phổ UV – VIS chùm tia có chức kiểm soát nhiệt độ bên buồng đovới cuvet thạch anh máy quang phổ Elisa microplate reader với đĩa thạch anh để phép đo xác - Phân lập hoạt chất có tác dụng ức chế LOX chè dây dâu tằm, thử với phận khác để tìm phận có hàm lượng hoạt chất cao Bên cạnh đó, cần sàng lọc thêm nhiều thuốc để chọn thuốc có khả ức chế LOX mạnh - Sử dụng dung môi chiết khác (methanol, ethanol, ethyl acetat), dung mơi hòa tan cắn khác (đệm borat pH9,0, đệm Tris-HCl pH8,5, đệm Tris-buffer pH7,4, DMSO) loại đệm khác (đệm borat pH9,0, đệm Tris-HCl pH8,5, đệm Tris-buffer pH7,4), từ chọn dung mơi chiết, dung mơi hòa tan cắn đệm phù hợp để khả ức chế LOX mạnh Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt: Đỗ Huy Bích (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc, NXB khoa học kỹ thuật, tập I, tr.423 – 425 Đỗ Huy Bích (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc, NXB khoa học kỹ thuật, tập II Nguyễn Thị Bình (2008), Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học rễ móng (Lawsonia internis L.Họ Tử vi Lythcaceae), Luận án thạc sỹ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr.51 – 52 Nguyễn Minh Hằng (2006), “Ảnh hưởng phần chiết giàu flavonoid hoa kim ngân lên hoạt độ peroxidase máu người peroxy hóa lipid màng”,Tạp chí dược học, số 1, tr 18 – 22 Hoàng Quỳnh Hoa (2010), Nghiên cứu số thuốc chi cườm rụng (Ehretia P.Br.), họ Vòi Voi (Boraginaceae) miền Bắc Việt Nam, Luận án tiến sĩ dược học, tr.82 – 85 Lưu Thị Diễm Hồng, Nguyễn Xuân Thắng (2005), “Tác dụng chống viêm flavonoid kim ngân kết hợp với amylase”, Tạp chí dược học,số 3, tr – 11 Ninh Ngọc Bảo Kim (2012), Cây thuốc người Dao Ba Vì,Quỹ Châu Á – Trung tâm mơi trườngvà phát triển cộng đồng, tr 90 Đỗ Tất Lợi (2005), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB y học Trương Minh Lương, Nguyễn Thị Thu Hạnh (2009), “Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học thân kim ngân (Lonicera japonica Thunb.) Bắc Giang”, Tạp chí khoa học, 54(3), tr.80-85 10 Vũ Thị Ngọc Thanh, Phan Thị Vân Anh cs (2005), “Bước đầu nghiên cứu tác dụng flavonoid từ hoa kim ngân lên số số lipid máu”, Tạp chí dược học, số 1, tr.15 – 18 11 Nguyễn Xuân Thắng (2005), Hóa sinh học, NXB y học, tr 139-140 12 Phùng Thị Vinh (1995), Nghiên cứu thực vật, thành phần hóa học tác dụng sinh học chè dây (Ampelopsis cantoniensis Planch., Vitaceae), Luận án phó tiến sỹ khoa học y dược, Trường Đại học Dược Hà Nội Tiếng Anh: 13 Ali Shah S.M et al (2013), “Anti-lipoxygenase activity of some indigenous medical plants”, Journal of Medicinal Plants Reseach, 7(6), pp.219-222 14 Axelrol B et al.(1981), “Lipoxygenase from soybeans”, Methods in Enzymology, 71, pp.441-451 15 Berger W et al (2007), “Zileuton: clinical implications of 5lipoxygenase inhibition in severe airway disease”, International Journal of Clinical Practice, 61, pp.663-676 16 Berkeley H D., Galliard T (1976), “Measurement of lipoxygenase activity in crude and partially purified potato extracts”, Phytochemistry, 15, pp.1475-1479 17 Bhattacharjee Soumen (2007), “Reactive oxygen species and oxidative burst: roles in stress, senescence and signal transduction in plants”, Current science, 89(7), pp.1113 – 1121 18 Caroline Charlier, Catherine Michaux (2003), “Dual inhibition of cyclooxygenase-2 (COX-2) and 5-lipoxygenase (5-LOX) as a new strategy to Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi provide safer non-steroidal anti-inflammatory drugs”, European Journal of Medicinal Chemistry, 38, pp.645-659 19 Cayman Chemical Company (2011), Lipoxygenase Inhibitor Screening Assay Kit, Item No 760700, pp5 20 Choudhary M.I et al (2009), “Antiinflammatory and lipoxygenase inhibitory compounds from Vitex agnus castus”, Phytotherapy Reseach, 23(9), pp.1336-9 21 Cole A.T et al (1996), “Mucosal factors inducing neutrophil movement in ulcerative colitis: the role of interleukin and leukotriene B4, Gut, 39, pp.248-254 22 Cuzzocrea S et al (2005), “5-lipoxygenase modulates colitis through the regulation of adhesion molecule expression and neutrophil migration”, Laboratory Investigation, 85, pp.808-822 23 Drazen J.M et al (1994), “Role of cysteinyl leukotrienes in spontaneous asthmatic responses”, Advances in Prostaglandin Thromboxane and leukotriene research, 22, pp.251-262 24 Fischer A M et al (1999), “Protein dynamics activity and cellular localization of soybean lipoxygenases indicate distinct functional roles for individual isoforms”, ThePlant Journal, 19, pp.543-554 25 Flavin D.F (2007), “A lipoxygenase inhibitor in breast cancer brain metastaces”, Journal of Neuro-Oncology, 82(1), pp.91-93 26 Gardner (1991), “Recent investigations into the lipoxygenase pathway in plants”, Biochimica Biophysica Acta, 1084 (3), pp.221-239 27 Gordon E Anthon, Diane M Barret (2001), “Colorimetric Method for the Determination of lipoxygenase Activity”, Journal of agricultural and food chemistry, 49(1), pp.32 – 37 28 Gregor J.I et al (2005), “Effects of selective COX-2 and 5-LOX inhibition on prostaglandin and leukotriene systhesis in ductal pancreatic cancer in Syrian hamster”, Prostaglandins Leukot Essent Fatty acids, 73, pp.89-97 29 Gupta I et al (2001), “Effects of gum resin of Boswellia serrata in patients with chronic colitis”, Planta Medica, 67(5), pp.391-5 30 Ha T.J et al (2010), “Inhibition mode of soybean lipoxygenase-1 by quercetin”, Chemistry and Biodiversity, 7(8), pp.1893-1903 31 Ho C.T et al (1992), “Antioxidative effect of polyphenol extract prepared from various Chinese teas”, Preventive Medicine, 21, pp.520-525 32 Iversen L., Kragballe K., Ziboh V (1997), “Significance of leukotriene A4 hydrolase in the pathogenesis of psoriasis”, Skin Pharmacology, 10, pp.169-177 33 Kamalakkannan N., Prince P.S (2006), “Antihyperglycaemic and antioxidant effect of rutin, a polyphenolic flavonoid, in streptozotocininduced diabetic wistar rats”, Basic and Clinical Phamacology, 98 (1), pp 97103 34 Kamalakkannan N., Prince P.S (2006), “Protective effect of rutin on lipids, lipoproteins, lipid metabolizing enzyms and glycoproteins in streptozotocin-induced diabetic rats”, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 58 (10), pp 1373-1383 35 Kazuo Tsuijmoto et al (2007), “Anacardic Acids and Ferric Ion Chelation”, Journal of biosciences 62c, pp 710 –716 36 Kennedy T.J et al (2003), “Lipoxygenase inhibitors for the treatment of pancreatic cancer”, Expert Review of Anticancer Therapy, 3(4), pp.525-36 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 37 Kim G.N and Jang H.D (2011), “Flavonol content in the water extract of the mulberry (Morus alba L.) leaf and their antioxidant capacities”, Journal of food science 76, pp C869 – 73 38 Koch R.B et al (1958), “Linoleic acid and trilinolein substrates for soybean lipoxydases”, Archives of Biochemistry and Biophysics, 78, pp.165179 39 Koshihara Y et al (1983), “Selective inhibition of 5-lipoxygenase by natural compounds isolated from Chinese plant, Artemisia rubripes Nakai”, FEBS Letters, 158(1), pp.41-44 40 Kris-Etherton P.M., Keen C L (2002), “Evidence that the Antioxidant Flavonoids in Tea and Cocoa are Beneficial for Cardiovascular Health”, Current Opinion in Lipidology, 13(1), pp.41-9 41 Kumaraswamy M.V and Satish S (2008), “Antioxidant and AntiLipoxygenase Activity of Thespesia lampas Dalz & Gibs”, Advances in Biological Reseach, 2(3-4), pp.56-59 42 Kumaraswamy M.V et al (2010), “Antioxidant and anti-inflammatory activity of isolated phytoconstituent from Woodfordia fructicosa”, Journal of Pharmacy Reseach, 3(7), pp.1492-1495 43 Laughton M.J , Halliwell B., Evans P.J (1989), “Antioxidant and prooxidant antions of the plant phenolics quercetin, gossypol and myricetin effects on lipid proxidand, hydroxyl radical generation and bleomycin depentdent damage to DNA”, Biochemical Pharmacology, 38(17), pp 457 – 63 44 Lehnigk et al (1998), “Effects of a 5-lipoxygenase inhibitor, ABT-761, on exercise-induced bronchoconstriction and urinary LTE4 in asthmatic patients”, The European Respiratory Journal, 11(3), pp.617-623 45 Li N et al (2005), “Overexpression of 5-lipoxygenase and cyclooxygenase in hamster and human oral cancer and chemopreventive effects of zileuton and celecoxib”, Clinical Cancer Reseach, 11, pp.20892096 46 Lucia Rackova et al (2007), “Free radical scavenging activity and lipoxygenase inhibition of Mahonia aquifolium extract and isoquinoline alkaloids”, Journal of Inflammation, 4(15), pp.1186-1476 47 Melan M A et al (1993), “An Arabidopsis thaliana lipoxygenase gene can be induced by pathogens, abscisic acid, and methyl jasmonate, Plant Physiology, 101, pp.441-450 48 Natarajan R and Nadler J.L (2004), “Lipid inflammatory mediators in diabetic vascular disease”, Arterioscler Thrombosis and Vascular Biology, 24, pp.1542-1548 49 Porta H et al (1999), “Analysis of lipoxygenase mRNA accumulation in the common bean (Phaseolus vulgaris L.) during development and under stress conditions”, Plant Physiology, 40(8), pp.850-858 50 Raghavenra H et al (2006), “Eugenol-The active principle from cloves inhibits 5-lipoxygenase activity and leukotriene-C4 in human PMNL cells”, Prostaglandins Leukot Essent Fatty acids, 74(1), pp.23-27 51 Rask – Madsen J et al (1992), “5-Lipoxygenase inhibitors for the treatment of inflammatory bowel disease”, Special Conference Issue, C37-46 52 Rossi A et al (2010), “The 5-lipoxygenase inhibitor, zileuton, suppresses prostaglandin biosynthesis by inhibition of arachidonic acid release in macrophages”, British Journal of Pharmacology, 161(3), pp.555570 53 Sekhar Rao K.C et al (2002), “A lipoxygenase inhibitor from Aspergillus niger”, Applied Microbiology and Biotechnology, 58, pp.539-542 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 54 Sekiya K and Okuda H (1982), “Selective inhibition of platelet lipoxygenase by baicalein” , Biochemical and Biophysical Reseach Communications”, 150 (3), pp.1090-1095 55 Selloum L et al (2003), “Anti-inflammatory effect of rutin on rat paw oedema, and on neutrophils chemotaxis and degranulation”, Experimental and Toxicologic Pathology, 54 (4), pp 313-318 56 Shureiqi I and Lippman S.M (2001), “Lipoxygenase modulation to reverse carcinogenesis”, Cancer research, 61, pp.6307-6312 57 Sigma – Aldrich company (1997), Enzymatic Assay of Lipoxydase, EC 1.13.11.12, SPLINo 01 58 Skrzypczak – Jankun et al.(2003), “Inhibition of lipoxygenase by (-)epigallocatechin gallate: X-ray analysis at 2.1 A reveals degradation of EGCG and shows soybeans LOX-3 complex with EGC instead”, International Journal of Molecular Medicine, 12, pp.415-420 59 Steele V.E et al (1999), “Lipoxygenase inhibitors as Potential Cancer Chemopreventives”, Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention, 8(5), pp.467-83 60 Uma Sankar Akula, Bharti Odhav (2008), “In vitro 5-Lipoxygenase inhibition of polyphenolic antioxidants from undomesticated plants of South Africa”, Journal of Medicinal Plants Reseach, 2(9), pp.207-212 61 Veronica Sanda Chedea, Mitsuo Jisaka (2011), “Inhibition of Soybean Lipoxygenase – Structural and Activity Models for the Lipoxygenase Isoenzymes Family”, In Tech, IBSN 978-953-307-533-4, pp.110-130 62 Veronica Sanda Chedea et al (2012), “Lipoxygenase – Quercetin Interaction: A Kinetic Study Through Biochemical and Spectroscopy Approaches”, In Tech, IBSN 978-953-51-0249-6, pp.152-178 63 Vicas S.I et al (2011), “Inhibitory effects of isoflavones on soybean lipoxygenase-1 activity”, Journal of Food Biochemistry, 35, pp 613-627 64 West M et al (2004), “Nordihydroguaiaretic acid, an inhibitor of lipoxygenase, also inhibits cytochrome P-450-mediated monoxygenase activity in rat epidermal and hepatic microsomes”, Journal of Neurochemistry, 91(1), pp.133-143 65 Williams D.C et al (1986), “Blanching of vegetables for freezing: which indicator enzyme to choose”, Food technology, 40(6), pp.130-140 66 Wong B C et al (2001), “Lipoxygenase inhibition induced apoptosis in human gastric cancer cells”, Carcinogenesis, 22(9), pp.1349-54 ... tài nghiên cứu Nghiên cứu số dược liệu có tác dụng ức chế enzym lipoxygenase với hai mục tiêu sau: Mục tiêu 1: Xây dựng mơ hình thử tác dụng dụng ức chế enzym lipoxygenase dịch chiết dược liệu. .. mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THU TRANG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ DƯỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM LIPOXYGENASE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hoàng Quỳnh... sát tương tác enzym – chất ức chế ……………… …….… 33 3.3 Thử tác dụng ức chế LOX dược liệu theo mơ hình cuvet.…… 33 3.4 Bàn luận……………………………………………………….…… 35 3.4.1 Về mơ hình thử tác dụng ức chế LOX