Nghiên cứu sàng lọc một số dược liệu hướng tác dụng chống oxy hoá, bảo vệ tế bào gan

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HUỲNH THỊ NHƯ THUÝ NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC MỘT SỐ DƯỢC LIỆU HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HOÁ, BẢO VỆ TẾ BÀO GAN Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc – Độc chất Mã ngành: 60720410 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành Phố Hồ Chí Minh - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HUỲNH THỊ NHƯ THUÝ NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC MỘT SỐ DƯỢC LIỆU HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HOÁ, BẢO VỆ TẾ BÀO GAN Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc – Độc chất Mã ngành: 60720410 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS DS NGUYỄN HỮU LẠC THỦY Thành Phố Hồ Chí Minh - 2017 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết quả, số liệu trình bày luận văn trung thực chưa có cơng trình công bố Huỳnh Thị Như Thúy Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 iii Luận văn thạc sĩ Dược học – Năm học: 2015 – 2017 NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC MỘT SỐ DƯỢC LIỆU HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA, BẢO VỆ TẾ BÀO GAN Huỳnh Thị Như Thúy Thầy hướng dẫn: TS Nguyễn Hữu Lạc Thủy Mở đầu Hiện nay, hướng phát triển chứng minh tác dụng cao toàn phần, cao phân đoạn hoạt chất tinh khiết dược liệu mơ hình thử nghiệm với trang thiết bị đại Với phương pháp đề tài nhằm góp phần tìm kiếm thêm dược liệu, hợp chất có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ tế bào gan Đối tượng phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu: 50 mẫu dược liệu hướng tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan thu mua nhà thuốc y học cổ truyền quận 5, Tp Hồ Chí Minh Phương pháp: Sàng lọc tác dụng chống oxy hóa in vitro 50 dược liệu phương pháp đo quang phổ với phép thử DPPH Folin – Ciocalteu Thử tác dụng bảo vệ gan in vivo theo hướng chống oxy hóa mơ hình tổn thương gan cyclophosphamid Khảo sát thành phần hóa học mẫu dược liệu tiềm Kết Chọn 5/50 dược liệu có hoạt tính chống oxy hóa in vitro tiềm nhất: Cốt khí củ, Hậu phác, Hịe, Kim ngân hoa, Trâm mốc Cao chiết cồn 70% Cốt khí củ có IC50 thấp (30,67 μg/ml), hàm lượng polyphenol cao (10,09%) thể tác dụng bảo vệ gan theo hướng chống oxy hóa liều 0,9 1,8 g/kg (tương đương 6,11 g 12,22 g dược liệu khô/kg) 10 kg bột Cốt khí củ sau chiết ngấm kiệt với cồn 70% thu 1.8 kg vao cồn 70% Cao lắc phân bố với dung môi: n-hexan, cloroform, ethyl acetat Từ 30 g ethyl acetat thu 1170 mg PC-1 Bằng phương pháp phổ nghiệm chứng minh PC-1 emodin với IC50 = 112,95 μg/ml Kết luận Cao cồn 70% Cốt khí củ cao chiết có tác dụng chống oxy hóa tốt 50 mẫu nguyên liệu (tương đương 200 mẫu cao), sở cho nghiên cứu thành phần hóa học định hướng chống oxy hóa, bảo vệ gan Từ khóa: cốt khí củ, sàng lọc, DPPH, Folin – Ciocalteu, tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan, cyclophosphamid Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 iv THESIS OF MASTER OF PHARMACY, COURSE 2015-2017 Thesis title: “Screening of herbal plants on antioxidant activities, hepatoprotective effect” Huynh Thi Nhu Thuy Supervisor: Dr Nguyen Huu Lac Thuy Introduction Demonstrating the effect of extracts, pure subtances by test methods and modern equipments is currently a development trend The aim of the present study was to indicate more antioxidant, hepatoprotective herbal plants, constituents Materials and methods Materials: 50 antioxidant, hepatoprotective herbal plants were perchased in Pharmacy of traditional medicines, in District 5, Ho Chi Minh city Methods: UV–visible spectroscopy method with DPPH, Folin-Ciocalteu for screening of 50 herbal plants on antioxidant activities In vivo, hepatoprotective effect was evaluated in mice induced liver damage by cyclophosphamid Pharmacognostic study on the strongest antioxidant activity herbal plant Results: The best results were obtained for antioxidant, hepatoprotective herbal plants: Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc Polygonaceae, Magnolia officinalis Rehd et Wils Magnoliaceae, Styphnolobium japonicum L Fabaceae, Lonicera japonica Thunb Caprifoliaceae, Syzygium cumini L Myrtaceae Ethanol 70% extract of Polygonum cuspidatum has the lowest IC50 (30,67 μg/ml), the highest polyphenol content (10,09%) and hepatoprotective effect at dose 0,9; 1,8 g/kg (is equivalent to 6,11 g; 12,22 g dried herb/kg) The powder of Polugonum cuspidatum roots (10 kg) was percolates with ethanol 70%.The percolates were combined and concentrates under reduced pressure to give an alcohol extract (1,8 kg) The alcohol extract was partitioned with n-hexan, chloroform and ethyl acetat From 30 g ethyl acetat extract, 1170 mg PC-1 was obtained Based on data of UV, MS, NMR spectra and previously reported data, structures of PC-1 was determined to be emodin with IC50 112,95 μg/ml Conclusion The highest antioxidant activities, hepatoprotective effect is ethanol 70% extract of Polygonum cuspidatum It is the basis for pharmacognostic study on antioxidant activity Key words: Polygonum cuspidatum, screening, DPPH, Folin – Ciocalteu, antioxidant activity, hepatoprotective effect, cyclophosphamid.MỤC LỤC Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 v MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC SƠ ĐỒ x DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT xi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÁC DƯỢC LIỆU ĐỊNH HƯỚNG CHỐNG OXY HOÁ, BẢO VỆ GAN .2 1.1.1 Cốt khí củ 1.1.2 Hậu phác 1.1.3 Hòe 1.1.4 Kim ngân hoa 10 1.2 TỔNG QUAN VỀ CHẤT CHỐNG OXY HÓA .12 1.2.1 Gốc tự 12 1.2.2 Chất chống oxy hóa 14 1.2.3 Bệnh lý liên quan đến gốc tự 15 1.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP SÀNG LỌC DƯỢC LIỆU CĨ KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HỐ IN VITRO 16 1.4.1 Phương pháp DPPH [32] 17 1.4.2 Phương pháp đo MDA 18 1.4.3 Phương pháp đánh giá khả antioxidant với hệ thống β-caroten- acid linoleic 19 1.4.4 Phương pháp phân tích FRAP 19 1.4.5 Phương pháp ức chế enzym xanthin oxidase 20 1.5 PHƯƠNG PHÁP THỬ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN IN VIVO 20 Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 vi 1.5.1 Mơ hình chuột nhắt trắng bị gây nhiễm độc APH (adiabaticallyadjusting principal-axes hyperspherical) 20 1.5.2 Mơ hình chuột nhắt trắng bị nhiễm độc CCl4 20 1.5.3 Mơ hình chuột bị gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamid 20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 22 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.2.1 Sàng lọc in vitro tác dụng chống oxy hoá 25 2.2.2 Xác định IC50 mẫu thử vitamin C 27 2.2.3 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng polyphenol 28 2.2.4 Thử tác dụng sinh học mơ hình in vivo 31 2.2.5 Khảo sát thành phần hoá học mẫu dược liệu theo định hướng kết sàng lọc có tác dụng mạnh 33 CHƯƠNG KẾT QUẢ 34 3.1 SÀNG LỌC IN VITRO TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA 34 3.1.1 Kết chiết xuất cao chiết thử nghiệm DPPH 34 3.1.2 Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa phép thử DPPH 34 3.1.3 Khảo sát động học phản ứng 35 3.1.4 Kết xác định hoạt tính chống oxy hóa của cao chiết cồn toàn phần cao phân đoạn: 35 3.1.5 Kết xác định IC50 cao cồn toàn phần vitamin C 37 3.2 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG POLYPHENOL TRONG CAO CHIẾT CỐT KHÍ CỦ 39 3.2.1 Định tính polyphenol cao tồn phần phản ứng hóa học 40 3.2.2 Kết khảo sát quy trình định lượng polyphenol phương pháp quang phổ với thuốc thử Folin–Ciocalteu 40 3.2.3 Thẩm định quy trình 43 Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 vii 3.3 THỬ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CAO CỒN 70% CỐT KHÍ CỦ TRÊN MƠ HÌNH IN VIVO 49 3.3.1 Kết xác định độc tính cấp đường uống cao cồn 70% Cốt khí củ 49 3.3.2 Kết khảo sát tác dụng bảo vệ gan theo hướng chống oxy hóa 50 3.4 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HĨA TỪ CỐT KHÍ CỦ .52 3.4.1 Quy trình chiết xuất, tách phân đoạn cao Cốt khí củ 52 3.4.2 Phân lập hợp chất hướng tác dụng chống oxy hóa từ cao ethyl acetat Cốt khí củ 53 3.4.3 Xác định độ tinh khiết 55 3.4.4 Xác định cấu trúc chất phân lập 57 3.4.5 Xác định IC50 emodin 59 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 viii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 50 mẫu dược liệu nghiên cứu 22 Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm 31 Bảng 3.1 Hiệu suất chiết cao chiết thử nghiệm DPPH 34 Bảng 3.2 Kết sàng lọc hoạt tính chống oxy hố phân đoạn 36 Bảng 3.3 Kết xác định IC50 cao cồn toàn phần vitamin C: .37 Bảng 3.4 Kết độ hấp thu dung dịch đối chiếu 41 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ ổn định dung dịch đối chiếu A với TT FC 42 Bảng 3.6.Kết khảo sát độ hấp thu dung dịch thử T .42 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ ổn định dung dịch thử T với thuốc thử FC .42 Bảng 3.8 Kết thẩm định độ đặc hiệu 44 Bảng 3.9 Khảo sát khoảng tuyến tính dung dịch đối chiếu A 46 Bảng 3.10 Kết độ lặp lại 47 Bảng 3.11 Kết độ .47 Bảng 3.12 Kết thẩm định quy trình 48 Bảng 3.13 Kết định lượng polyphenol cao toàn phần .48 Bảng 3.14 Kết độc tính cấp cao cồn 70% Cốt khí củ .49 Bảng 3.15 Hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) gan chuột .50 Bảng 3.16 So sánh liệu phổ NMR PC-1 emodin 58 Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 ix DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Thân rễ Cốt khí củ (Nguồn: trung tâm dược liệu Búp xanh) .3 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học hợp chất quinonoid Hình 1.3 Cấu trúc hóa học vài hợp chất stilbenoid Hình 1.4 Hình phản ứng DPPH 17 Hình 1.5 Phản ứng FRAP 20 Hình 3.1 Phổ UV dung dịch thuốc thử DPPH (mẫu đối chứng) 34 Hình 3.2 Khảo sát độ ổn định dung dịch thử nghiệm 35 Hình 3.3 Đồ thị quan hệ nồng độ hoạt tính chống oxy hóa số mẫu dược liệu Cốt khí củ, Hậu phác; Trâm mốc; Hòe; Kim ngân hoa chất đối chiếu vitamin C 38 Hình 3.4 Biểu đồ so sánh IC50 cao toàn phần vitamin C .39 Hình 3.5 Phản ứng hóa học hợp chất polyphenol với sắt III clorid 3% 40 Hình 3.6 Phổ UV dung dịch đối chiếu A dung dịch thử T với FC .40 Hình 3.7 Hình minh họa thử nghiệm xác định C (µ/ml) dd đối chiếu A TT FC 41 Hình 3.8 Hình minh họa khảo sát độ đặc hiệu 44 Hình 3.9 Phổ UV mẫu thử khảo sát độ đặc hiệu .45 Hình 3.10.Kết khảo sát khoảng tuyến tính 45 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ tuyến tính nồng độ độ hấp thu 46 Hình 3.12 Khảo sát độ lặp lại 46 Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn nồng độ MDA nhóm .50 Hình 3.14 Sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao cồn 70% Cốt khí củ 53 Hình 3.15 Sắc ký lớp mỏng dịch (A), cắn (B), hệ dung môi CHCl3 – MeOH (12:1) 53 Hình 3.16 Sắc ký đồ tinh chế PC-1 54 Hình 3.17 Sắc ký đồ PC-1 khai triển hệ dung môi khác .55 Hình 3.18 Tinh thể PC-1 55 Hình 3.19 SKĐ xác định độ tinh khiết PC-1 HPLC 56 Hình 3.20 Phổ UV-Vis PC-1 57 Huỳnh Thị Như Thuý Luận văn thạc sĩ Dược học - 2017 21 Denisov E.T., Afanas’ev I.B (2005), “Oxidation and antioxidant in Organic chemistry and Biology”, Taylor and Francis, pp.835-884 22 Forouzan Faghihzadeh, Azita Hekmatdoost (2015), “Resveratrol and liver: A systematic review”, J Res Med Sci, 20(8), pp 797–810 23 Giasson BI., Ischiropoulos H et al (2002), “The relationship between oxidative/nitrative stress and pathological inclusions in Alzheimer’s and Parkinson’s disease”, Free Radical Biology & Medicine, 32 (12), pp 1264-1275 24 Halli B (1996), “Oxidative Stress, Nutrition and health Experimental Strategies for Opmization of Nutritional Antioxidant Intake in humans”, Journal of Biological Chemistry, pp 57-74 25 ICH Harmonised tripartite guideline (2005), Validation of analytical procedures: text and methodology, pp 1–13 26 Jayaprakasha G.K., Singh R.P and Sakariah K.K (2001), “Antioxidant activity of grape seed (Vitis vinifera) extracts on peroxidation models in vitro, Food chemistry, 73, pp.285-290 27 Jui-Lung Shen, Kee-Ming Man, Yung-Hsiang Chen (2010), “Honokiol and Magnolol as Multifunctional Antioxidative Molecules for Dermatologic Disorders”, Molecules, pp 6452 – 6465 28 LiShuang Lv, XiaoHong Gu, Jian Tang, Chi-Tang Ho (2007), “Antioxidant activity of stilbene glycosid from Polygonum multiflorum Thunb in vivo”, Food Chemistry, 104(4), pp 1678-1681 29 Mai Thanh Thi Nguyen, Suresh Awale, Yasuhiro Tezuka, Quan Le Tran, Hiroshi Watanabe and Shigetoshi Kadota (2004), “Xanthine oxidase inhibitory activity of Vietnamese medicinal plants”, Biological & Pharmaceutical Bulletin 27, pp.1414- 1421 30 Na Li, Jia-Bo Wang, Yan-Ling Zhao, Ting-Guo Kang (2017), “Liver Protective and Reactive Oxygen Species Scavenging Effects of Emodin in Lipopolysaccharide/Bacillus Calmette Guerin-injured Mice by Optical Molecular Imaging”, International Journal of Pharmacology, 13,pp 175-182 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 31 Ndhlala A R., Moyo M., et al (2010), “Natural antioxidants: fascinating or mythical biomolecules?”, Molecules, 15(10), pp 6905-6930 32 Neuza Paixa, Rosa Perestrelo, Jose C Marques, Jose S Camara (2007), “Relationship between antioxidant capacity and total phenolic content of red, rose´ and white wines”, Food Chemistry, pp 204 - 214 33 Niki E (2010), “Assessment of antioxidant capacity in vitro and in vivo”, Free Radical Biology and Medicine, 49(4), pp 503-515 34 Noro T., Oda Y., Miyase T., Ueno A., Fukushima S (1983), “Inhibitors of xanthine oxidase from the flowers and buds of Daphne genkwa”, Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 31, pp 3984-3987 35 Okawa H., Oshisi N., Yagi K (1979), “Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituris acid reaction”, Anal Biochem, 95, pp 351-358 36 Pham-Huy, L A., et al (2008), “Free radicals, antioxidants in disease and health”, Int J Biomed Sci, 4(2), 89-96 37 Pharmaceutical Press, Martindal: The complete Drug Reference, 36 Edition (2009), pp 702 38 Richard S Bruno, Joshua A Bomser, Mario G Ferruzzi (2014), “Chapter – Antioxidant Capacity of Green Tea (Camellia sinensis)”, Processing and Impact on Antioxidants in Beverages, pp 33–39 39 Shih-Hua Fang, Yerra Koteswara Rao, Yew-Min Tzeng (2008), “Anti-oxidant and inflammatory mediator's growth inhibitory effects of compounds isolated from Phyllanthus urinaria”, Journal of Ethnopharmacology 116( 2), pp 333-340 40 Shu-Chun Hsu a, Jing-Gung Chung (2012), “Anticancer potential of emodin”, Bio Medicine 2, pp 108-116 41 Wei Peng, Rongxin Qin, Xiaoli Li, Hong Zhou (2013), “Botany, phytochemistry, pharmacology, and potential application of Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.: A review”, Journal of Ethnopharmacology, 148, pp 729–745 42 Xin Chu, Ailing Sun, Renmin Liu (2005), “Preparative isolation and purification of five compounds from the Chinese medicinal herb Polygonum cuspidatum Sieb Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn et Zucc by highspeed counter-current chromatography”, J Chromatography A, 1097, pp 33-39 43 Yamamoto, H., & Ogawa, T (2002), “Antimicrobial activity of perilla seed polyphenols against oral pathogenic bacteria”, Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 66(4), pp 921-924 44 Yingming Pan, Xiaopu Zhang, Hengshan Wang (2007), “Antioxidant potential of ethanolic extract of Polygonum cuspidatum and application in peanut oil”, Food Chemistry, 105, pp 1518–1524 45 Yvonne V.Y., Dawn E.B., Meshell F.C (2005), “Antioxidant activity of Dulse extract evaluated in vitro”, Food chemistry, 91, pp 485-494 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC PHỤ LỤC Kết sàng lọc tác dụng chống oxy hố cao tồn phần Tên mẫu dược liệu Cao cồn 96% Cao cồn 70% Cao cồn 50% Cao cồn 25% A S% A S% A S% A S% Cốt khí củ 0,1477 78,9 0,0343 95,1 0,0511 92,7 0,0728 89,6 Trà 0,1589 77,3 0,0581 91,7 0,0532 92,4 0,0434 93,8 Hậu phác 0,1919 72,6 0,0553 92,1 0,2962 57,7 0,3081 56 Hòe 0,2416 65,5 0,1400 80 0,2094 70,1 0,1568 77,6 Diệp hạ châu 0,3452 50,7 0,0707 89,9 0,0651 90,7 0,3774 46,1 Trâm mốc 0,1708 75,6 0,0931 86,7 0,2220 68,3 0,1828 73,9 0,1288 81,6 0,1751 75 0,0574 91,8 0,0693 90,1 Kim ngân hoa Bột nghệ 0,3998 42,9 0,1940 72,3 0,1358 80,6 0,5111 27 Trứng cá 0,5882 16 0,3725 46,8 0,0532 92,4 0,1687 75,9 10 Bồ công anh 0,6764 3,4 0,4047 42,2 0,3396 51,5 0,5791 17,3 11 Muồng trâu 0,4502 35,7 0,4152 40,7 0,4614 34,1 0,7002 12 Râu mèo 0,4236 39,5 0,4740 32,3 0,3445 50,8 0,5721 18,3 13 Dâm hoắc hương Vỏ ổi 0,5069 27,6 0,4873 30,4 0,4824 31,1 0,4922 29,7 0,5427 22,5 0,4901 30 0,6071 13,3 0,5917 15,5 0,5581 20,3 0,5202 25,7 0,4789 31,6 0,5294 24,4 0,4663 33,4 0,5230 25,3 0,4719 32,6 0,4894 30,1 17 Ngũ gia bì chân chim Kim tiền thảo (lá ) Hồng hoa 0,3886 44,5 0,5301 24,3 0,4754 32,1 0,5434 22,4 18 Nhân trần 0,6134 12,4 0,5413 22,7 0,1701 75,7 0,6841 2,3 19 Rau má 0,5209 25,6 0,5420 22,6 0,6113 12,7 0,5209 25,6 20 Sài đất 0,4425 36,8 0,5434 22,4 0,3928 43,9 0,4593 34,4 21 Thanh bì 0,4859 30,6 0,5511 21,3 0,5160 26,3 0,5188 25,9 22 Xà lách xoong 0,5763 17,7 0,5518 21,2 0,6456 7,8 0,6554 6,4 23 Dâu tằm (thân) 0,5441 22,3 0,5588 20,2 0,5826 16,8 0,6057 13,5 14 15 16 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 24 Bạch hoa xà 0,4607 34,2 0,5574 20,4 0,4831 31 0,5153 26,4 25 Dâu tằm 0,6987 0,2 0,5672 19 0,5322 24 0,6547 6,5 26 Mạn kinh tử 0,5622 19,7 0,5749 17,9 0,5153 26,4 0,5917 15,5 27 0,5916 15,5 0,5770 17,6 0,5153 26,4 0,5385 23,1 0,6063 13,4 0,5784 17,4 0,5434 22,4 0,5973 14,7 29 Kim tiền thảo (thân ) Cà gai leo (thân) Actiso 0,5965 14,8 0,5840 16,6 0,4873 30,4 0,5413 22,7 30 Lá cách 0,5776 17,5 0,5945 15,1 0,6183 11,7 0,5840 16,6 31 Ngũ vị 0,5272 24,7 0,5952 15 0,6393 8,7 0,5441 22,3 32 Dành dành 0,6189 11,6 0,5994 14,4 0,6554 6,4 0,6267 10,5 33 Viễn chí 0,5853 16,4 0,6057 13,5 0,4845 30,8 0,6078 13,2 34 Rễ tranh 0,6077 13,2 0,6057 13,5 0,6295 10,1 0,6155 12,1 35 Mật nhân 0,6217 11,2 0,6155 12,1 0,5686 18,8 0,5840 16,6 36 Giảo cổ lam 0,5790 17,3 0,6176 11,8 0,5462 22 0,5581 20,3 37 Cà gai leo (lá ) 0,5566 20,5 0,6183 11,7 0,4782 31,7 0,5209 25,6 38 Cỏ mực 0,54545 22,1 0,6197 11,5 0,4831 31 0,5013 28,4 39 Cam thảo đất 0,5356 23,5 0,6267 10,5 0,4523 35,4 0,5553 20,7 40 0,6287 10,2 0,6274 10,4 0,5924 15,4 0,5798 17,2 41 Bạch phục linh Sương sâm 0,5909 15,6 0,6288 10,2 0,5216 25,5 0,5609 19,9 42 Ý dĩ 0,6147 12,2 0,6400 8,6 0,5980 14,6 0,5777 17,5 43 Xáo tam phân 0,5363 23,4 0,6435 8,1 0,4523 35,4 0,5167 26,2 44 Ké đầu ngựa 0,4663 33,4 0,6470 7,6 0,5735 18,1 0,5539 20,9 45 Tiêu 0,5356 23,5 0,6491 7,3 0,5097 27,2 0,4852 30,7 46 Kiến cò (lá ) 0,6357 9,2 0,6554 6,4 0,6071 13,3 0,5910 15,6 47 Kiến cò (thân) 0,6651 0,6666 4,8 0,5406 22,8 0,6218 11,2 48 Cỏ mần trầu 0,5377 23,2 0,6841 2,3 0,5462 22 0,5728 18,2 49 Đinh lăng 0,5958 14,9 0,6918 1,2 0,5987 14,5 0,6260 10,6 50 Mướp gai 0,6903 1,4 0,6995 0,1 0,5504 21,4 0,6078 13,2 28 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC CY(-) Lô chứng sinh lý STT Po P8 OD Hàm lượng MDA (nM/ml dịch đồng thể) TB 37 42 39 40 23 26 26 22 23 30,9 48 52 41 41 35 31 28 23 27 36,2 0,102 0,103 0,105 0,109 0,073 0,105 0,071 0,072 0,080 0,091 1,237 1,250 1,275 1,325 0,879 1,409 0,846 0,863 0,995 1,120 Hàm lượng MDA (nM/g protein) 33,783 34,126 34,812 36,184 24,001 38,465 23,097 23,549 27,165 30,576 PHỤ LỤC CY(+) Lô chứng bệnh lý STT Po P8 OD Hàm lượng MDA (nM/ml dịch đồng thể) TB 36 37 35 41 33 24 25 34 25 32,2 35 43 35 34 38 25 26 29 26 32,3 0,198 0,177 0,188 0,199 0,191 0,157 0,169 0,188 0,206 0,186 2,443 2,180 2,318 2,456 2,356 2,270 2,469 2,783 3,081 2,484 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Hàm lượng MDA (nM/g protein) 66,709 59,506 63,279 67,052 64,308 61,969 67,393 75,981 84,117 67,813 PHỤ LỤC Lô đối chiếu Silymarin 100 mg/kg STT Po P8 OD Hàm lượng MDA (nM/ml dịch đồng thể) TB 34 36 41 38 33 37 23 26 26 32,7 37 41 32 40 35 37 25 27 27 33,4 0,101 0,101 0,148 0,092 0,106 0,074 0,113 0,075 0,095 0,101 1,225 1,815 1,112 1,288 0,886 0,886 1,541 0,912 1,243 1,212 Hàm lượng MDA (nM/g protein) 33,440 49,560 30,353 35,155 24,180 24,180 42,081 24,905 33,945 33,089 PHỤ LỤC Lơ thử: cao cồn 70% Cốt khí củ 0,9 g/kg STT Po P8 OD Hàm lượng MDA (nM/ml dịch đồng thể) TB 34 35 36 36 28 41 31 38 38 35,2 27 23 35 40 25 29 34 39 35 31,9 0,063 0,057 0,085 0,102 0,126 0,110 0,200 0,153 0,181 0,120 0,747 0,672 1,024 1,237 1,539 1,338 2,469 1,878 2,230 1,459 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Hàm lượng MDA (nM/g protein) 20,407 18,349 27,952 33,783 42,014 36,527 67,394 51,275 60,878 39,842 PHỤ LỤC Lô thử: cao cồn 70% Cốt khí củ 1,8 g/kg STT Po P8 OD Hàm lượng MDA (nM/ml dịch đồng thể) Hàm lượng MDA (nM/g protein) TB 30 31 33 38 34 31 33 40 31 33,4 26 29 25 30 29 24 35 28 25 27,9 0,111 0,141 0,086 0,162 0,109 0,126 0,103 0,147 0,100 0,121 1,351 1,727 1,036 1,991 1,325 1,539 1,250 1,803 1,212 1,471 36,870 47,159 28,295 54,361 36,184 42,014 34,126 49,217 33,097 40,147 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC Kiểm tra độ tinh khiết PC-1 HPLC Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC Phổ MS PC-1 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC Phổ 1H PC-1/DMSO Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC 10 Phổ 13C P Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... kiếm thêm dược liệu, hợp chất có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ tế bào gan Đối tượng phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu: 50 mẫu dược liệu hướng tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan thu mua nhà... pháp sàng lọc số dược liệu hướng tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ tế bào gan? ?? Với mục tiêu cụ thể sau: - Sàng lọc số dược liệu có tính chống oxy hố in vitro - Xác định hoạt tính chống oxy hóa in vivo... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HUỲNH THỊ NHƯ THUÝ NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC MỘT SỐ DƯỢC LIỆU HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HOÁ, BẢO VỆ TẾ BÀO GAN Chuyên ngành: Kiểm nghiệm