Nghiên cứu sàng lọc dươc liệu CQ tác dụngức cheenzym acetylcholinesterase Đ ỗ Q u y ê n , T rần T h ị D ịu H ng, N g u y ễ n H ổ n g K h n h TrườngĐại học DượcHà Nội SUMMARY Thirty eight p la n t materials reported as ingredients in Vietnamese traditional im proving memory remedies were collected The m ethanol extracts o f these plants were tested forAChE inhibitory activity using Ellman's colorimetric method The result showned that: a t the concentration ofo m g/m l, the extracts from roots ofStephania sinica Diels andStephania dielsiana YC Wu showed high AChE inhibitory activity (with percent inhibition o f 85.4 and 80.6, respectively) A t the same concentration, three extracts, i.e seed ofAreca catechu L, le a fo fC rin u m ơsiaticum Donn and le a fo fC rln u m latifolium L showed 70 - 75% inhibitory activity on AChE Six extracts, i.e rhizome ofCoptls sinensis Franch., ro o t o f Rheum officinale Baillon, bark o f Cinam om um cassia L, stem ofU ncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks., roo t o f Angelica dahurica Benth, roo t o f Cassia tora L showed 50 - 60% inhibitory activity The rest o f the extracts showed the AChE inhibitory activity below 50% However, a t the concentration o f 0.5 m g/m l, seven extracts, i.e whole plants o f Piper b lo t L, Piper betle L, Elsholtzia cristata W illd, and Perilla ocymoides L ; roo t ofPaeonia lactiflora Pall., rhizome o f Polygonum cuspidatum Siebold&Zucc, roo t o f Citrus deliosa Tenero showed 70 - 75% inhibitory activity Galantham ine was used as a standard AChE inhibitor in this study Từ khóa: ức chế acetylcholinesterase, AChE, Alzheimer Đặt vấn đề Acetylcholin có m ột vai trò quan trọng hoạt động hệ thần kinh Nó chất dẫn truyền thắn kinh khe synap, nồng độ acetylcholin trì ổn định enzym acetylcholinesterase (AChE) AChE m ột enzym có chức làm ngưng lại hoạt động chất dẫn truyền thần kinh acetylcholin synap thẩn kinh cholinergic thông qua việc th ủy phân acetylcholin tạo thành cholin acid acetic, bệnh nhân Alzheimer, có tích tụ mảng am yloid đám rối thẩn kinh, khiến cho nóng độ acetyl-cholin bị suy giảm đáng kể Do vậy, thuốc ức chế AChE nhằm trì nổng độ acetylcholin đóng m ột vai trò quan trọng việc ngăn chặn tiến triển bệnh Alzheimer [1], Hiện thị trường có năm loại thuốc lưu hành có tác dụng ức chê' acetylcholinesterase dùng điểu trị Alzheimer Rivastigmine®, Donepezine®, Tacrine®, Galanthamine®, Huperzine-A®, rivastigm ine, galantham ine Huperzine A đểu hợp chất tự nhiên [2], Vì vậỵ, việc nghiên cứu sàng lọc dược liệu sử dụng theo kinh nghiệm dân gian phục hổi trí nhớ, an thẩn ích trí theo hướng ức chế AChE m ột hướng nghiên cứu tìm thuốc có tác dụng cải thiện trí nhớ bệnh Alzheimer nhiểu nhà khoa học tiếp cận Trong báo trình bày kết sàng lọc dược liệu sử dụng thuốc 'an thẩn, ích trí' theo hướng ức chế AChE Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu: 38 mẫu dược liệu từ 36 loài thuộc 2 họ, có mẫu dược liệu tươi 26 mẫu dược liệu khô, thu mẫu mua Bắc Giang, Hưng Yên Hà Nội Mẫu dược liệu xác định tên khoa học cách so sánh với mẫu tiêu bản, dược liệu mẫu Bộ môn Dược liệu; Phòng tiêu môn Thực vật, lưu Phòng tiêu Bộ môn Thực Vật, Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP) Dược liệu sau sơ chế, sấy 50°c, nghiền thành bột, bảo quản bình hút ẩm Hóa chất thuốc thử: Acetylthiocholin iodid (ATCI), Acetylcholinesterase (AChE), 5,5'-dithiobis[2nitrobenzoic acid] (DTNB) galanthamine hãng Sigma (St Louis, MO, Mỹ) cung cấp Tất dung môi hữu đạt tiêu chuẩn, hóa chất vô Merck (Đức) cung cấp Chuẩn bị dịch chiết: Bột dược liệu chiết hổi lưu với MeOH 80% 5h Dịch chiết thu đem cất thu hồi áp suất giảm đến cắn Bảo quản cắn bình hút ẩm Phương pháp thử tác dụng ức chếAChE: Phép thử tác dụng ức chế AChE dựa nguyên tắc Ellman (1961): chất acetỵlthiocholin iodid (ATCI) bị thủy phân xúc tác enzym acetylcholinesterase (AChE) tạo thành thiocholin acid acetic Thiocholin thu cho phản ứng với thuốc thử Ellman (acid 5,5'-dithio-(2-nitrobenzoic) (DTNB) tạo acid 5-thio2-nitrobenzoic (RS-) có màu vàng, có độ hấp thụ cực đại bước sóng 420 nm Phương pháp đo quang: ĩiẽn hành làm phản ứng tạo màu ống nghiệm Mỗi bao gồm chất, thuốc thử, enzỵm pha dung dịch đệm phosphat chất chiết dược liệu methanol.Thực song song mẫu gồm mẫu trắng mẫu thử Sau đó, ủ dịch phản ứng 15 phút (ở nhiệt độ 20°C) Đo độ hấp thụ đồng thời mẫu m ột thời điểm, bước sóng 420nm Với nồng độ dịch chiết dược liệu, tiến hành lán, hoạt độ ức chê' AChE mẫu kết trung bình phép đo I Két quo đánh giá tác dụng ức chếA ChE (%) phương pháp đo quang ứ a Kết bàn luận 38 mẫu dược liệu lựa chọn từ thuốc an thẩn, ích trí thu mẫu để thử tác dụng ức chế AChE in vitro Chất chiết methanol mẫu dược liệu thử hoạt tính ức chế AChE phương pháp đo quang Ellman Kết trình bày bảng nóng độ , mg/ml, chất chiết từ củ loài Stephania sínica Diels, Stephania dielsiana YC VVu có hoạt tính ức chế AChE cao (85,02 80,6% Ỉ8 dịch chiét dược liệu nóng độ 1OOụg vò 500ụg/ml Tỷ lệ ức chế {%) Bpd Họ Tên khoa học TT 100ng/ml Rễ củ Stephania dlelsiano YCWu Menispermaceae Rễ củ 80,6 Areca catechu L Arecaceae Hat 77,95 Crinum asiaticum Donn Amaryllldaceoe Lá 70,13 ữinum latlfolium L Amaryllidaceae Lá 70,65 Coptìs sinensis Franch Ranunculaceae Thân rễ 61,25 57,72 Stephania sínica Diels 500ụg/ml 85,02 Menispermaceae Rheum officinale Bâillon Polyqonaceae Rễ ũnamomum cassia L Lauraceae Vỏ thân 53,54 ưncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks Rubioceae Gai móc 53,27 10 Angélica dahurica Benth Apiũceae Rễ 52,97 11 Cassia torn V Fabaceae Rễ 51,07 12 Piper loht L Piperaceae Toàn 44,61 74,63 13 Mimosa púdica Lm Mlmosaceae Toàn 38,60 43,39 14 Paeoniũ lactifloro PdW Ranunculaceae Rễ 38,55 64,52 15 Lamiaceae 74,53 Polyqonaceae TMĐ Thân rê 37,72 16 ElssholtziacristütaWM Polyqonum cuspidatum Siebold & Zucc 37,03 75,76 17 18 Perillo frutescens (L.) Britton Piper betíe L Lamiaceae Piperaceae ĨMĐ Toàn 34,14 33,38 76,52 70,40 19 Citrus deiiosa^mm Rutaceae Vỏ 29,40 70,53 20 Ziziphusjujuba Mill Rhamanaceae Nhân hat 28,71 57,45 21 Hymenocalis littomlls Salisb Amoryllidaceae Lá 22,15 23,99 22 Polyqala tenui folia Willd Polygaloceae Rễ 21,76 23,88 23 Platycodon grandiflorum (Jacq.) A DC Campanulaceae Rễ 21,08 15,8 24 Glycyrrhiza umlensis Fisch Fobaceae Thân rễ 19,01 41,06 25 Aconitum fortune! Hemsl Ranunculaceae Rễ củ 17,93 17,92 26 Codonopsispilosula (Franch.) Nannf campanulũceoe Rễ 17,51 13,74 27 Dioscoreasp Dioscoreoceoe Rễ củ 17,06 43,23 28 Cassia toral Fobaceae Thân 16,32 31,13 15,88 15,67 22,90 29 Achyranthes bidentato Blume Ảmranthaceae Rễ 30 Angelica sinensis (Oliv.) Diels Apiaceae Rễ 15,09 31 Scutellũríũ baicalensis Georqi Enql Lamiaceoe Rễ 13,37 25,99 32 Citrus aurantifolia Swingle Rutaceae Quả 13,12 45,84 33 Cassia tom L Fabaceae Hạt 11,53 23,26 34 Sơophularia buergeriana Miguel Scrophulariaceae Rễ 11,44 31,02 35 LyổumsinenseMÌ Solanaceae Quả 8,80 8,56 36 Astraaalus membronũceus Fisch Bqe Rễ 6,06 12,98 Lá 8,50 Thân rễ 0 37 Biota orientons (L) Endl Faboceae Cupressaceae 38 Amemarrheiìũ mphodeloides Bunge Liliũceae Ghi chú: ĨMĐ: pháíi đát ; Nghièn Cứu dược Thòng tín thuớc i Số 4/2011 tương ứng) Tiếp theo chất chiết loài Areca catechu L (hạt), Crinum asiaticum Donn (lá) Crinum latifolium L (lá) có hoạt tính ức chế AChE từ 70 - 75% Hoạt độ ức chế AChE từ 50 - 60% có loài, gồm Coptis sinensis Franch (thân rễ); Rheum officinale Bâillon (rễ), ũnamomum cassia L (vỏ thân), Uncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks, (thân móc); Angelica dahurica Benth (rễ), root of Cassia tora L (rễ) Các mẫu lại có hoạt độ ức chế AChE nhỏ 50% Tuy nhiên nổng độ 0,5 m g/ ml, có thêm dịch chiết có hoạt độ ức chê' từ 70 - 75%, bao gổm: Piper lolotL, (toàn cây) Piper betle L (toàn cây), Elsholtĩiơ cristata VVilld (toàn cây), and Perillơ ừutescens (L.) Britton (toàn cây); Paeoniơ lactiflora Pall, (toàn cây), Polygonum cuspidatum Siebold & Zucc (thân rễ) Citrus deliosa Tenero (rễ) sínica Diels, Stephơnia dielsiana YC Wu công bố có hoạt tính ức chê' AChE Trước đây, loài thuộc chi Stephania L thử hoạt tính ức chế AChE, gổm loài Stephania suberosa Forman (2003); loài s venosa (Blume) Spreng (2001) loài s tetrandra s Moore (1997) [5], dược liệu có hoạt tính ức chế AChE lớn 70% có thành phần hóa học nhóm chấtalcaloid Đây lần đẩu chất chiết từ củ loài Stephania Kết lụận 38 mẫu chất chiết methanol dược liệu lựa chọn từ thuốc an thắn, ích trí thử tác dụng ức chê' AChE in vitro phương pháp đo quang Ellman nồng độ 0,1 mg/m l, chất chiết từ củ loài Stephania sínica Diels, Stephania dielsiana YC Wu có hoạt tính ức chê' AChE cao (85,02 80,6% tương ứng) TÀI LIỆU THAM KHẢO V Terry et al (2003), 'The Cholinergic Hypothesis of Age and Alzheimer's Disease-Related Cognitive Deficits: Recent Challenges and Their Implications for Novel Drug Development", The journal o f pharmacology and experimental therapeutics, Vol 306, No 3, pp 821-827 BỘ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nxb Y học, Hà Nội, Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nxb.Y học, Hà Nội Ilkay Orhan (2003), "Acetylcholinesterase inhibitors from natural resources"J Pharm Scl, 28,51-58 Kornkanok Ingkaninan et al (2003), "Screening for acetylcholinesterase inhibitory activity in plants used in Thai traditional rejuvenating and neurotonic remedies", Journal o f Ethnopharmơcology, Vol 89, pp 261-264 ĐỖ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học kỹ thuật Nghiên cứu thành phẩn hóa học theo định hướng tác dụng hạ đường huyết tliân Ý dĩ (Coixlachrỳma-ịobi L Poaceae) Nguyễn Quỳnh Chi*, Đỗ Văn Khái**, Nguyễn Thị Thu Hằng*, Nguyễn Thị Đông**, Phùng Thanh Hương* * Trường Đại học DượcHà Mội ** Trường Cao đẵng DượcHải Dương SUMMARY; Six compounds were isolated from the m ost active fraction (chloroform fraction) o f the Coix lachryrnal-jobi L stem The compounds were identified as stigmast-4-en-3-one, (i-sitosterol, stigmasterol, 4-hydroxybenzaldehyd and a d d isovơnilic by using com bination o f MS and NMR spectroscopy This is the first time these compounds are reported as the constituents ofC oix lachrym al-jobi L stem Từ k h ó a : acid isovanilic, Coix lachryma-jobi, (E)-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl) acrylate, 4-hydroxybenzaldehyd, ^-sitosterol, stigmast4-en-3-one, stigmasterol, hạ glucose huyết, Ỷdĩ ... dịch chiết dược liệu, tiến hành lán, hoạt độ ức chê' AChE mẫu kết trung bình phép đo I Két quo đánh giá tác dụng ức chếA ChE (%) phương pháp đo quang ứ a Kết bàn luận 38 mẫu dược liệu lựa chọn... liệu lựa chọn từ thuốc an thẩn, ích trí thu mẫu để thử tác dụng ức chế AChE in vitro Chất chiết methanol mẫu dược liệu thử hoạt tính ức chế AChE phương pháp đo quang Ellman Kết trình bày bảng... (1997) [5], dược liệu có hoạt tính ức chế AChE lớn 70% có thành phần hóa học nhóm chấtalcaloid Đây lần đẩu chất chiết từ củ loài Stephania Kết lụận 38 mẫu chất chiết methanol dược liệu lựa chọn