Do vậy, các thuốc ức chế AChE nhằm duy trì nổng độ acetylcholin đóng m ột vai trò quan trọng tron g việc ngăn chặn sự tiến triển của bệnh Alzheimer [1], Hiện nay trên th ị trường có năm
Trang 1- 4
dụngức cheenzym acetylcholinesterase
Đ ỗ Q u y ê n , T rầ n T h ị D ịu H ư ơ ng , N g u y ễ n H ổ n g K h á n h
Trường Đại học Dược Hà Nội
SUMMARY
Thirty eight p la n t materials reported as ingredients in Vietnamese trad itio n a l im proving mem ory remedies were collected The
m ethanol extracts o f these plants were tested forAChE inhibitory activity using Ellman's colorim etric method The result showned that:
a t the concentration ofo 1 m g/m l, the extracts from roots ofStephania sinica Diels andStephania dielsiana YC Wu showed high AChE inhibitory activity (with percent inhibition o f 85.4 and 80.6, respectively) A t the same concentration, three extracts, i.e seed ofAreca catechu L, le a fo fC rin u m ơsiaticum Donn and le a fo fC rln u m la tifo liu m L showed 70 - 75% inhibitory activity on AChE Six extracts, i.e rhizome ofCoptls sinensis Franch., ro o t o f Rheum officinale Baillon, bark o f Cinam om um cassia L, stem ofU ncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks., ro o t o f Angelica dahurica Benth, roo t o f Cassia tora L showed 50 - 60% inhibitory activity The rest o f the extracts showed the AChE in h ib ito ry activity below 50% However, a t the concentration o f 0.5 m g/m l, seven extracts, i.e whole plants o f Piper b lo t L, Piper betle L, Elsholtzia cristata W illd, and Perilla ocymoides L ; roo t ofPaeonia lactiflora Pall., rhizome o f Polygonum cuspidatum Siebold&Zucc, roo t o f Citrus deliosa Tenero showed 70 - 75% inhibitory activity G alantham ine was used as a standard AChE in h ib ito r
in this study.
Từ khóa: ức chế acetylcholinesterase, AChE, Alzheimer.
Đặt vấn đề
Acetylcholin có m ột vai trò quan trọng trong
hoạt động của hệ thần kinh Nó là chất dẫn truyền
thắn kinh tại khe synap, và nồng độ acetylcholin
được duy trì ổn định bởi enzym acetylcholinesterase
(AChE) AChE là m ột enzym có chức năng làm
ngưng lại hoạt động của chất dẫn truyền thần kinh
acetylcholin tại các synap thẩn kinh cholinergic
th ôn g qua việc th ủ y phân acetylcholin tạo thành
cholin và acid acetic, ở các bệnh nhân Alzheimer,
do có sự tích tụ các mảng am yloid và các đám
rối thẩn kinh, khiến cho nóng độ acetyl-cholin bị
suy giảm đáng kể Do vậy, các thuốc ức chế AChE
nhằm duy trì nổng độ acetylcholin đóng m ột vai
trò quan trọng tron g việc ngăn chặn sự tiến triển
của bệnh Alzheimer [1], Hiện nay trên th ị trường
có năm loại thuốc đang được lưu hành có tác
dụng ức chê' acetylcholinesterase dùng điểu trị
Alzheim er là Rivastigmine®, Donepezine®, Tacrine®,
Galanthamine®, và Huperzine-A®, trong đó
rivastigm ine, galantham ine và Huperzine A đểu là
hợp chất tự nhiên [2], Vì vậỵ, việc nghiên cứu sàng
lọc các dược liệu được sử dụng theo kinh nghiệm
dân gian trong phục hổi trí nhớ, an thẩn ích trí theo
hướng ức chế AChE là m ột hướng nghiên cứu tìm
thuốc mới có tác dụng cải thiện trí nhớ tron g bệnh
Alzheimer được nhiểu nhà khoa học tiếp cận Trong
bài báo này chúng tô i trình bày kết quả sàng lọc
dược liệu được sử dụng trong các bài thuốc 'an
thẩn, ích trí' theo hướng ức chế AChE
Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu
Nguyên liệu: 38 mẫu dược liệu từ 36 loài thuộc
2 2 họ, trong đó có 1 2 mẫu dược liệu tươi và 26 mẫu dược liệu khô, được thu mẫu và mua tại Bắc Giang, Hưng Yên và Hà Nội Mẫu dược liệu được xác định tên khoa học bằng cách so sánh với các mẫu tiêu bản, dược liệu mẫu tại Bộ môn Dược liệu; Phòng tiêu bản bộ môn Thực vật, và lưu tại Phòng tiêu bản Bộ môn Thực Vật, Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP) Dược liệu sau khi sơ chế, sấy ở 50°c, nghiền thành bột, bảo quản trong bình hút ẩm
Hóa chất thuốc thử: Acetylthiocholin iodid
(ATCI), Acetylcholinesterase (AChE), 5,5'-dithiobis[2- nitrobenzoic acid] (DTNB) và galanthamine do hãng Sigma (St Louis, MO, Mỹ) cung cấp Tất cả các dung
môi hữu cơ đạt tiêu chuẩn, hóa chất vô cơ do Merck
(Đức) cung cấp
Chuẩn bị dịch chiết: Bột dược liệu được chiết hổi
lưu với MeOH 80% trong 5h Dịch chiết thu được đem cất thu hồi dưới áp suất giảm đến cắn Bảo quản cắn trong bình hút ẩm
Phương pháp thử tác dụng ức chếAChE: Phép
thử tác dụng ức chế AChE dựa trên nguyên tắc của Ellman (1961): cơ chất acetỵlthiocholin iodid (ATCI)
bị thủy phân xúc tác bởi enzym acetylcholinesterase (AChE) tạo thành thiocholin và acid acetic Thiocholin thu được cho phản ứng với thuốc thử Ellman (acid 5,5'-dithio-(2-nitrobenzoic) (DTNB) tạo ra acid 5-thio-2-nitrobenzoic (RS-) có màu vàng, có độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 420 nm
Trang 2Phương pháp đo quang: ĩiẽn hành làm phản ứng
tạo màu trong ống nghiệm Mỗi ổng bao gồm cơ chất,
thuốc thử, enzỵm pha trong dung dịch đệm phosphat
và chất chiết dược liệu trong methanol.Thực hiện song
song 4 mẫu gồm 2 mẫu trắng và 2 mẫu thử Sau đó, ủ
dịch phản ứng trong 15 phút (ở nhiệt độ 20°C) Đo độ
hấp thụ đồng thời 4 mẫu cùng m ột thời điểm, tại bước
sóng 420nm Với mỗi nồng độ dịch chiết dược liệu, tiến
hành 3 lán, hoạt độ ức chê' AChE của mỗi mẫu là kết
quả trung bình của 3 phép đo
Kết quả và bàn luận
38 mẫu dược liệu được lựa chọn từ các bài thuốc
an thẩn, ích trí đã được thu mẫu để thử tác dụng ức
chế AChE in vitro Chất chiết methanol của các mẫu
dược liệu này đã được thử hoạt tính ức chế AChE bằng phương pháp đo quang của Ellman Kết quả được trình bày ở bảng 1 ở nóng độ 0 , 1 mg/ml, chất chiết từ củ
của loài Stephania sínica Diels, và Stephania dielsiana YC
VVu có hoạt tính ức chế AChE cao nhất (85,02 và 80,6%
I Két quo đánh giá tác dụng ức chế A ChE (%) bằng phương pháp đo quang ứ a Ỉ8 dịch chiét dược liệu ở nóng độ 1 OOụg vò 500ụg/ml
100ng/ml 500ụg/ml
1 Stephania sínica Diels Menispermaceae Rễ củ 85,02
2 Stephania dlelsiano YC Wu Menispermaceae Rễ củ 80,6
3 Areca catechu L Arecaceae Hat 77,95
4 Crinum asiaticum Donn Amaryllldaceoe Lá 70,13
5 ữinum latlfolium L Amaryllidaceae Lá 70,65
6 Coptìs sinensis Franch Ranunculaceae Thân rễ 61,25
7 Rheum officinale Bâillon Polyqonaceae Rễ 57,72
8 ũnamomum cassia L Lauraceae Vỏ thân 53,54
9 ưncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks Rubioceae Gai móc 53,27
10 Angélica dahurica Benth Apiũceae Rễ 52,97
11 Cassia torn V Fabaceae Rễ 51,07
12 Piper lo h t L Piperaceae Toàn cây 44,61 74,63
13 Mimosa púdica L m Mlmosaceae Toàn cây 38,60 43,39
14 Paeoniũ lactifloro PdW Ranunculaceae Rễ 38,55 64,52
15 ElssholtziacristütaWM Lamiaceae TMĐ 37,72 74,53
16 Polyqonum cuspidatum Siebold & Zucc Polyqonaceae Thân rê 37,03 75,76
17 Perillo frutescens (L.) Britton Lamiaceae ĨMĐ 34,14 76,52
18 Piper betíe L Piperaceae Toàn cây 33,38 70,40
19 Citrus deiiosa^mm Rutaceae Vỏ quả 29,40 70,53
20 Ziziphusjujuba Mill Rhamanaceae Nhân hat 28,71 57,45
21 Hymenocalis littomlls Salisb Amoryllidaceae Lá 22,15 23,99
22 Polyqala tenu i folia Willd Polygaloceae Rễ 21,76 23,88
23 Platycodon grandiflorum (Jacq.) A DC Campanulaceae Rễ 21,08 15,8
24 Glycyrrhiza umlensis Fisch Fobaceae Thân rễ 19,01 41,06
25 Aconitum fortune! Hemsl Ranunculaceae Rễ củ 17,93 17,92
26 Codonopsispilosula (Franch.) Nannf campanulũceoe Rễ 17,51 13,74
27 Dioscoreasp Dioscoreoceoe Rễ củ 17,06 43,23
28 Cassia toral Fobaceae Thân lá 16,32 31,13
29 Achyranthes bidentato Blume Ảmranthaceae Rễ 15,88 15,67
30 Angelica sinensis (Oliv.) Diels Apiaceae Rễ 15,09 22,90
31 Scutellũríũ baicalensis Georqi Enql Lamiaceoe Rễ 13,37 25,99
32 Citrus aurantifolia Swingle Rutaceae Quả 13,12 45,84
33 Cassia tom L Fabaceae Hạt 11,53 23,26
34 Sơophularia buergeriana Miguel Scrophulariaceae Rễ 11,44 31,02
35 LyổumsinenseMÌ Solanaceae Quả 8,80 8,56
36 Astraaalus membronũceus Fisch Bqe Faboceae Rễ 6,06 12,98
37 Biota orientons (L) Endl Cupressaceae Lá 0 8,50
38 Amemarrheiìũ mphodeloides Bunge Liliũceae Thân rễ 0 0
Ghi chú: ĨMĐ: pháíi trên một đát
1 3 8 ; Nghièn Cứu dược Thòng tín thuớc i Số 4/2011
Trang 3tương ứng) Tiếp theo là chất chiết của 3 loài Areca
catechu L (hạt), Crinum asiaticum Donn (lá) và Crinum
latifolium L (lá) có hoạt tính ức chế AChE từ 70 - 75%
Hoạt độ ức chế AChE từ 50 - 60% có 6 loài, gồm Coptis
sinensis Franch (thân rễ); Rheum officinale Bâillon (rễ),
ũnamomum cassia L (vỏ thân), Uncaria rhynchophylla
(Miq.) Jacks, (thân móc); Angelica dahurica Benth (rễ),
root of Cassia tora L (rễ) Các mẫu còn lại có hoạt độ ức
chế AChE nhỏ hơn 50% Tuy nhiên ở nổng độ 0,5 m g/
ml, có thêm 7 dịch chiết có hoạt độ ức chê' từ 70 - 75%,
bao gổm: Piper lolotL, (toàn cây) Piper betle L (toàn cây),
Elsholtĩiơ cristata VVilld (toàn cây), and Perillơ ừutescens
(L.) Britton (toàn cây); Paeoniơ lactiflora Pall, (toàn cây),
Polygonum cuspidatum Siebold & Zucc (thân rễ) Citrus
deliosa Tenero (rễ).
Đây là lần đẩu chất chiết từ củ của loài Stephania
sínica Diels, và Stephơnia dielsiana YC Wu được công
bố có hoạt tính ức chê' AChE Trước đây, 3 loài thuộc chi Stephania L đã được thử hoạt tính ức chế AChE, gổm loài Stephania suberosa Forman (2003); loài s
venosa (Blume) Spreng (2001) và loài s tetrandra
s Moore (1997) [5], 5 dược liệu có hoạt tính ức chế AChE lớn hơn 70% đều có thành phần hóa học chính
là nhóm chấtalcaloid
Kết lụận
38 mẫu chất chiết methanol dược liệu được lựa chọn từ các bài thuốc an thắn, ích trí đã được thử tác dụng ức chê' AChE in vitro bằng phương pháp đo quang của Ellman ở nồng độ 0,1 m g/m l, chất chiết
từ củ của loài Stephania sínica Diels, và Stephania dielsiana YC Wu có hoạt tính ức chê' AChE cao nhất (85,02 và 80,6% tương ứng)
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 V Terry et al (2003), 'The Cholinergic Hypothesis of Age and Alzheimer's Disease-Related Cognitive Deficits: Recent Challenges
and Their Implications for Novel Drug Development", The journal o f pharmacology and experimental therapeutics, Vol 306, No 3, pp
821-827.
2 BỘ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nxb Y học, Hà Nội,
3 Võ Văn Chi (1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nxb.Y học, Hà Nội
4 Ilkay Orhan (2003), "Acetylcholinesterase inhibitors from natural resources"J Pharm Scl, 28,51-58.
5 Kornkanok Ingkaninan et al (2003), "Screening for acetylcholinesterase inhibitory activity in plants used in Thai traditional
rejuvenating and neurotonic remedies", Journal o f Ethnopharmơcology, Vol 89, pp 261-264.
5 ĐỖ Tất Lợi (2003), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học kỹ thuật.
Nghiên cứu thành phẩn hóa học theo
định hướng tác dụng hạ đường huyết của
Nguyễn Quỳnh Chi*, Đỗ Văn Khái**, Nguyễn Thị Thu Hằng*, Nguyễn Thị Đông**, Phùng Thanh Hương*
* Trường Đại học Dược Hà Mội
** Trường Cao đẵng Dược Hải Dương
SUMMARY;
Six compounds were isolated from the m ost active fraction (chloroform fraction) o f the Coix lachryrnal-jobi L stem The compounds were identified as stigmast-4-en-3-one, (i-sitosterol, stigmasterol, 4-hydroxybenzaldehyd and a d d isovơnilic by using com bination o f
MS and NMR spectroscopy This is the first time these compounds are reported as the constituents ofC oix lachrym al-jobi L stem.
Từ k h ó a : acid isovanilic, Coix lachrym a-jobi, (E)-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl) acrylate, 4-hydroxybenzaldehyd, ^-sitosterol, stigmast-
4-en-3-one, stigmasterol, hạ glucose huyết, Ỷdĩ.