Đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm và độc tính của chế phẩm tecan trên thực nghiệm

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH HOÀI ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH CỦA CHẾ PHẨM TECAN TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH HOÀI ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH CỦA CHẾ PHẨM TECAN TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: Ts. Đỗ Thị Nguyệt Quế Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực - trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian nghiên cứu, thời điểm hoàn thành khóa luận cũng là lúc tôi xin phép được bày tỏ lòng cảm ơn chân thành của mình đến những người đã hướng dẫn, dìu dắt và giúp đỡ để tôi có thể hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp của mình. Trước hết, tôi xin được thể hiện lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc nhất tới Ts. Đỗ Thị Nguyệt Quế, giảng viên bộ môn Dược lực. Cô vừa là người chỉ bảo dạy dỗ cho tôi kiến thức trong học tập, vừa sửa chữa cho tôi những sai sót, khuyết điểm của bản thân và cho tôi những lời khuyên quý giá trong cuộc sống thực tế, giúp tôi đủ tự tin để bước tiếp trên con đường phía trước. Một lần nữa, tôi xin dành cho người thầy kính yêu sự biết ơn chân thành nhất của mình. Tôi xin chân thành cảm ơn Ths. Nguyễn Thị Thu Hằng đã giúp đỡ và cho tôi rất nhiều lời khuyên quý giá trong quá trình tôi thực hiện và hoàn thành khóa luận này. Tôi xin chân thành cảm ơn các anh chị kĩ thuật viên tại bộ môn Dược lực đã tận tình hỗ trợ, giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình tiến hành các thử nghiệm nghiên cứu. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo trong bộ môn Dược lực đã truyền thụ cho tôi những kiến thức bổ ích thông qua các bài giảng, tạo những điều kiện thuận lợi cho tôi được học tập và nghiên cứu tại bộ môn. Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, phòng Đào tạo và các thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo mọi điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tôi suốt 5 năm học tập. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ sự yêu thương và biết ơn sâu sắc tới gia đình và bè bạn, những người luôn ở bên chăm sóc, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt những năm tháng cuộc đời. Hà nội, ngày 21 tháng 05 năm 2013 Sinh viên, Nguyễn Thị Thanh Hoài MỤC LỤC STT NỘI DUNG TRANG ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1: TỔNG QUAN 3 1.1 Tổng quan về viêm 3 1.1.1 Khái niệm viêm 3 1.1.2 Nguyên nhân gây viêm 3 1.1.3 Phân loại viêm 4 1.1.4 Sinh lý, cơ chế quá trình viêm 4 1.1.5 Các thuốc chống viêm 7 1.1.6 Các mô hình nghiên cứu tác dụng chống viêm của thuốc 9 1.2 Tổng quan về đau 11 1.2.1 Định nghĩa 11 1.2.2 Cơ chế của đau 11 1.2.3 Nguyên nhân gây đau 12 1.2.4 Phân loại đau 12 1.2.5 Thuốc giảm đau 14 1.2.6 Một số mô hình nghiên cứu tác dụng giảm đau của thuốc 14 1.3 Tổng quan về đối tượng nghiên cứu 14 1.3.1 Nguồn gốc và đặc điểm của tectoridin 14 1.3.4 Một số nghiên cứu về tác dụng sinh học của tectoridin và một số dịch chiết từ xạ can 15 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.1 Động vật nghiên cứu 18 2.1.2 Dụng cụ, hóa chất nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau 19 2.2.2 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm cấp 20 2.2.3 Phương pháp đánh giá độc tính cấp tính 21 2.2.4 Phương pháp đánh giá độc tính bán trường diễn 22 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 24 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1 Kết quả nghiên cứu 25 3.1.1 Kết quả đánh giá tác dụng giảm đau 25 3.1.2 Kết quả đánh giá tác dụng chống viêm 26 3.1.3 Kết quả đánh giá độc tính cấp tính 27 3.2.4 Kết quả đánh giá độc tính bán trường diễn 28 3.2 Bàn luận 34 3.2.1 Bàn luận về tác dụng giảm đau của Tecan 34 3.2.2 Bàn luận về tác dụng chống viêm của Tecan 35 3.2.3 Bàn về độc tính của Tecan 36 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 4.1 Kết luận 40 4.1.1 Về tác dụng giảm đau 40 4.1.2 Về tác dụng chống viêm cấp tính 40 4.1.3 Về độc tính cấp tính 40 4.1.4 Về độc tính bán trường diễn 40 4.2 Kiến nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT ADN Acid deoxyribo Nucleic NSAIDs Non steroidal anti- inflammatory drugs TNFα Tumor necrosis factor alpha PAF Platelet Activating Factor UV Ultra violet radiation DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ HÌNH VẼ TT Tên bảng/hình vẽ Trang 1 Bảng 3.1. Số cơn đau quặn của chuột tại các thời điểm. 25 2 Bảng 3.2. Tỉ lệ phù chân chuột tại các thời điểm. 26 3 Bảng 3.3. Cân nặng của động vật thí nghiệm. 28 4 Bảng 3.4. Ảnh hưởng của Tecan trên các thông số huyết học HC, Hb và HCT của chuột thực nghiệm. 29 5 Bảng 3.5. Ảnh hưởng của Tecan trên số lượng tiểu cầu và số lượng bạch cầu của chuột thực nghiệm. 30 6 Bảng 3.6. Ảnh hưởng của Tecan trên công thức bạch cầu. 31 7 Bảng 3.7. Ảnh hưởng của tectoridin đến hoạt độ SGPT, SGOT 31 8 Bảng 3.8. Ảnh hưởng của Tecan đến nồng độ cholesterol toàn phần và protein toàn phần. 32 9 Bảng 3.9. Ảnh hưởng của Tecan đến thông số creatinin huyết thanh của chuột thực nghiệm. 33 10 Hình 1.2. Cấu trúc hóa học của tectoridin. 15 11 Hình 3.1. Sự thủy phân tectoridin thành tectorigenin dưới tác động của acid HCl và vi khuẩn Bacteriodes spercoris trong đường ruột của người. 34 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm là quá trình bệnh lý phổ biến, có nhiều yếu tố cụ thể có thể gây viêm, bất cứ cơ quan nào và mô nào cũng có thể bị viêm. Viêm vừa là một phản ứng bảo vệ cơ thể chống lại yếu tố gây bệnh, vừa là phản ứng bệnh lý. Quá trình viêm gây ra tổn thương, hoại tử, rối loạn chức năng cơ quan… Phản ứng viêm vì thế gây nhiều ảnh hưởng đến cơ thể. Viêm nặng và cấp tính gây đau đớn, khiến bệnh nhân giảm ngon miệng, mất ngủ và ảnh hường xấu đến toàn trạng. Vậy nên, bên cạnh việc điều trị nguyên nhân gây viêm, cần phải điều trị làm giảm các triệu chứng viêm nhằm cải thiện chất lượng cuộc sống cho bệnh nhân [8]. Hai nhóm thuốc kháng viêm chính hiện nay đang được sử dụng nhiều là thuốc chống viêm không steroid (NSAIDs) và thuốc chống viêm steroid (glucocorticoid). Cả hai nhóm thuốc này đều có những tác dụng phụ thường gặp như gây loét dạ dày, tá tràng, xuất huyết tiêu hóa… Sự ra đời của các NSAID ức chế đặc hiệu cyclooxygenase-2 tưởng như là một giải pháp mới trong điều trị viêm nhưng sau đó lần lượt rofecoxib, valdecoxib bị cấm lưu hành do gây tăng các yếu tố nguy cơ tim mạch [2]. Vì vậy việc tìm kiếm những loại thuốc giảm đau, chống viêm mới hiệu quả và an toàn hơn vẫn là vấn đề của Y học hiện nay. Bên cạnh việc phát minh những thuốc tân dược mới, tìm kiếm thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên dựa trên kinh nghiệm điều trị của Y học cổ truyền cũng luôn được các nhà khoa học đào sâu nghiên cứu. Flavonoid là hợp chất tự nhiên đã được biết đến với các tác dụng dược lý đáng chú ý như tác dụng chống khối u, tác dụng chống xơ vữa động mạch, chống viêm, chống dị ứng, chống oxy hóa…[5] Thân rễ loài Xạ can (Belamcanda chinensis Lem.) chứa nhiều loại isoflavonoid như irigenin, tectoridin, tectorigenin, belamcanidin, methylirisolidon, iristectoriginin A [12]. Trong đó tecroridin phân lập từ dịch chiết thân rễ Xạ can đã được chứng minh là có tác dụng chống viêm in vitro do ức chế tổng hợp chất hóa học trung gian gây viêm prostaglandin E 2 [31]. Tuy nhiên chúng tôi chưa tìm thấy nghiên cứu nào đánh giá tác dụng chống viêm 2 của tectoridin cũng như về tác dụng giảm đau và độc tính của tectoridin ở in vivo. Vì vậy, nghiên cứu được thực hiện với những mục tiêu sau: - Đánh giá tác dụng chống viêm của Tecan trên mô hình gây viêm bàn chân chuột bằng carageenin. - Đánh giá tác dụng giảm đau của Tecan trên mô hình gây đau quặn Kostler. - Đánh giá độc tính cấp tính và độc tính bán trường diễn của Tecan trên thực nghiệm. 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. TỔNG QUAN VỀ VIÊM 1.1.1. Khái niệm viêm Viêm là một phản ứng không đặc hiệu của mô do bị các yếu tố hóa học, vật lý hay sinh học tấn công [8]. Biểu hiện bên ngoài của viêm ở da và niêm mạc đã được Celcus mô tả từ cách đây 2000 năm với 4 dấu hiệu điển hình gồm: Sưng, nóng, đỏ và đau [28]. Viêm vừa là một phản ứng bảo vệ cơ thể chống lại yếu tố gây bệnh vừa là phản ứng bệnh lý vì quá trình viêm gây ra tổn thương, hoại tử, rối loạn chức năng cơ quan…Phản ứng viêm có thể xuất hiện với nhiều mức độ khác nhau thậm chí rất nặng nề và nguy hiểm đến tính mạng [8]. 1.1.2. Nguyên nhân gây viêm Có thể xếp nguyên nhân gây viêm thành 2 nhóm lớn là nguyên nhân ngoại sinh và nguyên nhân nội sinh [8]: 1.1.2.1.Nguyên nhân ngoại sinh Các nguyên nhân ngoại sinh gây viêm thường gặp như: - Tác nhân cơ học: Từ xây sát nhẹ tới chấn thương nặng đều có thể gây phá hủy tế bào và mô, làm giải phóng ra những chất gây viêm nội sinh. - Tác nhân vật lý: Nhiệt độ quá cao hay quá thấp làm thoái hóa protid tế bào gây tổn thương enzym. Tia xạ (UV, tia X) do tạo ra các gốc oxy tự do gây phá hủy một số enzym oxy hóa đều dẫn đến phản ứng viêm. Ngoài ra tia xạ còn gây tổn thương ADN của tế bào. - Tác nhân hóa học: Các acid mạnh, kiềm mạnh và các chất hóa học khác như thuốc trừ sâu, các độc tố… gây hủy hoại tế bào hoặc phong bế các hệ enzym trong cơ thể. - Tác nhân sinh học: Là nguyên nhân phổ biến nhất, gồm virus, vi khuẩn, ký sinh trùng đơn bào, đa bào hay nấm… 1.1.2.2.Nguyên nhân nội sinh Thiếu oxy tại chỗ, hoại tử mô, xuất huyết, rối loạn thần kinh dinh dưỡng (tắc mạch) là các nguyên nhân gây viêm thường gặp. Ngoài ra, viêm có thể do [...]... Những tác động này bị ức chế bởi những thuốc kháng histamin, thuốc ức chế sự chuyển hóa của acid arachidonic và thuốc ức chế thụ thể của leucotrien Đánh giá: Đánh giá tác dụng chống tăng tính thấm của thuốc thông qua nồng độ chất nhuộm xanh Evans khi tiêm dưới da Phạm vi áp dụng: Thử nghiệm này được dùng để đánh giá tác dụng của các thuốc chống lại sự thẩm thấu mạch máu gây ra bởi các chất gây viêm. .. Đánh giá: Tính tỉ lệ % tặng khối lượng của tai phải so với tai trái rồi tính giá trị trung bình tỉ lệ % tăng khối lượng tai chuột trong mỗi lô Sau đó tính tỉ lệ phần trăm ức chế phù của lô thử so với lô chứng 11 Phạm vi áp dụng: Mô hình này cho phép đánh giá khả năng chống viêm tại chỗ của thuốc Đây cũng là phương pháp phù hợp để đánh giá tác dụng chống viêm của thuốc chống viêm steroid và không steroid... khi viêm cầu thận, viêm trong hiện tượng Arthus) 1.1.3 Phân loại viêm Có nhiều cách phân loại viêm như [8]: - Theo nguyên nhân gồm viêm nhiễm khuẩn và viêm vô khuẩn - Theo vị trí viêm gồm viêm nông, viêm sâu (bên ngoài và bên trong) - Theo dịch rỉ viêm gồm viêm thanh dịch, viêm tơ huyết, viêm mủ…tùy theo dịch viêm - Theo diễn biến gồm viêm cấp và viêm mạn - Theo tính chất viêm gồm viêm đặc hiệu và không... Các mô hình nghiên cứu tác dụng chống viêm của thuốc Căn cứ vào các giai đoạn trong quá trình viêm, có thể chia các mô hình thử nghiệm tác dụng chống viêm của một thuốc thành hai nhóm, bao gồm các mô hình gây viêm cấp và bán cấp và các mô hình gây viêm mạn [29] Trong phạm vi khóa luận này, chúng tôi chỉ tổng quan về các mô hình gây viêm cấp và bán cấp Các mô hình gây viêm cấp và bán cấp  Mô hình gây... mẫu thử và lô chứng để đánh giá tác dụng chống viêm của mẫu thử Mô hình gây phù chân chuột bằng carragenin được sử dụng bởi nhiều nhà nghiên cứu và được chứng minh phù hợp với mục đích sàng lọc đánh giá tác dụng chống viêm của thuốc chống viêm không steroid, steroid, thuốc kháng histamin, kháng serotonin Mô hình gây phù bàn chân chuột là mô hình đơn giản, dễ tiến hành viêm cấp đáp ứng trong vài giờ,... dụng chống oxy hóa mà còn có tác dụng bảo vệ gan chuột trong trường hợp bị nhiễm độc bởi CCI4 [26] Nghiên cứu khác của Sang Hoon Jung và cộng sự về tác dụng chống tạo mạch và chống khối u của tectoridin và tectorigenin cho thấy cả 2 chất đều có tác dụng làm giảm quá trình tạo mạch và ức chế đáng kể sự tăng khối lượng khối u trên chuột gây u bằng tế bào, tương ứng là 24.8% và 44.2% [27] Ngoài ra, trên. .. còn có tác dụng ức chế miễn dịch, chống dị ứng, tác động trên quá trình chuyển hóa glucid, protid, lipid, chuyến hóa muối nước [4]  Cơ chế chống viêm: Glucocorticoid có tác dụng chống viêm là do ức chế phospholipase A2 thông qua kích thích tổng hợp lipocortin, làm giảm tổng hợp cả leucotrien và prostaglandin Ngoài ra nó còn có tác dụng ức chế dòng bạch cầu đơn nhân, đa nhân, lympho bào đi vào mô để... dụng giảm mức độ sưng phù của bàn chân chuột, tuy nhiên tác dụng của Tecan lúc này chưa rõ rệt Mức độ sưng phù giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng ở thời điểm 5 giờ, 6 giờ và 7 giờ sau khi gây viêm (p < 0,05) Tác dụng thể hiện rõ rệt nhất ở thời điểm 5 giờ, tuy nhiên ở thời điểm này tác dụng giảm mức độ phù chân chuột của Tecan 60 mg/kg yếu hơn indomethacin 10 mg/kg ( p < 0,05) Tác dụng của Tecan. .. hình gây phù bàn chân bằng kaolin và gây u hạt thực nghiệm bằng amian ở chuột cống trắng, và có độc tính thấp Flavonoid toàn phần của Xạ can có tác dụng ức chế yếu hoạt tính của men polypheniloxydase huyết thanh người Hoạt tính của men này trong huyết thanh người tăng rõ rệt trong các bệnh nhiễm khuẩn, trong viêm cấp tính hoặc mạn tính [12] 18 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI... [13] 1.2.5.1 Thuốc giảm đau trung ương • Cơ chế giảm đau: Các thuốc thuộc nhóm này có tác dụng giảm đau do ức chế trung tâm đau ở não và ngăn cản dẫn truyền cảm giác đau từ tủy sống lên 13 não Tác dụng giảm đau thường kèm tác dụng gây ngủ và gây nghiện [3] Nhóm này được phân làm 2 nhóm theo mức độ giảm đau [2]: - Loại giảm đau mạnh: Morphin, meperidin, fentanyl, methadon… - Loại giảm đau trung bình: . chuột bằng carageenin. - Đánh giá tác dụng giảm đau của Tecan trên mô hình gây đau quặn Kostler. - Đánh giá độc tính cấp tính và độc tính bán trường diễn của Tecan trên thực nghiệm. 3 CHƯƠNG 1: TỔNG. về tác dụng giảm đau của Tecan 34 3.2.2 Bàn luận về tác dụng chống viêm của Tecan 35 3.2.3 Bàn về độc tính của Tecan 36 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 4.1 Kết luận 40 4.1.1 Về tác dụng giảm. HOÀI ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH CỦA CHẾ PHẨM TECAN TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH HOÀI ĐÁNH