ĐÁNH GIÁ tác DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM, hạ ACID URIC TRÊN mô HÌNH THỰC NGHIỆM và độc TÍNH cấp của CHẾ PHẨM NHÂN CHÍNH ĐAN KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dƣợc sĩ

Kết quả đánh giá tác dụng hạ acid uric máu của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây tăng acid uric cấp bằng kali oxonat .... Tác dụng hạ acid uric của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô

CHÍNH ĐAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ

HÀ NỘI - 2019

MÔ HÌNH THỰC NGHIỆM VÀ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CHẾ PHẨM NHÂN

CHÍNH ĐAN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ

Lời cảm ơn

Nhân dịp hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin chân thành gửi lời cảm ơn tới các thầy cô giáo, gia đình, bạn bè và những người đã giúp đỡ em trong thời gian vừa qua

Trước hết, em xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đào Thị

Vui – Trưởng bộ môn Dược lực và ThS Ngô Thanh Hoa, những người thầy kính mến

đã tận tình hướng dẫn, quan tâm và chỉ bảo em trong suốt thời gian học tập và thực hiện đề tài

Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô giáo tại bộ môn Dược lực đã tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện cho em được học tập và nghiên cứu Em xin cảm ơn các thầy cô giáo đã dạy dỗ em trong năm năm học tại trường Đại học Dược Hà Nội, thầy cô không chỉ là người truyền đạt kiến thức mà còn là người dạy cho sinh viên chúng em về đạo đức nghề nghiệp và những kinh nghiệm sống quý báu

Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy Phạm Đức Vịnh, anh Đinh Đại Độ, chị

Đinh Thị Kiều Giang cùng các anh chị kĩ thuật viên tại bộ môn Dược lực đã giúp đỡ

em trong quá trình hoàn thành khóa luận

Xin gửi lời cảm ơn tới những người bạn đã và đang cùng nghiên cứu khoa học tại bộ môn Dược lực đã luôn động viên, giúp đỡ và đóng góp ý kiến để mình có thể hoàn thiện khóa luận

Cuối cùng xin gửi lời cảm ơn tới gia đình và người thân, những người luôn bên cạnh, ủng hộ và động viên con trong suốt thời gian con thực hiện khóa luận này

Hà Nội, tháng 5 năm 2019

Sinh viên

Nguyễn Đức Huy

MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2

1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ BỆNH GÚT 2

1.1.1 Khái niệm 2

1.1.2 Dịch tễ học 2

1.1.3 Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh 2

1.1.4 Đặc điểm lâm sàng và cận lâm sàng của bệnh gút 3

1.1.5 Một số nhóm thuốc điều trị gút 4

1.2 MỘT SỐ MÔ HÌNH DƯỢC LÝ THỰC NGHIỆM ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU VÀ HẠ ACID URIC 7

1.2.1 Mô hình đánh giá tác dụng chống viêm 7

1.2.2 Mô hình đánh giá tác dụng giảm đau 9

1.2.3 Mô hình đánh giá tác dụng hạ acid uric 10

1.3 TỔNG QUAN VỀ CHẾ PHẨM NHÂN CHÍNH ĐAN 11

1.3.1 Thành phần của chế phẩm Nhân Chính Đan 11

1.3.2 Tác dụng của một số vị thuốc trong chế phẩm Nhân Chính Đan 12

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ 15

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15

2.1.2 Động vật thí nghiệm 15

2.1.3 Hóa chất, thuốc thử 15

2.1.4 Thiết bị nghiên cứu 16

2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 16

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan 17 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau của chế phẩm Nhân Chính Đan 21

2.3.3 Phương pháp đánh giá tác dụng hạ acid uric máu của chế phẩm Nhân Chính Đan 22

2.3.4 Phương pháp xác định độc tính cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan 24

2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 24

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25

3.1 KẾT QUẢ 25

3.1.1 Kết quả đánh giá tác dụng chống viêm của chế phẩm Nhân Chính Đan 25

3.1.2 Kết quả đánh giá tác dụng giảm đau của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây đau quặn bằng acid acetic 28

3.1.3 Kết quả đánh giá tác dụng hạ acid uric máu của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây tăng acid uric cấp bằng kali oxonat 29

3.1.4 Kết quả xác định độc tính cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan 31

3.2 BÀN LUẬN 32

3.2.1 Về tác dụng chống viêm, giảm đau của chế phẩm Nhân Chính Đan 32

3.2.2 Về tác dụng hạ acid uric máu của chế phẩm Nhân Chính Đan 36

3.2.3 Về độc tính cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan 37

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

PGE2 Prostaglandin E2

TEN Hoại tử biểu bì nhiễm độc

TNFα Yếu tố hoại tử u - alpha

TNHH Trách nhiệm hữu hạn

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 2.1 Thang điểm đánh giá mức độ viêm khớp chân chuột dựa theo triệu chứng.20 Bảng 3.1 Tác dụng chống viêm của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan 25 Bảng 3.2 Tác dụng chống viêm của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng tinh thể natri urat 27 Bảng 3.3 Tác dụng giảm đau của chế phẩm Nhân Chính Đan lên trên mô hình gây đau quặn bằng acid acetic 28 Bảng 3.4 Tác dụng hạ acid uric của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây tăng acid uric máu cấp bằng kali oxonat 29

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 2.1 Quy trình thí nghiệm đánh giá tác dụng chống viêm của chế phẩm Nhân

Chính Đan trên mô hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan 18 Hình 2.2 Quy trình thí nghiệm đánh giá tác dụng chống viêm của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng natri urat 20 Hình 2.3 Quy trình thí nghiệm đánh giá tác dụng giảm đau của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây đau quặn bằng acid acetic 21 Hình 2.4 Quy trình thí nghiệm đánh giá tác dụng hạ acid uric máu của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây tăng acid uric cấp bằng kali oxonat 23 Hình 3.1 Biểu đồ thể hiện tác dụng chống viêm của chế phẩm Nhân Chính Đan trên

mô hình gây phù bàn chân chuột 26 Hình 3.2 Biểu đồ thể hiện tác dụng hạ acid uric của chế phẩm Nhân Chính Đan trên

mô hình gây tăng acid uric máu cấp 30

ĐẶT VẤN ĐỀ

Gút là hậu quả của sự chuyển hóa acid uric bất thường, tăng nồng độ acid uric máu và lắng đọng tinh thể urat ở các khớp, mô mềm và đường tiết niệu Biểu hiện lâm sàng của bệnh gút thường là những cơn đau khớp cấp tính, khởi phát đột ngột với các triệu chứng sưng đau dữ dội, nóng đỏ Các triệu chứng này ảnh hưởng không nhỏ tới chất lượng cuộc sống của người bệnh Trên thế giới, tỷ lệ mắc bệnh gút được báo cáo

là từ 0,1% đến xấp xỉ 10%, có xu hướng ngày càng gia tăng ở nhiều quốc gia [28] Tại Việt Nam, theo một nghiên cứu ở bệnh viện Bạch Mai, bệnh gút đứng thứ tư về tỷ lệ mắc trong các bệnh xương khớp, chiếm 8,57% [10] Năm 2003, tỷ lệ mắc bệnh gút ở nước ta là 0,14% dân số [33], [44]

Hiện nay, các thuốc điều trị bệnh gút còn ít, chỉ tập trung vào giảm triệu chứng viêm và đau do cơn gút cấp gây ra Tuy nhiên những thuốc này còn nhiều hạn chế do làm tăng nguy cơ xảy ra các tác dụng không mong muốn trên bệnh nhân khi sử dụng lâu dài Chính vì vậy việc nghiên cứu tìm ra thuốc mới có thể giảm thiểu nhược điểm của các thuốc đang sử dụng là rất cần thiết Một hướng nghiên cứu là đi từ các thuốc dược liệu hiện nay đang được quan tâm và tập trung phát triển

Chế phẩm Nhân Chính Đan xuất phát từ bài thuốc cổ truyền, đã được các lang y

sử dụng để điều trị viêm đau do bệnh gút cho người dân cho thấy kết quả khả quan, tuy nhiên chưa có nghiên cứu khoa học cụ thể nào đánh giá tác dụng trên bệnh gút của chế phẩm này Vì vậy việc sử dụng chế phẩm còn bị hạn chế Để chứng minh hiệu quả và bước đầu đánh giá tính an toàn của chế phẩm làm cơ sở cho việc sử dụng rộng rãi, góp phần đưa chế phẩm Nhân Chính Đan vào thực tế điều trị trên lâm sàng, chúng tôi thực hiện đề tài “Đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm, hạ acid uric trên mô hình thực nghiệm và độc tính cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan” với 3 mục tiêu chính:

 Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau thực nghiệm của chế phẩm Nhân Chính Đan

 Đánh giá tác dụng hạ acid uric máu thực nghiệm của chế phẩm Nhân Chính Đan

 Xác định độc tính cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ BỆNH GÚT

ít khi xảy ra ở người trẻ tuổi, ở nữ giới bệnh ít khi xảy ra trước tuổi mãn kinh [6]

Ở các nước phương tây, bệnh xuất hiện với tỷ lệ 3 – 6% ở nam và 1 – 2% ở nữ, một số nước khác tỷ lệ này có thể lên tới 10% Tỷ lệ tăng lên tới 10% ở nam và 6% ở

nữ hơn 80 tuổi Hằng năm, có 2,68 trên tổng số 1000 người mới mắc bệnh Bệnh liên quan tới mức sống và chế độ dinh dưỡng, tỷ lệ mắc bệnh ngày càng gia tăng do thói quen ăn uống giàu đạm, thiếu rèn luyện thể lực, tăng tỷ lệ béo phì và hội chứng chuyển hóa [42]

1.1.3 Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh

Nguyên nhân chính gây bệnh gút là do sự lắng đọng các tinh thể muối urat trong

mô sụn, ổ khớp gây ra các triệu chứng viêm Tăng acid uric máu là điều kiện cần dẫn đến lắng đọng tinh thể muối urat tại tổ chức Tinh thể muối urat có vai trò chính trong

cơ chế bệnh sinh của bệnh gút

Cơ chế bệnh sinh bệnh gút:

Urat là dạng ion hóa của acid uric có trong cơ thể Acid uric là một acid yếu có

pH 5,8 Sự lắng đọng tinh thể urat trong các mô bắt đầu xảy ra khi nồng độ acid uric huyết thanh tăng cao hơn ngưỡng bình thường [42] Tăng acid uric máu kéo dài, cơ thể thích nghi bằng một loạt các phản ứng nhằm giảm acid uric trong máu bằng cách: tăng bài tiết qua thận, lắng đọng muối urat ở một số tổ chức như da, màng hoạt dịch, kẽ thận, gân… dẫn đến sự biến đổi về hình thái của các tổ chức này Lắng đọng acid uric trong dịch khớp tạo thành các tinh thể hình kim gây tổn thương sụn, màng hoạt dịch, bao khớp Các tinh thể lắng đọng gây viêm tại chỗ bằng cách tấn công đại thực bào Các tế bào này sau đó giải phóng các cytokines, TNFα, dẫn đến hoạt hóa yếu tố hageman, hoạt hóa bổ thể, hoạt hóa plasminogen gây tăng tính thấm thành mạch, tăng khả năng xuyên mạch của bạch cầu, rối loạn vi tuần hoàn tại chỗ, giảm pH tổ chức làm

acid uric dễ kết tủa hơn Sau khi tấn công lớp sụn, tinh thể urat ăn sâu xuống tận lớp xương dưới sụn hình thành các hạt tophi, phá hủy cấu trúc xương dưới dạng ổ khuyết xương hình cầu Viêm màng hoạt dịch, tăng sinh màng hoạt dịch, thâm nhiễm các tế bào lympho là tổn thương thứ phát Lắng đọng tinh thể urat ở thận dẫn tới tổn thương thận như viêm thận kẽ, sỏi thận, xơ hóa cầu thận, lâu dần sẽ tiến triển tới suy thận, tăng huyết áp [6]

1.1.4 Đặc điểm lâm sàng và cận lâm sàng của bệnh gút

1.1.4.1 Đặc điểm lâm sàng

Cơn gút cấp tính đầu tiên thường xuất hiện ở lứa tuổi 35 - 55, ít khi trước 25 hoặc sau 65 tuổi Ở nữ ít xảy ra trước tuổi mãn kinh, ở nam tuổi càng trẻ thì bệnh càng nặng Cơn gút cấp tính thường xảy ra sau bữa ăn có nhiều thịt (nhất là loại thịt có nhiều purin), rượu, sau chấn thương kể cả vi chấn thương, sau nhiễm khuẩn, dùng các thuốc lợi tiểu thiazid…[1]

 Triệu chứng lâm sàng của cơn gút cấp:

- Xuất hiện đột ngột vào ban đêm, bệnh nhân thức dậy vì đau ở khớp, thường là khớp ngón chân cái (60-70%): khớp sưng to, đau dữ dội và ngày càng tăng Lúc đầu chỉ viêm một khớp sau đó có thể viêm nhiều khớp

- Ngoài khớp ra, túi thanh dịch, gân, bao khớp cũng có thể bị thương tổn

- Các dấu hiệu viêm có thể kéo dài nhiều ngày, thường từ 5 – 7 ngày rồi các dấu hiệu viêm giảm dần: đỡ đau, đỡ phù nề Hết cơn, khớp trở lại hoàn toàn bình thường

- Cơn gút cấp dễ tái phát, khoảng cách có thể gần nhưng cũng có thể rất xa, có khi > 10 năm

- Bên cạnh thể điển hình, cũng có thể tối cấp với khớp viêm sưng tấy dữ dội, bệnh nhân đau nhiều nhưng cũng có thể gặp thể nhẹ, kín đáo, đau ít dễ bị bỏ qua

- Xét nghiệm dịch khớp: quan trọng nhất là tìm tinh thể urat trong dịch khớp Dịch khớp viêm giàu tế bào (> 2000 tb/mm3), chủ yếu là bạch cầu đa nhân trung tính Trong

cơn gút cấp có thể có tăng tốc độ máu lắng, tăng bạch cầu trong dịch khớp 5000/mm3,

đa số là loại đa nhân, dưới kính hiển vi thấy nhiều tinh thể urat

- Xquang khớp: giai đoạn đầu bình thường, nếu muộn có thể thấy các ổ khuyết xương hình hốc ở đầu xương, hẹp khe khớp, gai xương…

- Các xét nghiệm khác: tốc độ máu lắng tăng, CRP bình thường hoặc tăng…[1]

1.1.5 Một số nhóm thuốc điều trị gút

1.1.5.1 Thuốc ức chế xanthin oxidase

Xanthin oxidase là enzym xúc tác cho 2 bước cuối cùng trong chu trình chuyển hóa purin, quá trình hydroxyl hóa hypoxanthin thành xanthin và từ xanthin thành acid uric Thuốc ức chế xanthin oxidase ngăn cản sự tạo thành acid uric do bất kì nguyên nhân nào, trên lâm sàng được sử dụng nhiều để điều trị tăng acid uric máu và gút mạn tính, ngăn ngừa các cơn gút tái phát Các thuốc hiện đang được sử dụng là allopurinol

 Febuxostat

Febuxostat tạo phức hợp bền vững với cả dạng oxy hóa và dạng khử của xanthin oxidase, do đó ức chế hoạt động của enzym Febuxostat cũng được FDA chấp thuận để điều trị tăng acid uric ở bệnh nhân mắc bệnh gút, nhưng không được khuyến cáo điều trị tăng acid uric không triệu chứng Các thử nghiệm lâm sàng cho thấy febuxostat

hiệu quả hơn allopurinol trong việc làm giảm acid uric máu [12] Một số tác dụng không mong muốn có thể gặp khi sử dụng thuốc bao gồm: buồn nôn, rối loạn chức năng gan, đau khớp và phát ban, phù, gia tăng đợt bùng phát gút cấp tính khi bắt đầu điều trị, tăng tỷ lệ nhồi máu cơ tim và đột quỵ…[12], [51]

1.1.5.2 Thuốc làm tăng thải trừ urat qua thận

Thuốc làm tăng thải trừ urat qua thận bằng cách cạnh tranh ức chế tái hấp thu acid uric tại ống lượn gần, thông qua ức chế các chất vận chuyển anion ở tế bào ống thận Hai thuốc được sử dụng rộng rãi nhất trong nhóm là probenecid và sulfinpyrazon [16] Nhóm thuốc này ít được sử dụng hơn so với nhóm ức chế xanthin oxidase, bị chống chỉ định với các bệnh nhân suy giảm chức năng thận (độ thanh thải creatinin <

50 mL/phút), tiền sử bị sỏi thận, đặc biệt là sỏi urat Các tác dụng không mong muốn của nhóm thuốc này có thể gặp phải bao gồm: phản ứng quá mẫn (nổi mề đay, hội chứng Stevens - Johnson), thiếu máu bất sản, gây độc tính trên gan (hoại tử gan), đau bụng, tiêu chảy, làm khởi phát cơn gút cấp [2], [16] Một số thuốc trong nhóm: probenecid, sulfinpyrazon, benzbromazon

 Probenecid

Probenecid được dùng để điều trị tăng acid uric máu do bệnh gút, tăng acid uric máu thứ cấp do dùng thuốc lợi tiểu thiazid, furosemid, pyrazinamid và ethambutol Thuốc không được sử dụng cho tình trạng tăng acid uric không triệu chứng, tăng acid uric do hóa trị liệu ung thư [2]

 Sulfinpyrazon

Sulfinpyrazon được sử dụng để điều trị tăng acid uric máu tương tự như probenecid và có thể dùng phối hợp với allopurinol để tăng tác dụng, đặc biệt ở bệnh nhân có hạt tophi

 Benzbromazon

Benzbromazon là thuốc có tác dụng tăng thải trừ acid uric mạnh, có thể được sử dụng hiệu quả cho bệnh nhân suy thận nhẹ và vừa, bệnh nhân bị dị ứng hoặc thất bại điều trị với thuốc khác Thuốc dùng phối hợp với allopurinol có hiệu quả hơn so với thuốc đơn độc trong việc làm giảm nồng độ acid uric máu [12]

1.1.5.3 Thuốc làm tiêu acid uric

Các thuốc trong nhóm này được tái tổ hợp và biến đổi từ enzym uricase ở động vật, có tác dụng kích thích chuyển hóa acid uric thành allantoin dễ tan khiến nồng độ

acid uric máu giảm xuống Pegloticase là thuốc được FDA phê duyệt vào năm 2010 để điều trị gút mạn tính không đáp ứng với các thuốc hạ acid uric khác [37] Rasburicase được phê duyệt cho điều trị tăng acid uric máu thứ phát ở trẻ em điều trị ung thư, sử dụng thường quy rasburicase trên người trưởng thành có nguy cơ phát triển kháng thể kháng uricase, có thể dẫn đến quá mẫn [10], [16]

1.1.5.4 Thuốc chống viêm không steroid (NSAID)

Các thuốc nhóm NSAID ức chế enzym COX-2 là enzym chuyển hóa acid arachidonic thành prostaglandin, làm giảm sự tạo thành prostaglandin tại ổ viêm Thuốc nhóm này được sử dụng để điều trị triệu chứng đau và viêm trong các bệnh về xương khớp như viêm khớp dạng thấp, thoái hóa khớp, gút Indomethacin, naproxen, sulindac, celecoxib và etoricoxib đều đã được biết đến có hiệu quả trong bệnh gút, tuy nhiên chỉ có ba thuốc đầu tiên là được FDA phê duyệt cho điều trị gút cấp tính [12], [16]

Tất cả các NSAID đều có nguy cơ gây ra tác dụng không mong muốn như viêm loét đường tiêu hóa (NSAID ức chế COX không chọn lọc); đột quỵ, nhồi máu cơ tim (các NSAID ức chế chọn lọc COX-2); phản ứng quá mẫn (nổi mề đay, co thắt phế quản, hen phế quản dẫn đến phù thanh quản); giảm độ thanh thải creatinin huyết thanh, tăng huyết áp, đau đầu [16]…Mặc dù nguy cơ loét dạ dày tá tràng và xuất huyết là tương đối thấp khi điều trị gút trong thời gian ngắn, tuy nhiên vẫn cần cân nhắc sử dụng trên người cao tuổi, người có tiền sử loét, hoặc đang sử dụng các thuốc chống đông máu

1.1.5.5 Corticosteroid

Corticosteroid thường được sử dụng để điều trị viêm khớp cấp tính do gút khi có chống chỉ định với NSAID Một số bằng chứng gần đây chỉ ra rằng corticosteroid có hiệu quả tương đương với NSAID trong điều trị gút cấp tính, có thể dùng đường toàn thân hoặc tiêm nội khớp Sử dụng corticosteroid đường uống lâu dài có thể gây ra các tác dụng phụ liên quan đến liều lượng sử dụng và thời gian điều trị như: tăng huyết áp, tăng đường huyết, tăng cân, hạ kali máu và gây phù Sử dụng đường tiêm nội khớp phải được thực hiện bởi chuyên gia có kinh nghiệm, và cần xác định khớp không bị nhiễm trùng [16] Phương pháp điều trị này phức tạp bởi nó đòi hỏi yêu cầu cao về trình độ chuyên môn của người trực tiếp thực hiện kỹ thuật tiêm Tác dụng không

mong muốn thường gặp nhất khi sử dụng corticosteroid đường tiêm nội khớp là nhiễm khuẩn tại vị trí khớp tiêm

1.1.5.6 Colchicin

Colchicin làm giảm đáp ứng viêm đối với sự lắng đọng các tinh thể urat lên các

mô của khớp, có thể thông qua nhiều cơ chế, bao gồm ức chế hóa ứng động và kích hoạt bạch cầu trung tính, làm bạch cầu trung tính giảm sản xuất acid lactic, giảm thực bào Colchicin là một thuốc có hiệu quả cao trong việc làm giảm các cơn gút cấp tính, nhưng lại có tỷ lệ lợi ích/độc tính thấp nhất trong các phương pháp điều trị gút bằng thuốc [16] Colchicin được chỉ định trong đợt cấp của gút, phối hợp với probenecid để phòng tái phát viêm khớp do gút và điều trị dài ngày bệnh gút [2] Các triệu chứng giảm sau 2 – 3 ngày dùng thuốc, tuy nhiên bệnh nhân có thể thường xuyên gặp phải tác dụng bất lợi trên đường tiêu hóa phụ thuộc liều: buồn nôn, nôn, đau bụng, tiêu chảy, nổi ban, tổn thương thận [12] Tác dụng phụ quan trọng khác bao gồm giảm bạch cầu trung tính, bệnh lý thần kinh sợi trục, rụng tóc, giảm số lượng tinh trùng [2], [16]

1.2 MỘT SỐ MÔ HÌNH DƢỢC LÝ THỰC NGHIỆM ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU VÀ HẠ ACID URIC

1.2.1 Mô hình đánh giá tác dụng chống viêm

1.2.1.1 Mô hình đánh giá tác dụng chống viêm cấp

 Mô hình gây phù bàn chân chuột:

Nguyên tắc:

Khi tiêm carrageenan vào bàn chân chuột sẽ kích thích giải phóng các chất trung gian hóa học như histamin, serotonin, prostaglandin… và kết quả là gây phù Sau đó tiến hành đo thể tích bàn chân chuột hoặc trước và sau khi tiêm chất gây viêm để so sánh hiệu quả ức chế phù [13], [17], [54], [56] Các thuốc có tác dụng chống viêm sẽ làm giảm mức độ phù chân chuột

Các chất gây viêm tương tự:

Tương tự mô hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenin, nhiều nhà nghiên

cứu đã tìm ra các mô hình gây viêm sử dụng các chất kích thích khác như: formalin 1%, dung dịch dextran 1 đến 3%, lòng trắng trứng 1% (Turner 1965); hỗn dịch kaolin 5% (Lorenz 1961, Wagner-Jauregg và cộng sự 1962); dung dịch carrageenan 0,2%, dung dịch carrageenan 1% thêm 100ng PGE 2 hoặc PGI 2 , dung dịch ß-

naphthoylheparamin 0,5%, dung dịch collagenase 0,1%, dung dịch trypsin 0,1%, dung

dịch serotonin 0,02%, bradykinin 0,005%, PGE 2 0,1mg/ml, anti-IgG 0,05%, hỗn dịch

Aerosil 2,5%, gel bentonit; nystatin 15000 đơn vị, hỗn dịch bột mù tạt 2,5%, dung dịch

chứa 1 đơn vị yếu tố nọc độc rắn hổ mang (Leyck và Parnham 1990)…

 Mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối

Nguyên tắc:

Viêm khớp do gút là do sự tích tụ của tinh thể urat trong khớp gây nên Năm

1963, Faires và McCarty lần đầu tiên phát triển mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối dựa trên sinh lý bệnh gút cấp tính [54] Khi tiêm hỗn dịch natri urat vào khớp gối, chuột trải qua cơn đau dữ dội giống như triệu chứng của một cơn gút cấp Tiến hành cho chuột sử dụng thuốc đối chiếu và thuốc thử, sau đó gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng natri urat để đánh giá tác dụng chống viêm của thuốc Thông số đánh giá là điểm mức độ viêm của chuột ở các lô, được tính từ 1+ đến 4+ lần lượt cho từng biểu hiện: không có biểu hiện di chuyển bất thường, đi khập khiễng, đi khập khiễng bằng 3 chân không liên tục và đi hoàn toàn bằng 3 chân

Các chất gây viêm tương tự:

Tương tự mô hình của McCarty, một số nhà nghiên cứu đã cải tiến và tìm ra các

phương pháp sử dụng chất gây viêm màng hoạt dịch khác: tiêm prostaglandin E1 và

E2 vào khớp gối của chó (Rosenthale 1972), tiêm hỗn dịch kaolin 4% vào khớp gối

của mèo (Schaible và Schmidt 1985), tiêm 300µg carrageenan trong 50 µl nước muối sinh lý vào khớp xương chày chuột (Schött 1994), tiêm chất P (Carleson 1996)…

1.2.1.2 Mô hình đánh giá tác dụng chống viêm mạn

 Mô hình gây u hạt thực nghiệm

Các chất gây viêm tương tự:

Các nhà nghiên cứu đã đề xuất và cải tiến nhiều mô hình gây u hạt thực nghiệm

sử dụng các chất gây viêm khác như: gây u hạt bằng viên giấy lọc tẩm formalin 7%

(Tanaka 1960); gây u hạt bằng viên bông tẩm dịch chiết xuất từ ớt (Hicks 1969); thay viên bông băng đĩa giấy (Tsurumi, 1986); gây u hạt bằng tinh dầu thông (Levy 1968), mảnh kính (Vogel 1970), bọt biển (Saxena 1960)…

1.2.2 Mô hình đánh giá tác dụng giảm đau

1.2.2.1 Mô hình đánh giá tác dụng giảm đau ngoại vi

 Mô hình gây đau quặn

Nguyên tắc:

Khi tiêm một chất kích thích gây đau vào khoang màng bụng của chuột, chuột phản ứng lại bằng một hành vi đặc trưng gọi là cơn đau quặn Tiến hành cho chuột sử dụng thuốc đối chiếu và thuốc thử rồi gây đau, có thể đánh giá được tác dụng giảm đau của thuốc thông qua việc làm giảm số cơn đau quặn Đếm số cơn đau quặn của chuột trong mỗi khoảng thời gian và tính phần trăm ức chế cơn đau quặn của lô sử dụng thuốc so với lô chứng Thuốc có phần trăm ức chế lớn hơn 70% được coi là có hoạt tính giảm đau cao [19], [27], [54]

Các chất gây đau sử dụng cho mô hình gây đau quặn:

Một số mô hình gây đau quặn đã được các nhà nghiên cứu phát triển như: tiêm

màng bụng 0,1ml dung dịch acid acetic 0,6% (Koster 1959, Taber 1969); tiêm màng bụng acetylcholin (Amanuma 1984, Nolan 1990); tiêm màng bụng prostaglandin E1 31,6 µg/kg (Sancillo 1987); bradykinin (Burns 1968, Emele và Shanaman 1963); hỗn dịch 0,4ml gồm acid acetic 0,25%, kaolin 7,5 mg/ml, dung dịch zymosan 2,4 mg/ml hoặc bradykinin 25 µg/ml (Heapy 1993)…

 Mô hình Randall – Selitto

Nguyên tắc:

Viêm làm tăng độ nhạy cảm với đau của tổ chức, giảm ngưỡng phản ứng đau và ngưỡng phản ứng này dễ tăng lên nhờ tác dụng của thuốc giảm đau Tiêm chất kích thích vào gan bàn chân chuột để gây đau rồi tiến hành đo ngưỡng phản ứng đau, so sánh ngưỡng đau giữa lô thử và lô đối chiếu để đánh giá hiệu quả giảm đau của thuốc Thông số đánh giá là ngưỡng phản ứng đau của chuột ở các lô và tỷ lệ phần trăm ức chế ngưỡng phản ứng đau của lô dùng thuốc so với lô chứng

Các chất kích thích gây đau sử dụng cho mô hình Randall – Selitto

Mô hình Randall – Selitto lần đầu tiên được phát triển bởi Randall và Selitto sau

đó được Winter cải tiến năm 1963 bằng cách tiêm carrageenan vào gan bàn chân

chuột [54] Một số nhà nghiên cứu dựa trên mô hình đó xây dựng các mô hình tương

tự sử dụng các chất kích thích khác như: tiêm 0,1 ml dung dịch trypsin (Vinegar 1990); tiêm chất P kết hợp capsaicin (Davis 1996); tiêm chất gây viêm như

1993)…

1.2.2.2 Mô hình đánh giá tác dụng giảm đau trung ương

 Mô hình mâm nóng

Nguyên tắc:

Bàn chân chuột rất nhạy cảm với nhiệt độ cao Khi đặt chuột lên một mâm nóng

có nhiệt độ duy trì 55 – 56oC, chuột phản ứng lại bằng một số biểu hiện như: nhảy lên,

co chân hoặc liếm bàn chân Sử dụng đồng hồ bấm giây ghi lại thời gian từ lúc uống thuốc cho đến khi chuột có biểu hiện như trên Nếu thuốc có tác dụng giảm đau thì chuột sẽ không có hoặc chậm xuất hiện các phản xạ trên [54] Thông số đánh giá là thời gian từ lúc chuột uống thuốc cho đến khi xuất hiện phản xạ nhảy, co chân hoặc liếm bàn chân

Các mô hình tương tự:

Mô hình mâm nóng lần đầu tiên được khởi xướng bởi Woolfe và MacDonald năm 1944 Các nhà nghiên cứu sau này đã phát triển một số mô hình tương tự như: hạ nhiệt độ mâm nóng xuống 49,5oC (O’Callaghan và Holtzman 1975, Zimer và cộng sự 1986), mô hình mâm nóng với nhiệt độ 50oC (Ankier 1974), sử dụng máy đo tự động (O’Neill 1983), mô hình tăng dần nhiệt độ (Tjolsen 1991) [50]

1.2.3 Mô hình đánh giá tác dụng hạ acid uric

1.2.3.1 Mô hình đánh giá tác dụng hạ acid uric cấp

 Mô hình gây tăng acid uric cấp thực nghiệm

Nguyên tắc:

Kali oxonat là một chất ức chế enzym uricase chọn lọc, làm giảm tác dụng oxy hóa khử acid uric của uricase gan, dẫn tới làm tăng nồng độ acid uric máu [26], [30], [45], [49] Sau khi cho chuột sử dụng thuốc thử và thuốc đối chiếu, gây tăng acid uric cấp bằng cách tiêm màng bụng kali oxonat Để đánh giá tác dụng hạ acid uric của

thuốc, tiến hành đo nồng độ acid uric huyết thanh chuột ở các lô và tính tỷ lệ phần trăm giảm nồng độ acid uric huyết thanh của lô sử dụng thuốc so với lô chứng

Các mô hình tương tự:

Một số mô hình gây tăng acid uric cấp được các nhà nghiên cứu cải tiến như:

tiêm kali oxonat liều 80 mg/kg trong Na-CMC 1% trên chuột chù cây (Tang 2017); gây tăng acid uric bằng kali oxonat 250 mg/kg hai lần mỗi ngày trên chuột cống (Starvic 1975); kali oxonat 250 mg/kg (Kong 2004, D.Souza 2012)…

1.2.3.2 Mô hình đánh giá tác dụng hạ acid uric mạn

 Mô hình gây tăng acid uric mạn

Nguyên tắc:

Acid oxonic và muối kali của nó là những chất ức chế enzym uricase làm acid uric không chuyển hóa thành allatoin, dẫn đến tăng nồng độ acid uric trong máu Bổ sung vào thức ăn của chuột kali oxonat trong 3 tuần có thể làm tăng nồng độ acid uric lên cao gấp ba lần bình thường (Stavric 1969) Tiến hành cho chuột sử dụng thuốc thử

và thuốc đối chiếu trong thời gian nghiên cứu, có thể đánh giá được hiệu quả giảm nồng độ acid uric của thuốc trong mô hình gây tăng acid uric mạn tính [23], [25], [29], [30], [46] Tại các thời điểm sau 3 và 5 tuần, định lượng nồng độ acid uric huyết thanh

và so sánh giữa các lô Kết thúc thực nghiệm, xét nghiệm mô bệnh học thận chuột

Các mô hình tương tự:

Mô hình gây tăng acid uric mạn lần đầu tiên được phát triển bởi Stavric và cộng

sự năm 1969, bằng cách bổ sung vào thức ăn của chuột 5% kali oxonat và 1% acid

uric; các nhà nghiên cứu khác nghiên cứu và cải tiến thành nhiều mô hình tương tự

như: thêm 2% kali oxonat và 3% acid uric vào thức ăn (Bluestone 1975); tiêm kali

oxonat 250 mg/kg vào màng bụng chuột (Johnson 1969)…

1.3 TỔNG QUAN VỀ CHẾ PHẨM NHÂN CHÍNH ĐAN

1.3.1 Thành phần của chế phẩm Nhân Chính Đan

Thành phần của chế phẩm Nhân Chính Đan kết hợp nhiều vị dược liệu sau: hy thiêm, thổ phục linh, ngưu tất, thiên niên kiện, phòng đẳng sâm, hà thủ ô, sinh địa, cốt toái bổ, kê huyết đằng, bồ công anh, dây đau xương, cà gai leo, tang ký sinh, xấu hổ tía, cam thảo, tinh bột nghệ và tá dược (ba gạc, tinh bột hoàng tinh)

1.3.2 Tác dụng của một số vị thuốc trong chế phẩm Nhân Chính Đan

Một số vị thuốc theo y học cổ truyền đã biết có tác dụng chống viêm, giảm đau,

bổ can thận, mạnh gân cốt như: hy thiêm, ngưu tất, thổ phục linh, tang ký sinh, thiên niên kiện, cốt toái bổ…Trong đó một số vị thuốc có các nghiên cứu chứng minh tác dụng chống viêm, giảm đau liên quan tới bệnh gút được trình bày dưới đây:

1.3.2.1 Hy thiêm

- Tên khoa học: Siegesbeckia orientalis L (S.glutinosa Wall., Minyranthes

heterophylla Turcz.) thuộc họ Cúc Asteraceae [7]

- Bộ phận dùng: toàn cây

- Công dụng: khử phong thấp, lợi gân cốt, giảm đau, đồng thời có tác dụng giải độc an thần, hạ áp

Một số nghiên cứu về tác dụng của hy thiêm trên bệnh gút:

Năm 2012, Nguyễn Thùy Dương đã nghiên cứu tác dụng trên bệnh gút thực nghiệm của cây hy thiêm Kết quả nghiên cứu cho thấy hy thiêm có tác dụng hạ acid uric máu trên mô hình thực nghiệm [5]

Năm 2011, Wang và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau của kirenol phân lập từ hy thiêm Kết quả nghiên cứu cho thấy kirenol có tác dụng giảm đau và chống viêm tại chỗ [55]

Hong và cộng sự năm 2014 đã nghiên cứu tác dụng chống viêm của dịch chiết ethanol từ cây hy thiêm Kết quả cho thấy dịch chiết ethanol từ cây hy thiêm có tác dụng chống viêm trên cả mô hình invivo và invitro [21]

Một số nghiên cứu về tác dụng chống viêm, giảm đau của thổ phục linh:

Năm 1997, Jiang và cộng sự nghiên cứu tác dụng của dịch chiết nước thổ phục linh, kết quả cho thấy sự ức chế đáng kể phù nề trên chân viêm thứ cấp của chuột trong mô hình gây phù bằng carrageenan [24]

Lu và cộng sự năm 2014 chứng minh tác dụng chống oxy hóa và chống viêm của dịch chiết phenolic từ thổ phục linh, các tác dụng này được cho rằng có vai trò lớn của các hoạt chất flavonoid như astilbin, epicatechin, catechin Năm 2015, Lu và cộng sự tiếp tục nghiên cứu các hợp chất phân lập từ thổ phục linh và đã phát hiện nhiều hoạt

chất chống viêm có tiềm năng như: trans-resveratrol, syringic acid, syringaresinol,

lasiodiplodin, de-O-methyllasiodiplodin và dihydrokaempferol [31]

Trong nghiên cứu của Man và cộng sự năm 2008, công thức thảo dược Tuhuai gồm các vị dược liệu hòe hoa, thổ phục linh, cam thảo cho thấy tác dụng giảm viêm ở

cả mô hình viêm da dị ứng và viêm da tiếp xúc [32]

Một số nghiên cứu về tác dụng của ngưu tất trên các bệnh về khớp:

Trong nghiên cứu của T Vetrichelvan và M Jegadeesan năm 2002, cao chiết cồn

từ rễ ngưu tất có tác dụng ức chế phù bàn chân chuột trên mô hình viêm cấp tính, và giảm trọng lượng u hạt ở mô hình viêm mạn tính [52]

Năm 2012, Zhang và cộng sự đã phân lập được 8 hợp chất phytoecdysteroid từ ngưu tất, trong đó có các hợp chất ecdysteron đã biết là có tác dụng chống viêm [57] Năm 2014, Gang He và cộng sự nghiên cứu tác dụng của saponin có trong cây ngưu tất Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng các saponin này có tác dụng cải thiện mật độ xương bằng cách thúc đẩy sự tăng sinh và biệt hóa các tế bảo tủy xương [20]

Một số nghiên cứu về tác dụng chống viêm của tang ký sinh:

Gan và cộng sự năm 2010 tiến hành sàng lọc trên 50 dược liệu tại Trung Quốc có liên quan tác dụng trong điều trị các bệnh về thấp khớp Kết quả chỉ ra rằng Tang ký sinh là một trong sáu dược liệu có hàm lượng phenolic cao nhất, tương ứng với khả năng chống oxy hóa cao nhất trong các dược liệu được đưa vào nghiên cứu [18]

S.Z Moghadamtousi và cộng sự năm 2014 nghiên cứu dịch chiết từ tang ký sinh cho thấy có tác dụng chống oxy hóa mạnh, hoạt tính này được cho rằng liên quan đến các hợp chất phenolic có trong cành và lá của cây tang ký sinh [35]

Võ Vân Anh và cộng sự năm 2012 nghiên cứu tác dụng của avicularin trong mô hình invitro cho thấy avicularin thể hiện hoạt tính chống viêm bằng cách ức chế sản xuất NO, PGE2 và ức chế giải phóng các cytokine [53]

1.3.2.5 Thiên niên kiện

- Tên khoa học: Homalomena aromatica (Roxb) thuộc họ Ráy Araceae [7]

- Bộ phận dùng: thân rễ

- Công dụng: khử phong thấp, mạnh gân cốt, chữa khớp xương đau nhức, co quắp,

tê dại, kích thích tiêu hóa

Một số nghiên cứu về tác dụng của thiên niên kiện:

Năm 2002, Peana và cộng sự nghiên cứu tác dụng chống viêm của linalool và linalyl acetate, kết quả nghiên cứu cho thấy linalool và linalyl acetat làm giảm mức độ phù chân chuột trong mô hình gây phù bằng carrageenin [40]

Năm 2010, Batista và cộng sự nghiên cứu tác dụng giảm đau của linalool, kết quả nghiên cứu cho thấy linalool có tác dụng ức chế cảm giác đau trong mô hình gây viêm mạn bằng chất bổ trợ Freund và mô hình thắt đoạn dây thần kinh tọa [11], [14]

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Chế phẩm Nhân Chính Đan do công ty TNHH Nhân Chính cung cấp

Dạng bào chế: viên hoàn đan, khối lượng trung bình viên 2350 mg/viên

Quy cách đóng gói: mỗi hộp 20 viên hoàn đan màu vàng

Liều dùng cho nghiên cứu là liều được gợi ý từ liều dùng trên người (2 viên/ngày, tương đương 94 mg/kg cân nặng) Từ mức liều này, quy đổi thành các liều thử tương ứng trên chuột:

- Mức liều 1: 660 mg/kg đối với chuột cống; 1130 mg/kg đối với chuột nhắt (tương đương liều dùng trên người)

- Mức liều 2: 1320 mg/kg đối với chuột cống; 2260 mg/kg đối với chuột nhắt (gấp đôi liều dùng trên người)

tễ Trung ương cung cấp, uống nước tự do

2.1.3 Hóa chất, thuốc thử

- Indomethacin (CT CPDP Hà Tây, SĐK: VD-15141-11, NSX: 8/9/2017 – HSD: 4/9/2019)

- Allopurinol (Aspen Pharma, LOT: G00217, HSD: 11/2020)

- Bộ hóa chất định lượng acid uric gồm hóa chất phản ứng (BioSystem, LOT: 223XA, HSD: 31/3/2019) và acid uric chuẩn (BioSystem, LOT: 081XB, HSD: 31/3/2020)

- Kali oxonat 97%, dùng cho nghiên cứu và phát triển

- Carrageenan (Sigma Aldrich)

- Natri hydroxid, acid uric, NaCl, natri carboxymethyl cellulose (Na-CMC), các hóa chất và thuốc thử khác đạt chuẩn nghiên cứu

2.1.4 Thiết bị nghiên cứu

- Thiết bị đo độ phù chân chuột Plethysmometer LE 7500 (Letica Scientific Instruments)

- Đồng hồ bấm giây Nhật Bản

- Cân phân tích AY 220 (SHIMADZU)

- Cân kỹ thuật GM 312 (Sartorius)

- Micropipet một đầu kênh và đa kênh với các loại thể tích: 2-10 µl, 10-100 µl, 100-1000 µl

- Máy ly tâm EBA 20 (Hettich Zentrifugen, Đức)

- Máy sinh hóa TC-3300 Plus (Teco Diagnostics USA)

- Máy móc và dụng cụ sử dụng để pha thuốc lấy mẫu và xét nghiệm: đầu côn, dụng cụ thủy tinh, chày, cối sứ, mao quản, bơm kim tiêm, ống nghiệm các loại… thuộc phòng thí nghiệm bộ môn Dược lực Trường Đại học Dược Hà Nội

2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

Để giải quyết ba mục tiêu đã đề ra, nghiên cứu gồm ba nội dung chính:

 Nội dung 1: Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau của chế phẩm Nhân Chính Đan

- Đánh giá tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan

- Đánh giá tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng tinh thể natri urat

- Đánh giá tác dụng giảm đau ngoại vi trên mô hình gây đau quặn bằng acid acetic

 Nội dung 2: Đánh giá tác dụng hạ acid uric của chế phẩm Nhân Chính Đan trên

mô hình gây tăng acid uric máu cấp bằng kali oxonat

 Nội dung 3: Xác định độc tính cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan

2.3.1.1 Mô hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan

Nghiên cứu đánh giá tác dụng chống viêm cấp của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây phù thực nghiệm bằng carrageenan theo Winter (1962) [54], [56]

Thiết kế thí nghiệm:

Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô:

- Lô chứng bệnh: uống nước cất

- Lô chứng dương: uống indomethacin liều 10 mg/kg cân nặng

- Lô thử NCĐ1: uống chế phẩm Nhân Chính Đan liều 660 mg/kg cân nặng

- Lô thử NCĐ2: uống chế phẩm Nhân Chính Đan liều 1320 mg/kg cân nặng Chuột được uống nước cất, thuốc chứng dương hoặc chế phẩm nghiên cứu với cùng thể tích 1ml/100g cân nặng chuột vào một giờ nhất định hàng ngày trong 4 ngày trước khi gây viêm Ngày thứ 5, đo thể tích bàn chân sau phải của chuột tại thời điểm trước khi gây viêm được giá trị V0 Một giờ sau khi uống nước cất, thuốc chứng dương hoặc chế phẩm nghiên cứu lần cuối cùng, chuột được gây viêm bằng cách tiêm carrageenan 1% pha trong nước muối sinh lý vào dưới da gan bàn chân sau phải Đo thể tích bàn chân sau phải của chuột tại các thời điểm: 1, 3, 5, 7 giờ sau khi gây viêm được V1, V3, V5, V7

Quy trình tiến hành thí nghiệm được mô tả như hình 2.1

Hình 2.1 Quy trình thí nghiệm đánh giá tác dụng chống viêm của chế phẩm Nhân Chính Đan trên mô hình gây phù bàn chân chuột bằng carrageenan

Kỹ thuật đo độ phù bàn chân chuột:

Dùng bút đánh dấu cố định mặt bên khớp gối chân sau phải của chuột Nhúng bàn chân sau phải vào dung dịch đo đến đúng vị trí đã đánh dấu, đọc kết quả hiển thị trên thiết bị đo Kỹ thuật đo được thực hiện bởi cùng một kỹ thuật viên

∆V (%): Mức độ phù bàn chân chuột tại thời điểm t giờ sau khi gây viêm

V0: Thể tích bàn chân chuột trước khi gây viêm

Vt: Thể tích bàn chân chuột tại thời điểm t giờ sau khi gây viêm

- Phần trăm ức chế phù của các lô thử hoặc lô chứng dương so với lô chứng bệnh Phần trăm ức chế phù được tính theo công thức:

I (%) =

x 100%

7 5

3 1

0 -1

Đo thể tích bàn chân gây viêm

Trong đó:

I (%): Phần trăm ức chế phù của lô thử hoặc lô chứng dương so với lô chứng bệnh

∆Vc: Mức độ phù chân chuột trung bình ở lô chứng bệnh

∆Vt: Mức độ phù chân chuột trung bình ở lô thử hoặc lô chứng dương

2.3.1.2 Mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng tinh thể natri urat

Áp dụng mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối bằng tinh thể natri urat của McCarty và Faires [54]

Chuẩn bị hỗn dịch tinh thể natri urat: Hòa tan 0,4 g (0,01 mol) natri hydroxid trong 400 ml nước cất Thêm 1,68 g (0,01 mol) acid uric, khuấy đều và siêu âm cho acid uric hòa tan hết Để qua đêm ở nhiệt độ phòng Lọc hút chân không thu được tinh thể natri urat, rửa 3 lần bằng nước muối sinh lý lạnh Sấy khô bằng tủ sấy ở 60oC cho bay hơi hết nước Cân tinh thể urat khô, nghiền mịn và tạo lại hỗn dịch bằng nước muối sinh lý, tiệt trùng trong nồi hấp Hỗn dịch natri urat thu được có nồng độ 48 mg/ml (4,8%)

Thiết kế thí nghiệm:

Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô:

- Lô chứng bệnh: uống dung môi pha thuốc natri carboxymethyl cellulose 0,5% (Na-CMC 0,5%)

- Lô chứng dương: uống indomethacin liều 10 mg/kg cân nặng pha trong CMC 0,5%

Na Lô thử NCĐ1: uống chế phẩm Nhân Chính Đan mức liều 660 mg/kg cân nặng pha trong Na-CMC 0,5%

- Lô thử NCĐ2: uống chế phẩm Nhân Chính Đan mức liều 1320 mg/kg cân nặng pha trong Na-CMC 0,5%

Chuột được uống dung môi pha thuốc, indomethacin hoặc chế phẩm nghiên cứu với cùng thể tích 1ml/100g cân nặng vào một giờ nhất định trong vòng 4 ngày trước khi làm thí nghiệm Trong ngày thí nghiệm (ngày thứ 5), chuột được uống thuốc lần cuối Một giờ sau khi uống thuốc, chuột được tiêm vào khớp gối chân sau trái 0,05 ml hỗn dịch natri urat (nồng độ 4,8%) Quan sát biểu hiện di chuyển của từng chuột trên mặt phẳng tại 3 thời điểm sau khi tiêm: 4, 5, 6 giờ; tiến hành song song quay video ghi lại biểu hiện di chuyển của chuột Ba quan sát viên được huấn luyện cách đánh giá, sau