Xuất phát từ các luận điểm này, chúng tôi thực hiện nghiên cứu Bào chế và đánh giá tác dụng chống viêm gíàm đau của bột cao khô KKTT với các mục tiêu Xây dựng được quy trìn[r]
(1)Ths Phạm Văn Hiển (Trung tâm NCƯD sả n x u ấ t thuốc, Học viện Quân y) Ths Ngổ Xuân Trinh (Trung tâm NCƯD sàn xuất thuốc, Học viện Quân ý) DS Đặng Văn Điệp (Bộ m ôn D ược lý, Học viện Quân y) Ths Nguyễn Trọng Điệp (Trung tâm ĐT-NC Dược, Học viện Quân ý) TÓM TẢT
Đặt vấn đề: Bệnh xương khớp thường gặp Việt Nam gây đau nhức, giảm chất lượng sống tăng gánh nặng đối vơi xã hội Học viện Quân y đa bào chế thành công chế phẩm cao lỏng Kiện khớp tiêu thống (KKTT) có tác dụng tốt thực nghiệm sử dụng lâm sàng gặp nhiều khó khăn vận chuyển bảo qn khơng tiện s dụng.
Mục tiêu: Nghiên cứu tiến hành nhằm đại hoố thuốc, trước hết xây dựng quy trình chiết xuắt, bào chế tiêu chuần chất lượng cao khô KKTT; đảnh giá đuực tâc dụng chống viêm, giảm đau trên động vật ihực nghiệm.
Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Bài thuốc KKTT chuẩn hoá chất lượng dược liệu đầu vào, khảo lựa chọn thong số tối ưu cho quà trình chiết xuất phun sấy tầng sôi tạo cao khô Tác dụng chống viêm, giảm đau đánh giá mơ hình động vật thực nghiệm.
Két quả: Quy trình chiết xuất vả bào chế cao khô KKTT đuực xây dựng sử dụng chiết siêu âm tẩn sổ 60 MHz nhiệt độ 66°C/60 phút dung môi EtOH 60%, chiết lần với tỷ lệ D Í/D M : 1:10 Quỵ trình phun sấy tạo cao khơ xây dựng với tá dược hỗ trợ phun sẩy MD:AE (60:40); tỷ lệ tá dược/chất rắn: 0,4; tỷ lê chất rắn dịch phun: 10%, nhiệt độ đầu vào: 14(PC; tốc độ cấp dịch: 30 ml/phút, nhiệỉ độ đẩu ra: 108-11CrC, áp suất bơm nén: 0,2 Mpa Với quy trình xẫy dựng, hiệu suẩt chiết xuất ÁCG đạt 92,77% ± 1,64%; hiệu suằt phun sấy đạt xấp x ỉ 90% Tốc dụng chống viêm cấp mạn bột cao khô KKTT múx) liều 75 150 mg/kg tương ứng với natri diclofenac mức liều 15 mg/kg thề trọng Tác dụng giảm đau cấp mạn cắc mức liều 90 180 mg/kg thể trọng tương ổương với aspegic natrì diclofenac mức liều 80 20 mg/kg.
Kết luận: Đã bước đầu đại hóa thuốc KKTT chuyển dạng bào chế từ thuổc sắc sang dạng bột cao khơ có hàm luựng hoạt Chất cao mà giữ hiệu giấm đau chống viêm chế phẩm ban đầu.
Từ khóa: Bệnh ve xương khớp SUMMARY
STUDY ON PREPARATION AND INVESTIGATION OF ANALGESIC - ANTIINFLAMMATORY EFFECT OF KIEN KHOP TIEU THONG GRANULES
Pham: Van Hien , MD (Center of Drug Research Application&Manufacture, Vietnam Military Medical University)
Ngo Xuan Trình, MD (Center o f Drug Research Application &Manufacture, Vietnam Military Medical University)
Dang Van D ie p , MD (Department of Pharmacology, Vietnam Military Medical University)
Nguyen Trong Diep, Pharmacist (Training & Research Center o f Pharmaceutical, Vietnam Military Medical University)
Background: Osteoarthritis pain is the popular and give haviers on the social, especially o f Vietnam VMMU had already used Kien Khop Tieu Thong extract to treat this symptom on clinical but it is unstable and difficult on ỉranport, storage and using This study was conducted to prepare a simple, comfortable form, optimize specification and investigate analgesic - anti inflammatory effect o f Kien Khop Tieu Thong Materials and methods: pharmacognosic materials were standardized, extraction process was optimized to prepare granules using drying spray method Specification o f granules was established basic on Vietnamese Pharmarcopoeia Ed 4th Analgesic - antiinflammatory effect were appreciated on experimental animal model.
Result: Preparation process o f KKTT granules was established based on parameters optimization o f extraction and drying spray process, specification was constituted following dry extract’s o f Vietnamese Pharmacopoeia Ed 4th Antiinflammatory effect o f KKTT granules at dosing o f 75 mg/kg B W and 150 mg/kg BW, was equivalent to sodium diclofenac at dosing o f 15 mg/kg BW A t dosing o f 90 and 180 mg/kg BM following, alnagesic effect of KKTT granules equivalent to aspecgic and sodium diclofenac at dosing o f 80 and 20 mg/kg BW.
Conclusion: Preparation process and specification o f KKTT granules were established The finished product possessed good effect o f analgesic and antiinflammation It was potential to treat osteoarticular pain.
Keywords: Osteoarthritis pain
(2)íruyền thống sang dạng bào chể đại nhằm mục đích tăng độ ổn định, thuận lợi cho bắo quản, lưu thông tiện dụng trở thành xu ngành dược naý [2], Trung tâm Nghiên cứu ứng dụng sản xuất thuổc Học viện Quân y bào chế thành cơng chế phẩm cao íỏng Kiện khớp tiêu thống có tác dụng tốt lâm sàng Tuy nhiên dạng thuốc sắc có nhiều nhược điềm nhừ: ổn định, bat tiện vận chuyển, bảo quản sử dụng Để khắc phục nhược điểm trên, thực nghiên cứu với mục tiêu xây dựng quy ỉrinh chiết xuất, bào chế, tiêu chuẩn chẩt ỉượng bột cao khô KKTT đánh giá tác dụng giảm đau chống viêm chế phẩm mơ hình động vật thực nghĩệm Từ có khoa học cho việc nghiên cứu bào dạng thuốc viên nén, viên nang từ thuốc KKTT
Đối TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN u Đối tượng nguyên liệu; Bài thuốc kiện khớp tiêu thống gồm cac vị dược liệu cung cấp bời công ty Dược liệu Sơn Lâm, Hà Nội đạt tiêu chuẩn DĐVN IV Các hố chất dung mơi thiết bị đạt tiêu chuẩn phân tích Động vật thí nghiệm cung cấp bời Ban Chăn ni đọng vật thí nghiệm Học viện Quân ỳ
2 Phương pháp nghiên cứu
Chuần hoá dược liêu đầu vào: Để nhằm mục đích khảo sát lựa chọn íhơng số tối ưu cho trình chiết xuẳt hoạt chất từ thuốc, lựa chọn hợp chất acid chỉorogenỉc (ACG) vị thuốc ngũ gia bi chân chim (NGBCC) làm chất điểm
Xay dựng áuy trình chiết xuất hoạt chất: tiến hành khảo sát yểu tố ảnh hưởng gồm: dung mơi chiết, íĩ lệ dược liệu dung mơi, nhiệt độ, thời gian số lân chiết xuất Từ kết khảo sát đừợc, íối ưu hố thực nghiệm phần mềm Moddle 5.0 để đưa thông số tối ưu Dịch chiết cô bốc chân không, loại tạp bằna EtOH Căn vào hiệu suất chiết xuất thu hồi ACG ổe đánh giá hiệu quy trinh
Xây dựng quy írlnh phun sấy tạo cao khơ, tiến hành khảo sát yểu íố: Loại tá dược hỗ trợ phun sấy, tỷ iệ íá dược/chất rắn cao lỏng, nhiệt độ đầu vao buồng phun Đánh gíá dựa vào tiêu; hình thái bột, hàm ầm, tỉ trọng biểu kiến, hàm lượng ACG, hiệu suất thu hồi ACG hiệu suát phun sấy.Tiêu chuẩn chầí lượng cùa cao khơ tạo thành xay dựng dựa vào phương pháp DĐVN IV
Đánh giá tac dụng giảm đau chống vỉêm (cấp, mạn) đựợc thực mơ hlnh gây phù bàn chân chuọí carrageenin theo phương pháp Winter CS [6], mô hinh gây u hạt chuột cống trắng theo phương pháp cùa Meier c s [3] Tác dụng giảm đau tổ chức viêm đánh giá theo mơ hình Randall cộng có sửa đổi [3,5], tác dụng giảm đau mơ hình gây đau quặn thực theo phương pháp Koster CS [4]
KẾT QUẢ NGHIÊN u
1 Kết quà xây dựng quy trình định lượng ACG trong dược liệu NGBCC
Qua khảo sáí lựa chọn điều kiện sắc ký, xây dựng quy trinh định lượng ACG NGBCC sau:
Dung dịch chuẩn gốc: dung dịch chuẩn ACG gốc
cỏ nồng độ 1000 |jg/ml pha EtOH, íừ chuần gốc pha chuẩn làm việc có nồng độ từ 0,1-300,0 Ịjg/mi với EtOH
Dung dịch thử: 3,0g dược ỉiệu NGBCC chiết siêu âm với EtOH 50% (60m! X lần) 60°c giờ, ly íâm lấy dịch, định mức thành 200 ml EtOH, lọc qua màng lọc 0,22 ụm dung dịch tiêm sắc ky
Mâu trắng: EtOH
Điều kiện sắc ký: Cột sắc ký SunFire C18 (5Ịjm, 250 X 4,6 mm), Detector UV-VIS, A=320nm., Pha động: acid acetic 0,1%: acetonitrii (70:30,v/v), tốc độ dịng: 1,2ml/phút
•* A rid chlorogenic
^ ^
Hình SKĐ định lượng acid chlorogertic ngũ gìa bì chân chim
a SKĐ mẫu trắng; b) SKĐ mẫu chuần; c) SKĐ mẫu thử.
Quy trình định lượng đựợc thầm định cho thấy íà tương thích với hệ íhống sắc ký, đáp ứng yêu cầu độ chọn lọc đặc hiệu, độ (>98,0%), độ xác (RSD <2,0%) với gioi hạn phái giới hạn định lừợng !à 0,05 0,1 Ị j g / m i Hàm lượng ACG
trong ngũ gia bi chân chím xác định 100,75± 3,43 Ịjg/g
2 Khảo sát lựa chọn thơng số tổỉ ưu q trình chiết xuất thuốc KKTT
(3)lần, thiết bị chiết: Máy chiếí tác động siêu âm MHz Với thông số tối ưu hiệu suất chiết ACG SM30 (Hàn Quốc) dung tích 30 iít, íần số siêu âm 60 từ thuốc đạt 92,77 ± 1,64 %
Hình Hình ảnh mặt đáp phân tích ảnh hưởng yếu tố đầu vào đến hiệu suất chiết phần mềm Moddle 5.0 đưa
3 Kết khảo sát lựa chọn thơng số ảnh hường đến q trình phun sấy
Khảo sẩt yếu tố ảnh hương, chúng toi xây đựng quy trình bào chế bột cao khơ K K ĨT phương pháp phun sấy tầng sôi với ỉá dược hỗ trợ phun sấy MD:AE (60:40), tỷ lệ tá dược/chất rắn: 0,4;tỷ lệ chất rắn dịch phún: 10%, nhiệt độ đầu vào: 14ỏ°c, tốc độ cấp dịch: 30 ml/phút, nhiệt độ đầu ra: 108-110°c, áp suất bơm nén: 0,2 Mpa Với cac kết iựa chọn được, hiệu suất phun sấy đạt xấp xỉ 90% Quy trinh chiết xuất, bào chế cao khô mô sơ đồ hóa hình
Bảng Các tiêu chết lượng bột cao khố KKTT bào ché điều kiện tối ưu Độ ấm
(%)
Tỷ trọng biếu kiến (q/mi)
Chỉ số nén
C! HS phun sấy (%)
ACG/cao khô (ug/g)
HS thu hồi ACG (%)
Hlnh thức cảm quan
4,47 0,73 21,52 89,19 58,81 89,83 Bột khô tơi, màu nâu, mùi
thơm đặc trưnq
Hình Quy trình chiết xuấỉ, bào chế bộỉ cao khô KKTT
(4)-4 Kết xây dựng tiêu chuẩn chất lượng bột cao khô KKTT
Dựa vào cảc phương pháp DĐVN IV, tiến hành xây dựng tiêu chuẩn chất lượng bộí cao khơ KKTT bào chế vởi chĩ tiêu: Hình ĩhái, cảm quan (Bột khô tơi, màu nâu, mùi thơm đặc trưng dược liệu, vị đắng, dễ hút ẩm ngồi khơng khí), độ ẩm (á 5%), độ mịn (% bột qua rây 355 > 95%), định tính (SKLM), định lượng (ACG > 50 ng/g), độ nhiễm khuẩn (đạt mức theo quy định ÒĐVN IV)
mÊÊÊÊÈÊIÊễÊmÊ
* ■"* - Í Í iịẸÍ
K » » i » £ ■
Hình Hình ành chụp SEM cấu trúc bột cao khơ KKTT 5 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cùa bột cao khơ KKTT mơ hình động vật thực nghiệm (MHĐVTN)
Tác dụng chống viêm cấp đánh giá mô hlnh gây phù chan chuột Carrageenin, theo phương pháp Winter cs, 1962 [6], Tác dụng ức chế phù biểu thị % giảm mức độ tăng thể tích bàn chấn chuộí lơ dùng thuốc nghiên cứu so với mức ổộ tăng cua lơ chứng sính lý (uống nước cất) Kết cho thầy: Tại thời điểm sau gây phù viêm giờ, lô dùng cao KKTT diclofenac thể tác dụng ức che phù viêm Tác dụng thề rõ thời điểm sau gây phù viêm giờ, với tỷ lệ % ức chế phù viêm cac lô dùng cao khô liều 1(75mg/kg) , liều (150mg/kg) diclofenac íần lượt 38,14%, 41,05% 40,49% Tạỉ thời điểm sau gây phù viêm giờ, íỷ lệ % ức chế phù viêm ỉô dừng thuốc trì mức cao
Tác dụng chống viêm mạn đánh giá mô hỉnh gây u hạt chuột cổng trắng, theo phương pháp nghiên cứu Meier cs (1950) [3] Kết cho thấy: toàn chuột cấy hạt amian vổ khuẩn vào da có hình thành tố chức u hạt bao quanh hạt amian Cả diclofenac cao lỏng 1:1, cao khô KKTT (ở mức liều) làm giảm khối iượng u hạt so vơi lô chứng sinh lý (P < 0,01) Trọng lượng trung bình u hạt lô dùng cao khô KKTT liều cao lỏng 1;1tương đương so với lô dùng natri diclofenac mức liều 15 mg/kg
6 Kết đanh giá ỉác dụng giảm đau bộỉ cao khô KKTT MHĐVTN
Tác dụng giảm đau tổ chức viêm đánh giá theo mơ hình Randall cộng có sửa đồi [5] Đo ngưỡng đau bàn chân gây phù viêm chuột bang máy đo giảm đau áp lực bàn chân chuột (Paw Pressure Analgesy Meter) thời điểm khác sau dùng íhuốc So sánh ngưỡng đau bàn chân chuột với nhóm chứng sinh lý Kết cho thấy: thời điềm sau uống thuốc 30 phút, iô dùng cao khô cao lỏng KKTT iô dùng thuốc chuẩn aspegic
đều thể tác dụng giảm đau, !àm tăng ngưỡng đau so với lô chứng sinh ly (p < 0,05) Tác dụng giảm đau ỉhể rõ thời điềm sau uống thuốc 60 phút, ngưỡng đau tăng so với íô chứng sinh lý với p < 0,01 tỷ íệ % tăng ngưỡng đau so với iô chứng sinh lý lơ dịng cao khơ liều 1, liều 2, cao [ỏng 1:1 va aspegỉc 37,13%; 43,27%, 40,94% 42,40% Tại thời điềm sau uống thuốc 90 phút 120 phut, tác dụng giảm đau thuốc tri với ngưỡng đau tăng so với lô chứng sinh lý (p < 0,01)
Tác dụng giảm đau quặn íhực theo phương pháp nghiên cứu cua Koster CS, 1959 [4] Kết cho thấy: chuột lô dùng cao khô cao lỏng KKTT diclofenac có số đau quặn đểm 20 phút giảm rõ so với lô chứng sinh lý (p < 0,01) Ty lệ giảm ổau quặn lô dùng cao kho liều 1(90 mg/kg), cao khô liếu (180 mg/kg)Tcao long 1:1 diclofenac 30,15%, 38,25%, 35,14% 36,80% So sánh !ô dùng cao KKTT (cao lỏng, cao khô) với lô dùng diclofenac, lô dùng cao lỏng cao khơ KKTT với nhau, thấy khơng có khác biệt (p>0,05)
KẾT LUẬN
(5)được xây dựng theo DĐVN IV gồm tiêu hlnh thái, cảm quan, độ ẩm (ắ 5%), độ mịn (% bột qua rây 355 > 95%), định tính (SKLM), định iượng (ẢCG > 50 Ịjg/g), độ nhiếm khuẩn (đạt mức theo quy định DĐVN !V) Tác dụng chống viêm cấp mạn bột cao khô KKTT mức liều 75 150mg/kg tương đương với nri diciofenac liều 15mg/kg mơ hình động vật thực nghiệm Cao khô KKTT mức liều 90, 180 mg/kg thể trọng có tác dụng giảm đau quặn tương đường với aspegic liều 80mg/kg tác dụng giâm đau tren tổ chức viêm tương đương với natri diclofenac liều 20mg/kg Từ kểt nghiên cứu này, Trung tâm Nghiên cứu ứng dụng sản xuất thuốc Học viện Quân y bào chế thành công chế phẩm Kiện Khớp Tiêu Thống Collagen Bộ Y tế cấp phép lưu hành (số 1970/2015/ATTP-XNCB) phục vụ chăm sóc, bảo vệ sức khịe đội nhân dân
BÀN LUẬN
Các thuốc y học cổ truyền chữa đau nhức xương khớp Kiện khớp tiêu thống, Độc hoạt tang ký sinh, phòng phong ỉhang, quyên tỷ thang chưng minh ià có tác dụng tốt bào chế bằrip phương pháp sắc truyền thong có hạn chế độ on định khong cao, chịu tác động cùa nhiệt độ cao làm giảm hàm lượng hoạt chất, khơng tiện dụng, khó bảo quản, vận chuyển iưu thông đặc biệt
là đối tượng lao động có tính động cao Nghiên cứu bước đầu đại hoá thuốc KKTT tạo bán thành phẩm để chuyển dạng bào chế đại viên nén, viên nang giải vấn đề Kết thực nghiệm chứng tỏ, sau chuyển dạng bào chế giữ tác dụng giảm đau chống viêm tương đương với dạng thuốc lỏng
TAI LIỆU THAM KHẢO
1 Bộ Y tể (2009), Dược điển Việt Nam 4, NXB Y học
2 Đặng Quốc Khánh Phương hướng đại hóa y học cổ truyền kết hợp với y học đại http://ykhoaviet.vn
3 Meier R., Schuler w , Desaulles p., (1950): “L- usnic acid: tumor inhibitor isolated from Lichens", Experimentia 6:469-471
4 Koster R., Anderson M-, Beer E.J., (1959): “Acetic acid for analgesic Screening", Federation Proceeds 18,412-416
5 WHO (1993): “Research Guidelines For Evaluating the Safety and Efficacy- of Herbal Medicines", ROWP, Manila, Philippines
6 Winter C.A., Risley E.A and Nuss G.W., (1962): “Carrageenin-induced edema in hind paw of the rat as an assay for antiinflammatory drugs”, Proc Soc Exp Biol Med., 111: 544-547
NGHIÊN CỨU BÀO CHÉ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CHỐNG VIÊM CỦA BỘT CAO KHÔ KIỆN KHỚP TIÊU THỐNG
Ths Phạm Văn Hiển (Trung tâm NCƯD sản x u ấ t thuốc, Học viện Quân y) Ths Ngổ Xuân Trình (Trung tàm NCƯD sản xuất thuốc, Học viện Quân ý) DS Đặng Văn Điệp (Bộ m ôn D ược ly, Học viện Quân ý) Ths Nguyễn Trọng Điẹp (Trurig tâm ĐT-NC Dược, Học viện Quân ý)
ĐẶT VẤN ĐỀ VÀ MỤC TIÊU
Bẹnh xương khớp thường gặp Việt Nam gây đau nhức, giảm chất lượng cuọc song tăna ganh nặng xã hội Học viện Quân y đa bào che thành cong chế phẩm cao lỏng kiện khớp tiêu thống (KKTT) có tac dụng tốt thực nghiệm va sử dụng lâm sàng khó khăn vận chuyển bảo quản khơng tiện sử dụng Hiện đại hoá thuốc y học cô truyền nhằm chuyển dạng bào chế từ thuốc sắc truyền thống sang dạng bào chế đại nhằm tăng độ ổn định, dễ vạn chuyển bảo quan, lữu thông tiện sử dụng trở thành hừớng đầy triền vọng Xuất phát từ luận điểm này, thực nghiên cứu Bào chế đánh giá tác dụng chống viêm gíàm đau bột cao khô KKTT với mục tiêu Xây dựng quy trình bào chế tiêu chuẩn chất lượng cao khô bán thành phầm, đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau động vậí thực nghiẹm Cơng trinh tóm tắỉ số kết đạt
ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: Các dược ỉiệu thuốc kiện khớp tiêu thống
được tiêu chuẩn hố acid chlorogenic (ACG) Ngũ gia bỉ chân chim (NGBCC) hợp chất có tác đụng chữa đau nhức xương khởp íựa chọn làm chất điểm đề đánh giá Tựa chọn thông số ảnh hưởng đến trình chiết xuất bào chế bột cao khô KKTT Các thông số ảnh hưởng đến hiệu trình chiết xuấì, loại tạp, cô cao phun sầy tầng sôi tạo cao khô khảo sát toi ưu hoá thực nghiệm phần mềm Moddle 5.0 để tim thong số tối ưu Tiêu chuẩn chất lượng đánh giá dựa vào phương pháp DĐVN IV Tác dụng chống viêm, giảm đau đữợc đánh giá mơ hình động vật thực nghiệm
KÉT QUẢ V À PHÁT HIỆN CHÍNH: Quy trình định lượng ACG NGBCC xây dựng thẩm định đảm bảo độ đúng, độ xác iàm sờ cho khảo sáỉ thơng số q trình chiết xuất bào chế cao khơ Các yếu tố ảnh hường đến trình chiểt xuất khảo sáí tối ưu hố thực nghiệm để tim thôna số gồm: dung môi chiết xuất: ĨH 60%; nhiệt độ: 66c, thời gian chiết: 60 phút/lần, tỷ lệ
http://ykhoaviet.vn