ĐẶT VẤN ĐỀ Suy giảm miễn dịch mắc phải là hậu quả của nhiều quá trình bệnh lý như: Suy dinh dưỡng, nhiễm khuẩn, ung thư, sau khi dùng các thuốc ức chế hoặc độc với các tế bào của hệ thống miễn dịch, do tia xạ hoặc hoá chất điều trị ung thư, trong nhiễm HIV/AIDS. Các trường hợp bệnh lý trên, ngoài điều trị tác nhân gây bệnh thì điều trị nhằm nâng đỡ cơ thể, tăng cường miễn dịch là cần thiết. Tuy nhiên, do chi phí điều trị cao, nhiều bệnh nhân không có cơ hội tiếp cận, thì việc tìm kiếm các thuốc điều trị bổ sung hoặc thay thế, với giá thành dễ chấp nhận là vấn đề cấp bách và có ý nghĩa thực tiễn cao. Quả nhàu và cúc hoa vàng (CHV) có tác dụng: tăng cường miễn dịch, chống oxy hoá, ức chế khối u, kháng khuẩn, chống nấm, chống viêm...Sâm Ngọc linh sinh khối (NLSK) có tác dụng: tăng lực, tăng quá trình nhận thức, chống oxy hóa, bảo vệ gan... Tuy nhiên, hiện nay chưa có chế phẩm thuốc nào bào chế phối hợp từ ba dược liệu này. Do vậy, để góp phần nghiên cứu phát triển một chế phẩm thuốc mới từ quả nhàu, CHV và sâm NLSK (Viên Kaviran) nhằm tăng cường miễn dịch và chống oxy hóa theo hướng hiện đại, an toàn, hiệu quả và ứng dụng được vào sản xuất, đề tài: “Nghiên cứu bào chế và đánh giá tác dụng sinh học của viên nang cứng Kaviran” được tiến hành nhằm các mục tiêu sau: 1. Bào chế được bột cao khô định chuẩn của cúc hoa vàng, quả nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối. 2. Bào chế được viên nang cứng Kaviran từ bột cao khô định chuẩn cúc hoa vàng, quả nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối. 3. Đánh giá được độc tính, tác dụng tăng cường miễn dịch, chống oxy hoá và bảo vệ gan của viên nang cứng Kaviran trên thực nghiệm.
Trang 2ĐẶT VẤN ĐỀ
Suy giảm miễn dịch mắc phải là hậu quả của nhiều quá trìnhbệnh lý như: Suy dinh dưỡng, nhiễm khuẩn, ung thư, sau khi dùngcác thuốc ức chế hoặc độc với các tế bào của hệ thống miễn dịch, dotia xạ hoặc hoá chất điều trị ung thư, trong nhiễm HIV/AIDS Các
trường hợp bệnh lý trên, ngoài điều trị tác nhân gây bệnh thì điều trị
nhằm nâng đỡ cơ thể, tăng cường miễn dịch là cần thiết Tuy nhiên,
do chi phí điều trị cao, nhiều bệnh nhân không có cơ hội tiếp cận, thìviệc tìm kiếm các thuốc điều trị bổ sung hoặc thay thế, với giá thành
dễ chấp nhận là vấn đề cấp bách và có ý nghĩa thực tiễn cao
Quả nhàu và cúc hoa vàng (CHV) có tác dụng: tăng cường miễndịch, chống oxy hoá, ức chế khối u, kháng khuẩn, chống nấm, chốngviêm Sâm Ngọc linh sinh khối (NLSK) có tác dụng: tăng lực, tăngquá trình nhận thức, chống oxy hóa, bảo vệ gan Tuy nhiên, hiệnnay chưa có chế phẩm thuốc nào bào chế phối hợp từ ba dược liệunày Do vậy, để góp phần nghiên cứu phát triển một chế phẩm thuốcmới từ quả nhàu, CHV và sâm NLSK (Viên Kaviran) nhằm tăng
cường miễn dịch và chống oxy hóa theo hướng hiện đại, an toàn,
hiệu quả và ứng dụng được vào sản xuất, đề tài: “Nghiên cứu bào
chế và đánh giá tác dụng sinh học của viên nang cứng Kaviran”
được tiến hành nhằm các mục tiêu sau:
1 Bào chế được bột cao khô định chuẩn của cúc hoa vàng, quả nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối.
2 Bào chế được viên nang cứng Kaviran từ bột cao khô định chuẩn cúc hoa vàng, quả nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối.
3 Đánh giá được độc tính, tác dụng tăng cường miễn dịch, chống oxy hoá và bảo vệ gan của viên nang cứng Kaviran trên thực nghiệm.
Trang 3* Đóng góp mới của luận án
- Xây dựng được qui trình bào chế bột cao khô định chuẩn củaCúc hoa vàng, quả Nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối, bao gồm: Nângcấp tiêu chuẩn cúc hoa vàng và quả nhàu dựa trên tiêu chuẩn của
DĐVN IV Xây dựng được qui trình chiết xuất các hoạt chất chính
bằng phương pháp chiết siêu âm, qui trình bào chế bột cao khô bánthành phẩm bằng phương pháp phun sấy Xây dựng và thẩm định
được tiêu chuẩn cơ sở của bột cao khô bán thành phẩm
- Xây dựng được công thức bào chế viên nang cứng Kaviran từbột cao khô định chuẩn quả nhàu, CHV và sâm NLSK trên cơ sởphối hợp giữa thành phần có tác dụng tăng cường miễn dịch, chốngoxy hóa… trong cùng công thức nhằm tăng cường tác dụng cho chếphẩm Xây dựng được tiêu chuẩn chất lượng và đánh giá độ ổn địnhcủa chế phẩm
- Đánh giá được tính an toàn và một số tác dụng sinh học củachế phẩm: Chưa xác định được giá trị LD50trên chuột và không thấybiểu hiện độc tính bán trường diễn trên thỏ; chế phẩm có tác dụng
tăng cường miễn dịch, chống oxy hóa và bảo vệ gan khi thử trênđộng vật thực nghiệm
Luận án có tính cấp thiết, ý nghĩa khoa học và tính thực tiễncao Kết quả của luận án có đóng góp mới cho nguyên ngành côngnghệ dược phẩm và bào chế thuốc, là tài liệu tham khảo hữu íchtrong lĩnh vực nghiên cứu bào chế các thuốc nguồn gốc dược liệu
theo hướng hiện đại
* Nội dung và cấu trúc của luận án
Luận án gồm 149 trang: Đặt vấn đề 2 trang, tổng quan 33 trang,
đối tượng và phương pháp nghiên cứu 20 trang, kết quả nghiên cứu
56 trang, bàn luận 34 trang, kết luận 2 trang, kiến nghị 1 trang, danhmục bài báo 1 trang, có 158 tài liệu tham khảo (25 tài liệu tiếng Việt,
133 tài liệu tiếng Anh)
Trang 4Chương 1 TỔNG QUAN
Tổng quan về các dược liệu dùng trong nghiên cứu, gồm: quảnhàu, CHV và sâm NLSK Mỗi dược liệu đề cập đến: Đặc điểm thựcvật và phân bố, thành phần hóa học, tác dụng sinh học Các thông tin
về kỹ thuật chiết xuất dược liệu: Khái niệm và một số thuật ngữ, một
số phương pháp chiết xuất hiện đại, mỗi phương pháp chiết xuất đềcập đến nguyên lý và cơ chế, thiết bị, một số ứng dụng và nghiên cứu
điển hình Các thông tin về kỹ thuật phun sấy: Khái niệm, thiết bị vàcác giai đoạn phun sấy, các thông số quan trọng của qui trình, ưunhược điểm; ý nghĩa của phun sấy dịch chiết dược liệu, một số khókhăn gặp phải, một số nghiên cứu phun sấy dịch chiết dược liệu
Chương 2 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, ĐỐI TƯỢNG VÀ
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu và thiết bị nghiên cứu
- Quả Nhàu, CHV đạt tiêu chuẩn DĐVN IV Sâm NLSK đạtTCCS; Chất chuẩn: Apigenin, luteolin, ginsenosid (Rb1, Rg1) củahãng Sigma Aldrich Scopoletin của hãng Shanghai Tauto Biotech;
Các tá dược và hóa chất phân tích đều đạt tiêu chuẩn thí nghiệm
- Các thiết bị sử dụng đều đạt yêu cầu cho nghiên cứu chiết xuất, bàochế, kiểm nghiệm và đánh giá tác dụng dược lý
- Thỏ chủng Orytolgus cuniculus, khỏe mạnh, cân nặng 2,0 ± 0,2kg Chuột nhắt trắng chủng Swiss, khỏe mạnh, cân nặng 20,0 ±
2,0g Động vật được nuôi dưỡng ở điều kiện phóng thí nghiệm
2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1 Nghiên cứu bào chế bột cao khô tiêu chuẩn cúc hoa vàng, quả nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối
2.2.1.1 Phương pháp định lượng hoạt chất trong nguyên liệu, các phân đoạn dịch chiết và bột cao khô
Định lượng flavonoid toàn phần bằng UV-Vis; Định lượng
apigenin, luteolin trong CHV và scopoletin trong quả nhàu bằng
Trang 5HPLC: Xây dựng và thẩm định phương pháp; Định lượng ginsenosid(Rg1, Rb1) trong sâm NLSK bằng HPLC: Theo phương pháp của VũBình Dương và cộng sự (2008).
2.2.1.2 Nghiên cứu điều chế dịch chiết cúc hoa vàng, quả nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối
- Điều chế cao CHV, cao quả nhàu: Khảo sát các thông số qui
trình chiết siêu âm: Loại dung môi, tỷ lệ dung môi/ dược liệu, số lầnchiết, thời gian và nhiệt độ chiết Chỉ tiêu đánh giá: Hàm lượngflavonoid chiết được trong CHV và quả nhàu; hàm lượng ginsenosid(Rg1, Rb1) chiết được trong sâm NLSK; Nhóm hoạt chất bị kết tủatrong EtOH (Noni-ppt) chiết từ quả nhàu Dịch chiết được cô đặc vàloại tạp để thu được cao CHV (2:1) và cao quả nhàu (1:1)
- Điều chế cao sâm NLSK: Chiết siêu âm với EtOH 70%, nhiệt
độ chiết 600C, chiết hai lần với tỷ lệ DM/DL/lần là 10/1, thời gianchiết là 60 phút/lần Sau khi chiết xuất, cô thu hồi dung môi đến tỷ lệcao 1:1, loại bớt tạp rồi cô thu hồi dung môi để thu được cao 6:1
2.2.1.3 Nghiên cứu bào chế bột cao khô cúc hoa vàng, quả nhàu và sâm Ngọc linh sinh khối bằng phương pháp phun sấy
Thông số khảo sát: Loại tá dược (Maltodextrin và aerosil); nhiệt
độ phun sấy và tốc độ cấp dịch; tỷ lệ tá dược/ chất rắn (TD/CR) trong
cao; tỷ lệ chất rắn trong dịch phun (CR/DP); Thông số đánh giá:
Theo chỉ tiêu chất lượng của bột cao khô (Mục 2.2.1.4)
2.2.1.4 Phương pháp đánh giá các chỉ tiêu chất lượng bột cao khô phun sấy
Hình thức cảm quan: Quan sát bằng cảm quan và chụp hiển vi
điện tử quyét; Khối lượng riêng và chỉ số nén CI: Theo USP 30; Mất
khối lượng do làm khô: PL 9.6 - DĐVN IV; Tính hút ẩm: Thử ở
250C, độ ẩm tương đối 75,29%, thời gian: 7 ngày; Hàm lượng hoạt chất: Định lượng flavonoid toàn phần bằng UV-Vis, scopolein và
Trang 6ginsenosid (Rg1, Rb1) bằng HPLC; Hiệu suất thu hồi hoạt chất và phun sấy: Là tỷ lệ % thực tế thu được so với lý thuyết.
2.2.1.5 Nghiên cứu tiêu chuẩn hóa bột cao khô bán thành phẩm Tính chất: Thử bằng cảm quan; Mất khối lượng do làm khô, độ mịn, độ đồng nhất, tro toàn phần: Theo DĐVN IV; Định tính: bằng sắc ký lớp mỏng và HPLC; Định lượng bằng HPLC: apigenin,
luteolin trong bột cao khô CHV, scopoletin trong bột cao khô quảnhàu, ginsenosid (Rg1, Rb1) trong bột cao khô sâm NLSK
2.2.2 Nghiên cứu bào chế, tiêu chuẩn hóa và đánh giá độ ổn định của viên nang cứng Kaviran
- Xây dựng công thức bào chế: Xác định tỷ lệ phối hợp các bột
cao khô dựa trên đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro và tăng
cường miễn dịch in vivo; Lựa chọn các tá dược: Aerosil, magnesi
stearat, natri laurylsulphat, manitol Khảo sát tỷ lệ Avicel và natricroscarmellose Chỉ tiêu đánh giá: Khối lượng riêng, chỉ số nén CIcủa bột đóng nang và độ rã của viên nang
- Kiểm nghiệm về: Tính chất: Kiểm tra bằng cảm quan; Độ rã,
độ đồng đều khối lượng, hàm ẩm: Theo DĐVN IV; Định tính: Bằng
sắc ký lớp mỏng và HPLC; Định lượng: Apigenin, luteolin và
ginsenosid (Rg1, Rg1) bằng HPLC Từ kết quả kiểm nghiệm xâydựng tiêu chuẩn cơ sở (TCCS) cho chế phẩm
- Đánh giá độ ổn định: Theo hướng dẫn của ASIAN và WHO
2.2.3 Nghiên cứu tính độc tính và tác dụng sinh học của viên nang cứng Kaviran trên động vật thực nghiệm
2.2.3.1 Đánh giá tính độc tính của viên nang cứng Kaviran
- Xác định độc tính cấp trên chuột nhắt: Tiến hành theo hướng
dẫn của Bộ Y tế, OECD và WHO
- Xác định độc tính bán trường diễn: Tiến hành theo quy địnhcủa WHO và Bộ Y tế: Thỏ gồm 3 lô, 12con/ lô: Lô chứng: UốngNaCl 0,9%, liều 2,5ml/kg; (2) Lô Kaviran liều 240 và 1200mg/kg;
Trang 7Các chỉ tiêu đánh giá: Sinh lý - dược lý, huyết học, sinh hóa, môbệnh học Thời gian thử 6 tuần.
2.2.3.2 Đánh giá tác dụng sinh học của viên Kaviran
a Đánh giá tác dụng bảo vệ gan bằng mô hình gây độc do paracetamol liều cao:
Chuột nhắt trắng gồm 6 lô, mỗi lô ít nhất 10 con: Lô 1 (Đốichứng): Uống nước cất 0,2 ml/10g; Lô 2 (Mô hình): Uống nước cất0,2ml/10g + paracetamol; Lô 3 (Chứng dương): Uống silymarin140mg/kg + paracetamol; Lô 4: Uống Kaviran liều 0,72g/kg (D1) +paracetamol; Lô 5: Uống Kaviran liều 2,16g/kg (D2) + paracetamol;
Lô 6: Uống Kaviran liều 4,32 g/kg (D3) + paracetamol
Đến ngày thứ 8, sau khi uống thuốc thử 3 giờ, cho chuột từ lô 2đến lô 6 uống paracetamol liều 400mg/kg Sau 48 giờ, lấy máu để đo
hoạt độ enzym AST, ALT, xác định khối lượng gan và hàm lượngMDA Quan sát đại thể và vi thể gan
b Đánh giá tác dụng của Kaviran trên chuột thực nghiệm bị suy giảm miễn dịch do chiếu tia xạ:
Chuột nhắt trắng gồm 5 lô, mỗi lô ít nhất 10 con: Lô 1: Không
bị tác động gì; Lô 2: Chiếu xạ, uống NaCl 0,9%; Lô 3: Chiếu xạ,uống levamisol liều 50mg/kg; Lô 4: Chiếu xạ, uống Kaviran liều0,72g/kg; Lô 5: Chiếu xạ, uống Kaviran liều 2,16g/kg Chuột đượcchiếu xạ toàn thân liều 1Gy/ngày trong 6 ngày Cho chuột được uốngthuốc trong 6 ngày chiếu xạ và 7 ngày sau chiếu xạ Ngày thứ 14,
tiến hành các xét nghiệm Các chỉ tiêu đánh giá: Khối lượng tuyến ức
và lách tương đối; Số lượng bạch cầu và công thức bạch cầu; Vi thểlách, tuyến ức, hạch và đầu xương đùi
2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu
Sự khác biệt giá trị trung bình giữa các mẫu sử dụng Duncan’sMultiple Range Test bằng phần mềm SAS (α = 0,05), biểu diễn theo
Trang 8± SD Giá trị trong cùng cột có cùng một trong các ký tự (biểu thịtheo a, b, c, d ) là khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p < 0,05).
Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1 Kết quả bào chế bột cao khô tiêu chuẩn
3.1.1 Kết quả định tính, định lượng dược liệu
- Định tính: Trên sắc ký đồ mẫu thử có các píc có thời gian lưutrùng với thời gian lưu dung dịch chuẩn của luteolin và apigenin(24,6 và 34,5 phút) trong CHV, scopoletin (6,9 phút) trong quả nhàu,ginsenosid (Rg1 12,8 phút và Rb1 34,5 phút) trong sâm NLSK
- Định lượng: CHV chứa 1,3986mg/g luteolin và 0,2274mg/gapigenin; Quả nhàu chứa 110,85µg/g scopoletin; sâm NLSK chứa7,57mg/g ginsenosid (Rg1, Rb1)
3.1.2 Kết quả bào chế và tiêu chuẩn hóa bột cao khô cúc hoa vàng
3.1.2.1 Kết quả điều chế dịch chiết cúc hoa vàng
- Ảnh hưởng của dung môi: Chiết siêu âm CHV hai lần ở 600C,
tỷ lệ DM/DL là 10/1/lần, 60 phút/lần, nhưng với dung môi là: Nước
và EtOH 40, 50, 60, 70 và 80% Kết quả: EtOH 50% có hiệu suấtchiết cao nhất (96,84%), sau đó giảm nhẹ khi chiết với EtOH 60 -
80%, nhưng cao hơn rõ rệt khi chiết với EtOH 40% và nước Do vậy,
lựa chọn EtOH 50% để khảo sát tiếp
- Ảnh hưởng của tỷ lệ DM/DL và số lần chiết: Chiết siêu âm
CHV với EtOH 50% ở 600C, 60 phút/lần Chiết 1 lần với tỷ lệDM/DL từ 10/1 - 50/1 Chiết 2 lần, tỷ lệ DM/DL lần 1 là 10/1, lần 2lần lượt là 10/1, 7,5/1 và 5/1 Kết quả: Chiết 2 lần, tỷ lệ DM/DL10/1/lần có hiệu suất chiết flavonoid (96,84%) tương đương chiết 1lần với tỷ lệ DM/DL 30/1 - 50/1 và cao hơn 20/1 Do vậy, lựa chọnchiết 2 lần, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần để khảo sát tiếp
- Ảnh hưởng của nhiệt độ: Chiết siêu âm CHV hai lần với EtOH
50%, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần, 60 phút/lần, nhiệt độ 40-800C Kết quả:
Lượng flavonoid chiết được ở 60-800C là tương đương, nhưng cao
Trang 9hơn rõ rệt ở 40-500C Do vậy, nhiệt độ chiết thích hợp là 600C, vì khi
tăng nhiệt độ không làm tăng hiệu suất, nhưng tốn năng lượng
- Ảnh hưởng của thời gian chiết: Chiết CHV hai lần với EtOH
50%, ở 600C, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần, nhưng thời gian chiết từ 30 - 90phút/ lần Kết quả: Thời gian thích hợp để chiết flavonoid từ CHV là
60 phút/lần x 2 lần, khi tăng hoặc giảm thời gian chiết đều làm giảm
lượng flavonoid chiết được
* Tóm tắt thông số và kết quả điều chế dịch chiết CHV
Bảng 3.9 Thông số qui trình điều chế dịch chiết CHV
STT Tên phương pháp/ thông số Thiết bị/ thông số
3.1.2.3 Kết quả chiết xuất, cô cao, loại tạp dịch chiết cúc hoa vàng
Bảng 3.11 Kết quả chiết xuất, cô đặc và loại tạp cao CHV 2:1
Nội dung thử Bột CHV khô
Cao CHV 2:1
trước loại tạp
Cao CHV 2:1 sau loại tạp
Flavonoid, n=3 12,95±0,40mg/g 0,588±0,015mg/ml 23,28±1,23mg/g 20,79±0,85mg/g
Hàm lượng chất rắn (%), n=3 70,24±0,95 38,90±0,63
Chiết 4 mẻ CHV, mỗi mẻ khoảng 3kg Lấy 200 lít dịch chiết, côthu hồi dung môi được 4870,06g cao CHV 2:1, hàm lượng flavonoid
là 23,28 ± 1,23mg/g Sau khi loại tạp thu được 4.870,14g cao CHV2:1, hàm lượng flavonoid là 20,79 ± 0,85mg/g
3.1.2.3 Bào chế bột cao khô cúc hoa vàng bằng phương pháp phun sấy
- Ảnh hưởng của loại tá dược: Phun sấy cao CHV ở 160°C, tốc
độ cấp dịch 45ml/phút, tỷ lệ tá dược/chất rắn (TD/CR) trong cao 1/1,
Trang 10tỷ lệ chất rắn/dịch phun (CR/DP) 10%, nhưng với các tá dược là:maltodextrin (MD), aerosil (AE), MD/AE 8/2, MD/AE 6/4, MD/AE4/6, MD/AE 2/8 Kết quả: Khi tăng dần tỷ lệ AE, giảm dần tỷ lệ MD
làm tăng dần hàm ẩm, hiệu suất phun sấy, khả năng trơn chảy, nhưng
giảm dần tính hút ẩm, hàm lượng và hiệu suất thu hồi flavonoid.Trong đó, MD/AE 4/6 có hàm ẩm và tính hút ẩm thấp, khối lượngriêng cao, khả năng trơn chảy tốt, hàm lượng và hiệu suất thu hồiflavonoid cao nên được lựa chọn để khảo sát tiếp
- Ảnh hưởng của tỷ lệ tá dược: Phun sấy cao CHV với các điều
kiện như ở khảo sát trên, nhưng tỷ lệ tá dược/chất rắn là 30, 40, 50,
75, 100% Kết quả: Khi tăng tỷ lệ tá dược làm giảm hàm ẩm, tính hút
ẩm, hàm lượng flavonoid, nhưng làm tăng khối lượng riêng, khảnăng trơn chảy, hiệu suất phun sấy và thu hồi flavonoid Trong đó, tỷ
lệ tá dược 40% có hàm lượng hoạt chất cao và các chỉ số hóa lý phùhợp với múc đích nghiên cứu nên được lựa chọn để khảo sát tiếp
- Ảnh hưởng của nhiệt độ phun sấy và tốc độ cấp dịch: Phun
sấy cao CHV với các điều kiện như ở khảo sát trên, nhưng ở nhiệt độ
và tốc độ cấp dịch là: 160ºC, 45ml/phút; 140ºC, 45ml/phút; 120ºC,45ml/phút; 120ºC, 30ml/phút Kết quả: Khi tăng nhiệt độ làm giảmhàm ẩm, hàm lượng flavonoid, nhưng tăng hiệu suất phun sấy Khigiảm tốc độ cấp dịch làm giảm hàm ẩm, tăng tính hút ẩm, tăng hàm
lượng flavonoid, tăng khối lượng riêng và khả năng trơn chảy Trong
đó, phun sấy ở 120ºC, 30ml/phút là phù hợp nhất
- Ảnh hưởng của tỷ lệ CR/DP: Phun sấy cao CHV với tỷ lệ
CR/DP là 5, 10, 15, 20% Kết quả: Tỷ lệ CR/DP 20% làm giảm hiệusuất phun sấy, tỷ lệ CR/DP 5% làm tăng hàm ẩm, tính hút ẩm vàgiảm khối lượng riêng Như vậy, tỷ lệ CR/DP 15% là thích hợp nhất,
vì ở tỷ lệ này làm giảm lượng dịch phun nên tiết kiệm được năng
lượng và rút ngắn thời gian hơn khi phun sấy ở tỷ lệ CR/DP 10%
- Tóm tắt thông số qui trình bào chế bột cao khô CHV bằng phun sấy
Trang 11Bảng 3.21 Thông số qui trình bào chế bột cao khô CHV bằng phun sấy
2 Tá dược phun sấy Maltodextrin/ Aerosil (40/60)
3.1.2.4 Kiểm nghiệm và xây dựng tiêu chuẩn cơ sở bột cao khô cúc hoa vàng
Bột cao khô CHV chứa luteolin và apigenin với hàm lượng lần
lượt là 5,736 ± 0,280mg/g và 0,779 ± 0,044mg/g Từ kết quả kiểm
nghiệm đã xây dựng và thẩm định được TCCS bột cao khô CHV
3.1.3 Kết quả bào chế và tiêu chuẩn hóa bột cao khô quả nhàu
3.1.3.1 Kết quả điều chế cao quả nhàu toàn phần
a Khảo sát thông số qui trình chiết xuất flavonoid từ quả nhàu
- Ảnh hưởng của dung môi chiết: Chiết siêu âm quả nhàu 2 lần,
tỷ lệ DM/DL 10/1/lần, ở 500C, 60 phút/lần, nhưng dung môi là:Nước và EtOH (40, 50, 60, 70, 80%) Kết quả: Khi tăng nồng độ
EtOH làm tăng hiệu suất chiết flavonoid và đạt mức cao nhất tại
EtOH 50%, khi tiếp tục tăng nồng độ EtOH lại làm giảm nhẹ hiệusuất chiết flavonoid Do đó, lựa chọn EtOH 50% làm dung môi chiết
- Ảnh hưởng của tỷ lệ DM/DL và số lần chiết: Chiết xuất quả
nhàu với các điều kiện như khảo sát trên Chiết 1 lần với tỷ lệDM/DL là 20/1, 30/1 Chiết 2 lần với tỷ lệ DM/DL lần 1 là 10/1 vàlần 2 lần lượt là 10/1, 7,5/1, 5/1 Kết quả: Chiết 2 lần, tỷ lệ DM/DLlần 1 và 2 lần lượt là 10/1 và 7,5/1 là thích hợp nhất, vì có hiệu suấtchiết flavonoid cao (88,08%) và nếu tiếp tục tăng tỷ lệ DM/DL sẽ tốndung môi, đồng thời sau giai đoạn chiết bằng EtOH, bã dược liệu sẽ
được chiết tiếp bằng nước nên có thể chiết thêm cả flavonoid
- Ảnh hưởng của nhiệt độ chiết: Chiết xuất quả nhàu với các
điều kiện như khảo sát trên, nhưng ở nhiệt độ là: 40, 50, 60, 70,
Trang 12800C Kết quả: Nhiệt độ thích hợp nhất để chiết flavonoid từ quảnhàu là 700C, vì ở nhiệt độ này cho hàm lượng flavonoid tương
đương khi chiết ở 800C và cao hơn ở 40 - 600C
- Ảnh hưởng của thời gian chiết: Thời gian chiết 60 phút/lần
cho 2 lần có hiệu suất chiết flavonoid cao nhất Khi giảm thời gianchiết ở lần 2 xuống 45 và 30 phút làm giảm hiệu suất chiết flavonoid,còn khi tăng lên 90 phút ở cả 2 lần chiết cũng làm giảm nhẹ hiệu suấtchiết Do vậy, thời gian chiết thích lợp là 60 phút/lần x 2 lần chiết
b Khảo sát thông số qui trình chiết xuất Noni-ppt từ quả nhàu
Chiết xuất Noni-ppt (giàu polysacharid) từ quả nhàu bằng
phương pháp siêu âm Kết quả: Điều kiện chiết thích hợp là 900C, tỷ
lệ DM/DL 20/1, 2 giờ Điều kiện chiết này được áp dụng để chiếtxuất Noni-ppt trong bã quả nhàu sau khi đã chiết với EtOH 50%
c Tóm tắt thông số qui trình chiết xuất cao quả nhàu 1:1 toàn phần
Chiết siêu âm ở công suất 400W Giai đoạn chiết với EtOH50%: Chiết siêu âm ở 70ºC, chiết hai lần, tỷ lệ DM/DL lần 1 là 10/1
và lần 2 là 7,5/1, 60 phút/lần; Giai đoạn chiết với nước: Bã quả nhàuchiết tiếp với nước, tỷ lệ DM/DL 10/1, ở 90ºC, trong 2 giờ; Cô cao:Nhiệt độ 70ºC, áp suất giảm (60-70mmHg)
d Bào chế cao quả nhàu 1:1 toàn phần
Bảng 3.25 Kết quả chiết xuất, cô cao, loại tạp của cao quả nhàu toàn phần
Bảng 3.25 cho thấy: Chiết xuất quả nhàu 5mẻ, mỗi mẻ 3kg.Dịch chiết EtOH 50% được cô đặc, loại bớt tạp chất thu được cao
Trang 13EtOH 2:1 Bã quả nhàu được chiết tiếp với nước, cô đặc thu được
cao nước 2:1 Gộp hai phần cao thu được cao quả nhàu 1:1
3.1.3.2 Kết quả bào chế bột cao khô quả nhàu bằng phương pháp phun sấy
a Ảnh hưởng của loại tá dược đến phun sấy cao quả nhàu
Phun sấy cao quả nhàu trong cùng điều kiện: Nhiệt độ 140ºC,tốc độ cấp dịch 30ml/phút, tỷ lệ TD/CR 50%, tỷ lệ CR/DP 15%,
nhưng với các tá dược là: MD, AE, MD/AE(75/25), MD/AE(50/50),
MD/AE(40/60), MD/AE(25/75) Kết quả: Khi tăng dần tỷ lệ AE vàgiảm dần tỷ lệ MD làm tăng dần hàm ẩm, khả năng trơn chảy, hiệusuất phun sấy, nhưng giảm dần tính hút ẩm, hàm lượng và hiệu suấtthu hồi flavonoid, scopoletin Trong đó, MD/AE 25/75 là phù hợpnhất để bào chế bột cao khô quả nhàu bằng phương pháp phun sấy
b Ảnh hưởng của tỷ lệ tá dược/ chất rắn
Phun sấy cao quả nhàu trong cùng điều kiện, nhưng với các tỷ
lệ TD/CR là 50, 40, 30, 20, 0% Kết quả: Khi giảm dần tỷ lệ TD/CR
làm tăng hàm ẩm, tính hút ẩm và hàm lượng hoạt chất, nhưng làm
giảm dần khối lượng riêng, khả năng trơn chảy, hiệu suất thu hồihoạt chất và phun sấy Trong đó, tỷ lệ TD/CR 20% là phù hợp nhất
để bào chế bột cao khô quả nhàu bằng phương pháp phun sấy
c Ảnh hưởng của nhiệt độ và tốc độ cấp dịch
Phun sấy cao quả nhàu trong cùng điều kiện, chỉ khác về nhiệt
độ phun sấy và tốc độ cấp dịch: 160ºC, 45ml/phút; 140ºC,
30ml/phút; 120ºC, 30ml/phút; 120ºC, 45ml/phút Kết quả: Khi giảmnhiệt độ phun sấy làm tăng hàm lượng, hiệu suất thu hồi flavonoid,scopoletin Tăng tốc độ cấp dịch làm tăng hàm ẩm, chỉ số CI, giảmhiệu suất phun sấy Trong đó, phun sấy ở 1200C, 30ml/ phút là thíchhợp nhất nên được lựa chọn để khảo sát tiếp