Nghiên cứu bào chế và đánh giá tác dụng sinh học của viên nang cứng kaviran (tt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN TRỌNG ĐIỆP NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA VIÊN NANG CỨNG KAVIRAN Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC Mã số: 62 72 04 02 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - NĂM 2017 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI HỌC VIỆN QUÂN Y Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thanh Hải PGS TS Nguyễn Tùng Linh Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án Tiến sĩ cấp Trường họp Học viện Quân y Vào hồi: ngày tháng năm 20… Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia; - Thư viện Học viện Quân y ĐẶT VẤN ĐỀ Suy giảm miễn dịch mắc phải hậu nhiều trình bệnh lý như: Suy dinh dưỡng, nhiễm khuẩn, ung thư, sau dùng thuốc ức chế độc với tế bào hệ thống miễn dịch, tia xạ hoá chất điều trị ung thư, nhiễm HIV/AIDS Các trường hợp bệnh lý trên, điều trị tác nhân gây bệnh điều trị nhằm nâng đỡ thể, tăng cường miễn dịch cần thiết Tuy nhiên, chi phí điều trị cao, nhiều bệnh nhân hội tiếp cận, việc tìm kiếm thuốc điều trị bổ sung thay thế, với giá thành dễ chấp nhận vấn đề cấp bách có ý nghĩa thực tiễn cao Quả nhàu cúc hoa vàng (CHV) có tác dụng: tăng cường miễn dịch, chống oxy hoá, ức chế khối u, kháng khuẩn, chống nấm, chống viêm Sâm Ngọc linh sinh khối (NLSK) có tác dụng: tăng lực, tăng trình nhận thức, chống oxy hóa, bảo vệ gan Tuy nhiên, chưa có chế phẩm thuốc bào chế phối hợp từ ba dược liệu Do vậy, để góp phần nghiên cứu phát triển chế phẩm thuốc từ nhàu, CHV sâm NLSK (Viên Kaviran) nhằm tăng cường miễn dịch chống oxy hóa theo hướng đại, an toàn, hiệu ứng dụng vào sản xuất, đề tài: “Nghiên cứu bào chế đánh giá tác dụng sinh học viên nang cứng Kaviran” tiến hành nhằm mục tiêu sau: Bào chế bột cao khô định chuẩn cúc hoa vàng, nhàu sâm Ngọc linh sinh khối Bào chế viên nang cứng Kaviran từ bột cao khô định chuẩn cúc hoa vàng, nhàu sâm Ngọc linh sinh khối Đánh giá độc tính, tác dụng tăng cường miễn dịch, chống oxy hoá bảo vệ gan viên nang cứng Kaviran thực nghiệm * Đóng góp luận án - Xây dựng qui trình bào chế bột cao khô định chuẩn Cúc hoa vàng, Nhàu sâm Ngọc linh sinh khối, bao gồm: Nâng cấp tiêu chuẩn cúc hoa vàng nhàu dựa tiêu chuẩn DĐVN IV Xây dựng qui trình chiết xuất hoạt chất phương pháp chiết siêu âm, qui trình bào chế bột cao khô bán thành phẩm phương pháp phun sấy Xây dựng thẩm định tiêu chuẩn sở bột cao khô bán thành phẩm - Xây dựng công thức bào chế viên nang cứng Kaviran từ bột cao khô định chuẩn nhàu, CHV sâm NLSK sở phối hợp thành phần có tác dụng tăng cường miễn dịch, chống oxy hóa… công thức nhằm tăng cường tác dụng cho chế phẩm Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng đánh giá độ ổn định chế phẩm - Đánh giá tính an toàn số tác dụng sinh học chế phẩm: Chưa xác định giá trị LD50 chuột không thấy biểu độc tính bán trường diễn thỏ; chế phẩm có tác dụng tăng cường miễn dịch, chống oxy hóa bảo vệ gan thử động vật thực nghiệm Luận án có tính cấp thiết, ý nghĩa khoa học tính thực tiễn cao Kết luận án có đóng góp cho nguyên ngành công nghệ dược phẩm bào chế thuốc, tài liệu tham khảo hữu ích lĩnh vực nghiên cứu bào chế thuốc nguồn gốc dược liệu theo hướng đại * Nội dung cấu trúc luận án Luận án gồm 149 trang: Đặt vấn đề trang, tổng quan 33 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 20 trang, kết nghiên cứu 56 trang, bàn luận 34 trang, kết luận trang, kiến nghị trang, danh mục báo trang, có 158 tài liệu tham khảo (25 tài liệu tiếng Việt, 133 tài liệu tiếng Anh) Chương TỔNG QUAN Tổng quan dược liệu dùng nghiên cứu, gồm: nhàu, CHV sâm NLSK Mỗi dược liệu đề cập đến: Đặc điểm thực vật phân bố, thành phần hóa học, tác dụng sinh học Các thông tin kỹ thuật chiết xuất dược liệu: Khái niệm số thuật ngữ, số phương pháp chiết xuất đại, phương pháp chiết xuất đề cập đến nguyên lý chế, thiết bị, số ứng dụng nghiên cứu điển hình Các thông tin kỹ thuật phun sấy: Khái niệm, thiết bị giai đoạn phun sấy, thông số quan trọng qui trình, ưu nhược điểm; ý nghĩa phun sấy dịch chiết dược liệu, số khó khăn gặp phải, số nghiên cứu phun sấy dịch chiết dược liệu Chương NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị nghiên cứu - Quả Nhàu, CHV đạt tiêu chuẩn DĐVN IV Sâm NLSK đạt TCCS; Chất chuẩn: Apigenin, luteolin, ginsenosid (Rb1, Rg1) hãng Sigma Aldrich Scopoletin hãng Shanghai Tauto Biotech; Các tá dược hóa chất phân tích đạt tiêu chuẩn thí nghiệm - Các thiết bị sử dụng đạt yêu cầu cho nghiên cứu chiết xuất, bào chế, kiểm nghiệm đánh giá tác dụng dược lý - Thỏ chủng Orytolgus cuniculus, khỏe mạnh, cân nặng 2,0 ± 0,2kg Chuột nhắt trắng chủng Swiss, khỏe mạnh, cân nặng 20,0 ± 2,0g Động vật nuôi dưỡng điều kiện phóng thí nghiệm 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Nghiên cứu bào chế bột cao khô tiêu chuẩn cúc hoa vàng, nhàu sâm Ngọc linh sinh khối 2.2.1.1 Phương pháp định lượng hoạt chất nguyên liệu, phân đoạn dịch chiết bột cao khô Định lượng flavonoid toàn phần UV-Vis; Định lượng apigenin, luteolin CHV scopoletin nhàu HPLC: Xây dựng thẩm định phương pháp; Định lượng ginsenosid (Rg1, Rb1) sâm NLSK HPLC: Theo phương pháp Vũ Bình Dương cộng (2008) 2.2.1.2 Nghiên cứu điều chế dịch chiết cúc hoa vàng, nhàu sâm Ngọc linh sinh khối - Điều chế cao CHV, cao nhàu: Khảo sát thông số qui trình chiết siêu âm: Loại dung môi, tỷ lệ dung môi/ dược liệu, số lần chiết, thời gian nhiệt độ chiết Chỉ tiêu đánh giá: Hàm lượng flavonoid chiết CHV nhàu; hàm lượng ginsenosid (Rg1, Rb1) chiết sâm NLSK; Nhóm hoạt chất bị kết tủa EtOH (Noni-ppt) chiết từ nhàu Dịch chiết cô đặc loại tạp để thu cao CHV (2:1) cao nhàu (1:1) - Điều chế cao sâm NLSK: Chiết siêu âm với EtOH 70%, nhiệt độ chiết 600C, chiết hai lần với tỷ lệ DM/DL/lần 10/1, thời gian chiết 60 phút/lần Sau chiết xuất, cô thu hồi dung môi đến tỷ lệ cao 1:1, loại bớt tạp cô thu hồi dung môi để thu cao 6:1 2.2.1.3 Nghiên cứu bào chế bột cao khô cúc hoa vàng, nhàu sâm Ngọc linh sinh khối phương pháp phun sấy Thông số khảo sát: Loại tá dược (Maltodextrin aerosil); nhiệt độ phun sấy tốc độ cấp dịch; tỷ lệ tá dược/ chất rắn (TD/CR) cao; tỷ lệ chất rắn dịch phun (CR/DP); Thông số đánh giá: Theo tiêu chất lượng bột cao khô (Mục 2.2.1.4) 2.2.1.4 Phương pháp đánh giá tiêu chất lượng bột cao khô phun sấy Hình thức cảm quan: Quan sát cảm quan chụp hiển vi điện tử quyét; Khối lượng riêng số nén CI: Theo USP 30; Mất khối lượng làm khô: PL 9.6 - DĐVN IV; Tính hút ẩm: Thử 250C, độ ẩm tương đối 75,29%, thời gian: ngày; Hàm lượng hoạt chất: Định lượng flavonoid toàn phần UV-Vis, scopolein ginsenosid (Rg1, Rb1) HPLC; Hiệu suất thu hồi hoạt chất phun sấy: Là tỷ lệ % thực tế thu so với lý thuyết 2.2.1.5 Nghiên cứu tiêu chuẩn hóa bột cao khô bán thành phẩm Tính chất: Thử cảm quan; Mất khối lượng làm khô, độ mịn, độ đồng nhất, tro toàn phần: Theo DĐVN IV; Định tính: sắc ký lớp mỏng HPLC; Định lượng HPLC: apigenin, luteolin bột cao khô CHV, scopoletin bột cao khô nhàu, ginsenosid (Rg1, Rb1) bột cao khô sâm NLSK 2.2.2 Nghiên cứu bào chế, tiêu chuẩn hóa đánh giá độ ổn định viên nang cứng Kaviran - Xây dựng công thức bào chế: Xác định tỷ lệ phối hợp bột cao khô dựa đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro tăng cường miễn dịch in vivo; Lựa chọn tá dược: Aerosil, magnesi stearat, natri laurylsulphat, manitol Khảo sát tỷ lệ Avicel natri croscarmellose Chỉ tiêu đánh giá: Khối lượng riêng, số nén CI bột đóng nang độ rã viên nang - Kiểm nghiệm về: Tính chất: Kiểm tra cảm quan; Độ rã, độ đồng khối lượng, hàm ẩm: Theo DĐVN IV; Định tính: Bằng sắc ký lớp mỏng HPLC; Định lượng: Apigenin, luteolin ginsenosid (Rg1, Rg1) HPLC Từ kết kiểm nghiệm xây dựng tiêu chuẩn sở (TCCS) cho chế phẩm - Đánh giá độ ổn định: Theo hướng dẫn ASIAN WHO 2.2.3 Nghiên cứu tính độc tính tác dụng sinh học viên nang cứng Kaviran động vật thực nghiệm 2.2.3.1 Đánh giá tính độc tính viên nang cứng Kaviran - Xác định độc tính cấp chuột nhắt: Tiến hành theo hướng dẫn Bộ Y tế, OECD WHO - Xác định độc tính bán trường diễn: Tiến hành theo quy định WHO Bộ Y tế: Thỏ gồm lô, 12con/ lô: Lô chứng: Uống NaCl 0,9%, liều 2,5ml/kg; (2) Lô Kaviran liều 240 1200mg/kg; Các tiêu đánh giá: Sinh lý - dược lý, huyết học, sinh hóa, mô bệnh học Thời gian thử tuần 2.2.3.2 Đánh giá tác dụng sinh học viên Kaviran a Đánh giá tác dụng bảo vệ gan mô hình gây độc paracetamol liều cao: Chuột nhắt trắng gồm lô, lô 10 con: Lô (Đối chứng): Uống nước cất 0,2 ml/10g; Lô (Mô hình): Uống nước cất 0,2ml/10g + paracetamol; Lô (Chứng dương): Uống silymarin 140mg/kg + paracetamol; Lô 4: Uống Kaviran liều 0,72g/kg (D1) + paracetamol; Lô 5: Uống Kaviran liều 2,16g/kg (D2) + paracetamol; Lô 6: Uống Kaviran liều 4,32 g/kg (D3) + paracetamol Đến ngày thứ 8, sau uống thuốc thử giờ, cho chuột từ lô đến lô uống paracetamol liều 400mg/kg Sau 48 giờ, lấy máu để đo hoạt độ enzym AST, ALT, xác định khối lượng gan hàm lượng MDA Quan sát đại thể vi thể gan b Đánh giá tác dụng Kaviran chuột thực nghiệm bị suy giảm miễn dịch chiếu tia xạ: Chuột nhắt trắng gồm lô, lô 10 con: Lô 1: Không bị tác động gì; Lô 2: Chiếu xạ, uống NaCl 0,9%; Lô 3: Chiếu xạ, uống levamisol liều 50mg/kg; Lô 4: Chiếu xạ, uống Kaviran liều 0,72g/kg; Lô 5: Chiếu xạ, uống Kaviran liều 2,16g/kg Chuột chiếu xạ toàn thân liều 1Gy/ngày ngày Cho chuột uống thuốc ngày chiếu xạ ngày sau chiếu xạ Ngày thứ 14, tiến hành xét nghiệm Các tiêu đánh giá: Khối lượng tuyến ức lách tương đối; Số lượng bạch cầu công thức bạch cầu; Vi thể lách, tuyến ức, hạch đầu xương đùi 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu Sự khác biệt giá trị trung bình mẫu sử dụng Duncan’s Multiple Range Test phần mềm SAS (α = 0,05), biểu diễn theo ± SD Giá trị cột có ký tự (biểu thị theo a, b, c, d ) khác biệt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết bào chế bột cao khô tiêu chuẩn 3.1.1 Kết định tính, định lượng dược liệu - Định tính: Trên sắc ký đồ mẫu thử có píc có thời gian lưu trùng với thời gian lưu dung dịch chuẩn luteolin apigenin (24,6 34,5 phút) CHV, scopoletin (6,9 phút) nhàu, ginsenosid (Rg1 12,8 phút Rb1 34,5 phút) sâm NLSK - Định lượng: CHV chứa 1,3986mg/g luteolin 0,2274mg/g apigenin; Quả nhàu chứa 110,85µg/g scopoletin; sâm NLSK chứa 7,57mg/g ginsenosid (Rg1, Rb1) 3.1.2 Kết bào chế tiêu chuẩn hóa bột cao khô cúc hoa vàng 3.1.2.1 Kết điều chế dịch chiết cúc hoa vàng - Ảnh hưởng dung môi: Chiết siêu âm CHV hai lần 600C, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần, 60 phút/lần, với dung môi là: Nước EtOH 40, 50, 60, 70 80% Kết quả: EtOH 50% có hiệu suất chiết cao (96,84%), sau giảm nhẹ chiết với EtOH 60 80%, cao rõ rệt chiết với EtOH 40% nước Do vậy, lựa chọn EtOH 50% để khảo sát tiếp - Ảnh hưởng tỷ lệ DM/DL số lần chiết: Chiết siêu âm CHV với EtOH 50% 600C, 60 phút/lần Chiết lần với tỷ lệ DM/DL từ 10/1 - 50/1 Chiết lần, tỷ lệ DM/DL lần 10/1, lần 10/1, 7,5/1 5/1 Kết quả: Chiết lần, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần có hiệu suất chiết flavonoid (96,84%) tương đương chiết lần với tỷ lệ DM/DL 30/1 - 50/1 cao 20/1 Do vậy, lựa chọn chiết lần, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần để khảo sát tiếp - Ảnh hưởng nhiệt độ: Chiết siêu âm CHV hai lần với EtOH 50%, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần, 60 phút/lần, nhiệt độ 40-800C Kết quả: Lượng flavonoid chiết 60-800C tương đương, cao rõ rệt 40-500C Do vậy, nhiệt độ chiết thích hợp 600C, tăng nhiệt độ không làm tăng hiệu suất, tốn lượng - Ảnh hưởng thời gian chiết: Chiết CHV hai lần với EtOH 50%, 600C, tỷ lệ DM/DL 10/1/lần, thời gian chiết từ 30 - 90 phút/ lần Kết quả: Thời gian thích hợp để chiết flavonoid từ CHV 60 phút/lần x lần, tăng giảm thời gian chiết làm giảm lượng flavonoid chiết * Tóm tắt thông số kết điều chế dịch chiết CHV Bảng 3.9 Thông số qui trình điều chế dịch chiết CHV STT Tên phương pháp/ thông số Chiết siêu âm Cúc hoa vàng Dung môi chiết Nhiệt độ chiết Số lần chiết Tỷ lệ DM/ DL Thời gian chiết Thiết bị/ thông số Thiết bị SM30-CEP, công suất 400W Kích thước nhỏ 1mm Ethanol 50% 600C lần 10/1/ lần x lần 60phút/ lần x lần 3.1.2.3 Kết chiết xuất, cô cao, loại tạp dịch chiết cúc hoa vàng Bảng 3.11 Kết chiết xuất, cô đặc loại tạp cao CHV 2:1 Bột CHV khô Cao CHV 2:1 Cao CHV 2:1 Dịch chiết CHV kiệt trước loại tạp sau loại tạp Khối lượng, thể tích 9.740,3 g 200,0 lít 4.870,06g 4.870,14g Flavonoid, n=3 12,95±0,40mg/g 0,588±0,015mg/ml 23,28±1,23mg/g 20,79±0,85mg/g Hàm lượng chất rắn (%), n=3 70,24±0,95 38,90±0,63 Tỷ lệ chất rắn loại (%) 44,62 Flavonoid loại tạp (%) 10,70 Hiệu suất chiết, cô cao (%) 89,88 Hiệu suất chiết, cô cao loại tạp (%) 80,27 Flavonoid (mg/g) tính theo cao khô tuyệt đối 33,14 53,45 Tỷ lệ làm giàu flavonoid sau loại tạp (lần) 1,61 Nội dung thử Chiết mẻ CHV, mẻ khoảng 3kg Lấy 200 lít dịch chiết, cô thu hồi dung môi 4870,06g cao CHV 2:1, hàm lượng flavonoid 23,28 ± 1,23mg/g Sau loại tạp thu 4.870,14g cao CHV 2:1, hàm lượng flavonoid 20,79 ± 0,85mg/g 3.1.2.3 Bào chế bột cao khô cúc hoa vàng phương pháp phun sấy - Ảnh hưởng loại tá dược: Phun sấy cao CHV 160°C, tốc độ cấp dịch 45ml/phút, tỷ lệ tá dược/chất rắn (TD/CR) cao 1/1, 11 800C Kết quả: Nhiệt độ thích hợp để chiết flavonoid từ nhàu 700C, nhiệt độ cho hàm lượng flavonoid tương đương chiết 800C cao 40 - 600C - Ảnh hưởng thời gian chiết: Thời gian chiết 60 phút/lần cho lần có hiệu suất chiết flavonoid cao Khi giảm thời gian chiết lần xuống 45 30 phút làm giảm hiệu suất chiết flavonoid, tăng lên 90 phút lần chiết làm giảm nhẹ hiệu suất chiết Do vậy, thời gian chiết thích lợp 60 phút/lần x lần chiết b Khảo sát thông số qui trình chiết xuất Noni-ppt từ nhàu Chiết xuất Noni-ppt (giàu polysacharid) từ nhàu phương pháp siêu âm Kết quả: Điều kiện chiết thích hợp 900C, tỷ lệ DM/DL 20/1, Điều kiện chiết áp dụng để chiết xuất Noni-ppt bã nhàu sau chiết với EtOH 50% c Tóm tắt thông số qui trình chiết xuất cao nhàu 1:1 toàn phần Chiết siêu âm công suất 400W Giai đoạn chiết với EtOH 50%: Chiết siêu âm 70ºC, chiết hai lần, tỷ lệ DM/DL lần 10/1 lần 7,5/1, 60 phút/lần; Giai đoạn chiết với nước: Bã nhàu chiết tiếp với nước, tỷ lệ DM/DL 10/1, 90ºC, giờ; Cô cao: Nhiệt độ 70ºC, áp suất giảm (60-70mmHg) d Bào chế cao nhàu 1:1 toàn phần Bảng 3.25 Kết chiết xuất, cô cao, loại tạp cao nhàu toàn phần Quả nhàu khô Cao EtOH 2:1, Cao EtOH 2:1, kiệt chưa loại tạp loại tạp Khối lượng (g) 13.684,58 6.844,71 6.843,47 Tỷ lệ chất rắn (%) 32,79 ± 0,80 23,81 ± 1,17 Tỷ lệ (%) tạp loại từ dịch chiết 8,97 Flavonoid (mg/ 0,654 ± 0,032 1,104 ± 0,034 1,061 ± 0,047 Hiệu suất chiết, cô cao, loại tạp tính theo fla (%) 81,10 Tỷ lệ (%) Noni-ppt 10,24 ± 0,45 39,23 ± 2,62 Hiệu suất chiết Noni-ppt (%) từ nhàu 45,63 Nội dung thử Cao QN 1:1 toàn phần 13.686,73 16,05 ± 0,25 0,560 ± 0,017 85,72 53,91 ± 1,55 84,54 Bảng 3.25 cho thấy: Chiết xuất nhàu 5mẻ, mẻ 3kg Dịch chiết EtOH 50% cô đặc, loại bớt tạp chất thu cao 12 EtOH 2:1 Bã nhàu chiết tiếp với nước, cô đặc thu cao nước 2:1 Gộp hai phần cao thu cao nhàu 1:1 3.1.3.2 Kết bào chế bột cao khô nhàu phương pháp phun sấy a Ảnh hưởng loại tá dược đến phun sấy cao nhàu Phun sấy cao nhàu điều kiện: Nhiệt độ 140ºC, tốc độ cấp dịch 30ml/phút, tỷ lệ TD/CR 50%, tỷ lệ CR/DP 15%, với tá dược là: MD, AE, MD/AE(75/25), MD/AE(50/50), MD/AE(40/60), MD/AE(25/75) Kết quả: Khi tăng dần tỷ lệ AE giảm dần tỷ lệ MD làm tăng dần hàm ẩm, khả trơn chảy, hiệu suất phun sấy, giảm dần tính hút ẩm, hàm lượng hiệu suất thu hồi flavonoid, scopoletin Trong đó, MD/AE 25/75 phù hợp để bào chế bột cao khô nhàu phương pháp phun sấy b Ảnh hưởng tỷ lệ tá dược/ chất rắn Phun sấy cao nhàu điều kiện, với tỷ lệ TD/CR 50, 40, 30, 20, 0% Kết quả: Khi giảm dần tỷ lệ TD/CR làm tăng hàm ẩm, tính hút ẩm hàm lượng hoạt chất, làm giảm dần khối lượng riêng, khả trơn chảy, hiệu suất thu hồi hoạt chất phun sấy Trong đó, tỷ lệ TD/CR 20% phù hợp để bào chế bột cao khô nhàu phương pháp phun sấy c Ảnh hưởng nhiệt độ tốc độ cấp dịch Phun sấy cao nhàu điều kiện, khác nhiệt độ phun sấy tốc độ cấp dịch: 160ºC, 45ml/phút; 140ºC, 30ml/phút; 120ºC, 30ml/phút; 120ºC, 45ml/phút Kết quả: Khi giảm nhiệt độ phun sấy làm tăng hàm lượng, hiệu suất thu hồi flavonoid, scopoletin Tăng tốc độ cấp dịch làm tăng hàm ẩm, số CI, giảm hiệu suất phun sấy Trong đó, phun sấy 1200C, 30ml/ phút thích hợp nên lựa chọn để khảo sát tiếp 13 d Ảnh hưởng tỷ lệ chất rắn dịch phun Phun sấy cao nhàu điều kiện, khác tỷ lệ CR/DP: 5, 10, 15, 18% Kết quả: Tỷ lệ CR/DP ảnh hưởng đến hàm ẩm, tính hút ẩm, hàm lượng hiệu suất thu hồi hoạt chất, tăng tỷ lệ CR/DP làm tăng khối lượng riêng khả trơn chảy Trong đó, tỷ lệ CR/DP 15% thích hợp để bào chế bột cao khô nhàu phương pháp phun sấy e Tóm tắt thông số bào chế bột cao khô nhàu phun sấy Bảng 3.35 Thông số qui trình bào chế bột cao khô nhàu phun sấy STT Tên thông số Dịch phun sấy Tá dược phun sấy Tỷ lệ tá dược/ chất rắn Nhiệt độ đầu vào Tốc độ cấp dịch Tỷ lệ chất rắn dịch phun Áp suất khí nén đầu phun Thông số Cao nhàu toàn phần 1:1 Maltodextrin/ Aerosil (25/75) 20% 120 ± 20C 30 ml / phút 15% Bar 3.1.3.4 Kiểm nghiệm tiêu chuẩn hóa bột cao khô nhàu Hàm lượng scopoletin bột cao khô nhàu 383,78 ± 12,26 µg/g Từ kết kiểm nghiệm xây dựng thẩm định TCCS bột cao khô nhàu 3.1.4 Kết chiết xuất, bào chế tiêu chuẩn hóa bột cao khô sâm Ngọc linh sinh khối 3.1.4.1 Kết điều chế dịch chiết sâm Ngọc linh sinh khối Bảng 3.36 Thành phần nguyên liệu cao sâm NLSK Hàm lượng ginsenosid (mg/g) Khối Hàm ẩm lượng (g) (%) Rg1 Rb1 Rg1+Rb1 Sâm NLSK 12.011,19 9,73±0,22 3,78±0,17 3,79±0,24 7,57±0,33 Cao sâm 10.820,24 84,56±1,22 3,57±0,15 3,44±0,09 7,01±0,24 NLSK 1:1 Cao sâm 1.801,57 59,47±1,25 20,58±0,64 18,85±0,68 39,43±1,32 NLSK 6:1 STT Hiệu suất chiết (%) 92,61 86,83 Bảng 3.36 cho thấy cao sâm NLSK 6:1 có hàm lượng ginsenosid 39,43mg/g, hàm ẩm 59,47% Cao sâm 6:1 sử dụng nghiên cứu bào chế bột cao khô 14 3.1.4.2 Kết bào chế bột cao khô sâm Ngọc linh sinh khối phương pháp phun sấy a Ảnh hưởng tá dược hỗ trợ phun sấy Phun sấy cao sâm điều kiện: Nhiệt độ 140ºC, tốc độ cấp dịch 30ml/phút, tỷ lệ TD/CR 50%, tỷ lệ CR/DP 10%, với tá dược là: MD/AE(75:25), MD/AE(50:50), MD/AE(25:75) Kết quả: Khi giảm dần tỷ lệ MD tăng dần tỷ lệ AE làm tăng hàm ẩm, hiệu suất phun sấy, khả trơn chảy, lại làm giảm tính hút ẩm, khối lượng riêng, hàm lượng hiệu suất thu hồi ginsenosid Trong đó, MD/AE 50/50 phù hợp nên lựa chọn b Ảnh hưởng nhiệt độ tốc độ cấp dịch Phun sấy cao sâm điều kiện, nhiệt độ đầu vào, tốc độ cấp dịch là: 160ºC, 45ml/phút, 140ºC, 30ml/phút, 120ºC, 30ml/phút Kết quả: Nhiệt độ phun sấy từ 140 - 1600C cho sản phẩm có khối lượng riêng, hiệu suất phun sấy, hàm lượng, hiệu suất thu hồi ginsenosid cao 1200C Trong đó, phun sấy 1400C, 30ml/phút cho sản phẩm tốt nên lựa chọn để khảo sát tiếp c Ảnh hưởng tỷ lệ tá dược Phun sấy cao sâm điều kiện, tỷ lệ TD/CR 50, 40, 30 20% Kết quả: Khi tăng dần tỷ lệ TD/CR làm giảm dần hàm ẩm, tính hút ẩm, hàm lượng ginsenosid, khả trơn chảy, hiệu suất phun sấy hiệu suất thu hồi hoạt chất Trong đó, tỷ lệ TD/CR 30% thích hợp để bào chế bột cao khô sâm NLSK d Ảnh hưởng tỷ lệ chất rắn dịch phun Phun sấy cao sâm NLSK điều kiện, khác tỷ lệ CR/DP (5, 10, 15, 20%) Kết quả: Khi tăng tỷ lệ CR/DP làm tăng khối lượng riêng, khả trơn chảy, hàm lượng hiệu suất thu hồi ginsenosid, đồng thời giảm tính hút ẩm Tuy nhiên, tỷ lệ CR/DP 20% chất lượng bột không tăng, hiệu suất phun sấy lại giảm mạnh Do vậy, tỷ lệ CR/DP 15% phù hợp 15 e Tóm tắt thông số bào chế bột cao khô sâm NLSK phương pháp phun sấy Bảng 3.45 Thông số qui trình bào chế bột cao khô sâm NLSK phun sấy STT Tên thông số Nguyên liệu phun sấy Tá dược phun sấy Tỷ lệ tá dược/ chất rắn Nhiệt độ đầu vào Tốc độ cấp dịch Tỷ lệ chất rắn dịch phun sấy Áp suất khí nén đầu phun Thông số Cao sâm NLSK (6:1) Maltodextrin : Aerosil (50:50) 30% 140 ± 20C 30 ml / phút 15% Bar 3.1.4.3 Kiểm nghiệm xây dựng tiêu chuẩn sở bột cao khô sâm Ngọc linh sinh khối Bột cao khô sâm NLSK có hàm lượng ginsenosid (Rg1, Rb1) 68,97 ± 1,93mg/g Từ kết kiểm nghiệm xây dựng thẩm định TCCS bột cao khô sâm NLSK 3.2 Kết xây dựng công thức, tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định viên nang cứng Kaviran 3.2.1 Xây dựng công thức viên nang Kaviran - Xây dựng công thức dược chất: Trên sở đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro tác dụng tăng cường miễn dịch xác định tỷ lệ phối hợp bột cao khô để xây dựng công thức dược chất viên Kaviran là: bột cao khô sâm NLSK/ bột cao khô nhàu/ bột cao khô CHV với tỷ lệ 1/3/3 - Đã xây dựng công thức viên nang Kaviran (Bảng 3.48) Bảng 3.48 Thành phần công thức cho viên nang cứng Kaviran STT Thành phần Bột cao khô sâm NLSK Bột cao khô CHV Bột cao Quả nhàu Aerosil Magnesi stearat Natri laurylsulphat Natri croscarmellose Manitol Khối lượng 60,0 mg 180,0 mg 180,0 mg 2,5 mg 5,0 mg 2,5 mg 20,0 mg 24,58 mg 16 3.2.2 Kiểm nghiệm, xây dựng tiêu chuẩn sở viên nang cứng Kaviran Viên nang Kaviran chứa luteolin 0,846±0,030mg, apigenin 0,121±0,006mg, ginsenosid Rg1 2,31±0,137g ginsenosid Rb1 2,24 ± 0,167mg Từ kết kiểm nghiệm xây dựng thẩm định TCCS cho viên nang cứng Kaviran 3.2.3 Kết đánh giá độ ổn định viên nang cứng Kaviran Tất tiêu chí đánh giá sau tháng điều kiện lão hóa cấp tốc 12 tháng điều kiện dài hạn đạt theo tiêu chuẩn sở chế phẩm Như vậy, chế phẩm có độ ổn định 12 tháng 3.3 Đánh giá độc tính tác dụng tăng cường miễn dịch, chống oxy hóa, bảo vệ gan viên nang Kaviran 3.3.1 Đánh giá độc tính cấp bán trường diễn - Độc tính cấp: Kaviran dùng đến mức liều cao cho chuột nhắt uống 36g/kg/24h (gấp 50 lần liều dự kiến lâm sàng), không xác định LD50 - Độc tính bán trường diễn: Kaviran liều 240 1200mg/kg không làm thay đổi cân nặng thể, điện tim thỏ Chỉ số huyết học, hoạt độ enzym AST, ALT hàm lượng creatinin, ure máu thay đổi ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Hình ảnh đại thể vi thể gan, lách thận lô dùng Kaviran không khác so với lô chứng 3.3.2 Đánh giá tác dụng tăng cường miễn dịch, chống oxy hóa bảo vệ gan viên nang cứng Kaviran 3.2.2.1 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa bảo vệ gan Khối lượng gan ương đối chuột uống Kaviran liều 4,32g/kg giảm so với lô mô hình (p < 0,05) Kaviran mức liều làm giảm hoạt độ AST, ALT, liều 2,16 4,32g/kg có ý nghĩa thống kê so với lô mô hình (p < 0,05) So với lô mô hình, silymarin Kaviran có tác dụng làm giảm hàm lượng MDA dịch đồng thể gan, khác biệt ý nghĩa thống 17 kê (p > 0,05) Về đại thể, vi thể gan chuột uống Kaviran bình thường mức độ tổn thương nhẹ so với lô mô hình 3.2.2.2 Đánh giá tác dụng Kaviran chuột thực nghiệm bị suy giảm miễn dịch chiếu tia xạ Lô chuột uống Levamisol Kaviran (liều 0,72 2,16g/kg) làm tăng rõ rệt khối lượng ức lách tương đối so với lô chứng chiếu xạ (p < 0,05) Bảng 3.59 Ảnh hưởng Kaviran lên số lượng bạch cầu chuột nhắt trắng Lô chuột Lô Lô Lô Lô Lô Số lượng bạch cầu bạch cầu thành phần (109/ L) Bạch cầu BC Lympho BC đơn nhân BC hạt 4,107 ± 0,724 a 3,497 ± 0,628 a 0,249 ± 0,065 b 0,365 ± 0,053 a 1,875 ± 0,354 c 1,470 ± 0,263 c 0,187 ± 0,054 b 0,189 ± 0,078 b bc bc a 2,538 ± 0,652 1,982 ± 0,495 0,375 ± 0,170 0,210 ± 0,073 b 2,900 ± 1,068 b 2,287 ± 0,917 b 0,278 ± 0,083 ab 0,196 ± 0,077 b 2,588 ± 0,579 bc 2,113 ± 0,455 b 0,275 ± 0,086 ab 0,230 ± 0,050 b Giá trị cột có ký tự khác biệt ý nghĩa thống kê (p 0,05) KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất viên nang cứng Kaviran quy mô lớn đánh giá độ ổn định chế phẩm với thời gian dài - Đánh giá thêm số tác dụng sinh học chế phẩm thực nghiệm lâm sàng nhằm xác định rõ liều dùng tác dụng điều trị chế phẩm DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Trọng Điệp, Nguyễn Minh Chính, Nguyễn Tùng Linh, Nguyễn Thanh Hải (2013), Nghiên cứu chiết xuất flavonoid toàn phần từ Cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.), Tạp chí Y Dược học Quân sự, 38(9), tr 39-45 Nguyễn Trọng Điệp, Chử Văn Mến, Vũ Bình Dương, Nguyễn Vũ Minh, Nguyễn Thanh Hải (2014), Nghiên cứu định lượng luteolin, apigenin dược liệu bột cao khô cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.) phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, Tạp chí Dược học, 461(54), tr 66-70 Nguyễn Trọng Điệp, Vũ Bình Dương, Nguyễn Thanh Hải (2015), Nghiên cứu ảnh hưởng tá dược đến chất lượng bột cao khô cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.) bào chế phương pháp phun sấy, Tạp chí Y Dược học Quân sự, 40(1), tr.1118 Nguyễn Trọng Điệp, Vũ Bình Dương, Nguyễn Thanh Hải (2015), Nghiên cứu ảnh hưởng tá dược đến qui trình bào chế bột cao khô nhàu (Morinda citrifolia L.) phương pháp phun sấy, Tạp chí Dược học, 465(55), tr 13-18 Nguyễn Trọng Điệp, Nguyễn Tùng Linh, Nguyễn Văn Long (2016), Nghiên cứu tác dụng tăng cường miễn dịch viên nang cứng Kaviran chuột nhắt trắng bị suy giảm miễn dịch chiếu tia xạ, Tạp chí Y Dược học Quân sự, 41 (Số chuyên đề Dược), tr 117-124 Nguyễn Trọng Điệp, Nguyễn Tùng Linh (2016), Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan viên nang cứng Kaviran mô hình gây tổn thương gan chuột nhắt trắng paracetamol, Tạp chí Y Dược học Quân sự, 41(9), tr 5-11 ... (2) Lô Kaviran liều 240 1200mg/kg; Các tiêu đánh giá: Sinh lý - dược lý, huyết học, sinh hóa, mô bệnh học Thời gian thử tuần 2.2.3.2 Đánh giá tác dụng sinh học viên Kaviran a Đánh giá tác dụng. .. cho chế phẩm - Đánh giá độ ổn định: Theo hướng dẫn ASIAN WHO 2.2.3 Nghiên cứu tính độc tính tác dụng sinh học viên nang cứng Kaviran động vật thực nghiệm 2.2.3.1 Đánh giá tính độc tính viên nang. .. đánh giá tác dụng sinh học viên nang cứng Kaviran tiến hành nhằm mục tiêu sau: Bào chế bột cao khô định chuẩn cúc hoa vàng, nhàu sâm Ngọc linh sinh khối Bào chế viên nang cứng Kaviran từ bột cao