VŨ NGỌC LINH ĐÁNH GIÁ tác DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU của CHẾ PHẨM KHƯƠNG THẢO ĐAN TRÊN mô HÌNH THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGỌC LINH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM KHƯƠNG THẢO ĐAN TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGỌC LINH Mã sinh viên: 1501291 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM KHƯƠNG THẢO ĐAN TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Đào Thị Vui Ths Ngô Thanh Hoa Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc lời cảm ơn chân thành tới thầy cô giáo, gia đình, anh chị, bạn bè người giúp đỡ, ủng hộ em thời gian vừa qua Trước hết, với tất kính trọng lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Đào Thị Vui – Trưởng môn Dược lực ThS Ngô Thanh Hoa, người thầy kính mến tận tình bảo giúp đỡ em suốt trình nghiên cứu thực đề tài Cảm ơn ngồi kiến thức chun mơn em cịn dạy kỹ thực nghiệm phương pháp làm việc khoa học, hiệu trung thực Em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ThS Hồ Mỹ Dung thầy cô giáo mơn Dược lực tận tình giúp đỡ, bảo, tạo điều kiện cho em học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn DS Đinh Đại Độ, anh chị kỹ thuật viên, nghiên cứu sinh, bạn sinh viên nghiên cứu khoa học Bộ môn Dược lực đồng hành, hỗ trợ, giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè ln bên cạnh, ủng hộ, chia sẻ khó khăn động viên em thực khóa luận Hà Nội, tháng năm 2020 Sinh viên Vũ Ngọc Linh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tóm lược bệnh viêm khớp 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Nguyên nhân số yếu tố nguy cơ, triệu chứng, phân loại số bệnh viêm khớp phổ biến 1.1.4 Một số nhóm thuốc hóa dược thường dùng điều trị viêm khớp 1.1.5 Một số thuốc y học cổ truyền nghiên cứu điều trị viêm khớp .7 1.2 Một số mơ hình thực nghiệm đánh giá tác dụng chống viêm giảm đau thực nghiệm 1.2.1 Một số mơ hình nghiên cứu tác dụng chống viêm thực nghiệm 1.2.2 Một số mơ hình đánh giá tác dụng giảm đau thực nghiệm 10 1.3 Tổng quan chế phẩm Khương thảo đan 11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .15 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Động vật thí nghiệm 16 2.1.3 Hóa chất, thuốc thử .17 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 17 2.2 Nội dung nghiên cứu .17 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 17 2.2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu .18 2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan .18 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau ngoại vi chế phẩm Khương thảo đan thực nghiệm .23 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ 26 3.1 Kết đánh giá tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan 26 3.2 Kết đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan thực nghiệm 31 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau quặn acid acetic .32 3.2.2 Kết đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau viêm .33 CHƯƠNG BÀN LUẬN 35 4.1 Về tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan 35 4.2 Về tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình thực nghiệm 39 4.2.1 Về tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau quặn acid acetic .40 4.2.2 Về tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau viêm 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .43 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tên viết đầy đủ Tên viết tắt COX DMARDs GC HTAB IL Cyclooxygenase Disease-modifying antirheumatic drugs (thuốc chống thấp khớp tác dụng chậm) Glucocorticoid Hexadecyl trimethyl ammoni bromid Interleukin KTĐ Khương thảo đan MPO Myeloperoxidase NSAID VAS WHO WOMAC Non-steroidal anti-inflammatory drug (thuốc chống viêm không steroid) Visual analog scale (thang đánh giá mức độ đau theo cảm giác chủ quan người bệnh) (World Health Organization) Tổ chức y tế giới The Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index (thang điểm đánh giá thối hóa khớp) DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU STT Tên bảng, biểu Bảng 2.1 Thang điểm đánh giá mức độ viêm khớp chân chuột dựa triệu chứng Bảng 3.1 Ảnh hưởng chế phẩm Khương thảo đan đến mức độ sưng vùng khớp gối Bảng 3.2 Ảnh hưởng chế phẩm Khương thảo đan lên mức độ viêm khớp chân chuột dựa triệu chứng Bảng 3.3 Ảnh hưởng chế phẩm Khương thảo đan lên số lượng bạch cầu dịch khớp Bảng 3.4 Ảnh hưởng chế phẩm Khương thảo đan lên hoạt độ MPO dịch rửa khớp Bảng 3.5 Ảnh hưởng chế phẩm Khương thảo đan lên số đau quặn Bảng 3.6 Ảnh hưởng chế phẩm Khương thảo đan lên thời gian phản ứng đau mơ hình gây đau viêm Số trang 21 26 28 29 31 32 33 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tên hình vẽ, đồ thị STT Số trang Hình 2.1 Chế phẩm Khương thảo đan 15 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 18 Hình 2.3 Sơ đồ quy trình tiến hành thí nghiệm đánh giá tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm khớp chuột 20 carrageenan Hình 2.4 Quy trình định lượng hoạt độ MPO có HTAB Hình 2.5 Quy trình thí nghiệm đánh giá tác dụng giảm đau phương pháp gây đau quặn acid acetic Hình 3.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng chế phẩm Khương thảo đan lên số lượng bạch cầu 22 24 29 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm khớp bệnh xương khớp phổ biến giới bệnh nhân khơng điều trị tích cực có nguy dẫn đến tàn tật suốt đời Trong năm gần đây, tỷ lệ bệnh nhân mắc bệnh viêm khớp tăng nhanh toàn cầu Việt Nam Bệnh viêm khớp xảy lứa tuổi, ảnh hưởng lớn đến khả lao động, sinh hoạt, chất lượng sống người bệnh làm gia tăng chi phí chăm sóc y tế [16], [68] Nghiên cứu từ liệu WHO cho thấy, tỷ lệ dân số mắc bệnh viêm khớp nước thu nhập thấp trung bình Việt Nam cao nước thu nhập cao, đặc biệt nhóm người cao tuổi, phụ nữ người có địa vị xã hội thấp [24] Hai nhóm thuốc chủ yếu dùng điều trị triệu chứng viêm khớp thuốc chống viêm khơng steroid (NSAIDs) glucocorticoid (GC) Ngồi dùng thuốc giảm đau số nhóm thuốc khác kết hợp với chế độ dinh dưỡng luyện tập hợp lý Tuy nhiên thuốc NSAIDs GC lại có nhiều tác dụng khơng mong muốn, đặc biệt hệ tiêu hóa: đau thượng vị, viêm loét dày tá tràng, xuất huyết tiêu hóa… Bên cạnh đó, nhiều loại thảo dược điều trị bệnh viêm khớp sử dụng từ lâu đời với tác dụng phụ như: hy thiêm [7], địa liền [37], ngưu tất [50] Chính vậy, việc nghiên cứu thuốc điều trị viêm khớp mới, đặc biệt thuốc có nguồn gốc từ dược liệu với tác dụng khơng mong muốn cần thiết Chế phẩm Khương thảo đan xuất phát từ thuốc cổ truyền với hoạt chất KGA1 (chiết xuất từ địa liền, Rhizoma Kaempferiae galangae) collagen type II sử dụng để hỗ trợ điều trị bệnh xương khớp đông y [32], [37], [45] Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu khoa học cụ thể đánh giá tác dụng điều trị bệnh viêm khớp chế phẩm Vì vậy, để chứng minh hiệu xác định khoa học làm sở cho việc sử dụng rộng rãi, góp phần đưa chế phẩm Khương thảo đan vào thực tế điều trị lâm sàng, thực đề tài “Đánh giá tác dụng chế phẩm Khương thảo đan mơ hình viêm khớp cấp thực nghiệm” với mục tiêu chính: Đánh giá tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan Đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan thực nghiệm CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tóm lược bệnh viêm khớp 1.1.1 Định nghĩa Viêm khớp (arthritis) thuật ngữ nhóm rối loạn có biểu viêm khớp Khớp trở nên đau, sưng, cứng biến dạng Đây bệnh lý thường gặp, triệu chứng điển hình đau khớp hạn chế vận động dẫn tới khó khăn sinh hoạt lao động Hai loại viêm khớp thường gặp là: thối hóa khớp (Osteoarthritis - OA) viêm khớp dạng thấp (Rheumatoid arthritis - RA) [46] 1.1.2 Dịch tễ Bệnh lý liên quan đến xương khớp nhóm bệnh lý đa dạng, phức tạp có xu hướng gia tăng Viêm khớp gây đau đớn kéo dài, gây tàn phế cho hàng triệu người, làm giảm suất lao động chất lượng sống đồng thời làm gia tăng chi phí chăm sóc y tế thiệt hại kinh tế [68] Ở Mỹ, từ năm 2013 - 2015, năm ước tính có khoảng 54,4 triệu người trưởng thành (22,7%) chẩn đoán mắc số dạng viêm khớp như: viêm khớp dạng thấp, gút, lupus… Hai phần ba số người mắc viêm khớp phụ nữ Năm 2013, tổng chi phí chăm sóc y tế viêm khớp tổn thất thu nhập người trưởng thành bị viêm khớp 303,5 tỷ đô la tương đương 1% tổng sản phẩm quốc nội (GDP) Hoa Kỳ Dự đốn đến năm 2040 có khoảng 78,4 triệu (25,9%) người Mỹ từ 18 tuổi trở lên chẩn đoán mắc viêm khớp [68] Ở Việt Nam, tổng hợp kết nghiên cứu tỷ lệ mắc bệnh xương khớp giai đoạn 2000 - 2015 người cao tuổi cho thấy: tỷ lệ bệnh nhân chẩn đoán viêm khớp khoảng 34%, tỷ lệ bệnh nhân có triệu chứng đau lưng, đau khớp dao động từ khoảng 20% lên 69% Tỷ lệ mắc bệnh viêm khớp nữ giới cao nam giới khơng có khác biệt lớn tỷ lệ mắc bệnh/triệu chứng xương khớp theo nhóm tuổi [5] Nhận thức ảnh hưởng nhóm bệnh lý với sức khỏe người phát triển xã hội, Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) Liên hợp quốc thống đề xướng thập niên thiên niên kỉ (2000 - 2010) thập niên xương khớp (tháng 5/2000) [68] có nhiều nơi giới bao gồm Việt Nam Vì vậy, mơ hình áp dụng rộng rãi Việt Nam [8] Đề tài lựa chọn mơ hình gây viêm khớp cấp chuột carrageenan để đánh giá tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan hai mức liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng Thuốc chứng dương diclofenac (thuộc nhóm NSAIDs, có tác dụng giảm đau, hạ sốt, chống viêm, định bệnh nhân viêm khớp [4]) liều 20 mg/kg cân nặng Thời điểm đánh giá sau tiêm carrageenan Các thông số đánh giá tác dụng chống viêm gồm: triệu chứng lâm sàng viêm (thông qua đánh giá mức độ sưng vùng khớp gối chuột, mức độ viêm khớp dựa theo triệu chứng) xét nghiệm đánh giá tác dụng ức chế di chuyển bạch cầu tới ổ viêm (thông qua đánh giá số lượng bạch cầu hoạt độ MPO dịch rửa khớp) 4.1.1 Mức độ sưng vùng khớp gối chuột Sưng, nóng, đỏ, đau bốn triệu chứng lâm sàng điển hình viêm, lựa chọn mức độ sưng vùng khớp gối thông số để đánh giá mức độ viêm hiệu điều trị thuốc Đánh giá mức độ sưng vùng khớp gối cách đo đường kính khớp gối phương pháp đơn giản, dễ thực nhanh chóng Bốn sau gây viêm carrageenan, khớp gối chuột bị sưng, đường kính khớp gối chuột tăng lên Thuốc làm giảm mức độ sưng vùng khớp gối chuột so với lơ chứng bệnh xem có tác dụng chống viêm khớp cấp Khi so sánh mức độ sưng vùng khớp gối chân sau bên phải chuột lô chứng sinh lý chứng bệnh, kết cho thấy mức độ sưng vùng khớp gối lô chứng bệnh tăng lên rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý (p < 0,01) Như carrageenan gây viêm khớp gối thời điểm nghiên cứu (sau bốn tiêm) Kết Bảng 3.1 cho thấy, chế phẩm Khương thảo đan liều 440 mg/kg cân nặng có tác dụng chống viêm tốt, làm giảm mức độ sưng vùng khớp gối có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với lô chứng bệnh với tỷ lệ ức chế sưng vùng khớp gối 58,0% Chế phẩm Khương thảo đan liều 880 mg/kg cân nặng có tác dụng chống viêm tốt, làm giảm mức độ sưng vùng khớp gối rõ rệt (p < 0,01) so với lô chứng bệnh với tỷ lệ ức chế sưng vùng khớp gối 76,6% Mặt khác, so sánh mức độ sưng vùng khớp gối chế phẩm Khương thảo đan hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng với nhau, kết cho thấy khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Như chế phẩm Khương thảo đan hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng có tác dụng 36 chống viêm tương đương Trong nghiên cứu T Vetrichelban M Jegadeesan (2002) nghiên cứu cao chiết cồn từ rễ ngưu tất liều 375 mg/kg 500 mg/kg cân nặng có tác dụng ức chế phù bàn chân chuột với tỷ lệ ức chế tương ứng 63,52% 79,73 % thời điểm sau gây viêm cấp mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan [50] 4.1.2 Mức độ viêm khớp dựa triệu chứng Khi bị viêm, khả di chuyển chuột bị ảnh hưởng triệu chứng lâm sàng viêm (sưng, nóng, đau) Mức độ viêm khớp dựa triệu chứng thể qua điểm viêm khớp đánh giá qua thang điểm từ – theo Bảng 2.1 Thuốc làm giảm điểm điểm viêm khớp dựa triệu chứng so với lô chứng bệnh coi có tác dụng chống viêm cấp Kết thể Bảng 3.2 cho thấy, lô chứng bệnh, sau bốn tiêm carrageenan, chuột bị viêm nặng, phần lớn chuột di chuyển hoàn toàn ba chân di chuyển ba chân không liên tục (điểm đánh giá 3) Điều hoàn toàn phù hợp với giai đoạn gây viêm cấp carrageenan, thời điểm - sau tiêm carrageenan triệu chứng viêm (sưng, nóng, đỏ, đau) thể rõ [57] Tác dụng chống viêm thể rõ lô chuột uống diclofenac liều 20 mg/kg uống chế phẩm Khương thảo đan hai mức liều 440 mg/kg 880 mg/kg thông qua điểm đánh giá mức độ viêm khớp dựa triệu chứng thấp có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh (p < 0,01) Chuột uống chế phẩm Khương thảo đan hai mức liều 440 mg/kg cân nặng 880 mg/kg cân nặng sau tiêm carrageenan bốn đa số di chuyển khơng có triệu chứng bất thường di chuyển khập khiễng (điểm 2) Tuy nhiên, so sánh điểm đánh giá mức độ viêm khớp dựa triệu chứng chế phẩm Khương thảo đan hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng cho kết khác ý nghĩa thống kê (p>0,05) Như tác dụng chống viêm khớp cấp dựa thông số đánh giá mức độ viêm dựa triệu chứng chế phẩm Khương thảo đan hai mức liều 440 mg/kg 880 mg/kg khơng khác Kết thành phần hy thiêm công thức chế phẩm nghiên cứu có tác dụng chống viêm Nghiên cứu Nguyễn Thùy Dương (2012): phân đoạn n-butanol hy thiêm 120mg/kg làm giảm điểm viêm khớp dựa triệu chứng mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối tinh thể natri urat [7] 37 4.1.3 Số lượng bạch cầu Ngoài triệu chứng lâm sàng marker sinh học định lượng dịch rửa khớp gối có ý nghĩa quan trọng việc đánh giá tác dụng chống viêm chế phẩm nghiên cứu Các tế bào bạch cầu đóng vai trị quan trọng trình viêm Việc tập trung bạch cầu từ mạch máu đến mô dấu hiệu đặc trưng viêm Bạch cầu tăng cho thấy phản ứng viêm diễn mạnh Như vậy, giảm bạch cầu đồng nghĩa với có tác dụng chống viêm Do dựa mơ hình này, thuốc có tác dụng làm giảm số lượng bạch cầu ổ viêm có tác dụng chống viêm cấp Thời điểm bốn sau tiêm carrageenan giai đoạn hai viêm cấp tính gây carrageenan với đặc trưng giải phóng prostaglandin, cảm ứng enxym COX với thâm nhập hoạt hóa bạch cầu trung tính [56], [57] Chế phẩm Khương thảo đan liều 440 mg/kg làm giảm số lượng bạch cầu với tỷ lệ giảm 57% so với lô chứng bệnh (p < 0,05) Chế phẩm Khương thảo đan liều 880 mg/kg làm giảm số lượng bạch cầu với tỷ lệ 58% so với lô chứng bệnh (p < 0,01) Mặt khác, so sánh số lượng bạch cầu chế phẩm Khương thảo đan hai mức liều 440 mg/kg 880 mg/kg cho kết khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Như tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Khương thảo đan hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng tương đương Kết đồng thuận với nghiên cứu Li J (2016): cao chiết độc hoạt liều 0,176mg/kg làm giảm số lượng bạch cầu mơ hình gây viêm cấp lipopolysaccharid [27] 4.1.4 Hoạt độ MPO MPO enzym peroxidase có chứa hem, dự trữ chủ yếu bạch cầu đa nhân trung tính, có bạch cầu đơn nhân MPO giải phóng ổ viêm bạch cầu kích hoạt Khi có mặt hydroperoxid halogenua, MPO xúc tác cho hình thành loại oxy phản ứng, bao gồm acid hypocholorid (HOCl) Hệ thống MPO/HOCl đóng vai trò quan trọng việc tiêu diệt vi khuẩn bạch cầu trung tính Ngồi MPO chất trung gian gây tổn thương mô gây viêm bệnh viêm khác MPO mục tiêu quan trọng điều trị bệnh viêm [61], [64] Do thuốc có tác dụng làm giảm hoạt độ MPO có tác dụng chống viêm cấp 38 Kết thể Bảng 3.4 cho thấy hoạt độ MPO lô chuột uống chế phẩm Khương thảo đan liều 440 mg/kg cân nặng giảm có ý nghĩa thống kê với tỷ lệ 39% so với lô chứng bệnh (p < 0,05) Trong đó, kết hoạt độ MPO lô chuột uống chế phẩm Khương thảo đan liều 880 mg/kg khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh (p > 0,05) Do đó, chế phẩm Khương thảo đan có tác dụng chống viêm cấp, làm giảm hoạt độ MPO liều 440 mg/kg khơng có tác dụng giảm hoạt độ MPO liều 880 mg/kg Nghiên cứu Jagadish cộng (2016 cho kết cao chiết ether SKG-1 địa liền liều liều 100mg/kg làm giảm tình trạng viêm hoạt độ MPO mơ hình gây viêm mạn tính chất bổ trợ Freund [37] Kết nghiên cứu chứng cho thấy địa liền có tác dụng chống viêm giảm hoạt độ MPO, sở để đánh giá tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan theo mơ hình Từ kết thấy chế phẩm Khương thảo đan thể tác dụng chống viêm tốt qua thông số đánh giá Kết tương đối phù hợp với lý giải có mặt thành phần có tác dụng chống viêm công thức Hầu hết dược liệu chứa từ đến hai hoạt chất có tác dụng chống viêm: kirenol hy thiêm, astilbin thổ phục linh, ecdysteron ngưu tất, avicularin tang ký sinh, isopimarane diterpenoids địa liền… [23], [49], [52] Kết đồng thuận với nghiên cứu Nguyễn Đức Huy (2019) chế phẩm Nhân đan với kết hợp thành phần dược liệu : hy thiêm, thổ phục linh, ngưu tất, thiên niên kiện, tang ký sinh, hà thủ ơ, cốt tối bổ…) có tác dụng chống viêm tốt mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối tinh thể natri urat [12] Từ nghiên cứu này, đề tài có sở để kết luận chế phẩm Khương thảo đan có tác dụng chống viêm mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan Chế phẩm Khương thảo đan với tác dụng chống viêm tốt trở thành thuốc dược liệu tiềm hỗ trợ điều trị viêm khớp, đặc biệt điều trị triệu chứng viêm khớp cấp 4.2 Về tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình thực nghiệm Đau triệu chứng điển hình xuất sớm viêm khớp Triệu chứng đau ảnh hưởng không nhỏ tới chất lượng sống người bệnh Mục tiêu điều trị viêm khớp bao gồm việc giảm triệu chứng đau từ nâng cao chất lượng sống cho bệnh nhân Vì vậy, song song với việc đánh giá tác dụng chống viêm, đề tài tiến hành 39 đánh giá khả giảm đau thực nghiệm chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau quặn acid acetic mơ hình gây đau viêm 4.2.1 Về tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau quặn acid acetic Về phương pháp nghiên cứu, mơ hình gây đau quặn chuột nhắt acid acetic mơ hình gây đau kinh điển, nhiều tác giả sử dụng để đánh giá tác dụng giảm đau thuốc Acid acetic chất kích thích tổng hợp giải phóng chất trung gian gây viêm như: bradykinin, serotonin, histamin, prostaglandin chất gây kích thích thần kinh đau[33], [35] Tác dụng gây đau quặn acid acetic phụ thuộc vào việc sản xuất cytokin gây viêm là: TNF-α, IL-1β IL-6 prostaglandin [54] Trong mơ hình này, thuốc chứng dương sử dụng diclofenac với liều 20 mg/kg cân nặng Kết thu từ Bảng 3.5 cho thấy chế phẩm Khương thảo đan hai mức liều 755 mg/kg 1510 mg/kg cân nặng làm giảm số đau quặn có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) từ phút thứ 10 trở tổng số đau quặn 30 phút Còn 10 phút đầu tiên, số đau quặn giảm khơng có ý nghĩa thống kê hai mức liều (p > 0,05) Chế phẩm Khương thảo đan hai mức liều 755mg/kg 1510 mg/kg có tác dụng giảm đau ngoại vi mơ hình gây đau quặn acid acetic Tuy nhiên tác dụng giảm đau tốt 10 phút mà có tác dụng 20 phút sau tổng số đau quặn 30 phút Điều 10 phút đầu, số đau quặn chưa đạt đỉnh, chế phẩm Khương thảo đan có xu hướng làm giảm số đau quặn số lượng đau quặn ít, chưa đủ tạo khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh Tuy nhiên nhận định chủ quan, để biết xác cần nghiên cứu thêm mơ hình khác Kết tương đồng với nghiên cứu Lu T (1997): cao chiết ngưu tất với rượu vang có tác dụng giảm đau mơ hình gây đau quặn acid acteic [48] Như chế phẩm Khương thảo đan có tác dụng giảm đau ngoại vi mơ hình gây đau quặn acid acetic Để đánh giá chi tiết tác dụng giảm đau ngoại vi bệnh viêm khớp, nhóm nghiên cứu thực đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau viêm 40 4.2.2 Về tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau viêm Mơ hình gây đau viêm áp dụng để đánh giá tác dụng giảm đau trung ương ngoại vi phụ thuộc vào thơng số đánh giá Ở mơ hình này, phản ứng đau chuột cảm giác, kích thích nhiệt, có dẫn truyền từ ngoại vi tủy sống, từ tủy sống kích thích lên não, chuột có phản xạ liếm chân sau nhảy lên Thời gian phản ánh tác động nên dùng để đánh giá tác dụng giảm đau trung ương Tiếp đó, chuột đau viêm Khi tiêm carrageenan vào khớp gối chân chuột gây đau xuất phản ứng viêm đạt đỉnh viêm sau – sau tiêm carrageenan [33] Lúc này, chuột tăng nhận cảm đau viêm, từ rút ngắn thời gian phản ứng đau với nhiệt Thuốc làm kéo dài thời gian phản ứng đau so với lơ chứng bệnh có tác dụng giảm đau ngoại vi Trong mơ hình này, thuốc chứng dương sử dụng diclofenac liều 20 mg/kg cân nặng Kết cho thấy chế phẩm Khương thảo đan hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng có tác dụng giảm đau tốt (p < 0,05) so với lô chứng bệnh Mặt khác, so sánh hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg chế phẩm với cho kết khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Tức tác dụng giảm đau mơ hình gây đau viêm chế phẩm hai liều tương đương Kết tương đồng với nghiên cứu Nguyễn Thùy Dương cộng (2012) phân đoạn n-butanol hy thiêm với liều 120 mg/kg có tác dụng giảm đau ngoại vi mơ hình mâm nóng có sử dụng thêm tác nhân tăng cảm nhận đau mơ hình Randall - Selitto [7] Như vậy, chế phẩm Khương thảo đan có tác dụng giảm đau tốt hai mơ hình gây đau quặn acid acetic gây đau viêm Tác dụng giảm đau chế phẩm đến từ số hoạt chất có thành phần dược liệu như: kirenol hy thiêm, astilbin thổ phục linh, …[49], [66] Các kết đồng thuận với nghiên cứu Nguyễn Đức Huy (2019) cho kết chế phẩm Nhân đan với thành phần (hy thiêm, thổ phục linh, ngưu tất, tang ký sinh…) có tác dụng giảm đau tốt mơ hình gây đau quặn acid acetic [12] Từ kết nghiên cứu thấy chế phẩm Khương thảo đan có tác dụng giảm đau tốt hai mức liều, chế phẩm có tiềm thay thuốc giảm đau thơng thường hỗ trợ phối hợp với thuốc hóa dược điều trị viêm khớp 41 Đề tài giải hai mục tiêu đề ra: Chế phẩm Khương thảo đan có tác dụng chống viêm mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan thể tác dụng giảm đau tốt mơ hình gây đau quặn acid acetic mơ hình gây đau viêm Những kết góp phần tạo tiền đề cho nghiên cứu tiếp theo, nhằm nghiên cứu sâu tác dụng chống viêm giảm đau mơ hình khác chế chống viêm chế phẩm 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau chế phẩm Khương thảo đan, xin đưa số kết luận: Tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan Mức độ sưng vùng khớp gối: chế phẩm Khương thảo đan liều 440 mg/kg 88mg/kg cân nặng làm giảm mức độ sưng vùng khớp gối so với lô chứng bệnh (p < 0,05 p < 0,01) với tỷ lệ ức chế sưng vùng khớp gối tương ứng 58,0% 76,6% Mức độ viêm khớp dựa triệu chứng: chế phẩm Khương thảo đan hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng làm giảm mức độ viêm khớp dựa triệu chứng có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh (p < 0,01) Số lượng bạch cầu: chế phẩm Khương thảo đan liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng làm giảm số lượng bạch cầu so với lô chứng bệnh (p < 0,05 p < 0,01) với tỷ lệ giảm tương ứng 57% 58% Hoạt độ MPO: chế phẩm Khương thảo đan liều 440 mg/kg cân nặng làm giảm hoạt độ MPO với tỷ lệ giảm 39% khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh (p < 0,05); nhiên, liều 880 mg/kg chưa làm giảm rõ hoạt độ MPO so với lơ chứng bệnh, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình thực nghiệm Mơ hình gây đau quặn acid acetic: chế phẩm Khương thảo đan liều 755 mg/kg 1510 mg/kg cân nặng không làm giảm số đau quặn 10 phút đầu (p > 0,05) làm giảm số đau quặn 10 phút (p < 0,05 p < 0,01), giảm số đau quặn rõ rệt 10 phút cuối tổng số đau quặn 30 phút (p < 0,01) Mơ hình gây đau viêm: chế phẩm Khương thảo đan hai liều 440 mg/kg 880 mg/kg cân nặng có tác dụng giảm đau tốt, thể qua việc kéo dài thời gian phản ứng đau với nhiệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh (p < 0,05) KIẾN NGHỊ Sau thực xong đề tài, đưa số kiến nghị sau: 43 Tiếp tục nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn tính mơ hình gây viêm mạn tính như: mơ hình gây u hạt thực nghiệm viên bơng tẩm carrageenan, mơ hình viêm khớp thực nghiệm gây chất bổ trợ Freund… Tiếp tục nghiên cứu đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn chế phẩm Khương thảo đan để xác định tính an tồn chế phẩm trước thử nghiệm lâm sàng đưa vào sử dụng 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ môn Miễn dịch - Sinh lý bệnh - Trường Đại học Y Hà Nội (2008), Sinh lý bệnh trình viêm Sinh lý bệnh học, Nhà xuất y học, tr 209-230 Bộ môn Y học sở (2020), Bài giảng Sinh lý bệnh trình viêm, Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ y tế (2007), Mô – phôi, phần Mô học, Nhà xuất y học, tr 40-56 Bộ y tế (2009), Dược lý học tập 2, Nhà xuất giáo dục Việt Nam, tr 225 Bộ Y tế (2016), Báo cáo chung tổng quan ngành y tế Bộ Y tế (2016), Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh xương khớp, tr 11 Nguyễn Thùy Dương (2012), Nghiên cứu tác dụng bệnh gút thực nghiệm hy thiêm (Siegesbeckia orientalis L., Asteraceace), Luận án Tiến sĩ Dược học, Viện Dược Liệu Đỗ Trung Đàm (1996), "Đánh giá mơ hình gây phù thực nghiệm kaolin carrageenan để nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp thuốc", Tạp chí Dược liệu, số 2, tr 49-51 Nguyễn Thị Thu Hà, Nguyễn Thị Vân Anh, Lưu Thị Hạnh, (2013), "Tác dụng hỗ trợ cải thiện chức vận động thuốc Khương hoạt Nhũ hương thang điều trị viêm khớp dạng thấp giai đoạn II", Tạp chí nghiên cứu y học, 82, tr 133-139 10 Nguyễn Thị Thu Hà, Nguyễn Thị Vân Anh, Lưu Thị Hạnh, (2013), "Tác dụng hỗ trợ giảm đau chống viêm thuốc Khương hoạt Nhũ hương thang điều trị viêm khớp dạng thấp", Tạp chí nghiên cứu y học, 81, tr 90-97 11 Nguyễn Thị Hằng, Phạm Văn Trịnh (2007), "Nghiên cứu tác dụng lâm sàng thuốc Độc hoạt tang ký sinh điều trị bệnh viêm khớp dạng thấp", Tạp chí Y học thực hành 3, tr 85-87 12 Nguyễn Đức Huy (2019), Đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm, hạ acid uric mơ hình thực nghiệm độc tính cấp chế phẩm Nhân đan, Đại học Dược Hà Nội, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ 13 Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học 14 Tống Trần Luân Trần Thị Lan, Nguyễn Võ Hiến, (1981), "Kết điều trị 64 ca viêm khớp dạng thấp thuốc thấp khớp II", Thông tin Đông y, 31, tr 11-14 15 Đào Văn Phan (2012), Các thuốc giảm đau – chống viêm, Nhà xuất y học Hà Nội, tr 45-47, 92-93 16 Lê Anh Thư (2008), "Những thành tựu lĩnh vực xương khớp năm đầu kỉ 21", Tạp chí Nội khoa số 2/2008 17 Phạm Quốc Tốn (1997), Đánh giá tác dụng thuốc Thấp khớp II điều trị viêm khớp dạng thấp giai đoạn I - II, Luận văn tốt nghiệp bác sĩ chuyên khoa cấp II, Đại học Y Hà Nội 18 Trường Đại học Y Hà Nội (2012), Sinh lý bệnh học, Nhà xuất y học Hà Nội, tr 209-229 19 Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập I, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội 20 Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập II, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội 21 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Tài liệu Tiếng Anh 22 Winter C A., Risley E A., et al (1962), "Carrageenin-induced edema in hind paw of the rat as an assay for antiiflammatory drugs", Proc Soc Exp Biol Med, 111, pp 5447 23 Tungcharoen P., Wattanapiromsakul C., et al (2020), "Anti-inflammatory effect of isopimarane diterpenoids from Kaempferia galanga", Phytother Res, 34(3), pp 612623 24 Brennan-Olsen S L., Cook S., et al (2017), "Prevalence of arthritis according to age, sex and socioeconomic status in six low and middle income countries: analysis of data from the World Health Organization study on global AGEing and adult health (SAGE) Wave 1", BMC Musculoskelet Disord, 18(1), pp 271 25 Nguyen T D., Thuong P T., et al (2017), "Anti-Hyperuricemic, Anti-Inflammatory and Analgesic Effects of Siegesbeckia orientalis L Resulting from the Fraction with High Phenolic Content", BMC Complement Altern Med, 17(1), pp 191 26 Ashraf S., Mapp P I., et al (2018), "Effects of carrageenan induced synovitis on joint damage and pain in a rat model of knee osteoarthritis", Osteoarthritis Cartilage, 26(10), pp 1369-1378 27 Li J., Hua Y., et al (2016), "Effects of volatile oils of Angelica sinensis on an acute inflammation rat model", Pharm Biol, 54(9), pp 1881-90 28 Yang X., Ji H., et al (2018), "Structural Characterization and Antitumor Activity of Polysaccharides from Kaempferia galanga L", Oxid Med Cell Longev, 2018, pp 9579262 29 Kumar R., Singh S., et al (2019), "Effect of Boswellia Serrata Extract on Acute Inflammatory Parameters and Tumor Necrosis Factor-α in Complete Freund's AdjuvantInduced Animal Model of Rheumatoid Arthritis", Int J Appl Basic Med Res, 9(2), pp 100-106 30 Xu X X., Zhang X H., et al (2017), "Achyranthes bidentate saponins protect rat articular chondrocytes against interleukin-1β-induced inflammation and apoptosis in vitro", Kaohsiung J Med Sci, 33(2), pp 62-68 31 Maleki N., Garjani A., et al (2001), "Potent anti-inflammatory activities of hydroalcoholic extract from aerial parts of Stachys inflata on rats", J Ethnopharmacol, 75(2-3), pp 213-8 32 Vittalrao A M., Shanbhag T., et al (2011), "Evaluation of antiinflammatory and analgesic activities of alcoholic extract of Kaempferia galanga in rats", Indian J Physiol Pharmacol, 55(1), pp 13-24 33 Vogel Hans G Vogel Wolfgang H (2008), Drug discovery and evaluation: pharmacological assays, Springer Science & Business Media, pp 954 34 Krawisz JE, Sharon P, et al (1984), "Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity: assessment of inflammation in rat and hamster models", 87(6), pp 1344-1350 35 Koster R (1959), Acetic acid for analgesic screening, Fed proc,pp 412 36 Jiang JIEYUN, Wu FEIHUA, et al (1997), "Anti-inflammatory activity of the aqueous extract fromrhizoma Smilacis glabrae", 36(4), pp 309-314 37 Jagadish Puralae Channabasavaiah, Latha Kotehal Parameshwarappa, et al (2016), "Extraction, characterization and evaluation of Kaempferia galanga L.(Zingiberaceae) rhizome extracts against acute and chronic inflammation in rats", 194, pp 434-439 38 Gupta RC, Canerdy TD, et al (2012), "Comparative therapeutic efficacy and safety of type‐II collagen (uc‐II), glucosamine and chondroitin in arthritic dogs: pain evaluation by ground force plate", 96(5), pp 770-777 39 Fietz S, Bondzio A, et al (2008), "Measurement of equine myeloperoxidase (MPO) activity in synovial fluid by a modified MPO assay and evaluation of joint diseases–an initial case study", 84(3), pp 347-353 40 Dong Lisha, Zhu Jinqiu, et al (2018), "Corrigendum to “Astilbin from Smilax glabra Roxb Attenuates Inflammatory Responses in Complete Freund’s Adjuvant-Induced Arthritis Rats”", 2018, pp 41 Crowley David C, Lau Francis C, et al (2009), "Safety and efficacy of undenatured type II collagen in the treatment of osteoarthritis of the knee: a clinical trial", 6(6), pp 312 42 Bradley Peter P, Christensen Robert D, et al (1982), "Cellular and extracellular myeloperoxidase in pyogenic inflammation", pp 43 Bendele A %J J Musculoskelet Neuronal Interact (2001), "Animal models of rheumatoid arthritis", 1(4), pp 377-85 44 Bao Yarigui, Li Hui, et al (2018), "Therapeutic effects of Smilax glabra and Bolbostemma paniculatum on rheumatoid arthritis using a rat paw edema model", 108, pp 309-315 45 Bakilan Fulya, Armagan Onur, et al (2016), "Effects of native type II collagen treatment on knee osteoarthritis: a randomized controlled trial", 48(2), pp 95 46 Australian Government - Austrailian Institute of Health and Welfare (2018), Australia’s health 2018, pp 492 47 Ali Mohammad Shawkat, Dash Pritesh Ranjan, et al (2015), "Study of sedative activity of different extracts of Kaempferia galanga in Swiss albino mice", 15(1), pp 158 48 Lu T., Mao C., et al (1997), "[The research on analgestic and anti-inflammatory action of different processed products of Achyranthes bidentata", Zhong Yao Cai, 20(10), pp 507-9 49 Wang Jian-ping, Zhou Ya-ming, et al (2011), "Topical anti-inflammatory and analgesic activity of kirenol isolated from Siegesbeckia orientalis", 137(3), pp 10891094 50 Vetrichelvan T., Jegadeesan M (2002), "Effect of alcoholic extract of Achyranthes bidentata blume on acute and sub acute inflammation", Indian Journal of Pharmacology, 34, pp 115-118 51 Van Can Mao, Nguyen Hoa Thi, et al (2016), "Anti-inflammatory effects of the bee venom in experimental arthritis rats", 19(2), pp 64-70 52 Van Anh Vo Jae-Won Lee, Chang Ji-Eun, et al (2012), "Avicularin inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory response by suppressing ERK phosphorylation in RAW 264.7 macrophages", 20(6), pp 532 53 Since MPO %J THE JOURNAL OF INVESTIGATIVE DERMATOLOGY (1982), "Measurement of cutaneous inflammation: estimation of neutrophil content with an enzyme marker", 78, pp 206-209 54 Ribeiro Ronaldo A, Vale Mariana L, et al (2000), "Involvement of resident macrophages and mast cells in the writhing nociceptive response induced by zymosan and acetic acid in mice", 387(1), pp 111-118 55 Randall Lowell O %J Arch Int Pharmacodyn (1957), "A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissues", 111, pp 409-419 56 Necas Jiri, Bartosikova Ladislava %J Veterinarni medicina (2013), "Carrageenan: a review", 58(4), pp 57 Morris Christopher J (2003), "Carrageenan-induced paw edema in the rat and mouse", Inflammation protocols, Springer, pp 115-121 58 Moon Sun Wook, Park Eui Ho, et al (2019), "Pain-Relieving Effect of 4.4 MHz of Pulsed Radiofrequency on Acute Knee Arthritis in Rats", Pain Medicine, pp 59 Karnati Mamatha, Chandra Rodda H, et al (2013), "Anti-arthritic activity of root bark of Oroxylum indicum (L.) vent against adjuvant-induced arthritis", 5(2), pp 121 60 Hansra Pauline, Moran Erica, et al (2000), "Carrageenan-Induced Arthritis in the Rat", Inflammation, 24, pp 141-55 61 Grivennikov Sergei I, Greten Florian R, et al (2010), "Immunity, inflammation, and cancer", 140(6), pp 883-899 62 Ghosh Saikat, Roy Tanushree (2013), "Animal models of rheumatoid arthritis: correlation and usefulness with human rheumatoid arthritis", Indo-American Journal of Pharmaceutical Research., 3, pp 6131-6142 63 Fujiwara Nagatoshi, Kobayashi Kazuo %J Current Drug Targets-Inflammation, et al (2005), "Macrophages in inflammation", 4(3), pp 281-286 64 Ekundi‐Valentim Eduardo, Santos Karen Tiago dos, et al (2010), "Differing effects of exogenous and endogenous hydrogen sulphide in carrageenan‐induced knee joint synovitis in the rat", 159(7), pp 1463-1474 65 DiPiro Joseph T, Talbert Robert L, et al (2014), Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach, ed, McGraw-Hill Medical, New York, pp 66 Batista Patricia Aparecida, de Paula Werner Maria Fernanda, et al (2010), "The antinociceptive effect of (-)-linalool in models of chronic inflammatory and neuropathic hypersensitivity in mice", 11(11), pp 1222-1229 67 Ankier Stephen I %J European journal of pharmacology (1974), "New hot plate tests to quantify antinociceptive and narcotic antagonist activities", 27(1), pp 1-4 68 Lide David R (2003), "The bone and joint decade 2000-2010 : editorials / Lars Lidgren", Bulletin of the World Health Organization : the International Journal of Public Health 2003 ; 81(9) : 629, pp 68 Centers for Disease Control and Prevention (CDC) (2020), "Arthritis", Retrieved, from https://www.cdc.gov/arthritis 69 National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases, Retrieved, from https://www.niams.nih.gov/health-topics/arthritis ... Đánh giá tác dụng chống viêm chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan 17 Nội dung 2: Đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình thực nghiệm - Đánh giá tác. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ NGỌC LINH Mã sinh viên: 1501291 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM KHƯƠNG THẢO ĐAN TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng... pháp đánh giá tác dụng giảm đau ngoại vi chế phẩm Khương thảo đan thực nghiệm 2.3.2.1 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Khương thảo đan mơ hình gây đau quặn acid acetic Tiến hành đánh