NGUYỄN THỊ QUÝ ĐÁNH GIÁ tác DỤNG hạ ACID URIC, CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU của CHẾ PHẨM GUDCARE TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ QUÝ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ ACID URIC, CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM GUDCARE TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ QUÝ Mã sinh viên: 1501413 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ ACID URIC, CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM GUDCARE TRÊN THỰC NGHIỆM Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thùy Dương ThS Ngô Thanh Hoa Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lực HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thùy Dương, người thầy trực tiếp dẫn dắt, bảo, quan tâm động viên tơi suốt q trình làm khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ThS Ngô Thanh Hoa, cô cho lời khuyên quý báu tạo điều kiện tốt cho tơi q trình làm thực nghiệm môn Ở cô, không học kiến thức chun mơn mà cịn dạy kỹ thực nghiệm phương pháp làm việc khoa học, hiệu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới DS Đinh Đại Độ, DS Đinh Thị Kiều Giang, chị Lê Hồng Oanh, chị Trần Thảo Hương, bạn em sinh viên nghiên cứu môn Dược lực động viên, giúp đỡ, hỗ trợ tận tình suốt trình thực đề tài để có kết cuối Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tới thầy, cô giáo dạy dỗ suốt năm năm mái trường Đại học Dược nói chung mơn Dược lực nói riêng, cảm ơn thầy tận tâm với nghề, thầy người truyền cảm hứng, gương sáng lối sống đạo đức nghề nghiệp cho sinh viên Mặc dù cố gắng tạo điều kiện, song thời gian nghiên cứu ngắn, kiến thức thân hạn chế nên chắn khóa luận cịn nhiều thiếu sót Rất mong nhận đóng góp quý báu thầy bạn để khóa luận hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2020 Sinh viên Nguyễn Thị Quý MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh gout 1.1.1 Tăng acid uric máu chế bệnh sinh gout 1.1.1.1 Nguyên nhân tăng acid uric máu 1.1.1.2 Cơ chế bệnh sinh gout 1.1.2 Triệu chứng lâm sàng gout 1.1.3 Nguyên tắc điều trị bệnh gout 1.1.4 Các thuốc điều trị gout theo y học đại 1.1.5 Các vị thuốc điều trị thống phong theo y học cổ truyền 1.2 Tổng quan chế phẩm Gudcare CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng, nguyên vật liệu thiết bị 16 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2 Động vật thí nghiệm 17 2.1.3 Hóa chất, thuốc thử 17 2.1.4 Thiết bị nghiên cứu 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng hạ acid uric chế phẩm Gudcare 19 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare 21 2.3.2.1 Mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan 21 2.3.2.2 Mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối tinh thể natri urat 23 2.3.3 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Gudcare 25 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 Kết đánh giá tác dụng hạ acid uric chế phẩm Gudcare mơ hình gây tăng acid uric máu cấp kalioxonat 27 3.2 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare 29 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan 29 3.2.2 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối tinh thể natri urat 32 3.3 Kết đánh giá tác dụng giảm đau ngoại vi chế phẩm Gudcare 33 CHƯƠNG BÀN LUẬN 34 4.1 Về tác dụng hạ acid uric máu thực nghiệm chế phẩm Gudcare 34 4.2 Về tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mơ hình thực nghiệm 36 4.2.1 Tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan 37 4.2.2 Tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối natri urat 38 4.3 Về tác dụng giảm đau ngoại vi chế phẩm Gudcare 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT CK Creatinin kinase huyết COX - Cyclooxygenase - CPK Creatin phosphokinase DRESS Hội chứng phát ban thuốc với tăng bạch cầu ưa acid triệu chứng toàn thân EULAR European League Against Rheumatism (Liên đoàn chống thấp khớp Châu Âu) IL Interleukin iNOS Nitric oxide synthase LOX Lypoxygenase LPS Lipopolysaccarid MDA Malondialdehyd MSU Tinh thể muối urat natri NaCMC Natri carboxymethyl cellulose NF - κB Nuclear Factor - kappa B (Yếu Tố Nhân kappa) NSAIDs Non Steroid Anti Inflammation Drugs (Thuốc chống viêm không steroid) SCAR Phản ứng bất lợi da SOD Superoxid effutase SUA Axit uric huyết TNF Yếu tố hoại tử u ULT Liệu pháp giảm acid uric máu XO Xanthin oxidase DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Trang Bảng 1.1 Nguyên nhân gây tăng acid uric máu Bảng 2.1 Thành phần chế phẩm Gudcare 16 Bảng 2.2 Thang điểm đánh giá mức độ viêm dựa theo triệu chứng 25 Bảng 3.1 Ảnh hưởng chế phẩm Gudcare đến nồng độ acid uric huyết tỷ lệ giảm acid uric huyết so với lô chứng bệnh Bảng 3.2 Ảnh hưởng chế phẩm Gudcare lên hoạt độ xanthin oxidase gan chuột nhắt trắng thực nghiệm Bảng 3.3 Kết nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp mức độ phù chân chuột theo thời gian Bảng 3.4 Kết nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối natri urat Bảng 3.5 Kết nghiên cứu tác dụng giảm đau mơ hình gây đau quặn 27 29 30 32 33 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình Trang Hình 1.1 Phác đồ điều trị đợt gout cấp Hình 2.1 Hình ảnh chế phẩm Gudcare 16 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nội dung nghiên cứu 19 Hình 2.3 Quy trình đánh giá tác dụng hạ acid uric máu 20 Hình 2.4 Quy trình đánh giá tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù bàn chân chuột Hình 2.5 Quy trình đánh giá tác dụng chống viêm mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối tinh thể natri urat Hình 2.6 Quy trình đánh giá tác dụng giảm đau mơ hình gây đau quặn acid acetic Hình 3.1 Biểu đồ biểu diễn nồng độ acid uric huyết mơ hình gây tăng acid uric máu cấp kalioxonat Hình 3.2 Biểu đồ thể tác dụng chống viêm chế phẩm Gudcare mơ hình gây phù bàn chân chuột 22 24 26 28 30 ĐẶT VẤN ĐỀ Gout hay gọi thống phong, bệnh khớp vi tinh thể, đặc trưng đợt viêm khớp cấp tái phát Người bệnh thường xuyên bị đau đớn đột ngột đêm sưng đỏ khớp đợt viêm cấp bùng phát, đặc biệt khớp ngón chân cái, làm ảnh hưởng không nhỏ đến chất lượng sống Trong tỷ lệ mắc bệnh gout tồn giới ngày tăng dần, không nước phát triển mà nước phát triển [39] Năm 2009, gout ảnh hưởng đến 2,13% dân số Mỹ Ở Đài Loan, 16 người có người bị gout [51] Còn Việt Nam, gout chiếm 10 - 15% bệnh lý xương khớp điều trị bệnh viện Chợ Rẫy, đứng thứ tư tỷ lệ mắc bệnh xương khớp điều trị bệnh viện Bạch Mai [18] Bệnh gout bệnh mang tính chất mạn tính, cần sử dụng thuốc dài ngày Điều trị bệnh thuốc hóa dược có tác dụng nhanh thuận tiện đồng thời tiềm ẩn nguy tác dụng không mong muốn nghiêm trọng Với lý này, việc sử dụng dược liệu an toàn kho tàng tri thức dân gian có hiệu điều trị bệnh ngày quan tâm trọng Mặt khác, tiềm dược liệu Việt Nam lớn Do kết hợp ứng dụng tác dụng dược liệu với phương pháp bào chế đại trở thành hướng tiềm phát triển thuốc Chế phẩm Gudcare sản phẩm kết hợp dược liệu kinh điển thuốc chữa gout hy thiêm, thổ phục linh, cịn bổ sung thêm bồ cơng anh, nhọ nồi, vỏ đậu xanh, curcumin… dược liệu, hoạt chất có chứng in vitro và/hoặc in vivo giảm đau, chống viêm, ức chế enzym xanthin oxidase hỗ trợ giảm acid máu Tuy nhiên, đến chưa có nghiên cứu dược lý thực để đánh giá tác dụng điều trị gout phối hợp dược liệu Nhằm xây dựng khoa học việc sử dụng sản phẩm lâm sàng, giúp bác sĩ bệnh nhân có thêm lựa chọn điều trị gout, nhóm nghiên cứu thực đề tài “Đánh giá tác dụng hạ acid uric, chống viêm, giảm đau chế phẩm Gudcare thực nghiệm” với ba mục tiêu sau: Đánh giá tác dụng hạ acid uric chế phẩm Gudcare mơ hình thực nghiệm Đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mơ hình thực nghiệm Đánh giá tác dụng giảm đau chế phẩm Gudcare mô hình thực nghiệm CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh gout Gout bệnh khớp vi tinh thể đặc trưng đợt viêm khớp cấp tái phát lắng đọng tinh thể muối urat natri (MSU) khớp mô liên kết Tinh thể lắng động thận, gây bệnh thận gout Ngày tỷ lệ mắc bệnh gout toàn giới tăng dần thói quen dùng thức ăn nhanh, vận động hội chứng chuyển hóa [39] Nguyên nhân gây bệnh liên quan chặt chẽ đến tăng acid uric máu [3], [5], [55] 1.1.1 Tăng acid uric máu chế bệnh sinh gout Trước đây, tăng acid uric máu (SUA) định nghĩa nồng độ acid uric máu vượt giới hạn hòa tan tối đa acid uric huyết tương: nam 7,0 mg/dL (trên 420 µmol/L); nữ 6,0 mg/dL (trên 360 µmol/L) [5] Hiện nay, ngưỡng bệnh lý tăng axit uric máu xác định 6,8 mg/dL [27], [52] 1.1.1.1 Nguyên nhân tăng acid uric máu Tăng acid uric máu xảy cân trình tổng hợp tiết: tăng sản xuất giảm thải trừ kết hợp hai Theo nghiên cứu Mandal cộng sự, tăng tổng hợp acid uric chiếm 10% trường hợp gout, 90% lại giảm thải trừ [48], [52] Ngoài tuổi cao, SUA cao, nam giới nồng độ SUA cao nữ [52] Các nguyên nhân tăng acid uric tóm tắt bảng 1.1 [5], [27], [52] Từ tổng quan cho thấy chế phẩm Gudcare chứa thành phần có chế chứng minh ức chế enzym XO hy thiêm, thổ phục linh, vỏ đậu xanh nano curcumin Do sau lấy máu xét nghiệm acid uric, nhóm nghiên cứu đồng thời lấy gan chuột tiến hành định lượng enzym XO để thông qua xác định sơ chế hạ acid uric chế phẩm Theo nghiên cứu Nguyễn Thùy Dương, cao toàn phần hy thiêm liều 600 1200 mg/kg ức chế XO in vivo, làm giảm acid uric huyết thanh, liều 300 mg/kg cân nặng tác dụng có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh mơ hình đề tài sử dụng [8] Với thổ phục linh, tổng flavonoid liều 125 mg/kg có tác dụng giảm hoạt động XO gan chuột làm tăng acid uric [32] Dịch chiết ethanol toàn phần phân đoạn ethyl acetat, cloroform từ vỏ hạt đậu xanh nồng độ 10 µg/ml, 50 µg/ml, 100 µg/ml thể tác dụng ức chế XO in vitro [15], nhiên chưa thử nghiệm mơ hình in vivo tương ứng Curcumin 20 40 mg/kg sử dụng 14 ngày cho hiệu ức chế XO công nhận [57] Trong Gudcare, ngoại trừ nano curcumin quy đổi mức liều thử chuột khoảng 46 – 92 mg/kg tương ứng liều thấp G1 557 mg/kg liều cao G2 1114 mg/kg thành phần cịn lại hy thiêm, thổ phục linh vỏ đậu xanh chưa thể xác định hàm lượng tương đương để so sánh với mức liều thử nghiệm nghiên cứu Kết tác dụng hạ acid uric xảy liều cao G2 1114 mg/kg, kết hợp với kết đánh giá tác dụng ức chế XO mức liều cho thấy tỷ lệ ức chế XO có xu hướng giảm giá trị thấp, chưa đủ tạo khác biệt có ý nghĩa thống kê Điều hàm lượng thành phần thấp, tác dụng chưa đủ mạnh và/hoặc chế phẩm cịn có chế hạ acid uric khác chưa đánh giá Ngoài chế phẩm cịn chứa dược liệu bồ cơng anh, theo y học cổ truyền có tác dụng lợi tiểu, từ lâu sử dụng dân gian, làm tăng thải trừ acid uric Lồi bồ cơng anh Trung Quốc Taraxacum docinale L nhiều tài liệu ghi chép nghiên cứu, hoạt chất taraxasterol loài bồ công anh chứng minh làm giảm lắng đọng tinh thể, tăng tiết acid uric chất lắng đọng thận, từ giảm hình thành sỏi thận gout mạn tính [70] Tuy nhiên lồi Lactuca indica L sử dụng chế phẩm số lượng nghiên cứu hạn chế, thành phần hóa học chưa biết đến đầy đủ, số tác dụng đề cập bao gồm chống viêm, kháng khuẩn, trị đái tháo đường, chống oxy hóa [30], [35], [67] Tương tự, gắm Gnetum gnemon L Indonesia có khả ức chế tái hấp thu acid uric biểu mơ 35 ống thận lồi Gnetum montanum Markgr chưa có nghiên cứu chứng minh chế Thêm vào flavonoid tồn phần thổ phục linh làm tăng biểu chất vận chuyển tiết acid uric qua thận nhiên chưa có sở để so sánh liều chế phẩm với nghiên cứu công bố, đồng thời đề tài chưa thực đánh giá ảnh hưởng chế phẩm lên thải trừ urat qua thận Do chưa thể khẳng định vai trị bồ công anh Lactuca indica L., thổ phục linh dây gắm kết giảm nồng độ acid uric huyết Tuy mơ hình gây tăng acid uric cấp sử dụng đề tài có nhiều ưu điểm thời gian gây tăng tương đối ngắn nên khơng giống hồn toàn tăng acid uric người bị gout tác dụng thuốc chưa thể đầy đủ Vì vậy, để đánh giá tồn diện tác dụng hạ acid uric chế phẩm cần triển khai thêm mơ hình nghiên cứu khác với thời gian nghiên cứu dài hơn, đồng thời chế hạ acid uric chế phẩm nên tiếp tục tìm hiểu sở quan trọng giúp tối ưu hóa liều thành phần liều sử dụng chế phẩm để hướng đến mục tiêu tăng tác dụng điều trị Một số mơ hình triển khai nước, áp dụng để đánh giá tác dụng hạ acid uric mơ hình gây tăng acid uric mạn chuột cống trắng uống acid oxonic tuần [10]; tiêm màng bụng kalioxonat cách nhật, liều 300 mg/kg, sau giảm dần liều, lấy máu chuột ngày 1, 14 để xét nghiệm acid uric [11]… 4.2 Về tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare thực nghiệm Trong gout cấp, người bệnh viêm khớp đa khớp, khớp viêm có tính chất bỏng rát, sưng to, đỏ, phù nề, đau dội ngày tăng Đau chủ yếu đêm dẫn đến ngủ, mệt mỏi, ban ngày đau có giảm vận động đau, làm hạn chế vận động, ảnh hưởng nghiêm trọng đến chất lượng sống người bệnh Trong gout mạn tình trạng viêm đa khớp, khớp bị cứng, sưng, đau vận động Do nguyên tắc quan trọng điều trị gout, đặc biệt gout cấp sử dụng thuốc chống viêm để làm giảm nhanh chóng triệu chứng viêm đau cho người bệnh Điều trị thuốc hóa dược có ưu điểm tác dụng nhanh, nhiên tiềm ẩn nhiều tác dụng không mong muốn, khơng thể sử dụng lâu dài bị hạn chế nhóm đối tượng đặc biệt (người già có nhiều bệnh lý mắc kèm…) Mặt khác, chế phẩm Gudcare có nguồn gốc từ dược liệu nên khắc phục nhược điểm Từ tổng quan tài liệu cho thấy thành phần 36 chế phẩm chứng minh có tác dụng chống viêm giảm đau theo nhiều chế, nhiên chưa có sở so sánh liều dược liệu so với nghiên cứu việc phối kết hợp lại thành phần công thức chưa có đánh giá cụ thể Vì vậy, sau có kết thực nghiệm, nhóm nghiên cứu xin bàn luận tác dụng chống viêm chế phẩm Gudcare 4.2.1 Tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan Để đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm, nhóm nghiên cứu lựa chọn mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan [68] Mơ hình Winter khởi xướng từ năm 60 kỷ trước nhiều nghiên cứu viên lựa chọn [8], [29], [46], [65] Carrageenan polysaccharid có nhiều tảo đỏ Chondrus crispus, có cấu trúc gần giống với cấu trúc vi khuẩn, đáp ứng miễn dịch thể chủ yếu miễn dịch không đặc hiệu với tham gia đại thực bào bạch cầu đa nhân trung tính Khi gây phù carrageenan, phản ứng viêm cấp tính, trải qua hai giai đoạn liên quan đến giải phóng chất trung gian hóa học viêm: giai đoạn (0 – sau tiêm) có giải phóng histamin, serotonin bradykinin; giai đoạn (2 – sau tiêm) giải phóng prostaglandin, nitric oxid có thâm nhập, hoạt hóa bạch cầu trung tính Các dấu hiệu viêm xuất phù thể rõ giai đoạn cuối (đặc biệt vào thời điểm – sau tiêm carrageenan) [33] Do đó, thuốc ức chế chất trung gian hóa học cho tác dụng giảm viêm thời điểm tương ứng mơ hình Đây mơ hình đơn giản, dễ áp dụng nhạy dược lý thực nghiệm để đánh giá bước đầu khả chống viêm thuốc Kết bước đầu cho phép kết luận sơ mở hướng nghiên cứu mơ hình Tiến hành thử nghiệm chuột cống trắng với lô chứng bệnh dùng dung môi pha thuốc, liều thử Gudcare G1 liều 325 mg/kg, G2 liều 650 mg/kg thuốc đối chiếu diclofenac liều 20 mg/kg cân nặng Diclofenac thuốc chống viêm định phổ biến điều trị gout cấp nên lựa chọn sử dụng làm thuốc đối chiếu mô hình mơ hình chống viêm, giảm đau khác đề tài Kết quả, lô chứng bệnh, thể tích bàn chân chuột bị gây viêm tất thời điểm nghiên cứu tăng, mức độ phù lớn thời điểm giờ, sau đến thời điểm 37 sau gây viêm, kết hoàn toàn phù hợp với đặc điểm gây viêm carrageenan đề cập Trên lô chứng dương, diclofenac cho tác dụng chống viêm tốt, tác dụng xuất từ thứ tốt thời điểm này, kéo dài đến thứ Trong đó, Gudcare liều 325 mg/kg khơng làm giảm phù có ý nghĩa thống kê thời điểm sau gây viêm Ở thời điểm lại cho tác dụng tốt, tác dụng chống viêm tốt thể thời điểm (p < 0,01), ức chế 40,15% phản ứng viêm so với lô chứng bệnh Liều cao G2 650 mg/kg làm giảm viêm thời điểm sau gây viêm – thời điểm viêm mạnh gây carrageenan, mức độ phù không khác biệt so với liều thấp G1 (p > 0,05), nhiên tác dụng chống viêm không tốt G1 thời điểm dài (5 sau gây viêm) Theo tổng quan thành phần chế phẩm, flavonoid hy thiêm chứng minh có tác dụng ức chế phản ứng viêm cấp mạn chuột thực nghiệm với chế liên quan đến ức chế hoạt hóa yếu tố trung gian NF - κB, cyclooxygenase, lipoxygenase, ức chế sản xuất prostaglandin leucotrien gây viêm [7], [28], [29] Kirenol phân lập từ hy thiêm làm giảm IL - 1β TNF - α, cytokin quan trọng phản ứng viêm [65] Chiết xuất giàu phenolic thổ phục linh; vitexin, isovitexin, acid galic từ vỏ đậu xanh nano curcumin chứng minh ức chế đáng kể interleukin (1β,16,18), NO, TNF - α, COX LOX [24], [43], [44], [45], [47] Flavon, luteolin luteolin - - O - glucosid chiết xuất từ bồ công anh có tác dụng chống oxy hóa đồng thời ức chế biểu iNOS COX - [30], [67] Ngoài ra, dược liệu dây gắm củ ráy trắng chưa có nghiên cứu khoa học chứng minh hoạt tính sinh học đầy đủ từ lâu sử dụng dân gian làm giảm triệu chứng đau nhức cho hiệu tốt Như vậy, tác dụng chống viêm có chế phẩm phù hợp với kết nghiên cứu tác dụng thành phần có cơng thức 4.2.2 Tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mô hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối natri urat Sau xác định chế phẩm Gudcare có tác dụng chống viêm cấp thực nghiệm, đề tài tiếp tục thử nghiệm mơ hình gây viêm đặc hiệu tinh thể natri urat Mơ hình khởi xướng Faires McCarty từ năm 1963, so với mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenan hay sử dụng để đánh giá tác dụng 38 chống viêm, việc gây viêm cách tiêm tinh thể natri urat vào khớp gối chuột tạo triệu chứng giống gout cấp tính điển hình Do đó, mơ hình phù hợp để đánh giá tác dụng chống viêm thuốc điều trị gout Tinh thể urat sau tiêm vào khớp gối nhận diện bị thực bào tế bào màng hoạt dịch Trong trình thực bào, tinh thể natri urat kích thích tăng tạo thể gây viêm, hoạt hóa caspase - 1, chuyển ProIL - 1β thành IL - 1β, IL - 1β giải phóng đến gắn vào thụ thể IL - 1R nó, gây hoạt hóa nội mơ, giải phóng yếu tố trung gian tiền viêm, kích thích bạch cầu hạt tới ổ khớp Các yếu tố tiếp tục quay trở lại kích thích IL - 1β làm nặng thêm trình viêm [7], [52] Kết sau tiêm giờ, chuột lô chứng bệnh xuất triệu chứng viêm tương đối nặng, hầu hết chuột khập khiễng, đơi có kéo lê co chân trình di chuyển Ở thời điểm giờ, số chuột có biểu nặng phải di chuyển hoàn toàn chân triệu chứng cịn số chuột sau tiêm tinh thể Trong đó, thuốc đối chiếu diclofenac 20 mg/kg thể tác dụng chống viêm rõ rệt thời điểm (p < 0,01), điều hoàn toàn hợp lý diclofenac thuốc có tác dụng chống viêm mạnh cơng nhận Với chế phẩm Gudcare, chuột uống liều 325 mg/kg giảm triệu chứng viêm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng, tác dụng giảm viêm tốt thời điểm sau gây viêm (p < 0,01) Chuột uống liều 650 mg/kg, tác dụng giảm viêm không khác biệt liều 325 mg/kg thời điểm thời điểm 6h sau gây viêm, liều không làm giảm điểm đau chuột có ý nghĩa thống kê so với chứng bệnh Kết tương đồng với kết mơ hình gây phù bàn chân carrageenan Lý giải hiệu làm giảm viêm mơ hình này, chế phẩm Gudcare có đa số thành phần có chế ức chế IL - 1β yếu tố trung gian tiền viêm chứng minh hy thiêm, thổ phục linh, vỏ đậu xanh nano curcumin Tuy nhiên tăng liều tác dụng chống viêm khơng tốt Như vậy, qua mơ hình đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare thấy với mục đích làm giảm viêm cấp (giảm triệu chứng viêm nặng thời điểm sau gây viêm với viêm carrageenan thời điểm sau gây viêm với viêm tinh thể natri urat) mức liều thử G1 liều 325 mg/kg G2 liều 650 mg/kg có tác dụng khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê thời điểm 39 mức liều (p > 0,05) Ở thời điểm lại, liều cao G2 không cho hiệu giảm viêm tốt liều thấp G1 4.3 Về tác dụng giảm đau ngoại vi chế phẩm Gudcare thực nghiệm Viêm gout cấp kèm với cảm giác đau đớn - nguyên nhân ảnh hưởng tới chất lượng sống người bệnh Do đó, bên cạnh việc đánh giá tác dụng chống viêm, đề tài tiến hành nghiên cứu khả giảm đau chế phẩm Gudcare thực nghiệm Về phương pháp nghiên cứu, đề tài lựa chọn mơ hình gây đau quặn chuột nhắt acid acetic Đây mơ hình gây đau kinh điển, nhiều tác giả sử dụng để đánh giá tác dụng giảm đau thuốc [9], [34], [65] Tác dụng gây đau quặn acid acetic phụ thuộc vào việc sản xuất cytokin gây viêm bao gồm: TNF - α, IL - 1β, IL - [53] Vì thuốc ức chế cytokin có tác dụng làm giảm đau tốt Kết quả, 20 phút đầu chuột tất lô đau nhiều, biểu số lượng đau quặn cao, sau số đau giảm 10 phút cuối quan sát Thuốc đối chiếu diclofenac 20 mg/kg cho tác dụng giảm đau rõ rệt tất thời điểm nghiên cứu Cả mức liều G1 liều 557 mg/kg G2 liều 1114 mg/kg có tác dụng làm giảm số đau quặn chuột, liều thấp 557 mg/kg có tác dụng tốt thời điểm 10 phút đầu, hiệu tương đương với thuốc đối chứng diclofenac Liều cao 1114 mg/kg cho tác dụng tốt từ phút thứ 10 đến phút thứ 20 Trong 30 phút quan sát, tổng số đau quặn sử dụng G1 G2 giảm rõ rệt so với chứng bệnh (p < 0,01) Khi so sánh G1 G2, tác dụng giảm đau tương đương tất thời điểm nghiên cứu Như vậy, chế phẩm Gudcare cho thấy tác dụng giảm đau ngoại vi tốt mơ hình gây đau quặn acid acetic, số lượng đau giảm có ý nghĩa thống kê so với chứng bệnh thời điểm nghiên cứu Về chế giảm đau, đề cập trên, thuốc có khả ức chế cytokin gây viêm TNF - α, IL - 1β, IL – cho hiệu giảm đau mơ hình Cơ chế tương đồng với chế chống viêm, tác dụng giảm đau chế phẩm đến từ kirenol hy thiêm, phenolic thổ phục linh; vitexin, isovitexin, acid galic từ vỏ đậu xanh hay nano curcumin… Tổng hợp kết đánh giá tác dụng hạ acid uric, chống viêm, giảm đau chế phẩm Gudcare cho thấy: tác dụng hạ acid uric huyết xảy liều cao G2 (1114 mg/kg với chuột nhắt) mức liều khơng ức chế enzym XO có ý nghĩa thống 40 kê Tác dụng chống viêm cấp giảm đau liều khơng có khác biệt Do với mục đích điều trị gout, nhóm nghiên cứu nghĩ liều cao G2 (1114 mg/kg với chuột nhắt hay 650 mg/kg với chuột cống) đáp ứng mục tiêu điều trị bệnh bao gồm hạ nồng độ acid uric huyết nguyên nhân gây bệnh, đồng thời giảm triệu chứng viêm đau gout cấp Liều thấp G1 (557 mg/kg chuột nhắt hay 325 mg/kg với chuột cống) đạt hiệu giảm đau chống viêm Tuy nhiên chế hạ acid uric chế phẩm chưa làm rõ, thêm vào đó, chưa có đánh giá tác dụng chế phẩm sử dụng lâu dài Chính để áp dụng sử dụng tốt chế phẩm lâm sàng nhóm nghiên cứu đề xuất tiến hành thêm nghiên cứu khác xác định chế tác dụng chế phẩm Gudcare dùng thời gian dài 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu, nhóm nghiên cứu xin đưa số kết luận: Tác dụng hạ acid uric máu thực nghiệm chế phẩm Gudcare mơ hình gây tăng acid uric máu chuột nhắt cấp kalioxonat - Chế phẩm Gudcare mức liều 557 mg/kg không làm giảm nồng độ acid máu so với lô chứng bệnh (p > 0,05) - Chế phẩm Gudcare mức liều 1114 mg/kg làm giảm nồng độ acid máu so với lô chứng bệnh (p < 0,05) - Cả mức liều 557 mg/kg 1114 mg/kg không làm giảm hoạt độ enzym xanthin oxidase có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Tác dụng chống viêm thực nghiệm chế phẩm Gudcare • Trên mơ hình gây phù bàn chân chuột: - Chế phẩm Gudcare mức liều 325 mg/kg làm giảm mức độ phù chân chuột thời điểm 3, sau gây viêm (p < 0,05) sau gây viêm (p < 0,01) - Chế phẩm Gudcare mức liều 650 mg/kg làm giảm mức độ phù chân chuột thời điểm sau gây viêm (p < 0,05) • Trên mơ hình gây viêm màng hoạt dịch khớp gối: - Chế phẩm Gudcare mức liều 325 mg/kg làm giảm điểm viêm so với lô chứng bệnh thời điểm 4, sau gây viêm (p < 0,05) sau gây viêm (p < 0,01) - Chế phẩm Gudcare mức liều 650 mg/kg làm giảm điểm viêm so với lô chứng bệnh thời điểm 4, sau gây viêm (p < 0,05) Tác dụng giảm đau thực nghiệm chế phẩm Gudcare mơ hình gây đau quặn acid acetic - Chế phẩm Gudcare mức liều 557 mg/kg 1114 mg/kg làm giảm số đau quặn so với lô chứng bệnh tất thời điểm nghiên cứu (p < 0,05) KIẾN NGHỊ - Đánh giá tác dụng hạ acid uric máu chế phẩm mơ hình gây tăng acid uric mạn tính - Đánh giá ảnh hưởng chế phẩm lên thải trừ urat qua thận 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Thị Bay (2007), Bệnh học điều trị nội khoa (kết hợp Đông-Tây y), NXB Y học, Hà Nội, tr.538-546 Bộ môn Dược lực - Trường Đại học Dược Hà Nội (2012), Dược lý học, NXB Y học, Hà Nội Bộ Y Tế (2016), Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh xương khớp NXB Y học, Hà Nội, tr.89-94 Bộ Y Tế (2018), Dược thư quốc gia Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội Ngô Quý Châu, Nguyễn Lân Việt, Nguyễn Đạt Anh (2012), Bệnh học nội khoa, NXB Y học, Hà Nội, tr.171-187 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Thùy Dương (2012), Nghiên cứu tác dụng bệnh gút thực nghiệm hy thiêm (Siegesbeckia orientalis L., Asteraceae), Luận án tiến sĩ dược học, Viện Dược liệu Nguyễn Thùy Dương, Khổng Thị Hoa, Nguyễn Minh Khởi (2011),"Tác dụng hạ acid uric huyết phân đoạn hy thiêm thực nghiệm", Tạp chí Dược học, 51(9), tr.32-36 Nguyễn Thùy Dương, Nguyễn Minh Khởi, Hoàng Kim Huyền (2011),"Tác dụng giảm đau chống viêm phân đoạn n-butanol hy thiêm", Tạp chí Dược học, 51(11), tr.34-38 10 Nguyễn Thùy Dương, Nguyễn Thị Thúy (2016),"Triển khai mơ hình gây tăng acid uric huyết mạn tính chuột cống trắng thực nghiệm áp dụng đánh giá tác dụng cao phân đoạn n-butanol Hy thiêm", Tạp Chí Nghiên cứu dược & thơng tin thuốc, 2, tr.21-26 11 Vũ Bình Dương, Nguyễn Hồng Ngân, Trần Quốc Bảo (2015),"Đánh giá tác động hạ acid uric máu cao lỏng Thống Phong Khang động vật thực nghiệm", Tạp chí Y-Dược học Qn sự, 8, tr.11-16 12 Đồn Văn Đệ (2003), Bệnh học nội khoa: Bệnh khớp - nội tiết, Học Viện Quân Y, Hà Nội, tr.39-47 13 Mai Văn Điển, Nguyễn Thế Dân (1996),"Ảnh hưởng flavonoid vỏ đậu xanh thay đổi mô học số quan miễn dịch lách, hạch, tuyến ức chuột nhắt trắng sau chiếu xạ liều 7Gy", Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Viện y học cổ truyền Việt Nam, tr.308-311 14 Trình Nhu Hải, Lý Gia Canh (2004), Trung quốc danh phương toàn tập, NXB Y học, Hà Nội 15 Nguyễn Thu Hằng, Nguyễn Thùy Dương (2014),"Nghiên cứu tác dụng ức chế enzym xanthin oxidase in vitro hạt đậu xanh", Tạp chí nghiên cứu Dược thông tin thuốc, 2, tr.63-67 16 Trần Lưu Vân Hiền (1998),"Kết nghiên cứu Flavonoid từ Vỏ đậu xanh phương pháp hóa lý kêt phân tích chất hóa học chế phẩm (Vitexin isovitexin)", Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Viện y học cổ truyền Việt Nam 17 Nguyễn Thị Hương (2011), Nghiên cứu thành phần hóa học vỏ hạt đậu xanh (Vigna radiata (L).Wilczeck), họ Đậu (Fabaceae), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ trường Đại học Dược Hà Nội 18 Hoàng Thị Kim Huyền, Brouwers J.R.B.J (2012), Dược lâm sàng, nguyên lý sử dụng thuốc điều trị, tr.459-480 19 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội 20 Ơng Bình Nguyên, Đặng Thị Kim Quyên, Lý Hải Triều (2018),"Khảo sát thành phần hố học hoạt tính sinh học cao chiết Dây gắm (Gnetum montanum Markgr.)", Tạp chí Khoa học Công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành, (4), tr.15 21 Trần Đức Phấn (1998), Nghiên cứu hậu di truyền nhiễm độc hóa chất bảo vệ thực vật nhóm phospho hữu cơ, thăm dị biện pháp khắc phục, Luận án tiến sĩ y học, chuyên ngành Di truyền học trường Đại học Y Hà Nội, tr.141-142 22 Nguyễn Đức Toàn (2004), Nam y nghiệm phương, NXB Y học, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh 23 Bull Drug Ther (2018), "An update on the management of gout", 56(1), pp.9-12 24 Chen Y., Li C., Duan S., et al (2019), "Curcumin attenuates potassium oxonateinduced hyperuricemia and kidney inflammation in mice", Biomed Pharmacother, 118, pp.109-195 25 Chewcharat Api, Chang Yuan‐Ting, Thongprayoon Charat, et al (2020), "Efficacy and safety of Febuxostat for Treatment of Asymptomatic Hyperuricemia among Kidney Transplant Patients: A Meta‐analysis of Observational Studies" 26 Chung I M, Rajakumar G, Lee J H, et al (2017), "Ethnopharmacological uses, phytochemistry, biological activities, and biotechnological applications of Eclipta prostrata", Appl Microbiol Biotechnol, 101(13), pp.5247-5257 27 Dalbeth N., Merriman T R.,Stamp L K (2016), "Gout", Lancet, 388(10055), pp.2039-2052 28 Guo H., Zhang Y., Cheng B C., et al (2018), "An ethanolic extract of the aerial part of Siegesbeckia orientalis L inhibits the production of inflammatory mediators regulated by AP-1, NF-kappaB and IRF3 in LPS-stimulated RAW 264.7 cells", Biosci Trends, 12(3), pp.330-337 29 Hong Y H., Weng L W., Chang C C., et al (2014), "Anti-inflammatory effects of Siegesbeckia orientalis ethanol extract in in vitro and in vivo models", Biomed Res Int, pp.329-712 30 Hu Chun,Kitts David D (2004), "Luteolin and luteolin-7-O-glucoside from dandelion flower suppress iNOS and COX-2 in RAW264.7 cells", Molecular and Cellular Biochemistry, 265(1), pp.107-113 31 Hua S., Zhang Y., Liu J., et al (2018), "Ethnomedicine, Phytochemistry and Pharmacology of Smilax glabra: An Important Traditional Chinese Medicine", Am J Chin Med, 46(2), pp.261-297 32 Huang L., Deng J., Chen G., et al (2019), "The anti-hyperuricemic effect of four astilbin stereoisomers in Smilax glabra on hyperuricemic mice", J Ethnopharmacol, 238, pp.111-777 33 J Morris Christopher (2003), "Carrageenan-Induced Paw Edema in the Rat and Mouse", Inflammation Protocols, pp.115-121 34 Jahan R., Al-Nahain A., Majumder S., et al (2014), "Ethnopharmacological Significance of Eclipta alba (L.) Hassk (Asteraceae)", Int Sch Res Notices, pp 385-969 35 Jeon H J., Kang H J., Jung H J., et al (2008), "Anti-inflammatory activity of Taraxacum officinale", J Ethnopharmacol, 115(1), pp.82-88 36 Kojima Sunao, Matsui Kunihiko, Hiramitsu Shinya, et al (2019), "Febuxostat for Cerebral and Cardiorenovascular Events Prevention Study", European Heart Journal, 40(22), pp.1778-1786 37 Konno H, Kanai Y, Katagiri M, et al (2013), "Melinjo (Gnetum gnemon L.) Seed Extract Decreases Serum Uric Acid Levels in Nonobese Japanese Males: A Randomized Controlled Study", Evid Based Complement Alternat Med, 2013, pp.589-598 38 Koster R (1959), Acetic acid for analgesic screening, Fed proc, pp.412-417 39 Kuo C F., Grainge M J., Zhang W., et al (2015), "Global epidemiology of gout: prevalence, incidence and risk factors", Nat Rev Rheumatol, 11(11), pp.649-662 40 Kuo Chang-Fu, Grainge Matthew J, Mallen Christian, et al (2016), "Comorbidities in patients with gout prior to and following diagnosis: case-control study", 75(1), pp.210-217 41 Landgren A J., Jacobsson L T H., Lindstrom U., et al (2017), "Incidence of and risk factors for nephrolithiasis in patients with gout and the general population, a cohort study", Arthritis Res Ther, 19(1), pp.173 42 Lee M H., Graham G G., Williams K M., et al (2008), "A benefit-risk assessment of benzbromarone in the treatment of gout Was its withdrawal from the market in the best interest of patients?", Drug Saf, 31(8), pp.643-665 43 Lee Suk-Jun, Lee Ji-Hye, Lee Han-Hyung, et al (2011), "Effect of Mung Bean Ethanol Extract on Pro-inflammtory Cytokines in LPS Stimulated Macrophages", J Food Science Biotechnology, 20(2), pp.519-524 44 Lin J K (2007), "Molecular targets of curcumin", Adv Exp Med Biol, 595, pp.227243 45 Lin J K., Pan M H.,Lin-Shiau S Y (2000), "Recent studies on the biofunctions and biotransformations of curcumin", Biofactors, 13(1-4), pp.153-158 46 Lu C L, Zhu Y F, Hu M M, et al (2015), "Optimization of astilbin extraction from the rhizome of Smilax glabra, and evaluation of its anti-inflammatory effect and probable underlying mechanism in lipopolysaccharide-induced RAW264.7 macrophages", Molecules, 20(1), pp.625-644 47 Lu C L., Zhu W., Wang M., et al (2014), "Antioxidant and Anti-Inflammatory Activities of Phenolic-Enriched Extracts of Smilax glabra", Evid Based Complement Alternat Med, 2014, pp.1-8 48 Mandal A K.,Mount D B (2015), "The molecular physiology of uric acid homeostasis", Annu Rev Physiol, 77, pp.323-345 49 Mouradjian M T., Plazak M E., Gale S E., et al (2020), "Pharmacologic Management of Gout in Patients with Cardiovascular Disease and Heart Failure", Am J Cardiovasc Drugs 50 Nguyen T D., Thuong P T., Hwang I H., et al (2017), "Anti-Hyperuricemic, AntiInflammatory and Analgesic Effects of Siegesbeckia orientalis L Resulting from the Fraction with High Phenolic Content", BMC Complement Altern Med, 17(1), pp.191 51 Pascart T.,Liote F (2019), "Gout: state of the art after a decade of developments", Rheumatology (Oxford), 58(1), pp.27-44 52 Ragab Gaafar, Elshahaly Mohsen,Bardin Thomas (2017), "Gout: An old disease in new perspective - A review", Journal of advanced research, 8(5), pp.495-511 53 Ribeiro R A., Vale M L., Thomazzi S M., et al (2000), "Involvement of resident macrophages and mast cells in the writhing nociceptive response induced by zymosan and acetic acid in mice", Eur J Pharmacol, 387(1), pp.111-118 54 Richette P., Doherty M., Pascual E., et al (2017), "2016 updated EULAR evidencebased recommendations for the management of gout", Ann Rheum Dis, 76(1), pp.29-42 55 Roddy Edward,Choi Hyon K (2014), "Epidemiology of gout", Rheumatic diseases clinics of North America, 40(2), pp.155-175 56 Roughley Matthew J., Belcher John, Mallen Christian D., et al (2015), "Gout and risk of chronic kidney disease and nephrolithiasis: meta-analysis of observational studies", Arthritis Research & Therapy, 17(1), pp.90 57 Shen L.,Ji H F (2009), "Insights into the inhibition of xanthine oxidase by curcumin", Bioorg Med Chem Lett, 19(21), pp.5990-5993 58 Shu J., Li L., Zhou M., et al (2018), "Three new flavonoid glycosides from Smilax glabra and their anti-inflammatory activity", Nat Prod Res, 32(15), pp.1760-1768 59 Soleimani V., Sahebkar A., Hosseinzadeh H (2018), "Turmeric (Curcuma longa) and its major constituent (curcumin) as nontoxic and safe substances: Review", Phytother Res, 32(6), pp.985-995 60 Stamp L K.,Chapman P T (2020), "Allopurinol hypersensitivity: Pathogenesis and prevention", Best Pract Res Clin Rheumatol 61 Stavric B., Johnson W.J,Grice H.C (1969), "Uric Acid Nephropathy: An Experimental Model", Experimental Biology and Medicine, 130(2), pp.512-516 62 Sundari Sivakami, Ganapathy Sujan, Murthy Sushma (2015), "Pharmacognostic and preliminary phytochemical studies of Gnetum Ula", International Research Journal of Pharmacy, 2015, pp.377-381 63 Testa Alessandra, Mallamaci Francesca, Spoto Belinda, et al (2014), "Association of a polymorphism in a gene encoding a urate transporter with CKD progression", 9(6), pp.1059-1065 64 Vogel Hans Gerhard (2008), Drug Discovery and Evaluation, Springer, pp.11091110 65 Wang J P., Zhou Y M., Ye Y J., et al (2011), "Topical anti-inflammatory and analgesic activity of kirenol isolated from Siegesbeckia orientalis", J Ethnopharmacol, 137(3), pp.1089-1094 66 Wang S., Fang Y., Yu X., et al (2019), "The flavonoid-rich fraction from rhizomes of Smilax glabra Roxb ameliorates renal oxidative stress and inflammation in uric acid nephropathy rats through promoting uric acid excretion", Biomed Pharmacother, 111, pp.162-168 67 Wang S Y., Chang H N., Lin K T., et al (2003), "Antioxidant properties and phytochemical characteristics of extracts from Lactuca indica", J Agric Food Chem, 51(5), pp.1506-1512 68 Winter CA, Risley EA, GW Nuss (1962), "Carrageenin-induced edema in hind paw of the rat as an assay for antiiflammatory drugs", Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine, 111(3), pp.544-547 69 Yao Y, Chen F, Wang M, et al (2008), "Antidiabetic activity of Mung bean extracts in diabetic KK-Ay mice", 56(19), pp.8869-8873 70 Yousefi Ghale-Salimi M., Eidi M., Ghaemi N., et al (2018),"Antiurolithiatic effect of the taraxasterol on ethylene glycol induced kidney calculi in male rats", Urolithiasis, 46(5), pp.419-428 71 Zhao L., Cao L., Zhao T Y., et al (2020), "Cardiovascular events in hyperuricemia population and a cardiovascular benefit-risk assessment of urate-lowering therapies: a systematic review and meta-analysis", Chin Med J (Engl), 133(8), pp.982-993 PHỤ LỤC: PHIẾU KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM GUDCARE (tên cũ Gudcare) ... viêm, giảm đau chế phẩm Gudcare thực nghiệm? ?? với ba mục tiêu sau: Đánh giá tác dụng hạ acid uric chế phẩm Gudcare mơ hình thực nghiệm Đánh giá tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mơ hình thực. .. Về tác dụng hạ acid uric máu thực nghiệm chế phẩm Gudcare 34 4.2 Về tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare mơ hình thực nghiệm 36 4.2.1 Tác dụng chống viêm cấp chế phẩm Gudcare. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ QUÝ Mã sinh viên: 1501413 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ ACID URIC, CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA CHẾ PHẨM GUDCARE TRÊN THỰC NGHIỆM Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thùy Dương