Đánh giá tác dụng bảo vệ gan của cao đặc tỏi trên mô hình thực nghiệm khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VĂN ANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO ĐẶC TỎI TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VĂN ANH Mã sinh viên: 1801038 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO ĐẶC TỎI TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Thùy Dương ThS Đỗ Văn Khái Nơi thực hiện: Bộ môn Dược lý HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực hoàn thành đề tài, em nhận nhiều giúp đỡ tận tình q giá từ phía Nhà trường, thầy cô, anh chị bạn Xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu Trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ môn Dược lý khoa Dược lý - Dược lâm sàng tạo điều kiện cho em thực đề tài nghiên cứu Em xin dành kính trọng biết ơn đến PGS TS Nguyễn Thùy Dương ThS Đỗ Văn Khái trao cho em hội, tận tình hướng dẫn, bảo sát giúp đỡ em nhiều suốt trình học tập, nghiên cứu Em xin dành lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thu Hằng đồng hành, tạo điều kiện hỗ trợ giải đáp thắc mắc cung cấp kiến thức bổ ích kinh nghiệm quý báu để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn ThS Trần Hồng Linh TS Phạm Đức Vịnh bảo em nhiều trình thực đề tài môn Em xin gửi lời cảm ơn đến DS Đinh Đại Độ, DS Nguyễn Thị Thủy, anh chị kĩ thuật viên, bạn nhóm thực khóa luận bạn sinh viên tham gia nghiên cứu khoa học môn Dược lý, trực tiếp tham gia hỗ trợ nhiệt tình suốt thời gian qua Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, bạn bè người thân ủng hộ, động viên, chia sẻ giúp đỡ em nhiều mặt tinh thần giai đoạn trình học tập Trường Đại học Dược Hà Nội Hà Nội, tháng năm 2023 Sinh viên Nguyễn Văn Anh MỤC LỤC DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Gan bệnh gan 1.1.1 Cấu tạo vai trò gan 1.1.2 Các bệnh lý gan 1.1.3 Dịch tễ bệnh gan 1.1.4 Các thông số xét nghiệm đánh giá tổn thương chức gan 1.2 Các mơ hình động vật sử dụng đánh giá tác dụng bảo vệ gan 1.2.1 Mơ hình gây độc gan cấp 1.2.2 Mô hình gây độc gan mạn 10 1.3 Tổng quan tỏi 16 1.3.1.Đặc điểm thực vật 16 1.3.2 Phân bố phận dùng 17 1.3.3 Thành phần hóa học 17 1.3.4 Tác dụng dược lý công dụng 18 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu 20 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 20 2.1.2 Động vật thí nghiệm 20 2.1.3 Hóa chất, thuốc thử, thiết bị nghiên cứu 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan cấp carbon tetraclorid 21 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan mạn ethanol 22 2.3.3 Phương pháp xác định thông số nghiên cứu 24 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 29 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 30 3.1 Kết đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan cấp carbon tetraclorid 30 3.1.1 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hoạt độ AST ALT huyết mơ hình gây độc cấp CCl4 30 3.1.2 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến nồng độ bilirubin tồn phần huyết mơ hình gây độc cấp CCl4 31 3.1.3 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng MDA gan mô hình gây độc gan cấp CCl4 32 3.1.4 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng GSH gan hoạt độ CAT mô hình gây độc gan cấp CCl4 33 3.2 Kết đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan mạn ethanol 34 3.2.1 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hoạt độ AST ALT huyết mơ hình gây độc gan mạn ethanol 34 3.2.2 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến nồng độ bilirubin tồn phần huyết mơ hình gây độc gan mạn ethanol 35 3.2.3 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến nồng độ triglycerid huyết mơ hình gây độc gan mạn ethanol 36 3.2.4 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng MDA gan mơ hình gây độc gan mạn ethanol 37 3.2.5 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng GSH hoạt độ CAT gan mơ hình gây độc gan mạn ethanol 38 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 39 4.1 Về thiết kế mức liều thử mẫu nghiên cứu cao đặc tỏi 39 4.2 Về kết đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan cấp Carbon tetraclorid 40 4.3 Về kết đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan mạn ethanol 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ Thuật ngữ tiếng Anh Thuật ngữ tiếng Việt viết tắt ADH ALD ALDH2 ALP ALT Alcohol dehydrogenase Alcohol – related liver disease Aldehyde dehydrogenase Akaline phosphatase Alanine transaminase Alcohol dehydrogenase Bệnh gan rượu Aldehyd dehydrogenase Phosphatase kiềm Alanin transaminase AST CAT CLD DADS Aspartate transaminase Catalase Chronic liver disease Diallyl disulfide Aspartat transaminase Catalase Bệnh gan mạn tính Diallyl disulfid DATS DTNB GGT Diallyl trisulfide Diallyl trisulfid 5,5’-dithio-bis(2-nitrobenzoic acid) Acid 5,5’-dithio-bis(2-nitrobenzoic) 𝛾 – glutamyl transpeptidase 𝛾 – glutamyl transpeptidase GPx GRd Glutathione peroxidase Glutathione reductase Glutathion peroxidase Glutathion reductase GSH GST HCC LPS Glutathione Glutathione S – transferase Hepatocellular carcinoma Lipopolysaccharide Glutathion Glutathion S – transferase Ung thư biểu mô tế bào gan Lipopolysaccarid MDA Malondialdehyde NAFLD Nonalcoholic fatty liver disease NIAAA National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism Malondialdehyd Bệnh gan nhiễm mỡ không rượu Viện Quốc gia lạm dụng nghiện rượu NO PUFA Nitric oxyde Polyunsaturated fatty acids Nitric oxit Axit béo khơng bão hịa nhiều đa liên kết đôi ROS SAC SOD TBA TG TMP TP Reactive oxygen species S-allyl cysteine Superoxide dismutase Thiobarbituric acid Triglyceride 1,1,3,3-Tetramethoxypropane Total protein Các gốc oxi hóa phản ứng S-allyl cystein Superoxid dismutase Axit thiobarbituric Triglycerid 1,1,3,3-Tetramethoxipropan Protein toàn phần WHO World Health Oganization Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Kí hiệu Bảng 1.1 Tên bảng Một số mơ hình dược lý thường sử dụng để gây độc gan cấp tính Số trang Bảng 1.2 Cơ chế gây số tổn thương gan ethanol 12 Bảng 1.3 Thành phần hóa học tỏi - Allium savitum 17 Bảng 2.1 Chuẩn bị mẫu định lượng AST ALT 24 Bảng 2.2 Chuẩn bị mẫu định lượng bilirubin toàn phần 25 Bảng 2.3 Chuẩn bị mẫu định lượng triglycerid 26 Bảng 3.1 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng GSH gan hoạt độ CAT mơ hình gây độc gan cấp CCl4 33 Bảng 3.2 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng GSH gan hoạt độ CAT mơ hình gây độc gan mạn ethanol 38 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Kí hiệu Tên Hình Số trang Hình 1.1 Cơ chế gây tổn thương gan CCl4 Hình 1.2 Cơ chế gây tổn thương gan ethanol 11 Hình 1.3 Tỏi – Allium savitum L 16 Hình 2.1 Thiết kế thí nghiệm đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan cấp CCl4 22 Hình 2.2 Thiết kế thí nghiệm đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan mạn ethanol 23 Hình 2.3 Sơ đồ phản ứng định lượng AST ALT 24 Hình 2.4 Phản ứng tạo thành quinonimin từ triglycerid 25 Hình 2.5 Phản ứng tạo thành phức màu hồng đỏ từ MDA TBA 26 Hình 2.6 Phản ứng tạo thành TNB từ GSH DTNB 27 Hình 2.7 Phản ứng phân hủy H2O2 CAT 28 Hình 3.1 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hoạt độ AST ALT huyết mơ hình gây độc gan cấp CCl4 30 Hình 3.2 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến nồng độ bilirubin toàn phần huyết mơ hình gây độc gan cấp CCl4 31 Hình 3.3 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng MDA gan mơ hình gây độc gan cấp CCl4 32 Hình 3.4 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hoạt độ AST ALT huyết mơ hình gây độc gan mạn ethanol 34 Hình 3.5 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến nồng độ bilirubin toàn phần huyết mơ hình gây độc gan mạn ethanol 35 Hình 3.6 Hình 3.7 Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến nồng độ triglycerid huyết mơ hình gây độc gan mạn ethanol Ảnh hưởng cao đặc tỏi đến hàm lượng MDA gan mơ hình gây độc gan mạn ethanol 36 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Gan quan lớn thể với nhiều chức quan trọng tổng hợp, chuyển hóa chất khử độc Gan bị tổn thương nhiều nguyên nhân virus, vi khuẩn, kí sinh trùng, tổn thương thuốc, chất độc, tự miễn hay ung thư số tác nhân khác [1] Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) năm 2014 ước tính có khoảng 2,4 triệu ca tử vong hàng năm liên quan đến bệnh gan, phần ba số tử vong xơ gan [77] Một thống kê khác công bố khoảng 325 triệu người mắc viêm gan siêu vi toàn giới Việt Nam nằm vùng có tỉ lệ lưu hành dịch tễ virus viêm gan B cao với tỉ lệ mắc từ 10 – 20% [5] Ung thư gan Bộ Y tế xác định nguyên nhân gây tử vong hàng đầu, cao loại ung thư khác [3] Cùng với phát triển xã hội, gánh nặng bệnh gan tiếp tục tăng lên thời gian tới [15], [71] Mặc dù có nhiều tiến y học phương pháp điều trị, song thuốc sử dụng điều trị bệnh gan cịn nhiều hạn chế Các thuốc có nguồn gốc hóa dược chí có khả gây tổn hại cho gan [48] Vì vậy, xu hướng phát triển thuốc có nguồn gốc thảo dược ngày ý Một số hoạt chất (ví dụ silymarin) chứng minh hiệu sử dụng lâm sàng, nhiên giá thành tương đối cao, bệnh gan cần điều trị dài hạn Điều đặt nhu cầu tìm thuốc vừa dễ tiếp cận, vừa có hiệu điều trị lâu dài Ở Việt Nam, tỏi từ lâu dân gian sử dụng loại dược liệu trồng rộng khắp tỉnh thành nước Tỏi hợp chất lưu huỳnh hữu chứng minh có nhiều tác dụng quan trọng để áp dụng sản phẩm bảo vệ gan [17] Với ưu điểm dễ tiếp cận, sản phẩm từ tỏi có tiềm phát triển mạnh mẽ, khơng Việt Nam mà nhiều quốc gia khác Dựa sở đó, tỏi chiết xuất nhiều dạng khác để tăng khả bảo quản, nâng cao hiệu quả, dễ sử dụng hạn chế tác dụng không mong muốn củ tỏi Cao đặc tỏi dạng chiết xuất Vì vậy, để đánh giá khả áp dụng cao đặc tỏi sản phẩm có tác dụng để bảo vệ gan, hướng đến tiềm phát triển rộng rãi, xin thực đề tài: “Đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình thực nghiệm” với mục tiêu sau: Đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan cấp carbon tetraclorid Đánh giá tác dụng bảo vệ gan cao đặc tỏi mơ hình gây độc gan mạn ethanol CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Gan bệnh gan 1.1.1 Cấu tạo vai trò gan Gan quan nội tạng lớn thể, có hai thùy phải trái, bao bọc bao sợi liên kết gọi bao Glison Ở người trưởng thành, gan nặng 1,4 – 1,6 kg, chiếm 2,5% trọng lượng thể [38] Gan mơ tả theo hai cách, theo giải phẫu hình thái theo giải phẫu chức [8] Đơn vị chức gan tiểu thùy, kích thước từ 0,5 – 1mm, gồm tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy, từ dãy tế bào gan lan tỏa hình nan hoa Giữa tiểu thùy khoảng cửa có nhánh động mạch gan, tĩnh mạch cửa ống mật [2] Giữa dãy tế bào gan xoang mao mạch lót tế bào nội mơ tế bào Kupffer [29] Gan quan quan trọng, đóng vai trị gần hệ quan thể [51] Gan có chức trung tâm chuyển hóa để hấp thu chất dinh dưỡng chuyển hóa để thải trừ nhiều chất trước phân phối vào hệ thống tuần hoàn chung [12] Các chức nhóm chức gan bao gồm: (1) Bài tiết mật; (2) Chuyển hóa bilirubin; (3) Chức máu mạch máu; (4) Chuyển hóa chất dinh dưỡng; (5) Giải độc (độc tố, hormon, thuốc); (6) Dự trữ khoáng chất vitamin (sắt, đồng, vitamin A, D, E, K, B12); (7) Chức nội tiết (hoạt hóa vitamin D, chuyển hóa hormon tuyến giáp, tiết angiotensinogen, chuyển hóa hormon); (8) Chức miễn dịch (thành phần hệ thống lưới nội mô, bất hoạt chất độc thuốc) [80] 1.1.2 Các bệnh lý gan Có thể phân loại bệnh lý gan dựa thời gian tổn thương, xác định bất thường chức gan xét nghiệm sinh hóa Tổn thương tối cấp tính rối loạn nghiêm trọng dẫn đến suy gan vòng tuần [12] Tổn thương cấp tính tổn thương tế bào gan vịng sáu tháng, tổn thương mạn tính xảy bất thường kéo dài nửa năm [10], [23], [119] Bệnh lý gan phân loại theo nguyên nhân, bao gồm virus, vi khuẩn/kí sinh trùng, bệnh chuyển hóa bất thường gen, bệnh gan thuốc/chất độc, nguyên nhân tự miễn, mạch máu, ung thư,… [1] Phân loại bệnh lý gan trình bày theo tình trạng bệnh phổ biến thường gặp [12]: Viêm gan Viêm gan xảy nhiều nguyên nhân phổ biến virus nghiện rượu Viêm gan virus có nhiều dạng, thường gặp viêm gan B, A C Viêm gan B C trở thành viêm gan mạn tính dẫn đến xơ gan cân nặng nghiên cứu gây độc gan mạn tính mơ hình chế độ ăn Lieber – DeCarli có chứa ethanol vịng 28 ngày [82] Bilirubin tồn phần huyết tăng thông số quan trọng chẩn đoán bệnh lý gan mật rối loạn nghiêm trọng chức gan Sử dụng ethanol làm tác nhân gây độc gan mạn làm tăng đáng kể nồng độ bilirubin toàn phần huyết chuột với kết lô chứng bệnh cao 48,4% lơ chứng sinh lý (p