Nghiên cứu độc tính và tác dụng bảo vệ gan của sản phẩm vismisco trên thực nghiệm tt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ QUỲNH NHUNG NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA SẢN PHẨM VISMISCO TRÊN THỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Dược lý độc chất Mã số: 9720118 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2023 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Thị Vân Anh PGS.TS Nguyễn Trọng Thông Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Trường Vào hồi …… giờ….… phút, ngày … tháng …… năm 20… Có thể tìm hiểu luận án tại: DANH MỤC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ Bùi Thị Quỳnh Nhung, Nguyễn Văn Sơn, Phạm Thị Vân Anh (2016) Tác dụng chống viêm Vismisco thực nghiệm Tạp chí Y học Việt Nam, số 449, 16-24 Bùi Thị Quỳnh Nhung, Nguyễn Văn Sơn, Phạm Thị Vân Anh (2018) Tác dụng phục hồi tổn thương gan cao toàn phần Vismisco thực nghiệm Tạp chí Y học Việt Nam Số 472, 569 - 574 Bui Thi Quynh Nhung, Nguyen Van Son, Pham Thi Van Anh, Nguyen Thanh Ha (2019) Evaluation of subchronic toxicity of vismisco in experimental animals Journal of military pharmaco-medicine, 4, 90 - 97 Bùi Thị Quỳnh Nhung, Phạm Thị Vân Anh, Nguyễn Trọng Thông, Lương Ngọc Cương, Mai Phương Thanh (2023) Tác dụng chống xơ gan Vismisco mơ hình gây xơ gan carbon tetrachloride chuột nhắt trắng Tạp chí Nghiên cứu y học (162), 272 - 279 Phần A: GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Tính cấp thiết luận án Trong thể người, gan quan lớn nhất, đảm nhận nhiều chức quan trọng, nói chức đặc thù quan trọng gan khử độc chuyển hoá chất, quan biến đổi chất độc nội ngoại sinh thành chất không độc để đào thải Các bệnh gan chiếm tỷ lệ mắc bệnh tử vong lớn giới; theo báo cáo gánh nặng bệnh tật giới năm 2019, bệnh gan chiếm khoảng triệu ca tử vong năm toàn thế giới, đó triệu biến chứng xơ gan triệu viêm gan virus ung thư biểu mô tế bào gan Trong điều trị bệnh viêm gan cấp mạn tính, ngồi biện pháp điều trị đặc hiệu, thuốc có tác dụng hỗ trợ điều trị chứng minh có vai trị quan trọng Vismisco có thành phần gồm đậu xanh, thổ phục linh, cam thảo đất ba vị thuốc nghiên cứu sử dụng rộng rãi dân gian để điều trị nhiều bệnh khác Chúng thực đề tài để chứng minh sở khoa học nhằm ứng dụng sản phẩm Vismisco điều trị điều trị viêm gan, xơ gan lâm sàng Mục tiêu nội dung luận án 2.1 Mục tiêu luận án: Xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn của sản phẩm Vismisco động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống oxy hóa chống viêm sản phẩm Vismisco động vật thực nghiệm 2.2 Nội dung luận án: 2.2.1 Nghiên cứu độc tính - Xác định độc tính cấp Vismisco chiết xuất từ vỏ hạt đậu xanh, thổ phục linh cam thảo đất - Xác định độc tính bán trường diễn Vismisco 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống viêm chống oxy hóa Vismisco - Nghiên cứu tác dụng chống tổn thương gan cấp (tác dụng bảo vệ gan phục hồi tổn thương gan) Vismisco - Nghiên cứu tác dụng chống viêm gan mạn, tác dụng chống oxy hóa Vismisco - Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp viêm mạn tính Vismisco Những đóng góp luận án Luận án nghiên cứu độc tính tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống viêm chống oxy hóa Vismisco động vật thực nghiệm Vismisco chiết xuất từ vỏ hạt đậu xanh, thổ phục linh cam thảo đất Kết nghiên cứu cho thấy Vismisco với chiết xuất từ vỏ hạt đậu xanh, thổ phục linh cam thảo đất chưa xác định LD50 Vismisco chuột nhắt trắng theo đường uống cho chuột uống Vismisco đến liều tương đương với liều 360 g/kg thể trọng chuột/ngày; Vismisco liều tương đương 0,4 g/kg/ngày 1,2 g/kg/ngày, uống liên tục tuần khơng gây độc tính bán trường diễn chuột cống trắng thực nghiệm Vismisco với liều tương đương 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có tác dụng bảo vệ gan làm tăng phục hồi tổ n thương gan cấp chuột nhắt trắng gây độc paracetamol 400 mg/kg; Vismisco với liều tương đương 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có tác dụng làm hạn chế tổn thương xơ hóa gan có xu hướng làm hạn chế q trình oxy hóa chuột nhắt trắng gây độc CCl4 dài ngày Vismisco với liều tương đương 0,4 g/kg/ngày 1,2 g/kg/ngày có có tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột gây viêm màng bụng chuột cống trắng thực nghiệm Vismisco với liều tương đương 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có tác dụng chống viêm mạn rõ rệt mơ hình gây viêm mạn thực nghiệm chuột nhắt trắng Kết nghiên cứu đóng góp luận án, lần cơng bố độc tính tác chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống oxy hóa chống viêm Vismisco động vật thực nghiệm Việt Nam Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án 4.1 Ý nghĩa khoa học: Các kết nghiên cứu luận án cung cấp chứng khoa học chứng minh tính an toàn tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống oxy hóa chống viêm động vật thực nghiệm Vismisco chiết xuất từ vỏ hạt đậu xanh, thổ phục linh cam thảo đất, đồng thời tiền đề cho nghiên cứu để nghiên cứu phát triển thuốc sử dụng lâm sàng 4.2 Ý nghĩa thực tiễn: Làm sở khoa học để phát triển thuốc điều trị bệnh lý gan mật hiệu quả, an toàn từ nguồn nguyên liệu dồi dào, sẵn có, rẻ tiền tự nhiên Cấu trúc luận án: Luận án gồm 150 trang, bao gồm phần: Đặt vấn đề (2 trang); Tổng quan 41 trang; Đối tượng phương pháp nghiên cứu 15 trang; Kết nghiên cứu 41 trang với 29 bảng, 29 hình; biểu đồ Bàn luận 48 trang; Kết luận kiến nghị (3 trang) Luận án có 174 tài liệu tham khảo tiếng Việt tiếng Anh Phần B: NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh lý viêm gan, xơ gan 1.1.1 Cấu tạo chức gan Gan quan nội tạng lớn thể Gan cấu tạo bao gan, nhu mô gan, mạch máu đường dẫn mật gan Các chức gan thực nhờ hai loại tế bào (tế bào gan tế bào Kupffer) nhờ có lượng máu qua gan lớn 1.1.2 Nguyên nhân gây viêm gan * Viêm gan cấ p tính: bệnh lý gan xảy cấp tính, biểu đặc trưng phản ứng viêm rối loạn số chức phận gan nguyên nhân có thể gây bê ̣nh lý gan cấp tiń h: virus, thuốc nhiễm độc * Viêm gan mạn tính: hình thái bệnh lý với biểu viêm hoại tử gan kéo dài tháng Nguyên nhân viêm gan mạn tính thường gặp virus viêm gan, ngồi cịn nhiều ngun nhân khác viêm gan mạn tính rượu, hóa chất, thuốc nguyên nhân tự miễn 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh 1.1.3.1 Cơ chế bệnh sinh viêm gan thuốc hóa chất - Cơ chế gây độc gan trực tiếp: Tổn thương với biểu suy giảm trực tiếp cấu trúc chức gan (rối loạn chức ty thể, tắc mật, rối loạn lysosome, chất chuyển hóa lưới nội chất) gây hoại tử tế bào gan Cơ chế gây độc dự đoán trước, phụ thuộc vào liều thời gian dùng, thời gian khởi phát bệnh ngắn Biểu với triệu chức tăng cao enzyme AST, ALT Tỉ lệ tử vong cao Paracetamol (PAR) ví dụ điển hình với chế gây độc hình thành chất chuyển hóa trung gian NAPQI - Cơ chế gây độc gan gián tiếp: Tổn thương với biểu hoại tử tắc mật Cơ chế gây độc khơng dự đốn được, xảy người nhạy cảm, thời gian khởi phát bệnh thay đổi 1.1.3.2 Cơ chế bệnh sinh viêm gan mạn tính Bệnh gan mạn tính tình trạng bệnh liên quan đến trình phá hủy thối hóa khơng ngừng nhu mơ gan dẫn đến xơ hóa gan xơ gan Biến đổi chế gây xơ gan tình trạng hóa sợi tiến triển lan tỏa toàn gan tái tổ chức hệ thống vi tuần hoàn gan Sự kích hoạt tế bào hình làm tăng sinh sợi collagen tạo thành vách sợi Bên cạnh hoạt động tạo sợi, tế bào gan cịn sống sót tăng cường hoạt động tăng sinh tạo nốt tái tạo bao quanh mô sợi Kết cục gan trở thành mô sợi chứa nốt tế bào gan, hệ thống vi tuần hoàn cung cấp máu cho tế bào gan khả sản xuất protein tế bào gan bị tổn hại trầm trọng 1.1.4 Gan stress oxy hóa * Gốc tự * Chất chống oxy hóa * Hệ thống chống oxy hóa ở gan 1.1.5 Các dược liệu có tác dụng bảo vệ gan 1.2 Mơ hình gây tổn thương gan ̣ng vâ ̣t thực nghiệm (in vivo) 1.2.1 Mơ hình gây tổn thương gan PAR 1.2.2 Mơ hình gây tổn thương gan CCl4 1.3 Các phương pháp đánh giá 1.3.1 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa phương pháp MDA Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa phương pháp SOD Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa phương pháp GPx 1.3.2 Đánh giá tình trạng hoại tử tế bào gan: AST, ALT 1.3.3 Đánh giá chức tiết khử độc gan: Bilirubin huyết 1.3.4 Đánh giá chức tổng hợp gan: Albumin huyết thanh, Các yếu tố đơng máu 1.3.5 Khảo sát tình trạng viêm: Xác định mức độ phù bàn chân chuột, thể tích dịch rỉ viêm, trọng lượng khối u hạt, định lượng nồng độ TNF-α số số khác mơ hình gây viêm cấp, viêm mạn thực nghiệm 1.3.6 Đánh giá đại thể, vi thể tổn thương gan tiêu mô bệnh học 1.4 Tổng quan Vismisco 1.4.1 Thành phần Vismisco đươ ̣c chiế t xuấ t dạng cao đặc (độ ẩm 10,8%) Khoa Dược - Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên gồm: Tên vi thuố ̣ c Tên khoa ho ̣c Bô ̣ phâ ̣n dùng Hàm lươṇ g Đậu xanh Vigna radiata (L.) Wilczek Vỏ hạt 58,8 Thổ phục linh Smilax glabra roxb Thân, rễ 11,8 Cam thảo đất Scoparia dulcis L Toàn bô ̣ 29,4 Liều dùng của Vismisco dự kiế n người 2,5 gam cao/ngày 1.4.2 Giới thiệu dược liệu thành phần Vismisco 1.4.2.1 Hạt đậu xanh * Đặc điể m: Hạt đậu xanh có tên khoa học Vigna radiata (L.) Wilczek, tên thường gọi lục đậu, thuộc họ Đậu (Fabaceae) ), loại hạt phổ biến Việt Nam, dễ trồng dễ tìm * Thành phầ n hóa học vỏ hạt đậu xanh: thành phần chủ yếu vỏ hạt đậu xanh flavonoid * Tác dụng: chống độc, làm giảm thương tổn gan, bảo vệ chức gan 1.4.2.2 Thổ phục linh * Đặc điểm: Thổ phục linh có tên khoa học Smilax glabra roxb, thuộc họ Hành tỏi Liliaceae * Thành phần hóa học rễ Thổ phục linh: Astilbin xem hoạt chất rễ Thổ phục linh, Astilbin flavonoid * Tác dụng Thổ phục linh: giải độc thể, bổ dày, khỏe gân cốt, làm cho mồ hôi, chữa đau khớp xương 1.4.2.3 Cam thảo đất * Đặc điểm: Cam thảo đất có tên khoa học Scoparia dulcis L thuộc họ Hoa mõm chó Scrophulariaceae * Thành phần hóa học: Tồn chứa diterpen, flavonoid acid hữu * Tác dụng: bổ tỳ, nhuận phế, nhiệt, giải độc, lợi tiểu 1.4.3 Một số nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan dược liệu thành phần Vismisco Trong dân gian, có thuốc phối hợp dược liệu thành phần Vismisco giải độc Ở Việt Nam giới có nghiên cứu chứng minh tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, bảo vệ gan thành phần chiết xuất từ vỏ hạt đậu xanh, thổ phục linh cam thảo đất Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu Vismisco đươ ̣c chiế t xuấ t dạng cao đặc (độ ẩm 10,8%) Khoa Dược - Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên, đạt tiêu chuẩn sở gồm: Tên vi thuố ̣ c Tên khoa ho ̣c Bô ̣ phâ ̣n dùng Hàm lươṇ g Đậu xanh Vigna radiata (L.) Wilczek Vỏ hạt 58,8 Thổ phục linh Smilax glabra roxb Thân, rễ 11,8 Cam thảo đất Scoparia dulcis L Toàn bô ̣ 29,4 Các dược liệu đươ ̣c chiết xuất thành cao đă ̣c Liều dùng dự kiế n của Vismisco người tương đương uống 2,5 gam cao/ngày Vismisco pha dung môi nước trước cho động vật thí nghiệm uống 2.2 Động vật thực nghiệm - Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 25,0  2,0 gam (để nghiên cứu tác dụng bảo vệ, phục hồi tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống oxy hóa, chống viêm mạn) 20  gam (để nghiên cứu độc tính cấp) Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp - Chuột cống trắng giống, khỏe mạnh, trọng lượng 150 ± 20 gam Học viện Quân y cung cấp (để nghiên cứu độc tính bán trường diễn, tác dụng chống viêm cấp) 2.3 Thuốc, hóa chất, máy thiết bị phục vụ nghiên cứu: Đạt tiêu chuẩn thí nghiệm 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Nghiên cứu độc tính 2.4.1.1 Nghiên cứu độc tính cấp: Nghiên cứu độc tính cấp tiến hành theo hướng dẫn Tổ chức Y tế giới hướng dẫn Bộ Y tế Việt nam thử thuốc có nguồn gốc từ dược liệu Xác định LD50 mẫu thử chuột nhắt trắng đường uống theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon - Trước tiến hành thí nghiệm, cho chuột nhịn ăn qua đêm Từng lô chuột nhắt trắng, lô 10 con, uống mẫu thuốc nghiên cứu theo liều tăng dần Tìm liều cao khơng gây chết chuột (0%), liều thấp gây chết chuột hoàn toàn (100%) liều trung gian Theo dõi tình trạng chung chuột số lượng chuột chết lô 72 Từ xây dựng đồ thị tuyến tính để xác định LD50 mẫu thử Sau tiếp tục theo dõi tình trạng chung chuột đến hết ngày thứ sau uống mẫu nghiên cứu 2.4.1.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn: Nghiên cứu độc tính bán trường diễn Vismisco tiến hành chuột cống trắng theo đường uống theo hướng dẫn Tổ chức Y tế giới Chuột uống Vismisco liều: tương đương 0,4 g/kg/ngày (tương đương liều dự kiến dùng người) tương đương 1,2 g/kg/ngày (gấp lần liều dự kiến dùng người) tuần liên tục Đánh giá tình trạng chung thay đổi cân nặng, chức phận tạo máu, chức gan, thận thời điểm: trước uống thuốc, sau tuần tuần uống thuốc Đánh giá mô bệnh học gan, thận chuột sau tuần uống thuốc 2.4.2 Nghiên cứu tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống oxy hóa, chống viêm Vismisco động vật thực nghiệm 2.4.2.1 Nghiên cứu tác dụng chống tổn gan cấp * Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan: Chuột nhắt trắng trọng lượng 25,0  2,0 g chia ngẫu nhiên thành lô, lô 15 con: Lô (chứng trắng): Uống nước cất 0,2 ml/10g/ngày Lơ ( mơ hình viêm gan): Uống nước cất 0,2 ml/10g/ngày + uống PAR Lô (chứng dương): Uống silymarin (140 mg/kg/ngày) + uống PAR Lô (Vismisco liều thấp): Uống Vismisco liều 0,6g/kg/ngày + uống PAR (Liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số 12) Lô (Vismisco liều cao): Uống Vismisco liều 1,8g/kg/ngày + uống PAR Chuột uống nước cất, silymarin mẫu thử liên tục ngày Ngày thứ 8, sau uống thuốc giờ, gây tổn thương gan chuột lô từ lô đến lô uống PAR liều 400 mg/kg, với thể tích 0,2 ml/10g 48 sau gây độc PAR, lấy máu động mạch cảnh chuột để xác định hoạt độ enzym AST, ALT; lấy gan để quan sát mô bệnh học (đại thể, vi thể) làm xét nghiệm MDA * Nghiên cứu tác dụng làm tăng phục hồi tổn thương gan Vismisco: Tác dụng làm tăng phục hồi tổn thương tế bào gan Vismisco sau ngày uống thuốc Chuột nhắt trắng chia thành lô, lô 10 Gây tổn thương gan chuột uống PAR liều 400mg/kg, với thể tích 0,2ml/10g Sau uống PAR giờ, cho chuột uống nước cất thuốc thử tương ứng với lô: Lô (chứng trắng): Uống nước cất 0,2 ml/10g/ngày Lô ( mơ hình viêm gan): Uống PAR + Uống nước cất 0,2 ml/10g/ngày Lô (chứng dương): Uống PAR + Uống silymarin (140 mg/kg/ngày) Lô (Vismisco liều thấp): Uống PAR + Uống Vismisco liều 0,6g/kg/ngày (Liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số 12) Lơ (Vismisco liều cao): Uống PAR + Uống Vismisco liều 1,8g/kg/ngày Chuột lô uống nước cất thuốc thử ngày Sau ngày uống thuốc thử, giết chuột, lấy máu động mạch cảnh để xác định hoạt độ enzym AST, ALT; lấy gan để làm xét nghiệm MDA Tác dụng làm tăng phục hồi tổn thương tế bào gan Vismisco sau ngày uống thuốc - Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 Các lô chuột uống nước cất, silymarin liều Vismisco tương tự thí nghiệm đánh giá tác dụng phục hồi tổn thương tế bào gan Vismisco sau ngày uống thuốc - Chuột lô uống nước cất thuốc thử ngày Sau ngày uống thuốc thử, giết chuột, lấy máu động mạch cảnh để xác định hoạt độ enzym AST, ALT; lấy gan để quan sát mô bệnh học (đại thể, vi thể) làm xét nghiệm MDA 2.4.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm gan mạn chống oxy hóa Vismisco - Chuột nhắt trắng chủng Swiss trọng lượng 25 ± g gây mơ hình viêm gan mạn dẫn tới xơ gan tiêm màng bụng carbon tetraclorid (CCl 4) pha dầu olive liều 10µL/10g (pha dầu olive), hàng tuần, tuần lần cách ngày 19 tuần Thuốc thử thuốc chứng uống hàng ngày 19 tuần (cùng thời gian tiêm CCl 4) - Chuột nhắt trắng chia thành lô, lô 11 Lô (chứng trắng): Uống nước cất thể tích 0,2 ml/10g/ngày Lơ (mơ hình): Tiêm màng bụng CCl4 10µL/10g, lần/tuần Uống nước cất 0,2 ml/10g/ngày Lô (chứng dương): Tiêm màng bụng CCl 10µL/10g, lần/tuần Uống silymarin liều 140 mg/kg /ngày Lô (Vismisco liều thấp): Tiêm màng bụng CCl4 10µL/10g, lần/tuần Uống Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày Lô (Vismisco liều cao): Tiêm màng bụng CCl4 10µL/10g, lần/tuần Uống Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày - Chuột tiêm CCl4 uống thuốc thử 19 tuần, tuần thứ 20 tiến hành đánh giá trọng lượng tương đối chuột, mổ chuột, lấy máu, lấy gan làm xét nghiệm đánh giá chức gan, số huyết học, số đánh giá chức đông cầm máu, định lượng hydroxyprolin gan chuột quan sát mô bệnh học (đại thể, vi thể) gan chuột, Chỉ số chống oxy hóa: SOD, GPx huyết thanh; nồng độ MDA dịch đồng thể gan chuột 2.4.2.3 Nghiên cứu tác dụng chống viêm Vismisco * Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp mô hình gây phù chân chuột carrageenin - Chuột cống trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 Lơ (mơ hình): Uống nước cất với thể tích 10 ml/kg/ngày Lơ (chứng dương): Uống aspirin liều 200 mg/kg Lô (Vismisco liều thấp): Vismisco liều 0,4 g/kg/ngày (Liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số 8) Lơ (Vismisco liều cao): Vismisco liều 1,2 g/kg/ngày - Chuột uống nước cất thuốc ngày liên tục trước gây viêm Ngày thứ 4, sau uống thuốc thử giờ, gây viêm cách tiêm 10 Bảng 3.2 Ảnh hưởng Vismisco đến hoạt độ AST, ALT AST (UI/L) ALT (UI/L) Chứng 0,4 g/kg 1,2g/kg Chứng 0,4 g/kg (n = 10) (n = 10) (n = 10) (n = 10) (n = 10) Trước uống 119,50 130,38 ± 132,78 ± 79,38 ± 86,00 ± thuốc ± 21,75 11,35 18,96 6,87 6,14 Sau tuần 123,63 123,38 ± 116,20 ± 78,25 ± 86,43 ± uống thuốc ± 19,7 14,68 18,06 8,61 9,34 p (trước-sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau tuần uống 125,17 112,13 ± 115,00 ± 73,33 ± 68,63 ± thuốc ± 14,73 8,63 17,75 9,54 7,82 p (trước-sau) > 0,05 < 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,01 1,2 g/kg (n = 10) 80,90 ± 9,43 81,10 ± 8,23 > 0,05 63,90 ± 9,43 < 0,001 3.1.2.4 Đánh giá chức gan Vismisco liều 0,4 g/kg/ngày liều 1,2 g/kg/ngày uống liên tục thời gian tuần không làm thay đổi nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần albumin so sánh với lô chứng sinh học so với thời điểm trước uống thuốc (p > 0,05) 3.1.2.5 Đánh giá chức lọc cầu thận Sau tuần uống Vismisco, hai lô trị, nồng độ creatinin máu chuột cống khơng có thay đổi khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) 3.1.2.6 Mô bệnh học gan, thận - Trên cấu trúc vi thể gan: Ở lô chứng lô trị dùng Vismisco liều 0,4 g/kg/ngày 1,2 g/kg/ngày, cấu trúc gan không bị đảo lộn Tất vùng tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy gan vùng khoảng cửa không xơ hóa, khơng xâm nhập viêm, khơng tăng sinh ống mật Khơng có khác biệt cấu trúc vi thể gan lô dùng thuốc thử Vismisco so với lô chứng - Trên cấu trúc vi thể thận: Ở lô chứng lô trị dùng Vismisco, cầu thận có hình thái, cấu trúc giới hạn bình thường, khơng xơ hóa, khơng tăng sinh tế bào Ở chuột lô chứng lô uống Vismisco liều 0,4 g/kg/ngày, nhu mô thận không viêm, không hoại tử, mô đệm bình thường, khơng có xâm nhập viêm Ở lơ uống Vismisco liều 1,2 g/kg/ngày, 1/3 số chuột, thận có thối hóa nhẹ tế bào ống lượn gần 11 3.2 Nghiên cứu tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan ma ̣n, chống oxy hóa chớ ng viêm Vismisco động vật thực nghiệm 3.2.1 Nghiên cứu tác dụng chống tổn thương gan cấp Vismisco 3.2.1.1 Tác dụng bảo vệ gan Vismisco chuột nhắt bị gây độc PAR Bảng 3.3 Ảnh hưởng Vismisco lên hoạt độ AST, ALT huyết chuột bị gây độc PAR Lô nghiên cứu (n =15) Hoạt độ AST (UI/L) Hoạt độ ALT (UI/L) Lô1: Chứng sinh học 113,33 ± 16,35 63,33 ± 11,51 Lô 2: Mơ hình 190,53 ± 29,16*** 125,27 ± 32,01*** Lơ 3: Silymarin 169,40 ± 27,17Δ 78,07 ± 11,57ΔΔΔ Δ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 162,79 ± 26,06 75,86 ± 22,42ΔΔΔ Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 144,20 ± 35,06 ΔΔΔ,+ 69,07 ± 21,70 ΔΔΔ *** Chú thích: p < 0,001 so với lơ chứng sinh học (Student’t-test) Δ p < 0,05; Δ Δ Δp < 0,001 so với lơ mơ hình (Student’t-test) + p < 0,05 so với lô dùng Silymarin (Student’t-test) Nhận xét: Trọng lượng gan chuột lô Ở lô mơ hình), hoạt độ AST, ALT máu tăng cao rõ rệt so với lô chứng (p 0,05 Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 15,14 ± 2,62 < 0,05 > 0,05 Nhận xét: Hàm lượng MDA lơ mơ hình tăng cao rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,05) Hàm lượng MDA lô chuột uống Silymarin giảm rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,05) Hàm lượng MDA lô chuột uống Vismisco giảm rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,05) khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ dùng Silymarin - Ả nh hưởng của Vismisco lên hình ảnh mô bệnh học gan chuột: Lơ mơ hình thể rõ tình trạng viêm gan cấp quan sát đại thể gan hình ảnh vi thể với 2/3 mẫu bê ̣nh phẩ m có hình ảnh gan thoái hóa vừa, 1/3 mẫu bê ̣nh phẩ m có hình ảnh gan thối hóa nhẹ Vismisco làm hạn chế rõ rệt mức độ tổn thương gan PAR gây hình ảnh đại thể vi thể 12 3.2.1.2 Tác dụng phục hồi tổn thương gan Bảng 3.5 Ảnh hưởng Vismisco lên hoạt độ AST, ALT huyết chuột sau ngày bị gây độc PAR Lô nghiên cứu AST (UI/L) ALT (UI/L) (n = 10) Lô1: Chứng sinh học 93,7 ± 15,7 47,5 ± 5,0 Lơ 2: Mơ hình 434,2 ± 68,2*** 365,8 ± 45,1*** Lô 3: Silymarin 237,8 ± 63,1ΔΔΔ 165,8 ± 52,3 ΔΔΔ Δ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 356,3 ± 40,8 238,3 ± 39,8ΔΔ ΔΔΔ Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 168,8 ± 63,1 157,4 ± 87,8 ΔΔΔ Chú thích: *** p < 0,001 so với lô chứng sinh học (Student’t-test) Δ p < 0,05; ΔΔp < 0,01; ΔΔΔp < 0,001 so với lơ mơ hình (Student’t-test) Nhận xét: Sau ngày uống thuốc, hoạt độ AST ALT huyết lơ mơ hình tăng cao rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,001) Hoạt độ AST, ALT lô chuột uống silymarin lô uống Vismisco giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p ≤ 0,05) Khơng có khác biệt hoạt độ AST, ALT lô uống Vismisco với lô uống silymarin (p > 0,05) Bảng 3.6 Ảnh hưởng Vismisco hoạt độ AST, ALT huyết chuột sau ngày bị gây độc PAR Lô nghiên cứu Trọng lượng gan AST (UI/L) ALT (UI/L) (n = 10) (g/10g thể trọng) Lô1: Chứng sinh học 0,52 ± 0,05 92,1 ± 5,9 49,9 ± 6,9 Lô 2: Mơ hình 0,53 ± 0,08 191,1 ± 50,4*** 130,7 ± 32,0*** Lô 3: Silymarin 0,56 ± 0,31 116,3 ± 31,6ΔΔ 62,1 ± 13,0ΔΔΔ ΔΔ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 0,60 ± 0,08 126,7 ± 18,0 67,4± 21,9 ΔΔΔ ΔΔ Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 0,57 ± 0,08 118,3 ± 25,3 61,2 ± 13,7ΔΔΔ Chú thích: *** p < 0,001 so với lơ chứng sinh học (Student’t-test) ΔΔ p < 0,01; ΔΔΔp < 0,001 so với lơ mơ hình (Student’t-test) Kết bảng 3.6 cho thấy: - Sau ngày uống thuốc, trọng lượng gan chuột lơ khơng có khác biệt (p > 0,05) - Hoạt độ AST ALT huyết ở lơ mơ hình tăng cao rõ rệt so với lô chứng sinh học (p ≤ 0,001) - Hoạt độ AST ALT các lô uố ng Vismisco là m giả m rõ rê ̣t có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p ≤ 0,01) Khơng có khác biệt hoạt độ AST ALT hai lô uống Vismisco so với lô uống silymarin 13 Bảng 3.7 Ảnh hưởng Vismisco lên hàm lượng MDA dịch đồng thể gan chuột nhắt bị gây độc PAR Hàm lượng MDA Hàm lượng MDA Lô nghiên cứu Lô nghiên cứu (nmol/g gan) (nmol/g gan) (n = 10) (n = 10) (sau ngày) (sau ngày) Lô 1: Chứng 7,64 ± 1,01 Lô 1: Chứng 7,56 ± 0,26 Lô 2: Mơ hình 9,94 ± 0,86*** Lơ 2: Mơ hình 10,67 ± 1,83*** Lô 3: Silymarin 8,27 ± 1,25Δ Lô 3: Silymarin 8,96 ± 1,12Δ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 8,99 ± 1,08 Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 9,53 ± 0,87 Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 7,79 ± 1,49 Δ Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 8,91 ± 0,33 Δ *** p < 0,001 so với lô chứng sinh học; Δp < 0,05 so với lô mơ hình Nhận xét: hàm lượng MDA dịch đồng thể gan lơ mơ hình tăng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh học thời điểm Hàm lượng MDA lô uống Vismisco liều thấp giảm so với lơ mơ hình thời điểm sau ngày uống thuốc, nhiên khác biệt chưa ý nghĩa thống kê Hàm lượng MDA lô uống Vismisco liều cao giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình thời điểm sau ngày uống thuốc (p < 0,05) Khơng có khác biệt hàm lượng MDA lô uống Vismisco so với lô uống silymarin Ả nh hưởng của Vismisco lên hình ảnh mơ bệnh học gan chuột: Lơ mơ hình thể rõ tình trạng viêm gan cấp quan sát đại thể gan hình ảnh vi thể gan với 2/3 mẫu bê ̣nh phẩ m có hình ảnh gan thối hóa vừa, 1/3 mẫu bê ̣nh phẩ m có hình ảnh gan thối hóa nhẹ Uống Vismisco silymarin làm hạn chế rõ rệt mức độ tổn thương gan PAR liều cao gây hình ảnh đại thể vi thể 3.2.2 Tác dụng chống viêm gan mạn chống oxy hóa Vismisco 3.2.2.1 Tác dụng chống viêm gan mạn Vismisco * Ảnh hưởng Vismisco đến mức độ tổn thương tế bào gan chuột: Bảng 3.8 Ảnh hưởng Vismisco lên hoạt độ AST, ALT huyết chuột nhắt mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 Lơ nghiên cứu Hoạt độ AST (UI/L) Hoạt độ ALT (UI/L) Lô1: Chứng sinh học 148,15 ± 26,16 48,09 ± 7,41 *** Lơ 2: Mơ hình 326,18 ± 29,19 103,09 ± 7,97*** ***, ΔΔ Lô 3: Silymarin 140mg/kg 242,34 ± 26,66 69,09 ± 8,43***, ΔΔΔ ***, ΔΔΔ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 239,92 26,69 69,58 ± 6,68***, ΔΔΔ ***, ΔΔΔ Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 253,67 ± 29,37 70,73 ± 9,74***, Δ *** Chú thích: p < 0,001 so với lơ chứng sinh học (Student’t-test) Δ p < 0,05; ΔΔp < 0,01; ΔΔΔp < 0,001 so với lơ mơ hình Kết bảng 3.8 cho thấy: - Ở lơ mơ hình lô dùng thuốc: hoạt độ AST, ALT huyết chuột tăng cao rõ rệt so với lô chứng (p < 0,001) - Vismisco hai liều làm giảm hoạt độ AST, ALT máu rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,001; p < 0,05); khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê lơ uống Vismisco với lô dùng Silymarin (p > 0,05) 14 * Ảnh hưởng Vismisco đến chức gan chuột: Bảng 3.9 Ảnh hưởng Vismisco lên nồng độ Albumin, Cholesterol, Bilirubin huyết chuột nhắt mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 Albumin Cholesterol Bilirubin tồn Lơ nghiên cứu (n = 11) (g/dL) (mmol/l) phần (mmol/l) Lô1: Chứng sinh học 3,32 ± 0,24 1,25 ± 0,11 12,77 ± 0,36 *** ** Lơ 2: Mơ hình 2,81 ± 0,16 1,08 ± 0,14 14,17 ± 0,4*** ΔΔΔ Δ Lô 3: Silymarin 140mg/kg 3,16 ± 0,23 1,19 ± 0,05 12,54 ± 0,37 ΔΔΔ ΔΔΔ Δ 3,27 ± 0,22 1,21 ± 0,07 12,82 ± 0,43 ΔΔΔ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 3,36 ± 0,25ΔΔΔ 1,19 ± 0,07Δ 12,72 ± 0,44 ΔΔΔ ** *** Chú thích: p < 0,01; p < 0,001 so với lô chứng sinh học Δ p < 0,05; ΔΔΔ p < 0,001 so với lô mô hình (Student’t-test) Số liệu bảng 3.9 cho thấy: - Nờ ng ̣ Albumin tồn phần lơ mơ hình giả m rõ rê ̣t so với lơ chứng (p < 0,001) Lô uố ng Vismisco và silymarin có nồ ng đô ̣ Albumin tăng rõ rệt so với lô mô hình và không có sự khác biê ̣t so với lô chứng - Nồng độ Cholesterol huyế t chuô ̣t ở lô uố ng Vismisco và lô uố ng silymarin tăng cao so với lô mô hình (p < 0,05) - Lô uống Vismisco silymarin làm giảm rõ rệt nồng độ bilirubin toàn phần máu chuột so với lơ mơ hình (p < 0,001) * Ảnh hưởng Vismisco đến số đông cầm máu: Bảng 3.10 Ảnh hưởng Vismisco lên thời gian prothrombin (PT), thời gian thromboplastin phần hoạt hoá (APTT) hàm lượng fibrinogen huyết chuột nhắt mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 Lô nghiên cứu (n = 11) Prothrombin (s) APTT (s) Fibrinogen (g/L) Lô1: Chứng sinh học 12,54 ± 0,32 22,20 ± 0,48 1,52 ± 0,07 Lơ 2: Mơ hình 13,54 ± 0,39*** 23,07 ± 0,73** 0,95 ± 0,06*** Lô 3: Silymarin 12,53 ± 0,21 22,22 ± 0,46ΔΔ 1,42 ± 0,06ΔΔΔ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 12,32 ± 0,42 21,94 ± 0,58ΔΔ 1,47 ± 0,12ΔΔΔ Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 12,45 ± 0,24 21,74 ± 0,37ΔΔΔ 1,38 ± 0,10ΔΔΔ ** *** Chú thích: p < 0,01; p < 0,001 so với lơ chứng sinh học ΔΔ p < 0,01; ΔΔΔ p < 0,001 so với lơ mơ hình (Student’t-test) Kết bảng 3.10 cho thấy: - Ở lơ mơ hình: Thời gian prothrombin, thời gian thromboplastin phần hoạt hoá (APTT) kéo dài rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng (p < 0,01; p < 0,001) hàm lượng fibrinogen giảm rõ rệt so với lô chứng (p < 0,001) - Lô uống Silymarin Vismisco hai liều không ảnh hưởng đến Thời gian prothrombin, thời gian thromboplastin phần hoạt hoá (APTT) hàm lượng fibrinogen so với lô chứng 15 - Lô uống Silymarin Vismisco hai liều làm giảm thời gian thromboplastin phần hoạt hoá (APTT) tăng hàm lượng fibrinogen so với lô mô hình (p < 0,01; p < 0,001) * Ảnh hưởng Vismisco đến số đánh giá mức độ xơ gan gan chuột: Bảng 3.11 Ảnh hưởng Vismisco lên thay đổi hàm lượng Hydroxyprolin dịch đồng thể gan chuột nhắt mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 Hàm lượng hydroxyprolin (µg Lơ nghiên cứu (n = 11) Hyp/1g mô tươi) Lô1: Chứng sinh học 221,95 ± 8,82 Lơ 2: Mơ hình 340,26 ± 37,45*** Lô 3: Silymarin 140mg/kg 193,47 ± 13,05ΔΔΔ Lô 4: Vismisco liều 0,6g/kg 220,54 ± 29,02 ΔΔΔ Lô 5: Vismisco liều 1,8g/kg 205,14 ± 11,41ΔΔΔ *** ΔΔΔ p < 0,001 so với lô chứng sinh học; p < 0,001 so với lơ mơ hình Kết bảng 3.11 cho thấy CCl4 làm gia tăng rõ rệt lượng hydroxyprolin lô mơ hình so với lơ chứng sinh học Lơ ́ ng silymarin và Vismisco hai liều làm giảm lượng hydroxyprolin với khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,001) * Ả nh hưởng Vismisco lên hình ảnh mô bệnh học gan chuột: Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng Vismisco đến mơ bệnh học gan chuột mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 Biểu đồ cho thấy, lơ mơ hình có mức độ xơ hóa gan hình ảnh vi thể với 67% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố bắc cầu (khoảng cửa-khoảng cửa khoảng cửa-trung tâm) (3 điểm) 33% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố khoảng cửa rộng (1 điểm) Silymarin cải thiện tốt mức độ xơ hóa gan hình ảnh vi thể với 33% mẫu bệnh phẩm khơng xơ hố (0 điểm) 67% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố khoảng cửa rộng (1 điểm) Vismisco cải thiện rõ rệt mức độ xơ hóa gan hình ảnh vi thể, cụ thể 67% mẫu bệnh phẩm lơ uống Vismisco khơng có hình ảnh xơ hóa gan (0 điểm) 33% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố khoảng cửa rộng (1 điểm) 16 3.2.2.2 Tác dụng chống oxy hóa Vismisco Bảng 3.12 Ảnh hưởng Vismisco lên hàm lượng MDA dịch đồng thể gan chuột nhắt mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 Lơ nghiên cứu (n = 11) Hàm lượng MDA (nmol/g gan) Lô1: Chứng sinh học 8,98 ± 0,59 Lơ 2: Mơ hình 10,27 ± 1,05*** Lô 3: Silymarin 140mg/kg 9,10 ± 0,75 ΔΔΔ Lô 4: Vismisco liều 0,6g/kg 9,43 ± 0,66 ΔΔΔ Lô 5: Vismisco liều 1,8g/kg 8,73 ± 0,69 ΔΔΔ *** p < 0,001 so với lô chứng sinh học; ΔΔΔ p < 0,001 so với lơ mơ hình Kết bảng 3.12 cho thấy: - Hàm lượng MDA lơ mơ hình gây độc CCl4 tăng cao rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,001) - Hàm lượng MDA lô chuột uống Silymarin uống Vismisco liều giảm rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,001) Bảng 3.13 Ảnh hưởng Vismisco lên thay đổi hoạt độ SOD, GPx huyết chuột nhắt mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 Lô nghiên cứu (n = 11) Hoạt độ SOD (UI/l) Hoạt độ GPx (UI/l) Lô1: Chứng sinh học 107,07 ± 4,26 9653,34 ± 136,50 Lô 2: Mô hình 21,22 ± 1,56*** 778,25 ± 87,88*** Lơ 3: Silymarin 140mg/kg 196,86 ± 8,11ΔΔΔ 5935,66 ± 308,46ΔΔΔ Lô 4: Vismisco 0,6g/kg 103,38 ± 3,88ΔΔΔ 2838,34± 243,38ΔΔΔ Lô 5: Vismisco 1,8g/kg 87,54 ± 3,07ΔΔΔ 1327,65 ± 129,95ΔΔΔ p < 0,001 so với lô chứng sinh học; ΔΔΔ p < 0,001 so với lơ mơ hình Kết bảng 3.13 cho thấy: - Hoa ̣t đô ̣ SOD và GPx hồ ng cầ u của chuô ̣t lô mô hình giả m rõ rê ̣t có ý nghiã so với lô chứng (p < 0,001) - Lô uố ng Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày có hoa ̣t đô ̣ SOD tương đương với lô chứng tăng cao so với lô mô hình Hoạt độ GPx hờ ng cầ u chuột lơ tăng cao so với lơ mơ hình (p < 0,001) - Lô uố ng Vismisco liều 1,8g/kg/ngày có hoa ̣t đô ̣ SOD GPx hồ ng cầ u tăng cao so với lơ mơ hình (p < 0,001) *** 17 3.2.3 Nghiên cứu tác dụng chống viêm Vismisco 3.2.3.1 Tác dụng chống viêm cấp Vismisco * Trên mơ hình gây phù lòng bàn chân chuột cố ng trắ ng carrageenin Bảng 3.14 Tác dụng chống viêm cấp Vismisco mơ hình gây phù lòng bàn chân chuột cố ng trắ ng carrageenin Sau (V2) Sau (V4) Sau (V4) % % Lô nghiên cứu % giảm Độ phù giảm Độ phù giảm Độ phù (n = 10) phù so (%) phù so (%) phù so (%) chứng chứng chứng 58,66 ± 61,61 ± 67,00 ± Lô 1: Nước cất 14,21 15,22 19,01 32,00 ± 52,00 ± 58,00 ± Lô 2: ↓ ↓ ↓ 45,28 Aspirin 10,19** 15,60 12,84 16,24 13,1 Lô 3: Vismisco 66,00 ± ↑ 66,00 ± ↑ 68,00 ± ↑ 0,4g /kg 16,19ΔΔ 11,86 15,47 7,8 17,98 2,06 Lô 4: Vismisco 53,00 ± 60,00 ± 55,00 ± ↓ ↓ ↓ 1,2g/kg 13,15ΔΔ 9,36 13,93 8,87 2,52 17,59 *** p < 0,001 so với lô chứng sinh học; ΔΔp < 0,01 so với lô mô hình Số liệu bảng 3.14 cho thấ y: - Ta ̣i thời điể m giờ sau gây viêm: Lô Vismisco liề u 1,2g/kg có tác du ̣ng ức chế phản ứng phù 8,87% so với lô chứng, có xu hướng là m giả m mức đô ̣ tăng thể tích chân chuô ̣t - Ta ̣i thời điể m giờ sau gây viêm: Không có sự khác biê ̣t về mức đô ̣ tăng thể tích chân chuô ̣t ở các lô Lô uố ng Vismisco liề u 1,2g/kg có tác du ̣ng ức chế phản ứng phù 2,52%, lô uố ng Aspirin 16,24% so với lô chứng - Ta ̣i thời điể m giờ sau gây viêm: Không có sự khá c biê ̣t về mức độ tăng thể tích chân chuô ̣t ở các lô Lô uố ng Vismisco liề u 1,2g/kg có tác du ̣ng ức chế phả n ứng phù ma ̣nh nhấ t (17,59%) * Trên mô hình gây viêm màng bụng chuột cống carragenin Bảng 3.15 Ảnh hưởng Vismisco lên thể tích dịch rỉ viêm, số lượng bạch cầu hàm lượng protein dịch rỉ viêm Lơ nghiên cứu Thể tích dịch rỉ Số lượng bạch Hàm lượng (n = 10) viêm (mL) cầu (109/L) protein (mg/dL) Lô (Chứng sinh học) 4,01  1,19 23,74  9,23 3,66  0,21 *** * Lô 2: Aspirin 200mg/kg 2,00  0,62 16,96  4,44 3,45  0,33 Lô 3: Vismisco 0,4g/kg 4,73  1,58 ΔΔΔ 11,89  4,56Δ 3,97  0,19ΔΔ Lô 4: Vismisco 1,2g/kg 4,40  1,42ΔΔΔ 10,85  3,74ΔΔ 3,78  0,22Δ Δ Chú thích: * p < 0,05; *** p < 0,001 so với lô chứng sinh học p < 0,05; ΔΔp < 0,01; ΔΔΔp < 0,001 so với lô thuốc đối chứng (Student’t-test) Kế t quả ở bảng 3.15 cho thấ y: 18 - Về thể tić h dich ̣ rỉ viêm: lô uố ng Vismisco không có tác du ̣ng làm giảm thể tić h dich ̣ rỉ viêm, nhiên không có sự khác biê ̣t so với lô chứng - Về số lươ ̣ng ba ̣ch cầ u dich ̣ rỉ viêm: Vismisco có tác du ̣ng là m giả m rõ rê ̣t số lươ ̣ng ba ̣ch cầ u so với lô uố ng Aspirin và lô chứng (p < 0,05) Tác du ̣ng nà y ở cả liề u Vismisco là tương đương - Về hà m lươ ̣ng protein dich ̣ rỉ viêm: lô uố ng Vismisco không có tác du ̣ng là m giả m hà m lươ ̣ng protein dich ̣ rỉ viêm 3.2.3.2 Tác dụng chống viêm mạn Vismisco chuột nhắt Bảng 3.16 Trọng lượng trung bình u hạt thực nghiệm Trọng lượng Tỉ lệ % giảm trọng Lô nghiên cứu (n = 12) u hạt (mg) lượng u ̣t Lô 1: Chứng sinh học 24,92 ± 6,68 Lô 2: Methyl prednisolon 8mg/kg 19,03 ± 6,83* 23,61 Lô 3: Vismisco 0,6g/kg 19,92 ± 4,77* 20,07 Lô 4: Vismisco 1,8g/kg 15,18 ± 4,51*** 39,10 Chú thích: *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 so với lô chứng sinh học Kết bảng 3.16 cho thấy: Tro ̣ng lươ ̣ng u ̣t sau sấy khô ở lô uố ng Vismisco và Methyl prednisolon không có sự khác biê ̣t đề u giảm so với lô chứng Lô uố ng Vismisco liề u 1,8g/kg có tỉ lê ̣ giảm tro ̣ng lươ ̣ng u ̣t 39,10% so với lô chứng (p < 0,001) Bảng 3.17 Ảnh hưởng của Vismisco lên nồng độ TNF-α huyết của chuô ̣t nhắt mô hình gây viêm ma ̣n thực nghiê ̣m Nồng độ TNF-α huyết Lô nghiên cứu (n = 12) (pg/mL) Lô 1: Chứng sinh học 104,03 ± 17,28 Lô 2: Methyl prednisolon 8mg/kg 89,66 ± 12,33* Lô 3: Vismisco 0,6g/kg 82,62 ± 9,56* Lô 4: Vismisco 1,8g/kg 90,76 ± 10,64* Chú thích: * p < 0,05 so với lô chứng sinh học (Student’t-test) Số liệu bảng 3.17 cho thấy: Vismisco hai liều Methylprednisolon có tác dụng làm giảm nồng độ TNF-α cách rõ rệt so với lô chứng CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Độc tính Vismisco động vật thực nghiệm 4.1.1 Độc tính cấp Vismisco theo đường uống chuột nhắt trắng Cho chuột nhắt trắng uống Vismisco theo liều tăng dần từ 144 g/kg/24 (gấp 240 lần liều có tác dụng tương đương người) đến liều cao (nồng độ thể tích tối đa cho phép) 360 g/kg/24 (gấp 600 lần liều có tác dụng tương đương người) không thấy dấu hiệu bất thường nào chuột và không có chuô ̣t nào chế t Vì vâ ̣y, chưa xác định độc tính cấp chưa tính LD50 Vismisco chuột nhắt trắng theo đường uống 19 Kết nghiên cứu cho thấy Vismisco có độ an tồn cao 4.1.2 Độc tính bán trường diễn Vismisco theo đường uống Trong nghiên cứu độc tính bán trường diễn, Vismisco cho chuột cống trắng uống với mức liều: liều tương đương 0,4 g/kg/ngày (là liều có tác dụng tương đương liều dùng người) liều gấp lần (1,2 g/kg/ngày), uống liên tục tuần Các số đánh giá thực theo hướng dẫn Tổ chức Y tế giới Bộ Y tế Việt Nam Kết nghiên cứu cho thấy tất số theo dõi lô uống Vismisco khơng có khác biệt so với lơ chứng, chứng tỏ Vismisco khơng gây độc tính bán trường diễn chuột cống trắng uống liều tuần Với kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn Vismisco, phân loại Vismisco vào nhóm thuốc khơng có độc tính sử dụng liều lặp lại dài ngày (8 tuần) 4.2 Tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống oxy hóa chống viêm Vismisco động vật thực nghiệm 4.2.1 Tác dụng chống tổn thương gan cấp Vismisco 4.2.1.1 Tác dụng bảo vệ gan của Vismisco chuột nhắ t trắ ng bị gây tổn thương gan paracetamol - Ở lô mô hình, PAR với liều 400mg/kg dùng đường uống chuột nhắt trắng, sau ngày dùng thuốc làm tăng hoạt độ ALT 197,8% AST 168,12% so với lô chứng (bảng 3.2) Điều chứng tỏ PAR gây tổn thương tế bào gan cấp, làm giải phóng enzym vào máu - Dùng Vismisco ngày trước gây độc có tác dụng làm giảm rõ rệt hoạt độ ALT AST, cụ thể: liều 0,6 g/kg/ngày làm giảm 14,6% hoa ̣t đô ̣ AST (p < 0,05) và 39,4% hoa ̣t đô ̣ ALT (p < 0,001) so với lơ mơ hình Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày làm giảm 24,3% hoa ̣t đô ̣ AST (p < 0,001) và 44,9% hoa ̣t đô ̣ ALT (p < 0,001) so với lơ mơ hình Tác dụng Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày hoạt độ AST, ALT tương đương với silymarin, chất bảo vệ gan biết rõ Đă ̣c biê ̣t, Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày có xu hướng giảm hoạt độ AST, ALT mạnh liều 0,6 g/kg/ngày và ma ̣nh so với lô dùng silymarin (p < 0,05) MDA số để đánh giá tác dụng bảo vệ gan và chố ng oxy hóa thuốc thử Kết nghiên cứu cho thấy Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày uống liên tục ngày làm giảm hàm lượng MDA dịch đồng thể gan (p < 0,05) so với lơ mơ hình Tác dụng Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày nồ ng đô ̣ MDA tương đương với silymarin - Quan sát mô bệnh học cho thấy kết tương ứng với sự biến đổi enzym gan Ở lơ mơ hình gây độc không dùng thuốc, quan sát đại thể thấy gan nhạt màu, phù nề , sung huyết, bề mặt không nhẵn, có chỗ bị hoại tử bạc màu, có nhiều chấm xuất huyết Uống Vismisco silymarin làm hạn chế rõ rệt mức độ tổn thương gan PAR liều cao gây hình ảnh đại 20 thể vi thể Ở lô dùng Vismisco hoă ̣c thuốc chuẩn silymarin, hình ảnh đại thể vi thể gan không thay đổi so với lô chứng sinh học - Như vâ ̣y, Vismisco có tác dụng bảo vê ̣ gan gây đô ̣c bằ ng PAR liều cao, tác dụng liều Vismisco đã dùng tương đương và tương đương với silymarin - loa ̣i thuố c chứng minh có tác dụng bảo vệ gan tốt thực nghiệm lâm sàng 4.2.1.2 Tác dụng phục hồ i tổ n thương tế bào gan của Vismisco chuột nhắ t trắ ng Kết nghiên cứu cho thấy sau ngày bị gây độc uống PAR liều 400mg/kg, chuột nhắt trắng lơ mơ hình có tăng đáng kể hoạt độ transaminase huyết (AST tăng 363,6%, ALT tăng 670,1%) hàm lượng MDA dịch đồng thể gan (tăng 30,1%) so với lô chứng sinh học Mức độ tăng ALT cao gấp 1,84 lần mức độ tăng AST phản ánh tổn thương tế bào gan mức độ vừa phải Sau ngày điều trị, hoạt độ AST ALT huyết lô uống silymarin Vismisco liều cao giảm có ý nghĩa so với lơ mơ hình (p < 0,001), Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày có tác dụng làm hoạt độ AST ALT huyết so với lơ mơ hình nhiên sự khác biê ̣t chưa có ý nghiã thố ng kê Tại thời điểm sau ngày gây độc, PAR 400 mg/kg, hoạt độ AST ALT huyết lô bị gây độc giảm so với thời điểm ngày, nhiên cao rõ rệt so với lô chứng sinh học Kết phù hợp với diễn biến lâm sàng thời điểm ngày, thời điểm bắt đầu giai đoạn tự hồi phục Như mơ hình đáng tin cậy để nghiên cứu tác dụng làm tăng phục hồi tổn thương gan thuốc thử Định lượng MDA dịch đồng thể gan đánh giá gián tiếp chế gây tổn thương gan tác nhân gây bệnh chế bảo vệ, phục hồi tổn thương gan thuốc cần nghiên cứu Kết sau ngày ngày uống thuốc, nồng độ MDA lô bị gây độc PAR cao rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,05) Nồng độ MDA lô uống Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày giảm so với lơ mơ hình, đặc biệt lơ uống Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày, nồng độ MDA giảm với khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,05) Tại thời điểm sau ngày, ngày dùng PAR, Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có hoạt độ AST ALT giảm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình; có hàm lượng MDA thấp có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Như qua số AST, ALT, MDA, sơ kết luận Vismisco góp phần làm tăng phục hồi tổn thương gan thơng qua chế chống lại q trình oxy hóa Quan sát mơ bệnh học cho thấy kết tương ứng với sự biến đổi enzym gan Kết cho thấy Vismisco có tác dụng làm tăng phục hổi tổn thương gan, thể việc làm giảm hoạt độ ALT huyết - enzym tăng sớm đặc hiệu cho gan AST gan bị tổn thương làm giảm tổn thương mô bệnh học gan Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan Vismisco mơ hình gây tổn 21 thương gan paracetamol thực nghiệm So sánh với kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan Vismisco thấy tác dụng bảo vệ gan thể rõ tác dụng phục hồi tổn thương gan Kế t quả nghiên cứu cũng phù hơp̣ với số tác giả nghiên cứu thuốc điều trị bệnh gan cho thấy tác dụng bảo vệ gan thường thể rõ tác dụng phục hồi tổn thương gan 4.2.2 Tác dụng chống viêm gan mạn chống oxy hóa Vismisco chuô ̣t nhắ t trắ ng 4.2.2.1 Ảnh hưởng Vismisco đến trọng lượng gan chuột nhắt trắng Kết nghiên cứu cho thấy Vismisco có tác dụng làm giảm trọng lượng gan chuột mơ hình gây viêm gan ma ̣n CCl4 chuột nhắt trắng, tác dụng tương đương với tác dụng silymarin 4.2.2.2 Ả nh hưởng Vismisco đế n mức độ tổn thương gan chức gan chuột mơ hình gây viêm gan mạn thực nghiệm CCl4 * Về mức độ tổn thương gan: Kết cho thấy sau 19 tuần gây độc CCl4, ở lô mơ hình lơ dùng thuốc hoạt độ AST, ALT huyết chuột tăng cao rõ rệt so với lô chứng (p < 0,001) Lô uố ng silymarin và lô uố ng Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngày và liề u 1,8 g/kg/ngày có hoạt độ AST, ALT huyế t giảm rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê lơ uống Vismisco với lô uố ng Silymarin (p > 0,05) Như vâ ̣y có thể nói Vismisco ở cả hai liề u có tác du ̣ng là m giả m tổ n thương tế bào gan thông qua là m giả m hoa ̣t đô ̣ AST và ALT tương đương với silymarin * Đánh giá chức gan: - Nồng độ albumin máu chuột lơ mơ hình gây độc CCl giảm rõ rệt so với lô chứng Nồng độ albumin huyế t chuột lô uống silymarin và Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngà y và 1,8 g/kg/ngày cao có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình (p < 0,001) và khơng có sự khác biê ̣t so với lô chứng Từ kết nghiên cứu cho thấy Vismisco có tác dụng hạn chế suy giảm chức tổng hợp albumin gan - Nồng độ cholesterol máu chuột lơ mơ hình giảm rõ rệt với lơ chứng Lơ uống Vismisco silymarin có nồng độ cholesterol huyết cao rõ rệt so với lơ gây mơ hình (p < 0,05) và không có sự khác biệt so với lơ chứng Như vậy, Vismisco có tác dụng bảo vệ gan tương tự silymarin, hạn chế suy giảm chức tổng hợp cholesterol gan - Nồng độ bilirubin tồn phần lơ mơ hình tăng cao rõ rệt so với lô chứng (p < 0,001) Tất lô uống Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngày và liề u 1,8 g/kg/ngày silymarin làm giảm rõ rệt nồng độ bilirubin toàn phần máu chuột so với lơ mơ hình (p < 0,001) Kết cho thấy Vismisco có tác dụng bảo vệ gan, hạn chế suy giảm chức gan mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 tác dụng tốt hoă ̣c tương đương so với lô dùng silymarin 22 4.2.2.3 Ảnh hưởng Vismisco đế n mức độ chỉ số đông và cầ m máu Trong nghiên cứu này, tiế n hành đánh giá chức tổ ng hơ p̣ các yế u tố đông máu thông qua đánh giá thời gian PT, APTT và hà mlươ ̣ng fibrinogen Kết cho thấy, lơ mơ hình: PT, APTT kéo dài rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng hàm lượng fibrinogen giảm rõ rệt so với lô chứng Ở lô uống Silymarin Vismisco liều không ảnh hưởng đến PT, APTT hàm lượng fibrinogen so với lô chứng Lô uống Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngày và liề u 1,8 g/kg/ngày làm giảm thời gian APTT tăng hàm lượng fibrinogen so với lơ mơ hình (p < 0,01; p < 0,001) Từ kế t quả cho thấ y Vismisco có tác du ̣ng làm ̣n chế xơ hóa gan không ảnh hưởng đế n quá trình tổ ng hơ ̣p các yế u tố đông máu 4.2.2.4 Ả nh hưởng Vismisco đế n số đánh giá mức độ xơ gan Ảnh hưởng Vismisco lên số hydroxyprolin Thông qua định lượng hydroxyprolin đánh giá mức độ xơ hóa gan lâm sàng thực nghiệm Kết cho thấy hàm lượng hydroxyprolin gan chuột lơ mơ hình tăng cao so với lơ chứng (p < 0,001) Như mơ hình gây độc CCl4 19 tuần gây xơ hóa gan chuột thực nghiệm Hàm lượng hydroxyprolin gan chuột lô dùng Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngày và liề u 1,8 g/kg/ngày giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Khơng có khác biệt hàm lượng hydroxyprolin lô dùng Vismisco với lô dùng silymarin Ảnh hưởng Vismisco lên hình thái đại thể vi thể gan Kết nghiên cứu cho thấy lơ mơ hình có mức độ xơ hóa gan hình ảnh vi thể với 67% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố bắc cầu (khoảng cửakhoảng cửa khoảng cửa-trung tâm) (3 điểm) 33% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố khoảng cửa rộng (1 điểm) Silymarin cải thiện tốt mức độ xơ hóa gan hình ảnh vi thể với 33% mẫu bệnh phẩm khơng xơ hố (0 điểm) 67% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố khoảng cửa rộng (1 điểm) Vismisco cải thiện rõ rệt mức độ xơ hóa gan hình ảnh vi thể, cụ thể 67% mẫu bệnh phẩm lơ uống Vismisco khơng có hình ảnh xơ hóa gan (0 điểm) 33% mẫu bệnh phẩm có hình ảnh xơ hố khoảng cửa rộng (1 điểm) Từ kết cho thấy Vismisco liề u 0,6 g/kg/ngày và liề u 1,8 g/kg/ngày có tác dụng hạn chế xơ hóa gan gây độc gan dài ngày CCl4 Kết phù hợp với bàn luận trước tác dụng rõ rệt Vismisco lên chức gan 4.2.2.6 Ảnh hưởng Vismisco lên số chống oxy hóa Kế t quả nghiên cứu cho thấ y, CCl4 làm tăng hàm lượng MDA rõ rê ̣t so với lô chứng, hàm lượng MDA lô chuột uống Silymarin uống Vismisco liều giảm rõ rệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Trong nghiên cứu cho thấy Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày có hoa ̣t đô ̣ SOD tương đương với lô chứng tăng cao so với lơ mơ hình, hoạt độ GPx tăng cao so với lơ mơ hình; lơ uố ng Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày có hoa ̣t đô ̣ SOD tăng cao so với lơ mơ hình, hoạt độ GPx tăng cao so với lơ mơ hình Như 23 vậy, chứa flavonoid thành phần vỏ hạt đậu xanh, làm tăng SOD, GPx nên Vismisco làm giảm q trình peroxy hóa lipid, giảm gốc tự sinh CCl nên bảo vệ màng tế bào gan Tác dụng thể lô uống Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày rõ so với lô uống Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày 4.2.3 Tác dụng chống viêm của Vismisco đô ̣ng vâ ̣t thực nghiê ̣m 4.2.3.1 Tác dụng chống viêm cấp của Vismisco * Tác dụng chống viêm cấp của Vismisco mơ hình gây phù lòng bàn chân chuột cớ ng trắ ng carrageenin Kết nghiên cứu cho thấy: Vismisco liều 0,4 g/kg/ngày chưa có tác dụng làm giảm độ phù chân chuột mơ hình gây phù lòng bàn chân chuô ̣t bằ ng carrageenin; Vismisco liều 1,2 g/kg/ngày: thời điểm sau gây viêm có xu hướng là m giả m mức đô ̣ tăng thể tić h chân chuô ̣t có tác du ̣ng ức chế phản ứng phù 8,87% so với lô chứng, ta ̣i thời điể m giờ sau gây viêm có tác du ̣ng ức chế phả n ứng phù 17,59% Như vậy, Vismisco hai liều chưa thể hiê ̣n rõ tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù lòng bàn chân ch ̣t bằ ng carrageenin * Tác dụng chống viêm cấp của Vismisco mơ hình gây viêm màng bụng carrageenin Kết nghiên cứu cho thấy Vismisco liều 0,4 g/kg/ngày liều 1,2 g/kg/ngày không làm thay đổi thể tić h dich ̣ rỉ viêm hà m lươṇ g protein dich ̣ rỉ viêm, nhiên có tác du ̣ng là m giả m rõ rê ̣t số lươṇ g ba ̣ch cầ u dịch rỉ viêm so với lô uố ng Aspirin và lô chứng (p < 0,05) Tác du ̣ng này ở cả liề u Vimisco là tương đương Từ kết nghiên cứu cho thấy Vismisco có tác dụng chống viêm cấp chuột cống trắng với chế liên quan đến trình ức chế di chuyển bạch cầu vào mô viêm thông qua việc ức chế sản xuất chất trung gian hóa học gây viêm NO, PG E2, IL8, IL-12 hay histamin 5hydroxytryptamin làm giảm q trình hóa ứng động bạch cầu 4.2.3.2 Tác dụng chống viêm mạn của Vismisco chuột nhắ t trắ ng Kết nghiên cứu cho thấy Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày làm giảm rõ rệt trọng lượng u hạt, Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày có tác dụng chống viêm mạn rõ rệt thể qua tác dụng làm giảm trọng lượng khối u hạt 39,10% so với lô chứng sinh học (p < 0,001) Đặc biệt, mức giảm trọng lượng u hạt Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày cao so với lô chứng dương dùng Methylprednisolon, kết cho thấy tác dụng chống viêm mạn Vismisco liều 1,8 g/kg/ngày hiệu dùng Methylprednisolon Vismisco liều 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày thể tác dụng chống viêm mạn rõ rệt thông qua tác dụng ức chế TNF-α (giảm nồng độ TNF-α huyết chuột so với lô chứng) 24 KẾT LUẬN Độc tính cấp độc tính bán trường diễn Vismisco 1.1 Độc tính cấp Vismisco Chưa xác định độc tính cấp Vismisco chuột nhắt trắng theo đường uống cho chuột uống Vismisco đến liều tương đương với liều 360 g/kg thể trọng chuột/ngày 1.2 Độc tính bán trường diễn Vismisco Vismisco đến liều tương đương 0,4 g/kg/ngày 1,2 g/kg/ngày, uống liên tục tuần không gây độc tính bán trường diễn chuột cống trắng thực nghiệm Tác dụng chống tổn thương gan cấp, chống viêm gan ma ̣n, chống oxy hóa chống viêm Vismisco động vật thực nghiệm 2.1 Tác dụng chống tổn thương gan cấp Vismisco - Tác dụng bảo vệ gan: Vismisco với liều tương đương 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có tác dụng bảo vệ gan chuột nhắt trắng gây độc paracetamol 400 mg/kg - Tác dụng phục hồi tổn thương tế bào gan: Vismisco với liều tương đương 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có tác dụng phục hồi tổn thương tế bào gan chuột nhắt trắng gây độc paracetamol 400 mg/kg 2.2 Tác dụng chống viêm gan ma ̣n chống oxy hóa Vismisco Vismisco với liều tương đương 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có xu hướng làm hạn chế tổn thương xơ hóa gan hạn chế q trình oxy hóa chuột nhắt trắng gây độc CCl4 dài ngày 2.3 Tác dụng chống viêm Vismisco - Tác dụng chống viêm cấp: Vismisco với liều tương đương 0,4 g/kg/ngày 1,2 g/kg/ngày có có tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột gây viêm màng bụng chuột cống trắng thực nghiệm - Tác dụng chống viêm mạn: Vismisco với liều tương đương 0,6 g/kg/ngày 1,8 g/kg/ngày có tác dụng chống viêm mạn rõ rệt mơ hình gây viêm mạn thực nghiệm chuột nhắt trắng KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu độc tính tác dụng bảo vệ gan Vismisco thực nghiệm, đề xuất số kiến nghị sau: - Chỉ cần dùng liều tương đương liều dự kiến dùng người, không cần dùng liều cao điều trị viêm gan cấp - Tiế p tu ̣c các bước nghiên cứu tiế p theo để đánh giá hiê ̣u quả lâm sàng của Vismisco ... kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan Vismisco mơ hình gây tổn 21 thương gan paracetamol thực nghiệm So sánh với kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan Vismisco thấy tác dụng bảo vệ gan thể rõ tác dụng. .. thương gan cấp, chống viêm gan mạn, chống viêm chống oxy hóa Vismisco - Nghiên cứu tác dụng chống tổn thương gan cấp (tác dụng bảo vệ gan phục hồi tổn thương gan) Vismisco - Nghiên cứu tác dụng. .. chống viêm gan mạn, tác dụng chống oxy hóa Vismisco - Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp viêm mạn tính Vismisco Những đóng góp luận án Luận án nghiên cứu độc tính tác dụng chống tổn thương gan cấp,