TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO TOÀN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L ) ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022[.]
TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO TỒN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L.) ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO TỒN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L.) ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022 iii TĨM TẮT Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học – Năm học: 2021 – 2022 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO TỒN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L.) Giảng viên hướng dẫn: Mở đầu đặt vấn đề: Bìm ba (BBR) – Merremia tridentata (L.) thuộc họ Khoai lang - Convolvulaceae Phân bố rộng từ Nam Trung Bộ đến Tây Nam Bộ Cây có vị đắng, se Ở Ấn Độ, rễ sắc uống dùng chữa thấp khớp, liệt nửa người, trĩ, sưng phù rối loạn đường tiết niệu Ở Campuchia, nhân dân số nơi sử dụng toàn để chế loại thuốc dùng trị đau mẩy Ở Việt Nam, nhân dân sử dụng BBR phối hợp với vị thuốc khác dùng chữa sốt rét chữa ban xuất huyết Thành phần hóa học phần mặt đất BBR flavonoid, polyphenol, saponin Các cơng trình nghiên cứu giới cho thấy BBR có số tác dụng sinh học chống oxy hóa, giảm đau, kháng viêm, làm lành vết thương Các tác dụng có chủ yếu nhờ nhóm flavonoid Đề tài: “Nghiên cứu độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao tồn phần Bìm ba (Merremia tridentata L.)” thực với mong muốn làm rõ tính an toàn BBR thể sống để tạo sở cho việc ứng dụng cao toàn phần BBR định hướng hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường Đề tài thực với mục tiêu sau: - Chiết cao từ dược liệu BBR; - Đánh giá số tiêu chuẩn cao BBR; - Xác định độc tính cấp cao BBR chuột nhắt; - Xác định độc tính bán trường diễn cao BBR chuột nhắt Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: Toàn thân mặt đất BBR tươi thu hái vào tháng năm 2022 xã Ân Hảo Đơng, huyện Hồi Ân, tỉnh Bình Định iv Cây mơn Thực vật dược định danh với tên khoa học Merremia tridentata L thuộc họ Bìm bìm (Convolvulaceae) Chuột nhắt trắng, giống đực cái, chủng Swiss albino, trọng lượng 20-25 g, tình trạng khỏe mạnh đủ tiêu chuẩn để làm nghiên cứu, có nguồn gốc từ Viện Vắc xin Sinh phẩm y tế Pasteur Nha Trang (Việt Nam) Phương pháp nghiên cứu: Chiết cao từ dược liệu BBR Bột dược liệu chiết với nước phương pháp chiết nóng nhiệt độ 100 ºC, 20 phút chiết lần, lẫn với 5000 ml nước Gom dịch chiết, cô cách thủy 60 ºC thu cao đặc Đánh giá số tiêu chuẩn cao BBR Cảm quan Độ ẩm Xác định cân sấy ẩm Ohaus Định tính Phương pháp: TLC Định lượng Phương pháp: HPLC Xác định độc tính cấp cao BBR chuột nhắt Cho 12 chuột (50% đực, 50% cái, thực lần) nhịn đói 12 trước cho uống thuốc liều tối đa qua đường uống (thể tích cho uống tối đa 0,2 ml/10 g) Theo dõi ghi nhận trọng lượng thể chuột, tình trạng hoạt động, biểu hành vi, khả tiêu thụ thức ăn, nước uống, tình trạng phân, nước tiểu, số lượng chuột chết vòng 72 đầu sau dùng thuốc Nếu sau 72 giờ, chuột khơng có dấu hiệu bất thường chết, tiếp tục theo dõi 14 ngày Xác định độc tính bán trường diễn cao BBR chuột nhắt Chia chuột thử nghiệm thành lô, lơ 8-10 (50% đực, 50% cái), có trọng lượng ban đầu tương đương 20 ± g Cho chuột uống thuốc ngày vào định liên tục 28 ngày v Nhóm chứng uống nước cất; nhóm thử uống liều thấp, liều trung bình, liều cao cao chiết Thể tích cho chuột uống 0,1 ml/10 g thể trọng Lô (liều thấp), cho chuột uống liều BBR 200 mg/1kg thể trọng chuột liều có tác dụng dược lý người Lơ (liều trung bình), cho chuột uống liều BBR 15000 mg/1kg thể trọng chuột, liều gấp 75 lần so với liều trung bình Là liều hai mức liều thấp cao Lô (liều cao), cho chuột uống liều 30000 mg/kg thể trọng chuột, liều gấp 150 lần so với liều thấp Là mức liều giới hạn cao mà chuột uống Sử dụng phần mềm thống kê Minitab 19 để xử lý số liệu So sánh sự khác biệt thống kê nhóm Anova- test Mann-Whitney với độ tin cậy 95% Các kết biểu diễn dạng giá trị trung bình ± SE Kết quả: Chiết cao từ dược liệu BBR Đã điều chế 80,4 g cao khô để làm nghiên cứu, cao điều chế đạt yêu cầu chất lượng mong muốn: cao đặc; màu nâu, có mùi thơm có độ ẩm trung bình 7,77% < 20% Đánh giá số tiêu chuẩn cao BBR Cảm quan: cao đặc, màu nâu, có mùi thơm đặc trưng Độ ẩm trung bình: 7,77% < 20% Hiệu suất chiết: 16,26% Định tính phương pháp SKLM: dương tính với apigenin, luteolin, quercitrin, apigertrin cynarosid Định lượng: 0,068% ≥ 0,04% cynarosid Xác định độc tính cấp cao tồn phần BBR chuột nhắt Cao toàn phần BBR sử dụng thử nghiệm độc tính cấp có độ an tồn cao có Dmax = 30000 mg/kg (300 mg/10 g) Xác định độc tính bán trường diễn cao tồn phần BBR chuột nhắt Ở liều thử liều thấp 200 mg/kg, liều trung bình 15000 mg/kg liều cao 30000 mg/kg, không ảnh hưởng đến sự phát triển trọng lượng chuột Không ảnh hưởng đến hầu hết số huyết học (WBC, RBC, PLT, Hb HCT), trừ liều thấp 200 vi mg/kg có sự tăng PLT liều 15000 mg/kg có sự tăng PLT Hb Khơng ảnh hưởng đến hầu hết số hóa sinh (AST, ALT, creatinin, glucose, cholesterol toàn phần, triglycerid, protein toàn phần, bilirubin toàn phần), trừ liều cao 30000 mg/kg có sự tăng protein tồn phần Khơng quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan tim, phổi, gan, lách, tụy, thận hệ thống tiêu hóa chuột sau 28 ngày dùng thuốc thử nghiệm Quan sát vi thể mô gan, thận nhìn chung mơ gan lơ BBR 200 mg/kg viêm gan mạn nhẹ mô học mô thận lô BBR 30000 mg/kg viêm thận mô kẽ mức độ nhẹ Các mô cịn lại bình thường mơ học Kiến nghị: Do thời gian thực đề tài hạn chế, để tiếp tục hồn thiện hơn, chúng tơi đề nghị hướng sau: - Nghiên cứu độc tính bán trường diễn khoảng thời gian dài 60 ngày 90 ngày - Nghiên cứu độ an toàn BBR phối hợp với dược liệu khác vii MỤC LỤC TÓM TẮT iii MỤC LỤC vii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ix DANH MỤC CÁC BẢNG xi DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ, HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ xii LỜI CẢM ƠN xiii CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan dược liệu bìm ba 2.1.1 Mô tả thực vật 2.1.2 Phân bố sinh thái 2.1.3 Thành phần hóa học 2.1.4 Tác dụng dược lý 2.1.5 Tình hình nghiên cứu nước nước 2.2 tổng quan độc tính cấp 2.2.1 Mở đầu 2.2.2 Cách xác định LD50 11 2.2.3 Chuẩn bị mẫu để thử độc tính cấp 18 2.3 tổng quan độc tính bán trường diễn 24 2.3.1 Lựa chọn mơ hình thử 24 2.3.2 Một số quy định khác 32 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 3.1 đối tượng nghiên cứu 34 3.1.1 Dược liệu nghiên cứu 34 3.1.2 Động vật nghiên cứu 34 3.2 hóa chất - Trang thiết bị 34 3.2.1 Hóa chất 34 3.2.2 Trang thiết bị 35 3.3 phương pháp nghiên cứu 35 3.3.1 Chiết xuất cao dược liệu BBR 35 3.3.2 Đánh giá số tiêu chuẩn cao BBR 36 3.3.3 Xác định độc tính cấp cao BBR chuột nhắt 37 viii 3.3.4 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn cao BBR 37 3.3.5 Phương pháp xác định số huyết học, hóa sinh, đại thể vi thể 38 3.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 49 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 50 4.1 kết 50 4.1.1 Chiết xuất cao dược liệu BBR 50 4.1.2 Đánh giá số tiêu chuẩn cao BBR 50 4.1.3 Xác định độc tính cấp cao BBR chuột nhắt 52 4.1.4 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn cao BBR 53 4.1.5 Kết số huyết học, hóa sinh, đại thể vi thể 56 4.2 bàn luận 64 4.2.1 Độc tính cấp cao toàn phần BBR 64 4.2.2 Độc tính bán trường diễn cao toàn phần BBR 64 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 67 5.1 kết luận 67 5.2 Kiến Nghị 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 ix DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng anh Tiếng việt Liều chết tuyệt đối ALD absolute lethal dose ALT/ GPT Alanin – amino – transferase/glutamatpyruvate transaminase AST/GOT Aspartat amino transferase/glutamatoxaloacetat transaminase ATBS 2,2’-azino-bis-3-ethylbenzthiazoline6sulphonic acid Bìm ba BBR DMSO Dimethylsulfixid DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl Động vật thí nghiệm ĐVTN Liều có tác dụng dược lý ED Effective dose GSH Globally Harmonised Classification Hệ thống phân loại hài hòa System for Chemical Substances and toàn cầu cho chất hỗn Mixtures hợp hóa học Hb Hemoglobin Huyết sắc tố HCT Hematoric Thể tích khối hồng cầu HPLC High-performanceliquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography HPTL High performance thin layer Sắc ký lớp mỏng hiệu Chromatography cao ILD Infralethal dose Liều liều chết LD Lethal dose Liều chết LD0 Lethal dose 0% Liều lớn không gây chết vật LD100 Lethal dose 100% Liều nhỏ gây chết 100% số vật thử x LD5 Liều gây chết 5% số vật Lethal dose 5% thử LD50 Liều gây chết 50% số vật Lethal dose 50% thử (liều chết trung bình) Liều dung nạp tối đa MTD Maximum tolerated dose NaCMC Natri carboxymethylcellulose NOAEL No abserved adverse effect level OECD Organisation of Liều an toàn Econommic Tổ chức hợp tác phát triển Cooperation and Development kinh tế PLT Platelet Tiểu cầu PPAR-γ Peroxisome proliferator - activated receptor gamma QTPP Quality target product profile Hồ sơ chất lượng mục tiêu sản phẩm RBC Red blood cell Hồng cầu SKLM Sắc ký lớp mỏng T/C Cao cồn từ thân BBR T/N Cao nước từ thân BBR TI Therapeutic index Chỉ số điều trị WBC White blood cell Bạch cầu ...TRƯỜNG ĐẠI HỌC L? ??C HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO TỒN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L. ) ĐỒNG NAI,... tài: ? ?Nghiên cứu độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao tồn phần Bìm ba (Merremia tridentata L. )? ?? thực với mong muốn l? ?m rõ tính an tồn BBR thể sống để tạo sở cho việc ứng dụng cao toàn phần. .. có chủ yếu nhờ nhóm flavonoid Đề tài: ? ?Nghiên cứu độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao tồn phần Bìm ba (Merremia tridentata L. )? ?? thực với mong muốn l? ?m rõ tính an toàn BBR thể sống để tạo