Nghiên cứu độc tính cấp và độc tính bán trường diễn đường uống của viên nang CTH hỗ trợ điều trị viêm gan

Khảo sát độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của viên nang CTH trên thực nghiệm. Độc tính cấp: Chuột nhắt trắng đực, cái giống Swiss albino, nguồn từ Viện Pasteur, 6 – 7 tuần tuổi, trọng lượng 20 ± 2 g, nuôi ổn định một tuần trước khi thử nghiệm. Thể tích uống 0,2 ml/ 10g thể trọng, dùng một liều duy nhất trong một ngày trong khoảng thời gian từ 8 -9 giờ sáng. Chuột được chia lô và cho sử dụng thuốc ở các liều trong khoảng LD0 và LD100 chia theo cấp số nhân (nếu có) hoặc Dmax. Theo dõi các biểu hiện về hành vi và vận động của chuột trong vòng 72 giờ đầu sau khi dùng thuốc. Ghi chép các diễn tiến trong thời gian đó. Xác định LD50 theo phương pháp Karber – Behrens (nếu có).

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN ĐƯỜNG UỐNG CỦA VIÊN NANG CTH HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ VIÊM GAN Nguyễn Thị Anh Đào*, Phạm Huy Hùng*, Nguyễn Phương Dung* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Viêm gan tình trạng tổn thương nhu mơ gan, đặc trưng diện tế bào viêm Theo thống kê WHO (World Health Organization) tồn cầu có 1,45 triệu người tử vong viêm gan năm Hiện hướng thuốc có nguồn gốc tự nhiên Silymarin điều trị bệnh gan Viên nang cứng CTH với vai trò thực phẩm chức có tác dụng hỗ trợ điều trị bệnh lý viêm gan, tác dụng dược lý với liều 0.9 g/kg nghiên cứu thực nghiệm có tác dụng mơ hình tổn thương gan paracetamol Bài báo trình bày kết độc tính cấp độc tính bán trường diễn viên nang CTH thực nghiệm Đối tượng - Phương pháp: Khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn viên nang CTH thực nghiệm Độc tính cấp: Chuột nhắt trắng đực, giống Swiss albino, nguồn từ Viện Pasteur, – tuần tuổi, trọng lượng 20 ± g, nuôi ổn định tuần trước thử nghiệm Thể tích uống 0,2 ml/ 10g thể trọng, dùng liều ngày khoảng thời gian từ -9 sáng Chuột chia lô cho sử dụng thuốc liều khoảng LD0 LD100 chia theo cấp số nhân (nếu có) Dmax Theo dõi biểu hành vi vận động chuột vòng 72 đầu sau dùng thuốc Ghi chép diễn tiến thời gian Xác định LD50 theo phương pháp Karber – Behrens (nếu có) Độc tính bán trường diễn: Chuột thử nghiệm chia thành lô, lô 20 (50% đực, 50% cái), có trọng lượng ban đầu tương đương Mỗi ngày vào định (8 00 sáng) cho chuột uống thuốc liên tục 60 ngày: Lô chứng (n = 20): uống nước cất; Lô thử (n = 20): liều 0,9 g/kg Lô thử (n=20): Liều 1,8 g/kg Lô thử (n=20): Liều g/kg Thể tích cho chuột uống 0,1 ml/10 g thể trọng Chuột tất lô lấy máu trước thử nghiệm, sau uống thuốc 30 ngày để làm xét nghiệm công thức máu: số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, hemoglobin, hematocrit Và xác định thông số chức gan AST, ALT, thông số chức thận (creatinin, urê) Glucose máu, lipid máu Sau lấy máu vào ngày thứ 60, chuột mổ để quan sát đại thể lấy nội tạng để quan sát vi thể phân tích vi phẫu Kết quả: Xác định D max đường uống bột thuốc CTH 30 g/kg chuột nhắt trắng (tương đương 2,55 g/kg người người nặng 60 kg có hàm lượng thuốc 153 g bột thuốc) Viên nang CTH không làm thay đổi số sinh hóa: AST, ALT, creatinin máu, glucose máu, số lượng bạch cầu, hồng cầu, tiểu cầu, Hct, Hgb, cholesterol, triglycerid, HDL, acid uric máu sau chia lô cho uống tháng chuột nhắt trắng Chỉ ghi nhận triệu chứng lô g/kg tiêu phân sệt sau tuần uống thuốc Kết luận: Tìm Dmax 30 g/kg chuột, liều CTH xem có tác dụng dược lý 0,9 g/kg Liều D max gấp liều có tác dụng điều trị nhiều lần, chứng tỏ ngưỡng an toàn dùng thuốc CTH cao, khả ngộ độc thuốc thấp trường hợp dùng liều qua đường uống Sau tháng uống viên nang CTH khơng làm thay đổi số sinh hóa chuột thử nghiệm, bước đầu đánh giá tính an tồn viên nang CTH Từ khố: viên nang CTH, độc tính cấp, độc tính bán trường diễn *Khoa Y học cổ truyền – Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS.BS Nguyễn Thị Anh Đào ĐT: 0984 530 594 20 Email: ntanhdao@ump.edu.vn Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học ASTRACT ACUTE AND SEMI-CHRONIC TOXICITY OF ORAL CAPSULES CTH FOR SUPPORTING THE TREATMENT OF HEPATITIS DISEASE Nguyen Thi Anh Dao, Pham Huy Hung, Nguyen Phuong Dung * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 20 – 28 Objectives: Hepatitis is a condition of liver parenchyma lesions, characterized by the presence of inflammatory cells According to WHO (World Health Organization) statistics globally, 1.45 million people die from hepatitis each year Currently, using drugs of natural origin such as Silymarin in the treatment of liver diseases is being tendency A functional food in hard capsule form named CTH to support the treatment of hepatitis diseases has been experimentally studied the pharmacological effect based on the model of paracetamolinduced liver damage This paper presents the results of acute toxicity and semi-chronic toxicity of CTH capsules in the experiment Methods: Survey of acute toxicity and semi-chronic toxicity of CTH capsules in the experiment Acute toxicity: White male and female Swiss albino mice, from Institut Pasteur, 6-7 weeks old, weighing 20 ± g were fed one week before the test The drinking volume was 0.2 ml/10g body weight, using a single dose per day for the period from -9 am Mice were divided into plots and the use of drugs at doses in the range LD0 and LD100 divided exponentially (if any) or Dmax The activity and behavior of mice were followed within the first 72 hours after taken the drug The progresses and the number of dead mice in each batch during that time were recorded LD50 value was determined by the method Kärber - Behrens (if any) Semi-chronic toxicity: Mice were experimentally divided into groups, 20 animals (50% male, 50% female) with the same initial weight were put in each group Every day at a certain time, (8:00 am) each rat was continuously taken the extract for 60 days: control group (n = 20): used distilled water Group (n = 20): dose of 0.9 g/kg Group (n = 20): Dose of 1.8 g/kg Group (n = 20): Dose of g/kg The volume for mice to drink was 0.1 ml/10 g body weight Mice in all groups were taken blood before the test, after treated the drug for 30 days to the tests for blood formula (number of red blood cells (million/mm3), the number of white blood cells (thousand/mm3), hemoglobin (g/L), hematocrit (%), and determination of liver function parameters (AST, ALT), renal function parameters (creatinine, urea) and blood glucose, lipid After taking blood on the 60th day, mice were operated to observe the whole body and removed organs for microscopic observation and microsurgical analysis Results: D max of powder orally CTH was 30 g/kg mice (equivalent to 2.55 g/kg in human, 153 g powder in 60 kg persons) CTH capsules did not alter the biochemical indices: AST, ALT, serum creatinine, blood glucose, the number of leukocytes, erythrocytes, platelets, hematocrit, Hgb, cholesterol, triglyceric, HDL, and blood uric acid in mice after treated independently doses: 0.9 g/kg, 1.8 g/kg, and g/kg in three groups for months The diarrheal symptom was only observed in the g/kg group after weeks of taking medicine Conclusion: Dmax was successfully determined being 30 g/kg of mice, the dose 0.9 g/kg of CTH was considered to be effective D max dose is higher than the effective dose for treatment many times, proving the safety threshold when using CTH is high, the possibility of drug poisoning is low in case of overdose After months of taking CTH capsules, the biochemical indexes did not change in tested mice, initially assessing the safety of CTH capsules Keywords: CTH capsules, acute toxicity, semi-chronic toxicity viêm(2) Trong điều trị viêm gan, chủ yếu điều ĐẶT VẤN ĐỀ trị nguyên nhân khơng ổn định Viêm gan tình trạng tổn thương nhu mơ enzym gan góp phần dẫn đến nhiều hậu gan, đặc trưng diện tế bào Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 21 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 xấu viêm gan mạn, xơ gan, ung thư gan Độc tính cấp(1,4,7) Hiện giới việc kết hợp Y học cổ truyền (YHCT) Y học đại (YHHĐ) quan tâm Nên xu hướng thuốc có nguồn gốc tự nhiên Silymarin sử dụng điều trị bệnh gan, bao gồm viêm gan virus cấp tính mãn tính, viêm gan độc tố thuốc, xơ gan bệnh gan rượu(3) Viên nang cứng CTH gồm vị thuốc nam: Diệp hạ châu (Herba phyllanthus urinaria), Linh chi (Ganoderma lucidum), Nghệ (Curcumae longae), Đậu xanh (Seenzym vignae aurei), Sâm đại hành (Bulbus eleutherinis subaphyllae) sản phẩm lưu hành Việt Nam với vai trò thực phẩm chức có tác dụng hỗ trợ điều trị bệnh lý viêm gan Tác dụng bảo vệ gan chế phẩm viên nang CTH nghiên cứu thực nghiệm trước Để khảo sát tính an toàn dùng thuốc thực tiếp nghiên cứu với mục tiêu khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn đường uống viên nang CTH Điều kiện thí nghiệm ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Nguyên liệu Viên nang CTH (Diệp hạ châu, Linh chi, Nghệ, Đậu xanh, Sâm đại hành) với tỷ lệ tương ứng: 3:2:2:1,5:1,5 công ty TNHH TM SX Đông Nam Dược Hồng Vượng cung cấp số ĐK:21055/2014/ATTP-XNCB, ngày sản xuất 27/08/2016, hạn sử dụng năm Động vật thí nghiệm Chuột nhắt trắng đực, chủng Swiss albino, – tuần tuổi, trọng lượng 20 ± gram, khỏe mạnh, cung cấp Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Chuột cung cấp đầy đủ thức ăn nước uống, nuôi ổn định Hoạt chất thuốc thử Nước cất, nước muối sinh lý, formalin 10% ngày sản xuất 15/06/2016 Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Thiết kế thực nghiệm, đo lường độc lập 22 Thuốc thử nghiệm: lấy từ viên nang hòa tan nước cất Chuẩn bị động vật thí nghiệm: chuột nhắt trắng đực, giống Swiss albino, nguồn từ Viện Pasteur, – tuần tuổi, trọng lượng 20 ± g Cho chuột nhịn đói 12 trước cho uống thuốc Đường dùng thuốc: đường uống (p.o) Thể tích uống 0,2 ml/10g thể trọng Số lần dùng thuốc: dùng liều ngày khoảng thời gian từ -9 sáng Thử nghiệm thực qua giai đoạn Giai đoạn thăm dò (mỗi lơ dò liều chuột): khởi đầu từ liều cao bơm qua kim đầu tù cho uống Xác định liều LD0 (liều tối đa không gây chết) liều LD100 (liều tối thiểu gây chết 100%) Giai đoạn xác định: chuột chia lô cho sử dụng thuốc liều khoảng LD0 LD100 chia theo cấp số nhân (nếu có) Dmax Chỉ tiêu đánh giá kết Theo dõi biểu hành vi vận động chuột vòng 72 đầu sau dùng thuốc Ghi chép diễn tiến thời gian Ghi cho chuột uống thuốc, xuất triệu chứng khác thường Ghi nhận số chuột chết lô Xác định LD50 theo phương pháp Karber – Behrens (nếu có) Độc tính bán trường diễn(1,4,7) Chuột thử nghiệm chia thành lô, lơ 20 (50% đực, 50% cái), có trọng lượng ban đầu tương đương Mỗi ngày vào định (8 00 – sáng) cho chuột uống thuốc liên tục 60 ngày: Lô chứng (n = 20): cho uống nước cất hàng ngày 60 ngày; Lô thử (n = 20): Liều 0,9 g/kg; Lô thử (n=20): Liều 1,8 g/kg; Lô thử (n = 20): Liều g/kg 60 ngày Thể tích cho chuột uống 0,1 ml/10g thể trọng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Theo dõi đánh giá kết Chuột cho uống thuốc lần ngày vào buổi sáng, đưa thẳng thuốc vào dày kim bơm đầu tù Trong thời gian theo dõi tình trạng chung chuột thể trọng (g) (cân chuột hàng tuần) Trong thời gian thử nghiệm, chuột tất lô lấy máu trước thử nghiệm, sau uống thuốc 30 ngày để làm xét nghiệm công thức máu (số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, hemoglobin, hematocrit) Và xác định thông số chức gan AST, ALT, thông số chức thận (creatinin, urê) glucose máu, lipid máu Sau 60 ngày lấy đợt xét nghiệm tương tự Sau lấy máu vào ngày thứ 60, chuột mổ để quan sát đại thể lấy nội tạng để quan sát vi thể Gan thận chuột bảo quản dung dịch formol 10% sau phân tích vi phẫu khoa Giải phẫu bệnh – Bệnh viện Chợ Rẫy Phương pháp thống kê – xử lý liệu Số liệu trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn (M ± SD) Phân tích số liệu phép kiểm t-test Anova chiều, yếu tố với phần mềm MS EXCEL 2013 KẾT QUẢ Độc tính cấp Khi cho chuột uống viên nang CTH liều cao nhất, không gây chết súc vật thí nghiệm liều uống 30 g/kg chuột tương ứng pha viên CTH 4,5 g bột dược liệu pha ml nước, liều đặc bơm qua kim đầu tù Quan sát biểu chuột sau uống: nằm im, giảm động sau 30 phút chuột hoạt động bình thường Sau 24 đến 72 tuần sau khơng xuất triệu chứng khác, chuột sống ăn uống bình thường Như khơng xác định LD50 bột thuốc, mà ta có liều Dmax 30 g/kg chuột Sau tuần theo dõi, mổ chuột tất lô Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học để quan sát đại thể phủ tạng chuột Kết tất chuột thực nghiệm không thấy thay đổi hình thái đại thể quan tim, gan, thận, hệ thống tiêu hóa Như vậy, bột thuốc CTH khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho chuột uống (Bảng 1) Bảng Kết thử nghiệm độc tính cấp bột thuốc CTH Số chuột Số chuột chết Phân suất Số chuột đực sau 72h tử vong (%) (con) (con) lô (con) sau 72h Sơ khởi 2 0 Xác định 10 10 0 Lơ thử Độc tính bán trường diễn Tình trạng chung chuột Sau 60 ngày, tất chuột thử nghiệm đực 04 lô (uống nước cất, CTH 0,9 g/kg, CTH 1,8 g/kg CTH g/kg) hoạt động bình thường, ăn uống được, riêng chuột lô CTH g/kg xuất phân sệt sau tuần uống thuốc, phân vàng, lơ lại phân khơ, chặt, lơng mượt khơng có tượng rụng lông khô cứng Tất chuột thử nghiệm sống bình thường sau tháng uống thuốc Trọng lượng chuột Bảng Trọng lượng chuột nhắt (g) tháng thử nghiệm bán trường diễn (n=20) % thay Trước thử Sau tháng Sau tháng đổi sau nghiệm (g) (g) (g) tháng C 26,78±2,11 29,85±2,88 31,93±3,22 19,23% CTH 0,9 g 27,79±2,98 27,78±2,98 33,75±4,28 21,44% CTH 1,8g 28,79±2,42 29,21±2,42 31,75±5,29 10,28% CTH 3g 28,56±1,91 26,62±3 * 28,98±2,22 1,47% Lơ * khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô C (p < 0,05) Lô uống CTH liều 0,9 g/kg liều 1,8 g/kg tốc độ tăng trọng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô C sau tháng thử nghiệm (p>0,05) (Bảng 2) Lô uống CTH liều g/kg tốc độ tăng trọng chậm so với lô chứng sau tháng thử nghiệm khác biệt có ý nghĩa thống kê (p 0,05), nguyên nhân ban đầu dùng thuốc liều cao chuột xuất triệu chứng tiêu phân sệt, sau bệnh tự giới hạn Tiếp tục trì cho chuột lơ g/kg uống Bảng Kết huyết học, sinh hóa thử nghiệm bán trường diễn Chỉ tiêu khảo sát Hồng cầu (triệu tế bào/µl) Hemoglobin (g/dl) Hematocrit (%) Tiểu cầu (103 tế bào/µl) Bạch cầu (103 tế bào/µl) ALT (IU/L) AST (IU/L) Cholesterol (g/l) Triglycerid (mg/dl) HDL (mL/dL) Creatinin (mg/dl) 24 C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g Trước thử nghiệm 6,11 ± 0,78 5,62 ± 1,84 6,85 ± 0,98 6,64 ± 0,89 15,78 ± 1,65 15,91 ± 2,45 16,28 ± 1,86 16,25 ± 2,16 39,43 ± 2,89 41,51 ± 7,63 40,87 ± 4,79 41,25 ± 4,63 838,2 ± 277,6 703,3 ± 132 * 760,65 ± 164,6 784,8 ± 241 6,97 ± 2,11 6,41 ± 1,53 6,31 ± 1,72 5,91 ± 1,35 34,2 ± 7,67 33,7 ± 10,17 31,2 ± 9,06 31,7 ± 9,77 59,55 ± 8,61 58,9 ± 8,77 57,2 ± 13,08 57,45± 9,67 70,66 ± 11,73 75,48 ± 13,97 76,16 ± 18,56 71,71 ± 15,96 108,04 ± 24,29 119,49 ± 13,51 114,27 ± 12,26 109,79 ± 12,01 36,01 ± 6,43 44,4 ± 11,33 ** 46,08 ± 8,65 ** 38,57 ± 6,79 ** 0,39 ± 0,09 0,38 ± 0,08 0,32 ± 0,04 ** Sau tháng 6,38 ± 0,86 7,51 ± 0,49 ** 7,53 ± 0,61 ** 7,65 ± 0,71 ** 15,98 ± 1,91 16,63 ± 1,03 16,5 ± 1,38 16,39 ± 1,08 39,35 ± 6,17 46,35 ± 2,65 ** 46,11 ± 3,97 ** 45,55 ± 4,47 ** 1020 ± 229 833 ± 155 ** 851,4 ± 159,8 * 986,3 ± 141,8 7,67 ± 2,21 9,27 ± 1,63 9,32 ±2,55 7,03 ± 2,33 38,1 ± 14,28 31,4 ± 18,33 36,65 ± 10,2 39,55 ± 14,58 57,1 ± 13,84 59,3 ± 12,64 53,95 ± 15,83 66 ± 16.58 79,85 ± 10,26 81,53 ± 12,13 86,54 ± 11,74 88,95 ± 17,4 120,71 ± 22,71 130,06 ± 21,02 127,87 ± 10,92 129,96 ± 13,97 48,27 ± 13,35 56,18 ± 9,05 62,18 ± 8,97 ** 59,83 ± 9,14 ** 0,38 ± 0,12 0,47 ± 0,1 0,39 ± 0,08 Sau tháng 6,85 ± 0,85 7,07 ± 0,56 7,26 ± 0,56 7,09 ± 0,71 16,43 ± 1,69 16,22 ± 16,25 ± 1,16 15,67 ± 40,39 ± 6,82 45,26 ± 3,52 45,28 ± 3,11 42,15 ± 5,35 1079 ± 168,6 1064 ± 123,4 1170 ± 182,6 1177 ± 172 8,42 ± 2,68 9,52 ± 1,77 9,61 ± 3,62 8,46 ± 3,9 38,65 ± 10,05 44,7 ± 15,1 46,6 ± 18,65 37,5 ± 11,57 63,6 ± 29,1 73,05 ± 18,43 63,65 ± 21,39 55,6 ± 11,5 82,86 ± 8,53 89,06 ± 11,69 87,86 ± 10,64 82,25 ± 11,32 122,36 ± 15,29 139,96 ± 16,21 135,37 ± 13,9 134,13 ± 15,28 44,89 ± 10,3 61,35 ± 7,07 ** 58,48 ± 7,5 ** 54,67 ± 7,76 ** 0,42 ± 0,11 0,38 ± 0,13 0,39 ± 0,06 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Chỉ tiêu khảo sát CTH 3g C CTH 0,9g Acid uric (mg/dl) CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g Glucose (mg/dl) CTH 1,8g CTH 3g Trước thử nghiệm 0,36 ± 0,05 0,6 ± 0,11 0,53 ± 0,07 0,59 ± 0,1 0,5 ± 0,08 59,01 ± 17,8 60,43 ± 13,67 62,49 ± 13,52 66,18 ± 9,56 Nghiên cứu Y học Sau tháng 0.44 ± 0.1 0,61 ± 0,08 0,61 ± 0,04 0,64 ± 0,03 0,65 ± 0,09 77,15 ± 19,7 76,85 ± 13,55 85,79 ± 12,38 77,75 ± 15,6 Sau tháng 0,39 ± 0,13 0,64 ± 0,15 0,68 ± 0,1 0,71 ± 0,06 0,72 ± 0,16 81,28 ± 15,3 82,48 ± 15,68 83,96 ± 8,98 79,76 ± 10,69 C: Lô chứng (nước cất), CTH 0,9g: Lô uống CTH liều 0,9 g/kg chuột, CTH 1,8g: Lô uống CTH liều 1,8 g/kg chuột, CTH 3g: Lô uống CTH liều g/kg chuột, *: Khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ C (p 0,05) Các số số lượng bạch cầu (WBC), số lượng hồng cầu (RBC), số lượng tiểu cầu (PLT), nồng độ hemoglobin (HGB), phần trăm Hct chuột thử nghiệm với liều 0,9 g/kg, 1,8 g/kg g/kg tháng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ C (p >0,05) Viên nang CTH không làm thay đổi số công thức máu sau tháng dùng thuốc Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền CTH 1.8 CTH Mức độ tổn thương Bình thường Nhẹ Trung bình Nặng Bình thường Nhẹ Trung bình Nặng Bình thường Nhẹ Trung bình Nặng Bình thường Nhẹ Trung bình Nặng Gan 1/4 1/4 1/4 1/4 0/4 3/4 1/4 0/4 0/4 3/4 1/4 0/4 0/4 3/4 1/4 0/4 Thận 3/4 1/4 0/4 0/4 1/4 3/4 0/4 0/4 0/4 4/4 0/4 0/4 1/4 3/4 0/4 0/4 C: Lô chứng (nước cất); CTH 0,9: Lô uống CTH với liều 0,9 g/kg; CTH 1,8: Lô uống CTH với liều 1,8 g/kg; CTH 3: Lô uống CTH với liều g/kg 25 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Lơ C Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào gan phóng đại 200X lơ chứng sau tháng Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào thận phóng đại 200X lơ chứng sau tháng Lơ CTH 0.9 Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào gan phóng đại 200X lơ CTH 0,9 g/kg sau tháng 26 Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào thận phóng đại 200X lơ CTH 0,9 g/kg sau tháng Lơ CTH 1.8 Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào gan phóng đại 200X lơ CTH 1,8 g/kg sau tháng Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào thận phóng đại 200X lô CTH 1,8 g/kg sau tháng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Lô CTH Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào gan phóng đại 200X lơ CTH 3g/kg sau tháng Nghiên cứu Y học chuột Sau uống thuốc chuột bình thường, khơng thấy có biểu ngộ độc chuột khơng có chuột chết vòng 72 suốt tuần Do chưa xác định độc tính cấp tính LD50 cao thuốc chuột nhắt trắng theo đường uống Tác giả tham khảo liều LD50 số dược liệu thuốc như: nghiên cứu độc tính cấp Linh chi từ thân, sợi, hỗn hợp hai (tỉ lệ 220; 450) Bột Linh chi có trọng lượng khơ so với ướt 1:20 Nghiên cứu chứng minh bột thân Linh chi phân loại không độc hại (LD50 >5 g/kg BW), bột sợi phân loại tương đối vô hại (LD50 >15 g/kg BW) Diệp hạ châu sử dụng thời gian dài mà không báo cáo tác dụng phụ lâm sàng Nghiên cứu chiết xuất Diệp hạ châu không gây độc tế bào tế bào bình thường LD50 tinh dầu nghệ chuột nhắt trắng 9,2 ml/kg Như dùng riêng rẻ ghi nhận độc tính dược liệu, số tương tác curcumin, methionine, tryptophan với số tân dược xảy người dùng với liều cao nhiều lần so với điều trị Kết nghiên cứu gợi ý kết hợp dược liệu làm giảm tác dụng phụ độc tính dược liệu thành phần Độc tính bán trường diễn Hình Hình ảnh tiêu vi thể tế bào thận phóng đại 200X lơ CTH g/kg sau tháng C: Lô chứng (nước cất); CTH 0,9: Lô uống CTH với liều 0,9 g/kg; CTH 1,8: Lô uống CTH với liều 1,8 g/kg; CTH 3: Lô uống CTH với liều g/kg BÀN LUẬN Độc tính cấp Qua thử nghiệm độc tính cấp bột thuốc cho thấy, kết liều cao bơm qua kim đầu tù cho chuột uống 30 g/kg chuột Tương ứng với liều sử dụng người 2,55 g/kg người nặng 60 kg tương đương 153g bột thuốc CTH Ở liều thuốc đậm đặc vừa đủ để bơm thuốc vào dày Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Sau tháng uống viên nang CTH với liều khác 0,9 g/kg, 1,8 g/kg, g/kg so với lơ bình thường (nước cất), trọng lượng liều 0,9 g/kg 1,8 g/kg tốc độ phát triển bình thường, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Còn với liều g/kg uống sau tuần chuột xuất tiêu phân sệt, phân vàng khơng đóng khn xuất lô đực cái., nguyên nhân ban đầu dùng thuốc liều cao chuột xuất triệu chứng tiêu phân sệt, sau bệnh tự giới hạn, chuột tăng trọng bình thường trở lại Điều giải thích thành phần bột thuốc CTH có chứa 15% đậu xanh, đậu xanh có tính hàn theo y học cổ truyền đặc tính nhiệt trừ thử, khát, lợi niệu, giải loại độc Chủ trị: Tả lỵ, phù thũng, ngộ độc chất thuốc, thử 27 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 nhiệt khát nước Nên dùng với liều cao bình thường xuất triệu chứng tiêu phân sệt, bệnh tự giới hạn liều lượng đậu xanh chiếm tỷ lệ thấp thuốc Các xét nghiệm sinh hóa enzym gan AST, ALT, creatinin máu, glucose máu, công thức máu gồm số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, hemoglobin, Hct, cholesterol máu, triglycerid, HDL, acid uric, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ bình thường sau tháng sử dụng thuốc(5,6) Kết giải phẫu bệnh mô gan, thận lô ghi nhận mức độ tổn thương chuột từ nhẹ đến trung bình nặng rải rác lô thuốc liều 0,9 g/kg, 1,8 g/kg, 3g/kg giống lô chứng, kết tổn thương gan nặng lại rơi vào nhóm chứng lơ thuốc khơng ghi nhận Kết hợp xét nghiệm sinh hóa chức gan, thận nằm giới hạn bình thường Kết giải phẫu bệnh gửi khoa Giải phẫu bệnh bệnh viện Chợ Rẫy sử dụng đánh giá mức độ tổn thương người quy mức độ tổn thương chuột nên phần việc đánh giá khó khăn Trường hợp nguyên nhân tổn thương gan, thận chuột nguyên nhân uống thuốc, nhóm chứng (nước cất) bị tổn thương nặng KẾT LUẬN Độc tính cấp đường uống bột thuốc CTH chuột nhắt trắng: Xác định Dmax đường uống bột thuốc CTH 30 g/kg chuột 28 nhắt trắng (tương đương 2,55 g/kg người người nặng 60 kg hàm lượng thuốc 153 g bột thuốc) Độc tính bán trường diễn bột thuốc CTH chuột nhắt trắng: Viên nang CTH không làm thay đổi số sinh hóa: AST, ALT, creatinin máu, glucose máu, số lượng bạch cầu, hồng cầu, tiểu cầu, Hemoglobin, Hematocrit cholesterol, triglycerid, HDL, acid uric máu sau cho uống với liều tương ứng 0,9 g/kg, 1,8 g/kg, g/kg tháng chuột nhắt trắng Chỉ ghi nhận triệu chứng lô g/kg tiêu phân sệt sau tuần uống thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn dược liệu (2008) Phương pháp nghiên cứu dược liệu Trường Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh, pp.2-5 Châu Ngọc Hoa (2012) Bệnh học nội khoa Nhà xuất Y học, pp 181- 188 Dixit N, Baboota S, Kohli K, Ahmad S, Ali J (2007) “Silymarin: A review of pharmacological aspects and bioavailability enhanceenzymt approaches” Indian J Pharmacol, 39(4):172 -179 Đỗ Trung Đàm (1996) Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc Nhà xuất Y học, pp.50 -57 Đỗ Đình Hồ (2004) Sổ tay xét nghiệm hóa sinh lâm sàng Nhà xuất Y học, pp.27-45 Nguyễn Thế Khanh Phạm Tử Dương (2005) Xét nghiệm sử dụng lâm sàng Nhà xuất Y học, pp.681 Tunon MJ, Culebras JM, Gallego JG (2009) “An overview of animal models for investigating the pathogenesis and therapeutic strategies in acute hepatic failure” World J Gastroenterol, 15(25):3086 -3098 Ngày nhận báo: 28/07/2019 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/08/2019 Ngày báo đăng: 14/09/2019 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền ... C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH 0,9g CTH 1,8g CTH 3g C CTH. .. hỗ trợ điều trị bệnh lý viêm gan Tác dụng bảo vệ gan chế phẩm viên nang CTH nghiên cứu thực nghiệm trước Để khảo sát tính an tồn dùng thuốc thực tiếp nghiên cứu với mục tiêu khảo sát độc tính cấp. .. với mục tiêu khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn đường uống viên nang CTH Điều kiện thí nghiệm ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Nguyên liệu Viên nang CTH (Diệp hạ châu, Linh chi, Nghệ,