BO KHOA HOC VA CONG NGHE
VIEN DƯỢC LIỆU
3B QUANG TRUNG, HÀ NỘI
PHỤ LỤC 4
BÁO CÁO TỔNG KẾT KHOA HỌC VÀ KỸ THUẬT ĐỀ TÀI KC.10.07
NGHIÊN CỮŨU 3 THUỐC MỚI TỪ DUOC LIEU CÓ TÁC DỤNG HỖ TRO DIEU TRI VIEM GAN MAN HOAT DONG, DIEU TRI DAI THAO DUONG
VA HA CHOLESTEROL MAU
Chủ nhiệm dé tdi: TS Nguyễn Duy Thuần
Hà Nội, 11 — 2004
Bản thảo viết xong tháng 11 - 2004
Tài liệu này được chuẩn bị trên cơ sở kết quả thực hiện của
Đề tài cấp Nhà nước mã số KC.10 07
5G 4C- be
Trang 2
BO KHOA HOC VA CONG NGHE
VIEN DƯỢC LIỆU
3B Quang Trung, Hà Nội
BAO CAO TONG KET KHOA HOC VA KY THUAT DE TAI
NGHIÊN CỨU THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ
VIÊM GAN MẠN HOẠT ĐỘNG TỪ DƯỢC LIỆU
Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Nguyễn Thượng Dong
Phó Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Bùi Thị Bằng
HÀ NỘI, 11 - 2004
Bản thảo viết xong tháng 11 - 2004
Tài liệu này được chuẩn bị trên cơ số kết quả thực hiện
đề tài nhánh thuộc đề tài cấp Nhà nước mã số KC 10 - 07
Trang 3
DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI THỰC HIỆN STT Họ và tên Chức đanh / Chuyên Đơn vị công tác ngành 1 | Nguyên Thượng Dong PGS TS Duge hoc Viện Dược liệu (VDL)
2 | Bai Thi Bang PGS TS Sinh hoá thực vật VDL
3 | Trịnh Thị Điệp KS Chiết xuất VDL
4_ | Nguyễn Kim Bích DS CKI Kiểm nghiệm VDL
5 | Nguyén Thị Chỉnh CN Sinh hoc VDL
6 | Nguyễn Thị Dung DS CKI Kiểm nghiệm VDL
7 | Nguyễn Thị Dung DS Duge ly VDL
8 | Dinh thi Mai Hương CN Công nghệ Sinh học VDL
9 {Pham Minh Hung ThS Dược học VDL
10 | Nguyễn Trường Lap DS Bao ché VDL
11 | Lé Kim Loan TS Bao ché VDL 12 ] Đỗ Thị Phương DS Kiểm nghiệm VDL 13 | Nguyễn Minh Phuong BS Được lý VDL 14 | Nguyễn Kim Phượng DS Sinh hoá VDL
15 {| Trần Hữu Thị TS Dược học VDL
16 | Nguyễn Bích Thu TS Dược liệu VDL
17 | Nguyễn Quốc Thức Th.S Dược học VDL
18 | Nguyễn Trang Thuý DS Dược lý VDL
Trang 4BAI TOM TAT
Đề tài nhánh KC10-07-04 : “Nghién citu thudc hé tro diéu trị viêm gan mạn hoạt động
từ dược liệu” thuộc Đề tài cấp Nhà nước KC10-07 do TS Nguyễn Duy Thuần làm chủ nhiệm Đề tài được thực hiện từ năm 2001 đến 2004 tại Viện Dược liệu
Cơ quan chủ trì: Viện Dược liệu
2A
Don vị phối hợp thực hiện:
+ Bộ môn Miễn Dịch - Sinh lý bệnh (Trường Đại học Y Hà Nội) Mục tiêu của đề tài:
+ Nghiên cứu thuốc hỗ trợ điều trị viêm gan mãn hoạt động từ được liệu
Nội dung nghiên cứu:
Thu thập tài liệu và phân tích bổ sung thành phần hoá học 11 cây thuốc: Ban (nọc sởi), Ban tròn, bạch truật, cải trời, cúc gai đi thực, đành dành, mã đề, nhó đông, rau
đắng (biển súc), trạch tả, ráy gai
Nghiên cứu sàng lọc tìm cây thuốc và chế phẩm có tác đụng bảo vệ gan trên mô hình gây độc chuột bằng clorua cácbon
Lập công thức cho một bài thuốc mới dựa trên kết quả nghiên cứu sàng lọc, bài
thuốc cổ phương và tư liệu khoa học
Thử các tác dụng sau đây của bài thuốc mới:
a Độc tính cấp và bán trường diễn của bài thuốc b Tác dụng ức chế xơ gan c Tác dụng chống ô xy hoá d Tác dụng lợi mật e Tác dụng chống viêm cấp f Tac dung chống viêm mạn tính g Tác dụng trên hệ miễn dịch
Nghiên cứu quy trình chiết xuất sản phẩm làm thuốc
Nghiên cứu dạng bào chế viên nén bao phim cho thuốc
Trang 5e Phương pháp tiếp cận và nghiên cứu:
1 Thu thập thông tin về thành phần hoá học của các dược liệu trên các tạp chí khoa học, các sách về cây thuốc và mạng Internet Phân tích sơ bộ thành phần hoá học
của các được liệu chưa biết thành phần hoá học bằng phương pháp sắc lớp mỏng
Nghiên cứu sàng lọc tìm dược liệu và các ản phẩm có tác đụng bảo vệ gan trên
mô hình gây độc tế bào gan bằng CCI, :
Nghiên cứu tác dụng ức chế xơ gan của thuốc hỗ trợ điều trị viêm gan Cugama
bằng mô hình gây viêm gam mạn bằng CCI, dùng dài ngày theo phương pháp của
Marros và CS
Các thí nghiệm độc tính cấp, bán mạn, lợi mật được thực hiện theo các phương pháp thường sử dụng ở trong và ngoài nước (Tổ chức Y tế thế giới, Đỗ trung
Đàm)
Tác dụng trên hệ miễn dịch được thử trên mô hình gây suy giảm miễn dich bang
cyclophosphamid
Nghiên cứu chiết xuất sản phẩm làm thuốc từ mã để và từ quả cúc gai được thực
hiện trên thiết bị của Khoa Công nghệ chiết xuất tại Viện Dược liệu với các thiết bị sử dụng công nghệ cao (máy cô màng mỏng, máy chiết đa năng, máy sấy chân không )
Nghiên cứu bào chế viên bao phim Cugama được thực hiện tại khoa Bào chế và chế biến dược liệu (VDL) với các thiết bị hiện đại cho kiểm soát chất lượng màng bao phim, công thực thuốc, độ rã, độ cứng của viên vv
Các tiêu chuẩn được liệu mã đề, quả cúc gai, bán thành phẩm (silymarin, cao tinh chế mã đề F2c) và viên nén bao phim Cugama được thực hiện theo quy định của
DĐVN HI Thuốc và bán thành phẩm được kiểm soát bằng phương pháp định
lượng hoạt chất silymarin trên máy quang phổ tử ngoại khả kiến - đảm bảo độ
chính xác cao
e Kết quả nghiên cứu:
1 Kết quả nghiên cứu về hoa học:
Đã thu thập tài liệu về thành phần hoá học dược liệu của 11 cây thuốc liệt kê dưới
đây:
Trang 6— am
Ban tron (Hypericum patulum Thunb ex Murr.): La - Flavonoid - Bach truat (Atractylodes macrocephala Koidz.): Ca
-_ Cải trời (Blumea lacera DC.): Cả cây (thân, cành mang lá và hoa) - Ciic gai di thuc (Silybum marianum (L.) Gaertn.): Hạt
- Danh danh (Gardenia jasminoides Ellis.): Qua chin - _ Mã đề (Plantago asiatica L.): Cả cây (lá, bông hoa, quả) - _ Nhó đông (Morinda longissima Y Z Ruan): Rễ
- Rau dang (Polygonum aviculare L.): Thân, cành mang lá, hoa
- Ray gai: ( Lasia spinosa (L.) Thwaites): Than ré
- Trach ta (Alisma plantago aquatica L.): Ca
Đã sưu tập được 10 bài thuốc dùng trong điều trị VGB và các bệnh về gan
Đã phân tích bổ sung thành phần hoá học cho 3 cây thuốc chưa có thông tin về thành phần hoá học của được liệu thu hái ở Việt Nnam: Ban, ban tròn và quả cúc gai
Thành phần hoá học của các được liệu rất đa dạng, có nhiều nhóm chất khác nhau:
acid hữu cơ, acid amin, antraglycosid, flavonoid, flavanolignan, các hợp chất phenolic,
chát mầu, đường khử, iridoid glycosid, saponin, sterol , Các thành phần được ghi nhận và chứng minh có tác dụng bao vé gan gém cé: acid hitu co, antraglycosid, flavonoid, flavanolignan, iridoid glycosid
e Két qud nghién citu sang loc lua chon cdy thudc va ché phdm cé tac dung bdo vé
gan:
Đã thử tác dụng cia cao nude diéu ché tiy 10 duoc liệu trên men gan GPT va
bilirubin trén m6 hinh gây viêm gan cấp bằng CCl, so sdénh véi silymarin chiét xuat ti hat cúc gai di thực Cao nước của cây ban tròn, nhó đông, rau đắng và silymarin từ hạt cúc
gai đi thực có tác dụng giảm men gan GPT (20,70 - 36,19%) và bilirubin (29,05 - 49,08%
có ý nghĩa thống kê so với lô chứng
Các dược liệu và chế phẩm có tác dụng bảo vệ gan đã được phối hợp để thử tác dụng
bảo vệ gan nhằm tìm công thức cho bài thuốc mới Kết quả thử sàng lọc tác dụng bảo vệ gan đã cho phép chọn công thức cho bài thuốc hỗ trợ điều trị VGMHĐ gồm 2 thành phần:
silymarin chiết xuất từ quả cúc gai di thực và chế phẩm F2c chiết xuất từ mã để (tỷ lệ 2 :
Trang 72 Két quả nghiên cứu tác dụng dược lý của bài thuốc mới:
Bài thuốc được đặt tên là Cugama - có tác dụng bảo vệ gan tốt nhất được tiếp tục
nghiên cứu làm thuốc hỗ trợ điều trị viêm gan Lý do chọn bài thuốc này:
- Kết qủa thực nghiệm sàng lọc tác dụng bảo vệ gan cho thấy thuốc Cugama có tác dụng giảm men gan (42,49%) và giảm bilirubin (28,36%) tốt nhất trên mô hình gây tổn thương gan bằng CCl, Sự khác nhau giữa lô thử thuốc và lô chứng bệnh lý có ý nghĩa
thống kê „ ,
-Silymarin là thuốc bảo vệ gan đã được thế giới chứng minh bằng thực nghiệm va trên lâm sàng và hiện đang bán tại VN
-Mã đề là dược liệu sử dụng trong YHCT làm thuốc trị bệnh gan và đã được đưa vào danh mục thuốc thiết yếu dùng làm thuốc điều trị viêm gan siêu vi khuẩn và đã được các tác giả Hàn Quốc chứng minh các iridoid glycosid cso trong mã đề có tác dụng ức chế sự nhân lên của virus VGB
Vì vậy phối hợp 2 được liệu cúc gai và mã đề có thể cho một bài thuốc mới có các tác dụng: bảo vệ gan, ức chế xơ gan và ức chế sự nhân lên của virus VGB
Kết qủa nghiên cứu tác dụng được lý của đề tài đã chứng minh bằng thực nghiệm in vivo chế phẩm Cugama có các tác dụng sau: Chống viêm mạn, chống viêm cấp, ức chế xơ gan, chống ơ xy hố, lợi mật, tăng chức năng sinh kháng thể Chế phẩm Cugama có độc tính rất thấp (không xác định được LDaạ) Cho thỏ uống liều tối đa ~ 488 g được
liệu/kg thể trọng, không có chuột chết sau 72 giờ, không có các triệu chứng ngộ độc trên hành vị, hoạt động tự nhiên, hô hấp và tiêu hoá
Kết quả thử độc tính bán trường diễn thuốc Cugama: Cho thỏ uống với liều tương
đương 15g được liệu/kg thỏ x 30 ngày không làm ảnh hưởng tới chức năng gan, thận, chức năng tạo máu, cũng như không gây những biến đổi bất thường về mô bệnh học của gan, thận và thượng thận Như vậy thuốc an toàn cho người sử dụng
3 Nghiên cứu chiết xuất: Đã nghiên cứu quy trình chiết xuất chế phẩm cugama ở phòng thí nghiệm và trên quy mô pilot Đã xây đựng 2 quy trình:
Trang 8Quy trình chiết xuất cao tình chế mã để F2c: Hiệu suất chiết xuất F2c từ mã đề đạt 5,4 - 5,6% so với dược liệu khô Chế phẩm F2c có khối lượng nhỏ, là bột khô dễ dàng bào chế viên nén bao phim
5 Nghiên cứu bào chế: Đã nghiên cứu bào chế viên nén bao phim Cugama 0,15 g hỗn hợp silymarin : F2c (tỷ lệ 2 : 1)
7 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn: Đã xây dựng tiêu chuẩn viên bao phim Cugama
và các tiêu chuẩn có liên quan (hạt cúc gai, mã để, Cao tỉnh chế mã để F2c và
silymarin từ hạt cúc ga)
Tiêu chuẩn thuốc Cugama đã được Viện Kiểm nghiệm thẩm định Cả 5 tiêu chuẩn
đều xây dựng phương pháp định lượng
8 Đã bào chế 5.000.000 viên bao phim Cugama 0,15 g
Trang 9Chương Mục 1.1 1.2 2.1 2.2 3.1 3.1.1 3.1.2 3.1.4 3.2 3.2.1 3.2.2 3.3 3.4 3.4.1 MUC LUC Nội dung Đặt vấn dé
Tổng quan tài liệu
Một số thông tin chung về 11 cây thuốc
Một số bài thuốc điều trị viêm gan dùng trong
nhân dân hoặc đã được nghiên cứu
Đối tượng, vật liệu và phương pháp
Đối tượng nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu
Kết qủa nghiên cứu
Thu thập tài liệu và phân tích sơ bộ bổ sung cho
thành phần hoá học của 11 cây thuốc
Kết qủa phân tích sơ bộ thành phần hoá học cây
ban (Hypericum japonicum Thunb.)
Kết qủa phân tích sơ bộ thành phần hoá học lá cây ban tròn (Hypericum patulum Thunb Ex
Murr )
Kết qủa phân tích sơ bộ thành phần hoá học quả ctc gai di thuc [Silybum marianum (L.) Gaertn.]
Tổng hợp các thành phần chính của 11 được liệu
nghiên cứu
Nghiên cứu sàng lọc tìm cây thuốc và chế phẩm có tác dụng bảo vệ gan trên mô hình gây độc
gan chuột bằng clorua cácbon
Tác dụng của dược liệu trên men gan GPT và
bilirubin ở chuột gây viêm gan cấp bằng CC, Tác dụng bảo vệ gan của một số chế phẩm từ mã
để và chế phẩm phối hợp giữa các dược liệu Nghiên cứu lập công thức cho bài thuốc hỗ trợ
điều trị VGMHĐ
Kết quả nghiên cứu độc tính và tác dụng dược lý của bài thuốc Cugaima
Trang 103.4.1.1 3.4.1.2 3.4.2 3.4.2.1 3.4.2.2 3.4.2.3 3.4.2.4 3.4.2.5 3.4.2.6 3.5 3.5.1 3.5.2 3.6 3.6.1 3.6.1 3.7 4.1 4.2 4.3
Kết quả nghiên cứu độc tính cấp
Kết quả nghiên cứu độc tính bán trường diễn của thuốc Cugama Kết quả nghiên cứu tác dụng được lý của thuốc Cugama Kết qua thir tac dung tic chế xơ gan của thuốc Cugama Tác dụng chống ơ xy hố Tác dụng lợi mật Tác đụng chống viêm mạn Tác dụng chống viêm cấp
Tác dụng trên hệ miễn dịch của thuốc Cugama
Nghiên cứu quy trình chiết xuất sản phẩm làm
thuốc Cugama
Nghiên cứu chiết xuất sản phẩm từ mã để Nghiên cứu chiết xuất sản phẩm silymarin từ quả cúc gai di thực
Trang 11BANG CAC CHU VIET TAT ADV Adenovirus cS Céng su CGDT Cúc gai di thực DĐVN3 Dược điển Việt Nam II HSV Herpesvirus
Trang 12ĐẶT VẤN ĐỀ
1 Tính cấp thiết của đề tài
Hiện nay tỷ lệ người mắc bệnh viêm gan và đặc biệt là số người có phản ứng HBsAg
(+) ngày càng gia tăng Theo số liệu điều tra dịch tế học tỷ lệ người mang vi rút viêm gan
B ở nước ta là § ~ 15% Theo thống kê của Tổ chức Y tế thế giới (TCYTTG) trên thế giới
_ có khoảng 2 tỷ người nhiễm vi rút viêm gan B (VGB) với trên 350 triệu người mắc VGB
mạn tính, riêng châu Á có 200 triệu người Hàng năm có khoảng 2 triệu người mang vị rút viêm gan B mạn tính bị chết do xơ gan, ung thư gan Những số liệu này cho thấy nhu cầu
thuốc điều trị VGB, đặc biệt là VGB mạn tính cũng như viêm gan B thể hoạt động là rất
lớn
Thuốc tân dược dùng trong điều trị bệnh viêm gan mạn thể hoạt động (VGMHĐ) như alpha Interferon, Lamivudin thường rất đắt và có nhiều phản ứng phụ Thuốc hỗ trợ
điều trị VGMHĐ nguồn gốc thảo mộc đang được chú ý nghiên cứu Số thuốc đưa vào sử dụng chưa nhiều nhưng bước đầu cho thấy có triển vọng tốt trong hỗ trợ điều trị VGB nói chung va VGMHD Các thuốc thảo mộc thường có tác dụng rút ngắn thời gian điều trị, tăng sản xuất kháng thể chống lại kháng nguyén HBsAg, bảo vệ tế bào gan, giảm viêm gan, phục hồi chức năng gan Một số thuốc thảo mộc còn có tác dụng ức chế sự nhân lên của AND vi rút VGB Vì vậy xu hướng của thế giới cũng như của nước ta hiện nay là tìm kiếm các loại thuốc thảo mộc dùng hỗ trợ trong điều trị VGB nói chung và VGMHĐ nói riêng
Theo kinh nghiệm dân gian một số cây thuốc được dùng điều trị viêm gan, hoàng đản, suy giảm chức năng gan, giải độc, như: mã đề, đành dành, nọc sởi, ban tròn, trạch tả, nhó đông, cải trời, ray gai, ctic gai [1, 3, 11, 13, 14] Trong đó, Mã đề, dành dành, cải
trời (hạ khô thảo Nam) đã được Bộ Y tế xếp vào Danh mục cây thuốc Nam điều trị viêm
gan siêu vi trùng [4]
Để góp phần chứng minh tác dụng điều trị viêm gan của một số cây thuốc nêu trên và chọn lọc chế phẩm có triển vọng làm thuốc hỗ trợ điều trị VGMHĐ, chúng tôi tiến
hành nghiên cứu sàng lọc tìm vị thuốc và chế phẩm có tác dụng bảo vệ nhằm tạo ra một
thuốc mới dùng hỗ trợ điều trị VGMHĐ 2 Mục tiêu và nội dung nghiên cứu
Trang 13e_ Nội dung nghiên cứu:
1
PIN
A
Thu thập tài liệu và phân tích bổ sung thành phần hoá học L1 cây thuốc: Ban (nọc
sởi), ban tròn, bạch truật, cải trời, cúc gai di thực, dành dành, mã đề, nhó đông, rau
đắng (biển súc), trạch tả, rầy gai
Nghiên cứu sàng lọc tìm cây thuốc và chế phẩm có tác dụng bảo vệ gan trên mô
hình gây độc chuột bằng tetra clorua cácbon
Lập công thức cho một bài thuốc mới dựa trên bài thuốc cổ phương, tư liệu khoa học và kết quả nghiên cứu sàng lọc
Thử các tác dụng sau đây của bài thuốc: Tác dụng chống viêm cấp, chống viêm mạn tính, tác đụng chống ơ xy hố khử, tác dụng trên men gan; tác dụng ức chế xơ gan, tác dụng lợi mật, độc tính cấp và bán mạn của bài thuốc
Nghiên cứu quy trình chiết xuất sản phẩm làm thuốc Nghiên cứu dạng bào chế thích hợp cho thuốc
Xây dựng tiêu chuẩn cho thuốc
Trang 14CHUONG 1
TONG QUAN TINH HINH NGHIÊN CỨU Ở TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC
1 Một số thông tin chung về 11 cây thuốc - đối tượng nghiên cứu của đề tài:
Mười một cây thuốc có tên dưới đây đã được chọn làm đối tượng nghiên cứu sàng lọc tác dụng bảo vệ gan trên mô hình gây viêm gan cấp bằng CCI, Căn cứ để chọn các cây thuốc này làm đối đượng nghiên cứu là những kết quả nghiên cứu của các tác giả ở _ trong và ngoài nước hoặc kinh nghiệm sử dụng trong dân gian làm thuốc điều trị bệnh gan (VGB, viêm gan siêu vi khuẩn, viêm gan nhiễm trùng, hoàng đản, suy giảm chức năng gan
"
1) Cây Ban (Hypericum Japomicum Thunb.): Cây Ban, còn có tên là điền cơ hoàng, nọc sởi, châm hương Bộ phận sử dụng: Toàn cây (thân, cành mang lá, hoa, rễ)
Cây ban còn là một vị thuốc dùng trong dân gian Tính chất: Theo Đông y cây ban có vị đắng, ngọt, tính bình, không độc vào 2 kinh can và tỳ Có tác dụng thanh thấp nhiệt, _ tiêu thũng trướng, khử tích tiêu thực (chữa tiêu hoá kem, đầy) dùng chữa cam tích, thấp
nhiệt hoàng đẫn Dùng ngoài chữa rắn cắn, bị thương, sưng đau Chữa hoàng đản: cây ban khô: 40 ~ 60 g sắc uống {3, 11]
Theo kết quả nghiên cứu của các nước, cây ban có tác dụng kháng vi rút mạnh (HSV- I, HIV) và kháng khuẩn [26] Tại Trung Quốc cây ban được dùng chữa viêm gan cấp hoặc mãn tính [1,3] Gần đây cây ban được chứng minh có tác dụng chống ô xy hóa lipid mạnh Các tác giả cho rằng tác dụng này có liên quan đến tác dụng bảo vệ gan của dược liệu [30]
Thành phần hoá học: Tại Nhật Bản các tác giả đã chứng minh trong cây ban có các
dẫn xuất phloroglucinol: saroaspidin A, B và C; các sarothralen A, B, C và D; sarothralin
và sarothralin G [26] Gần đây các bisxanthones jacarelhyperol A và B đã được phân lập
từ cây ban ở Nhật Bản [26] ,
Cây ban thu hái tại Việt Nam chưa được nghiên cứu về thành phần hoá học
2) Cây Ban tròn (Hypericum patulum Thunb ex Murr.), thuộc họ măng cụt (Clusiaceae) mọc rất phổ biến ở vùng thượng du miền Bắc và miền Trung nước ta [9] Bộ phận sử dụng làm thuốc là lá và hoa Ở nước ngoài cây ban tròn được trồng làm cây cảnh
Trang 15Ở Trung Quốc cây ban tròn được dùng làm thuốc trị viêm gan cấp và mãn tính [3] Gần đây ở Ấn độ đã nghiên cứu tác đụng của cao methanol fừ lá ban tròn trên khả năng tái tạo tế bào và làm lành vết thương trên chuột Cao methanol được bào chế dưới dạng thuốc mỡ nồng độ 5 và 10 % Cả 2 nồng độ đều thể hiện tác dụng làm lành vết thương có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng [39]
Cao methanol chiết xuất từ cây ban tròn có phổ kháng khuẩn khá rộng Thử tác dụng
kháng ung bướu của cao chiết methanol cây ban tròn cho thấy TC; trên tế bào ung thư gan HEP-2 14 1,71 pg/ml, trén dồng RD là 1,53ng/ml và trên đồng Vero là 2,23ng/ml, Nếu thử với nồng d6 100 - 200 pg/ml thi cao methanol ức chế hoàn toàn đồng ung thu HEP-2 {38 56]
Chưa có công bố về thành phần hoá học cây ban trồn
2) Cây Bạch truật (Atractylodes macrocephala Koidz.): Bộ phận sử dụng là rễ củ
Công dụng: Chữa viêm loét dạ dày, suy giảm chức phận gan, ăn chậm tiêu, lợi tiểu,
trị đái tháo đường, làm tăng hàm lượng cắn khô trong mật có ý nghĩa thống kê (có nghĩa là làm tăng lượng các chất thải trừ qua mật) Chất atractylon trong bạch truật có tác dụng chống suy giảm chức phan gan [1, 11] Bạch truật dùng chữa viêm gan nhiễm trùng
trong bài thuốc phối hợp với nhân trần, trạch tả, dành dành và phục linh [1] Theo kết quả
nghiên cứu của các tác giả Hàn Quốc: dịch chiết methanol 90% của Bạch truật có tác
dụng bảo vệ gan [17]
Thành phần hóa học: Có tính dau (1,4 -1,5% gồm: atractylon, acetoxy atractylon, hydroxy atractylon ); cdc sesquiterpen (a- eudesmol, B- eudesmol); các dẫn chất lacton
(atractynolid I, 0, OT) inulin, vitamin A [1, 11, 13,14]
4) Cải trời (Bhunea lacera DC.): Cải trời còn có tên là hạ khô thảo nam, đại bị rách Bộ phận sử dụng: Cả cây (thân, cành mang lá và hoa) thu haf vào mùa xuân hè, chặt nhỏ phơi khô Cải trời được dùng thay thế hạ khô thảo nhập từ Trung Quốc (Brunella vulgaris) [1 1]
Cải trời (hạ khô thảo Nam) đã được Bộ Y tế xếp vào danh mục cây thuốc Nam điều trị viêm gan siêu vi trùng trong Danh mục thuốc thiết yếu YHCT ban hành kèm theo Quyết
định số 2285/1999/QĐ-BYT ngày 28 tháng 7 năm 1999 của Bộ trưởng Bộ Y tế) [4]
Trang 165) Cúc gai di thực (Silybum marianum (L.) Gaertn.): Theo kinh nghiệm cổ truyền người châu Âu dùng hạt cúc gai làm nước uống bảo vệ gan từ thế kỷ thứ nhất Đến năm 1929
người ta bất đầu chế biến cúc gai thành thuốc để chữa viêm gan cấp, viêm gan mạn và
bệnh hoàng đản Ba mươi năm sau (năm 1958) lần đầu tiên Wagnerr H - một nhà nghiên cứu Đức đã chiết xuất và xác định thành phần có tác dụng chữa các bệnh gan trong quả
cúc gai là silymarin - hỗn hợp flavanolignan [57]
Đến nay, trải qua hơn 70 năm sử dụng và nghiên cứu, cây cúc gai đã trở thành một cây thuốc được các nước châu Âu đánh giá cao về hiệu lực chữa các bệnh gan và bảo vệ
gan Bằng chứng về sự quan tâm đặc biệt này là hàng loạt công trình nghiên cứu đã và
đang được tiến hành nhằm chứng minh cơ chế tác dụng và tìm kiếm những tác dụng mới cua silymarin lén tế bào gan bình thường và tế bào gan bị tổn thương bởi các tác nhân độc hại Nghiên cứu được tiến hành trên động vật, trên bệnh nhân xơ gan và trên bệnh nhân bị ngộ độc do nấm độc, trên các mô hình gây ngộ độc gan thận, thần kinh bằng các thuốc giảm đau, thuốc chữa tâm thần, thuốc chữa ung thư v.v
Thành phần hoá học:
Cúc gai được nghiên cứu chủ yếu về thành phần hoá học của quả Thành phần có tác dụng chính được công nhận là các flavonolignan: silybin Œ), silydianin (TD, silychristin (I), trong đó silybin là chất có tác dụng sinh học chính Ngoài ra, còn có flavonoid
(taxifolin, quercetin, kaempferol), sterol (stigmasterol, B-sitosterol), vitamin C, E va K
Trong hạt cúc gai có khoảng 30% dầu béo, gồm các acid béo, trong đó acid linoleic chiếm
32,4 - 53,6% [31] Trong lá, hoa và thân cúc gai có 4, 5 và 1% tanin thuỷ phân [23]
Trang 17Silydianin “OH CHOH OCH; ‘OH Silychristin
Vé tac dung sinh hoc:
Các công trình nghiên cứu cuả nước ngoài chủ yếu tập trung vào nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của hỗn hợp flavonolignan chiết xuất từ quả cúc gai Những tác dụng sau đây của silymarin đã được chứng minh trên thực nghiệm và trên lâm sàng:
-Bđo vệ chức năng gan thông qua tác dụng điều hoà lipoprotein huyết tương hoặc
tác dụng trực tiếp lên trao đổi cholesterol gan bằng ức chế sinh tổng hợp cholesterol
-Chống oxy hóa, chống xơ vữa và làm bền vững màng tế bào gan Tác dụng này của silymarin có liên quan đến tác dụng ức chế peroxyd hoá màng tế bào hoặc ức chế
lipoxygenase
-Hạ cholesterol và tăng glutathion trong gan Tac dung này liên quan đến tác dụng làm tang HDL -lipoprotein có tỷ trọng cao và ức chế tác dụng của các chất làm giảm giutathion gan ( một chất chống oxyhoá nội sinh) của silymarin [47, 55]
-Phòng chống các chái độc và chát gây ô nhiễm [19]
Trang 18-Kích thích sự tái sinh tế bào gan [31]
-Kéo dài thời gian sống của người bệnh xơ gan do uống rượu [2])
-Cải thiện các chỉ tiêu lâm sàng và xét nghiệm của bệnh nhân viêm gan B [25] -Chống ung thư
Nếu như trước đây nghiên cứu về silymarin được tập trung chủ yếu vào tác dụng bảo
vệ gan và chống viêm gan, thì những năm gần đây nghiên cứu được mở rộng không chỉ theo hướng tác dụng bảo vệ gan mà còn bảo vệ thận và thần kinh chống tác dụng độc hại của các thuốc hoá được : Nhóm thuốc hướng tâm thần, thuốc giảm đau, thuốc chống ung thư, tia xạ, thuốc ức chế miễn dịch v.v [22, 43] Kết quả của hàng loạt thực nghiệm tiến
bành trên động vật gây độc bằng acetaminophen, cisplatin, cyclosporin, haloperidol,
metronidazol v.v đã chỉ ra triển vọng mở rộng phạm vi sử dụng silymarin trong tương
lai đó là dùng hỗ trợ trong điều trị giảm đau, gây mê, tâm thần và ung thư cùng với các
thuốc đặc trị
Silymarin chiết xuất từ hạt cúc gai của nước ngoài đã được nhiều công trình khoa học chứng minh có tác dụng bảo vệ gan, ức chế quá trình peroxy hoá lipid, giải độc, trung hoà các gốc tự do, kích thích sự tái tạo tế bào gan bị tổn thương, ức chế xơ hoá gan do rượu, hạ
cholesterol và tăng glutathion trong gan (một chất chống ô xy hoá nội sinh), chống viêm {[ 24 33, 55] Trên lâm sàng silymarin có tác dụng kéo dài thời gian sống của người bệnh
xơ gan do uống rượu [2l] Silymarin cải thiện các chỉ tiêu lâm sàng và xét nghiệm của các bệnh nhân viêm gan B [37, 25] Ở nước ngoài silymarin được sản xuất dưới dạng viên nến bao phim, hoặc bao đường và đang được bán trên thị trường làm thuốc bảo vệ gan, trị các rối loạn tiêu hoá do suy giảm chức năng gan
Legalon : viên bao chứa 70 mg silymarin của Pháp sản xuất Thuốc đã được Bộ Y tế cấp phép lưu hành ở nước ta Công dụng: Thuốc có tác dụng hướng gan Dùng trong các
trường hợp ăn uống khó tiêu kèm theo rối loạn chức năng gan
Carsil: Viên bao chứa 35 mg silymarin của Bulgaria Công dụng: Điểu trị các rối loạn tiêu hoá do viêm gan, rối loạn chức năng gan Dùng trong viêm gan cấp và viêm gan man, xơ gan ở giai đoạn bù trừ chức năng gan, suy gan, gan nhiễm mỡ
Siyborum: Viên bao chứa 40 mg flavonoid toàn phần chiết xuất từ cây Silybum
marianum
Silymar (Silymarum): Vién bao 0,1 g cao khé tinh ché chiét xuat tiy qua ctic gai (Silybum
marianum L.) cha Vién nghién cttu Cây thuốc CHLB Nga Công dụng: Trị các bệnh viêm
gan, Xơ gan, nhiễm độc gan (kể cả nhiễm độc thuốc, rượu, kim loại nặng)
Trang 196) Danh danh (Gardenia jasminoides Ellis.): Cay danh đành cho vị thuốc gọi là chỉ tử
(Fructus Gardeniae) là quả chín phơi hay sấy khô
Công dụng: Hạ nhiệt, tiêu viêm, lợi tiểu, chữa sốt, ‘Vang da Cao nước dành dành có tác dụng làm giảm lượng sắc tố mật trong máu Cao côn, các chất crocin, crocetin làm
tăng sự phân tiết mật Dành dành phối hợp với nhân trần dùng uống chữa vàng da, vàng
mắt, viêm gan [1, 11] Gardenoside và geniposid có tác dụng ức chế tổng hợp RNA và protein trên chuột Các tác giả Hàn Quốc cho rằng gardenosid có cấu trúc của iridoit glycosid, có tác dụng bảo vệ gan [18] Độc tính cấp của dành dành: Lạ = 83 g / kg thể
trọng chuột [ 49]
Thành phần hoá học: trong quả dành dành có các iridoit glycosid (gardenosid,
gentiobiosid, geniposid, .); các sắc tố œ- crocin, œ- crocetin, tanin, tĩnh dầu, pectin, sterol, 10 — 20% manit, flavonoid (21,01%), caroten, coumarin, lipid, đường khử (1,32%)
[1, LỄ 13, 491
7) Mé dé (Plantago major L., Plantago asiatica L.): Tén khac: xa tién, bong ma dé Ca cây (lá, bông hoa, quả) Mã đề, cũng như dành dành và cải trời đã được Bộ Y tế xếp vào
danh mục cây thuốc Nam điều trị viêm gan siêu vị trùng [4]
Công dụng: Theo Đông Y mã đề có vị nhạt, tính mát có tác dụng thanh nhiệt, lợi
phế, tiêu thũng, thông tiểu tiện [1, 11, 12, 13]
Theo YHCT các nước Chau Au, cay ma dé P major L được đùng với các tác dụng [46]:
- Lam săn se, làm lành vết thương - Chống viêm, làm dịu chỗ sưng đau - Kháng khuẩn, kháng virus
- Long đờm, chữa ho
- Lợi tiểu, thải độc
- Dùng ngoài chữ mày đay, mẩn ngứa, bôi vết côn trùng cắn, làm dịu bệnh trĩ - Hạt mã đề được dùng làm thuốc nhuận tràng
Trang 20- Nước sắc mã đề có tác dụng lợi tiểu [1] Có thể do tác dụng này mà nước sắc mã để còn
được dùng chữa cao huyết áp
- Chống dị ứng, chữa hen do có tác dụng ức chế giải phóng histamin
- Chống viêm, kháng khuẩn [46]
- Chống virus: Dịch chiết nước của P major L có tác dụng chống virus yếu nhưng các
_ chất tỉnh khiết phân lập được từ mã đề như acid cafeic, acid chlorogenic có tác dụng
chống virus manh trén herpesvirus (HSV-1, HSV-2), adenovirus (ADV-3, ADV-11) Aucubin có tác dụng ức chế sự sao chép DNA cua virus viém gan B (HBV) in vitro [17,
18]
- Tac dung chống oxy hoá - Tác dụng chống ung thư [46]
- Dịch chiết methanol của lá có tác dụng điều hoà miễn dịch
- Aucubin được các nhà nghiên cứu Hàn Quốc chú ý về tác dụng bảo vệ gan trên các mô
hình viêm gan thực nghiệm gây bởi carbon tetrachlorid, nấm độc œ-amanitin [16]
Kết quả nghiên cứu gần đây của một số tác giả ở Hàn Quốc cho thấy mã đề có tác dụng bảo vệ gan, giải độc, chống ơ xy hố - tương tự như tác dụng của silymarin chiết xuất từ hạt cúc gai Aucubin — một iridoid glycosid chiết xuất từ cây mã đề và cây Aucuba japonica - đã được chứng mình có tác dụng giải độc của nấm Amanita với liều
200 mg/kg theo đường tiêm bắp, có tác dụng bảo vệ gan, chống ô xy hoá, lợi tiểu Ủ
aucubin với B-glucosidase trong 30 phút sẽ có tác dụng ức chế sự nhân lên của ADN virus VGB in vitro Phat hién nay da dugc cdc tac gia Chang I M và CS (Hàn Quốc) đăng ký bản quyền phát minh sáng chế tại Mỹ năm 1995, được công nhận vào thắng 7 năm 1999 [59] Ngoài Aucubin, trong mã đề còn có một số thành phần khác có tác dụng chống virut, như adenin, - sitosterol Như vậy mã đề là dược liệu có tác đụng ức chế sự nhân lên của virus VGB [16, 17] Vấn đề đặt ra là nghiên cứu điều chế được chế phẩm từ mã đề có tác dụng bảo vệ gan và ức chế sự nhân lên của virus VGB
Thành phần hoá học: Lá chứa iridoit glycosid (aucubin, catapol), các acid hữu cơ
(acid ferulic, cafeic, chlorogenic ), chất nhày (20%), flavonoid (apigenin, querrcetin, baicalein, luteolin ) Hạt có chất nhày, dầu béo, ` 40% acid uronic [1, 11]
8) Nhé déng (Morinda longissima Y Z Ruan.): Theo kinh nghiệm của đồng bao
Thái, nước sắc rễ và lá của cây nhó đông được dùng để chữa các chứng bệnh gan, phù
Trang 21thũng Dịch chiết nước của rễ nhó đông có tác dụng chống ô xy hoá mạnh Với liễu uống 0,5 mi dịch chiết nước 1 : 1 rễ nhó đông đã làm giảm 54,34% MDA (malonyldialdehyd) trong gan chuột (P < 0,05) Dịch chiết nước rễ nhó đông có độc tính rất thấp: cho chuột uống liều 150 ml/kg dịch chiết nước 1 : 1 gấp 3000 lần liều dùng cho người nhưng không
nhận thấy nguy cơ độc hại { 52]
Thành phần hoá học của nhó đông: Thành phần hoạt chất của rễ nhó đông là các anthranoid Hàm lượng anthranoid toàn phần trong rễ là 14,01% và trong lá là 1.13%, trong đó có 4 thành phần chính [ 52]
9) Rau đắng (Polygonum aviculare L.): Rau đắng còn có các tên khác: biển súc, cầng
tôm, mụ khuyết Bộ phận dùng: Toàn cây thu hái vào lúc cây ra hoa, dùng tươi hoặc phơi khô
Tính vị và tác dụng: Rau dắng có vị đắng, tính hơi hàn Thân, cành mang lá, hoa có
tác dụng lợi tiểu, thông lâm, sát trùng, tiêu viêm, diét ky sinh trùng đường ruột Do có acid
*silisic rau đắng làm khô mô phổi và có tác dụng trong điều trị bệnh lao phổi
Công dụng: Thường được dùng trị viêm bàng quang, bí đái, đái buốt, đái đất cấp tính, hoàng đần, ly trực trùng, ngoài da lở ngứa, mụn nhọt, rắn cắn Liểu dùng 12 - 24 gam đạng thuốc sắc [1, 11]
Trong nhân dân rau đắng được dùng làm thuốc lợi tiểu, giải độc, chữa rắn cắn, vàng da , hoàng dan [ 3, 11] Hiện nay Công Ty cổ phần Dược Traphaco sản xuất thuốc bổ gan
(Boganic) từ rau đắng phối hợp với một số vị thuốc khác Rau đắng tham gia trong thành phần một số bài thuốc điều trị viêm gan, suy giảm chức năng gan, hoàng đản
Tại Hàn Quốc rau đắng được sử dụng trong nhân dân làm thuốc hạ sốt, chống giun sán, lợi tiểu Gần đây rau đắng được chứng minh có tác dụng bảo vệ gan Tại Liên Xô rau đắng được dùng làm thuốc trị sỏi thận, sỏi bàng quang [18]
Thành phần hoá học: có flavonoid (2,05 - 2,97%), avicularin, quercitrin, glycosid lignan aviculin, tinhdầu, tanin (0,35%o, vitamin C (9200mg%), caroten (39mg%), các acid
hữu cơ, chất nhày, đường [1, 3, 18] Năm 1994 các tác giả Hàn Quốc đã phân lập từ rau đắng một lignan có tên là aviculin (isolariciresinol rhamnosid) là [32]
10) Ray gai: ( Lasia spinosa (L.) Thwaites):
Trang 22he
Công dụng: Thân rễ Ráy gai được sử dụng trong nhân dân là thuốc trị phù thũng, suy gan, chữa ho, đau bụng, tê thấp, đau lưng, đau đầu gối, di chứng đo sốt rét Liều ding 6 — 12 g/ngày, sắc uống hoặc ngâm rượu
Trong thời ký kháng chiến chống Mỹ, bộ đội miền Đông Nam bộ đã dùng rộng rãi chữa viêm gan, vàng đa, cơ thể suy nhược có kết quả tốt Năm 1973 xưởng Dược X, thuộc phòng Quân Y B; đã sản xuất viên ráy gai, dùng điều trị trên lâm sàng và viên ráy gai phối hợp với bột nghệ làm thuốc bổ gan [1] Ráy gai là thành phần của một số bài thuốc gia
truyền điều trị xơ gan cổ chướng
Tai Sri Lanka than ré ray gai được bày bán tại các quầy rau tươi và chào bán trên mạng thương mại điện tử “Rau tươi của Sri Lanka”
Thanh phan hóa học của thân rễ ráy gai được biết có flavonoid, phenol, acid hữu cơ, acid
amin, saponin triterpen, dudng, tinh bot [1]
11) Trach td (Alisma plantago aquatica L.): Tên khác là mã dé nước Bộ phận sử dụng: thân rễ thu vào tháng 4 - 5 khi cây chuyển sang màu vàng
Công dụng: Làm thuốc lợi tiểu, chữa thuỷ thũng, bụng đầy trướng, bí tiểu tiện [1, 11] Tam dung dich NaCl 5% va sao vang làm tăng tác dụng lợi tiểu và hạ cholesterol
của trạch tả [ 51]
Các alisol A, B, C monoacetat có tác dụng bảo vệ gan, chống các tổn thương gan do CC1¿ gây ra Các alismol và 10-hydroxyalismol có tác dụng trị các rối loạn gan Gần đây ở
Hàn Quốc đã chứng minh trên thực nghiệm: cao methanol 90% của trạch tả có tác dụng
bảo vệ gan trên mô hình dùng thuốc ngủ hexobarbital Tác dụng chống ô xy hoá của trạch tả được chứng minh trên mô hình gây peroxyd hoá lipid bằng ethanol [18]
Thành phần hoá học có tỉnh dầu (alisol A, B, C, epialisol A), nhựa (7%), alismol,
glucan alisman, polysacharid alisman, protid, tỉnh bột, saponin triterpen (1,64%), coumarin, sferol và tanin [1, 11] Sau khi sao tẩm với dung dich NaCl 5% ham lượng
Sapnin tòan phần trong trạch tả tăng cao nhất, đạt 1,77%
1.2 Một số bài thuốc điều trị viêm gan dùng trong nhân dân hoặc đã được
nghiên cứu:
Trong nhân dân đã lưu truyền và đang được sử dụng một số bài thuốc trị các bệnh về gan, trong đó có VGPB, xơ gan cổ chướng, hoàng đản, suy giảm chức năng gan :
Trang 231) Bài thuốc chữa viêm gan siêu vi khuẩn thể cấp tính [13]: Hạ khô thao (40 g); thé
phục linh (12 ø), nghệ vàng (10 g), mã đẻ (40 g), rau má (40 g) Sắc uống ngày l thang
2) Bài thuốc chữa viêm gan siêu vi khuẩn thể mạn tính [ 13}: Hạ khô thảo (30 g), ý đã
(20 g), gừng khô (3 lát), đành dành (12 g), Hoài sơn (20 g), thé phục linh (12 g), sâm
bố chính (20 gø), mã đề (10 g), trần bì (6 ø) Sắc uống ngày 1 thang :
3) Bai thuéc chifa viém gan nhiém tring: bach truat (9 g), Nhan tran (30 g), trach ta 9
g), danh danh (9 g), thé phuc linh (12 g), nước 450 ml Sắc còn 200 ml chia 3 lần uống
trong ngày
4) Bài thuốc chữa viêm gan siêu vi trùng (theo phương pháp chữa thanh nhiệt, lợi thấp)
[13]: Nhân trần (30 g), dành dành (12 ø), vỏ đại (10 g) (hoặc chất chiết 8 g) Sắc uống
ngày 1 thang, uống trong 5 — 7 ngày
5) Chữa vàng da, vàng mắt, viêm gan [11]: Xirô nhân trần: Nhân trần (24 g), chi tir (12
ø), nước 600 ml, sắc còn 100 m], thêm đường cho đủ thành xirô Chia 3 lần uống trong
ngày
6) Bài thuốc LIV-94: Diệp hạ châu đẳng, chua ngút, cổ nhọ nồi Đây là bài thuốc nghiên cứu trong khuôn khổ đẻ tài cấp thành phố : “Đánh giá tác dụng của thuốc LIV-94 làm giam va sach HBsAg trên bệnh nhân viêm gan mạn tính” do BS Nguyễn Bá Kinh(Giám
đốc bệnh viện Thanh nhàn) làm chủ nhiệm kết hợp với Viện quản Y 103 Các vị thuốc
trong bài thuốc này đều là các vị thuốc chỉ huyết lương, có tác dụng cầm máu, lợi mật, hạ men gan, làm giảm và sạch HRsAg- kháng nguyên bề mặt của viêm gan B Bệnh nhân bị viêm gan mạn tính sau khi dùng thuốc LIV-94 từ 50 đến 97% số bệnh nhân được phục hồi men gan transaminase, từ 67 — 100% số bệnh nhân (tuỳ theo bệnh lý ban
đầu) giảm bilirubin toàn phần trở về bình thường
7) Xưô Hebevera — bài thuốc gia truyện của Lương Y Trần Xuân Thiện: Bài thuốc gồm 3 vị: Diệp hạ châu đắng, xuyên tâm liên và chi tử Bài thuốc này đã được lương y Trần Xuân Thiện dùng điều trị cho nhiều thanh niên tình nguyện có HBsAg(+) sau thời gian điều trị có HBsAg (-) Kết qủa nghiên cứu đã được công bố Bài thuốc có 2 tác dụng:
+Chuyển HBsAg (+) trở về âm tính HBsAg(-) là 26,5% (26/98 người)
+Tác động lên hệ miễn dịch, kích thích sản xuất ra kháng thể chống kháng nguyên HBsAg 18 62% trường hợp (59/98 người)
Trang 24Sau này DS Trần Dũng Sỹ cùng PGS Hà Văn Ngạc (Viện Quân Y 103) tiếp tục nghiên cứu dưới dạng xirô Hebevera
8) Bài thuốc VG 99: Bài thuốc gồm 7 vị: Diệp hạ châu đắng, nhân trần, sa tiền, rau má, ngũ vị tử, uất kim, đại hoàng Thuốc được bào chế dưới dạng cao lỏng chiết xuất theo
quy trình của Khoa được, Viện Y học cổ truyền (YHCT) Việt Nam Thuốc đã được
dùng điều trị cho 18 bệnh nhân VGB tại Bệnh viện Đống đa và Viện YHCT với liêu đùng 50 ml/ngày trong 2 tháng Kết quả thuốc VG 99 có tác dụng cải thiện tốt các triệu chứng lâm sàng, làm giảm transaminase máu, giảm hoạt động viêm trên mỡ học ở bệnh nhân VGB mạn tính Tại Sơn La từ lâu bài thuốc này cũng được nhiều người sử dụng để
chữa VGB
9) Bài thuốc bổ gan — thông mật: Thành phần có 3 vị: Cao actisô, cao khô biển súc (rau
đắng), bột hạt bìm bìm Bài thuốc này được một số công ty Dược trong nước sản xuất 10) Bài thuốc tiêu phong nhuận gan số 40: Là thuốc do Cơ sở Đông Nam Dược Ngọc
liên Mỹ tho, Cần thơ sản xuất Thành phần gồm 20 vị: Muồng trâu, rau má, xuyên tâm
liên, rau đắng biển, dâu tắm, hoàng đẳng, nghệ, dứa gai, bèo cái, actisô, lạc tiên, vông
nem, cỏ mần trầu, cỏ mực, móp gai, ô rô, quau nước, chỉ tử, hương phụ và kim ngân
hoa Thuốc có tác dụng nhuận gan, lợi mật, kháng viêm, giải độc, nhuận tràng Trị viêm gan mạn, mệt mỏi, kém ăn, đẩy bụng, đau vùng gan
Trên đây là 10 trong số rất nhiều bài thuốc được sử dụng trong nhân dân để điều trị
viêm gan, rối loạn chức năng gan, viêm gan mạn tính Trong số này cũng có những bài
thuốc đã được chứng minh trên lâm sàng
Nhận xét chung: Các bài thuốc thường có ít nhất 3 vị , nhiều nhất đến 20 vị Một số được liệu có tần suất sử dụng nhiều trong các bài thuốc là: Diệp hạ châu đắng, dành dành, mã để, rau má, nhân trần, actisô, rau đắng Thành phần các bài thuốc thường gồm các vị thanh nhiệt, lương huyết Theo y học hiện đại các vị thuốc có tác dụng chống ô xy hoá là có tác dụng bảo vệ gan, chống viêm gan đo đó có tác dụng giảm men gan và chống hoại tử tế bào gan Một số vị có tác dụng kích thích sản xuất kháng thể chống kháng nguyên HBsAg, ức chế sự nhân lên của vi rút VGB, nhờ vậy làm chuyén HBsAg (+) vé am tinh va giảm số lượng vi rus VGB
Một số hoạt chất có tác dụng trong điều trị viêm gan: Cho đến nay được biết một số nhóm chất có các tác dụng liên quan đến điều trị viêm gan thông qua cơ chế chống ơ xy
hố, bảo vệ tế bào gan như: các flavonoid, các iridoid, cdc hop chat polyphenol,
Trang 26CHUONG 2
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 Đối tượng nghiên cứu:
Đối tượng nghiên cứu là dược liệu của 11 cây thuốc được sử dụng trong dân gian làm thuốc điều trị viêm gan hoặc viêm gan siêu vi trùng, hoặc đã có kết quả nghiên cứu của nước ngoài về tác dụng bảo vệ gan, cụ thể các cây thuốc có tên đưới đây:
Ban (Hypericum Japonicum Thunb.): Thân, cành mang lá, hoa
Ban tròn (Hypericum patulum Thunb ex Murr.): La
Bach truat (Atractylodes macrocephala Koidz.): Cu
Cải trời (Blumea lacera DC.): Cả cây (thân, cành mang lá và hoa) Cúc gai di thực (Silybwm marianum Gaertn.): Hat
Danh danh (Gardenia jasminoides Ellis.): Qua chin Ma dé (Plantago asiatica L.): Ca cay (lá, bông hoa, qua) Nh6o déng (Morinda longissima Y Z Ruan): Ré
Rau dang (Polygonum aviculare L.): Than, canh mang 14, hoa
Ray gai: ( Lasia spinosa (L.) Thwaites): Thân rễ
Trach ta (Alisma plantago aquatica L.): Ct
Cao nước và các phân đoạn hoạt chất của các dược liệu trên được dùng cho thir sang
lọc tìm các được liệu có tác dụng bảo vệ gan và nghiên cứu xây dựng công thức cho bài
thuốc mới dùng hỗ trợ trong điều trị VGMHĐ
2.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Nghiên cứu về hoá học:
2.2.1.1 Dinh tinh các nhóm chát trong được liệu: Các dược liệu chưa biết thành phần
hoá học được phân tích sơ bộ bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKLM) theo tài liệu [ 8] Các hệ dung môi sử dụng trong triển khai SLKM:
1 Ether petrol - ethyi acetat - acid formic (100:10:1,5)
Toluent - ethyl acetat (95:5)
Toluent - ethy] acetat (9:1)
Toluent - ethyl acetat - aceton, acid formic (5:2:2:1)
Toluent - ethyl acetat (9:1) bao hoa hoi amoniac
RAR
WYN
Cloroform - aceton - acid formic (9:2:1)
Trang 287 Ethyl acetat - acid acetic - acid formic - nudc (10:1:1:1)
8 Propanol - ethyl acetat - nước (5:3:3)
9 n-butanol - ethanol - amoniac - nước (7:2:2:3)
10 n-butanol - acid acetic - nuéc (4:1:5)
11 Benzen - ethy] acetat (4:1), (3:1)
2.2.1.2 Định lueng flavonolignan : Nghiên cứu phương pháp định lượng flavonolignan
trong dược liệu và chế phẩm silymarin bằng phương pháp quang phổ tử ngoại trên máy
quang phổ tử ngoại — khả kiến Carry IE của hãng Varian (Mỹ) Tiến hành tại Khoa Hoá
phân tích — Tiêu chuẩn Viện Dược liệu
2.2.1.3 Chiết xuất trong phòng thí nghiệm:
Chiết xuất cao nước: Cao nước toàn phần của các mẫu dược liệu được chiết xuất theo phương pháp ghi trong DĐVN II
Chiết xuất [lavonolignan từ quả cúc gai:
Xử lý nguyên liệu: Quả cúc gai thu hái tại trung tâm nghiên cứu trồng và chế biên cây
thuốc Hà Nội và Trạm nghiên cứu cây thuốc Sa pa - Lào Cai được phơi khô, xay nhỏ
và dùng để nghiên cứu thành phần hóa học và chiết xuất hoạt chất flavonolignan Xác định hàm lượng flavonolignan trong các mẫu quả cúc gai đi thực (CGDT) thu hái trong 3 năm, tại 2 vùng trồng nói trên
Chiết xuất trong phòng thí nghiệm: Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất và
chất lượng sản phẩm như:
Nhiệt độ chiết: nhiệt độ phòng 25 — 30%C, trên bếp cách thuỷ ở 90 - 95°C
Thời gian chiết: 1, 2, 3, 4 giờ đến khi dịch chiết không màu (kiểm tra bằng phản
ứng với dung dịch kiểm: không còn màu vàng khi thêm 1 giọt kiểm) Dung môi: ethanol (80%, 85%, 90% và 96%) và methanol (100%)
Tỷ lệ dung môi : được liệu: 1 : 7 và 1 : 10 Khối lượng dược liệu: 30 ø / mẻ chiết
Dịch chiết được thu hồi dưới áp suất giảm trên máy cô quay cia hang Buichi
Loại đầu béo trong cao chiết bằng ether dầu
Loại tạp bằng methanol, ethanol và nước
Lọc qua giấy lọc, thu được sản phẩm fiavonolignan
Trang 29- Tinh hiéu suat flavonolignan chiét xuat so véi được liệu khô và so với hàm lượng
flavonolignan có trong dược liệu Từ đó xác định các điều kiện chiết xuất tối ưu cho phương pháp chiết trong phòng thí nghiệm
d) Chiết xuất ở quy mơ pÏưt: Áp dụng các điển kiện chiết xuất tối ưu đã chọn được trong quy trình phòng thí nghiệm để xây dựng quy trình chiết xuất pilot
- -Dung méi: ethanol 85%
- _ Tý lệ dung môi : được liệu: 1 : 10 x 3 lần - Thời gian chiết: 1 giờ x 3 lần
- _ Thiết bị chiết: Máy chiết đa năng của Pháp (hãng Tournaer)
- _ Thu hồi dung môi đưới áp suất giảm - _ Loại đầu béo bằng xăng công nghiệp -_ Loại tạp bằng ethanol và nước
-_ bọc flavonolignan và sấy sản phẩm trong tủ sấy chân không ở < 60°C -_ Thu hồi dung môi đưới áp suất giảm và dùng cho chiết mẻ tiếp theo
- _ Khối lượng được liệu: 12 kg/ mẻ x 2 mẻ
s_ Chiết xuất và tính chế cao mã đề:
e) Xử lý nguyên liệu: Dược liệu mã đề thu hái vào tháng 5 - 6 hàng năm tại Trung tâm nghiên cứu trồng và chế bíên cây thuốc Hà Nội được phơi khô, xay nhỏ và dùng để nghiên cứu thành phần hóa học, chiết xuất các phân đoạn hoạt chất phục vụ cho
nghiên cứu
f\ Chiết xuất trong phòng thí nghiệm: Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất và
chất lượng sản phẩm như:
- _ Nhiệt độ chiết: nhiệt độ phòng 25 — 30°C, trên bếp cách thuỷ ở 50°C, 800C
- Thời gian chiết: 1, 2, 3, 4 giờ đến khi dịch chiết không mau
- Dung môi: Nước, ethanol (50%, 80%)
- _ Tỷ lệ dung môi : được liệu: 1 : 10
- _ Khối lượng được liệu: 100 g, 500g, 1000g / mẻ chiết x 3 lần
- _ Dịch chiết được thu hồi dưới áp suất giảm trên máy cô quay của hãng Buichi Sau 46 tách thành hai phân đoạn Fln, F2n (nếu là cao nước) và Flc và F2c (nếu là cao cồn)
bằng ethanol
Trang 30Thu héi ethanol duéi 4p suat giam, thu dugc phan doan F, ~ 1a cdc chat tan trong ethanol 90%
Sấy khô sản phẩm ở 50 — 60°C và cân khối lượng F, và F; thu được
Tính hiệu suất các sản phẩm F; và F; so với dược liệu mã đề khô Từ đó xác định các
điều kiện chiết xuất tối ưu cho phương pháp chiết trong phòng thí nghiệm
g) Chiết xuất ở quy mô pHot Áp dung các điều kiện chiết xuất tối ưu đã chọn được trong quy trình phòng thí nghiệm để xây dựng quy trình chiết xuất pilot
Dung môi: ethanol 50%
Tỷ lệ dung môi : được liệu: I : 10 x 3 lần
Nhiệt độ chiết: Nhiệt độ phòng (25 — 30°C)
Thời gian chiết: 24 giờ x 3 lần Thiết bị chiết: Bình chiết inox Thu hồi dung môi dưới áp suất giảm
Tach thành 2 phân đoạn FIc và F2c
Lọc, thu hồi dung môi dưới áp suất giảm trên thiết bị cô màng mông
Sấy sản phẩm trong tủ sấy chân không
Khối lượng được liệu: 5 kg/ mẻ x 2 mẻ
Tỉnh hiệu suất chiết các sản phẩm F¡c và Fạc so với được liệu mã đề khô Dung môi thu hồi được chỉnh về 50% và dùng để chiết mẻ tiếp theo
2.2.2 Nghiên cứu về độc tính:
2.2.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp:
Độc tính cấp của thuốc Cugama được xác định theo phương pháp nghiên cứu độc
tính cấp của thuốc [7} Thí nghiệm được tiến hành trên chuột nhất trắng khoẻ mạnh, không
phân biệt đực cái, có khối lượng 19 - 22 g do Viện Vệ sinh Dịch tế cung cấp Cho chuột nhịn đói l6 giờ trước khi dùng thuốc
Bột thuốc Cugama được nghiền trong cối sứ và hoà trong nước đến độ đậm đặc thích hợp Cho chuột uống thuốc bằng cách dùng một bơm tiêm có kim cong đầu tù, cho thuốc trực tiếp vào đạ dày Thuốc được dùng một lần Sau khi dùng thuốc, chuột được theo dõi trong 3 ngày Liều lượng thuốc được tính theo bột Cugama tương đương với số gam dược liệu cho 1 kg nặng của chuột
2.2.2.2 Nghiên cứu độc tính bản trường diễn:
* Quá trình thí nghiệm:
Trang 31Thí nghiệm được thử trên thỏ Dùng 2 lô: đối chứng và lô thử thuốc Mỗi lô 6 con thỏ khoẻ mạnh, không phân biệt đực cái, có khối lượng từ 2kg đến 2,2 kg do viện nghiên cứu gia súc Ba Vì cung cấp Thỏ thí nghiệm sau khi mua về được nuôi ở phòng chăn nuôi của phòng thí nghiệm 10 ngày để ổn định điều kiện sống
Khi bắt đầu thí nghiệm tiến hành lấy máu lần đầu để xác định các thông số bình thường của thỏ trước khi uống thuốc Sau đó cho thỏ ở lô thử thuốc uống bột Cugama hoà
trong nước với liều 15g bột/ kg/ ngày Cho thỏ ở lô chứng uống nước cất cùng thể tích
(5mJ/ kg / ngày) Cả 2 lô đều cho uống liền trong 30 ngày
Sau 30 ngày uống thuốc: Lấy máu thỏ để kiểm tra các chỉ số sau 1 tháng uống thuốc
Sau khi ngừng thuốc một tháng: Lấy máu thỏ để kiểm tra các chỉ số sau khi ngừng uống thuốc một tháng Mổ thỏ - Quan sát đại thể và vi thể các cơ quan: gan, thận và
thượng thận
So sánh các chỉ số : sau khi uống thuốc 1 tháng và sau khi ngừng uống thuốc một tháng với chỉ số bình thường của thỏ trước khi uống thuốc (Theo phương pháp thống kê T- student) * Các thông số đánh giá: - Chức phận tạo máu: + Số lượng bạch cầu +Số lượng hồng cầu +Tỷ lệ huyết sắc tố - Chức nãng gan:
+ Định lượng protein toàn phần trong huyết thanh bằng phương pháp Biure [34] +Định lượng hoạt độ các men GÓT và GPT trong huyết thanh theo phương pháp của Reitman- Frankel sửa đổi bởi Sevela dùng 2 cơ chất là L- Alamin và L_
Aspartat [27, 28]
- Chức năng thận :
+ Định lượng urea trong huyết thanh theo phương phấp dùng men ureaza của Rappoport [53]
+Dinh lượng Creatinin trong huyết thanh bằng phản ứng J appe [35]
Xét nghiệm giải phẫu bệnh lý của gan, thận, thượng thận để xem ảnh hưởng cuả
Trang 32ứng
Các chỉ số sinh hoá được định lượng trên máy định lượng sinh hoá bán tự động Scout Kit do hing Human cung cấp Các chỉ số huyết học được đánh giá trên mấy phan tích máu Sysmex KX21, hoá chất do hãng Sysmex cung cấp
2.2.3 Nghiên cứu tác dụng dược lý
2.2.3.1 Nghiên cứu sàng lọc tìm dược liệu và chế phẩm có tác dụng bảo vệ gan trên
mô hình gây tổn thương gan bằng CCl,
_ Thí nghiệm được tiến hành trên chuột nhắt trắng khoẻ mạnh (20-22g/con do Viện Vệ Sinh Dịch Tế cung cấp) không phân biệt đực cái, theo phương pháp của Turner có cải tiến
[54] Kít định lượng GPT, Bilirubin, L-Alanin đo Hãng Human sản xuất Các chế phẩm
chiết xuất từ được liệu (cao nước và các phân đoạn hoạt chất, thuốc cugama) được nghiền trong cối sứ với nước cất đến độ đậm đặc thích hợp và cho uống với liều tương đương 5 —
10 g dược liệu (tuỳ theo thí nghiệm)
*Tiển hành: Chuột thí nghiệm được chia làm 3 16:
+ Lô chuột đối chứng sinh lý: Cho uống nước cất và tiêm đầu ôliu
+ Lô chuột đối chứng bệnh lý: Tiêm 0,1 ml đung địch CCl, trong dầu ô liu (tỷ lệ 1 : 9) / 10 g chuột Tiêm vào các ngày 1, 3, 5
+Lô thử thuốc: Uống thuốc từ ngày 1->§ và tiêm CCl, nhu 16 gây bệnh Đến ngày thứ 8, sau khi cho uống thuốc 1,5 h, chuột được lấy máu để tách huyết thanh và tiến hành định lượng GPT và Bilirubin (không đủ huyết thanh để định lượng GOT)
Men GPT được định lượng bằng phương pháp: dùng L-Alanin Bilirubin được định lượng bằng phương pháp so màu Thực hiện trên máy Định lượng sinh hoá bán tự
động Scout
Kết quả thí nghiệm được biểu thị bằng trị số trung bình cộng trừ sai số chuẩn (M + SE) và đánh giá thống kê giữa các lô bằng nghiệm pháp “t” của Student
2.2.3.2 Nghiên cứu tác dụng ức chế xơ gan và chống peroxy hoá trên mô hình gây xơ
gan bằng CCH [36]
Mô hình xơ gan theo phương pháp của Maros và cộng sự Trên động vật thí nghiệm nếu tiêm CCI, liều thấp trong ít ngày sẽ dẫn đến tổn thương gan Nếu tiêm CCl¿ dài
ngày thì tổn thương gan tiến triển, dẫn đến xơ gan Xơ gan là kết quả của qúa trình tăng tổng hợp và tích tụ colagen ở gan
Thí nghiệm được kéo dài 12 tuần trên chuột cống trắng khỏ mạnh, trọng lượng 90 - 100 g/con Học Viện quân y cung cấp
Trang 33o_ Chuột được chia làm 3 lô:
+ Lô 1: Chứng sinh lý — chuột không gây xơ
+ Lô 2: Chứng gây bệnh — gây xơ Tiêm dưới đa dung dịch CC], trong đầu 6 liu, 2 lần một tuần, trong 12 tuần Nồng độ CCI, và liều dùng tuỳ theo thời gian:
4 tuần đầu: Tỷ lệ CCI, : dau 6 liu là 4 : 1, liều tiêm 0,20 ml/lần/100 g chuột
4 tuần sau: Tý lệ CCI, : dau 6 liu là 4 : 2, liều tiêm 0,30 m1/lần/100 g chuột 4 tuần cuối: Tỷ lệ CC : đầu ô liu là 3 : 2, liều tiêm 0,40 m1/lần/100 g chuột
+ Lô 3: Lô gây xơ + thử thuốc: Cách gây xơ như lô 2, nhưng sau 4 tuần cho chuột uống thuốc hàng ngày với liều tương đương 10 gam dược liệu khô/kg chuột
Sau 12 tuần: Lấy máu chuột để định lượng men GPT và Bilirubin/ huyết thanh Thực
hiện trên máy định lượng sinh hoá bán tự động- Scout Lấy gan chuột làm các xét nghiệm sau:
+ Định lượng colagen gan biểu thị cho xơ gan Tiến hành theo phương phấp Newman- Logan [41] Nguyên tắc của phương pháp: Thuỷ phân gan để giải phóng ra Hydroxyprolin (HP) Cho HP phản ứng với thuốc thử Paradimethylaminobenzaldehyd sé sinh ra một chất có mầu Do quang ở bước sóng 557 nm So sánh với đồ thị chuẩn HP, từ đó suy ra hàm lượng colagen gan ( 1mmol HP tương đương 1 mg colagen)
+ Định lượng MDA ( Malonyldialdehyd) trong gan là thông số biểu thị cho quá
trình peroxy hoá gan Xác định MDA trong gan bằng cách lấy gan ra, nghiền đồng thể, ly
tâm để lấy dịch nổi, rồi cho phản ứng với cho phản ứng với acid thiobarbituric tạo phức
màu hồng [50] Đo cường độ màu ở bước sóng 532 nm để xác định hàm lượng MDA trong mẫu thử Thuốc có tác dụng chống oxy hoá thì lượng MDA hình thành trong gan ít hơn so với lô chứng Hoạt tính chống oxy hoá được tính theo hàm lượng MDA giảm theo % so
với lô chứng ( HTCO)
+ Xét nghiệm giải phẫu mô bệnh học gan (đại thể và vi thể) thực hiện bằng phương pháp quan sát trực tiếp bằng mắt thường và bằng cách cắt tiêu bản, nhuộm màu, rồi soi trên kính hiển vi có độ phóng đại cao
2.2.3.3 Nghiên cứu tác dụng lợi mật
Trang 342.2.3.4 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cáp tính
Tác dụng chống viêm cấp tính được tiến hành theo phương pháp gây phù thực nghiệm bằng carragenin [58] Thí nghiệm được tiến hành trên chuột cống trắng, không phân biệt đực cái, cân nặng 100 — 120 g Thể tích chân chuột được xác định bằng máy đo biến đổi thể tích của hãng Ugo Basill trước (Vạ) và 3 giờ sau khi gây viêm (V;) Tác nhân gây viêm là dung dich 1% carragenin/ dung dich NaCl 9%o Tiém 0,1 ml dung dich carragenin vào dưới da gan bàn chân phải sau của chuột Để dánh giá tác dụng phòng
ngừa, cả tác dụng điều trị, thuốc thử được cho uống 3 lần: + 1 giờ 30 phút trước khi gây
viêm
+30 phút trước khi gây viêm
+ 30 phút sau khi gây viêm
Chuột được uống thuốc bằng kim cong đầu tù bơm thẳng vào dạ dày chuột Tổng
liều tương đương 10g dược liệu/kg So sánh độ phù của bàn chân chuột trước khi gây viêm và 3 giờ sau khi gây viêm
2.2.3.5 Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn tính
Phương pháp: áp dụng phương pháp gây u hạt thực nghiệm của Ducrot Julou và cs Liều thử tương đương 10g dược liệu/kg/ngày x 5 ngày
- Amian sấy tiệt trùng 120”Œ/2 giờ - Dụng cụ mồ vô trùng
- U hạt được cân bằng cân phân tích có độ chính xác 10'
- Chuột cống trắng trưởng thành, cân nặng 110 - 130g được chia làm 3 lô :
1 lô chứng
1 lô tham chiếu uống prednisolon 1 lô thử thuốc
e Tiến hành thí nghiệm:
- Ngày thứ nhất: gây mê chuột, mổ và cấy viên amian có khối lượng 30mg vào dưới da vùng lưng chuột, khâu vết mổ và rắc thuốc để tiệt trùng
~ Ngày 2, 3 và 4: lô chứng uống nước, các lô thử thuốc cho uống thuốc
- Ngày thứ 5: Sau khi uống thuốc liều cuối cùng được 5 giờ, giết chuột bằng Chloroform, bóc tách khối u và cân khối lượng khối u
So sánh khối lượng khối u giữa lô chứng và lô thuốc Nếu thuốc có tác dụng chống viêm thì khối lượng khối u sẽ nhỏ hơn khối lượng khối u của lô chứng
Trang 352.2.3.6 Nghiên cứu tác dụng trên hệ miễn dịch
Thí nghiệm được tiến hành thăm dò trên ở 2 mô hình ở chuột nhất trắng:
1) Gây suy giảm miễn dịch bằng thuốc ức chế miễn dịch (cyclophosphamid) đồng
thời cho uống thuốc thử trong 6 ngày
2) Gây suy giảm miễn dịch bằng thuốc ức chế miễn dịch (cyclophosphamid) Hai ngày sau khi tiêm cyclophosphamid mới cho uống thuốc thử trong 6 ngày (tổng thời gian
thí nghiệm là 8 ngày) ,
Các thông số nghiên cứu : - _ Phản ứng bì với Ovalbumin - _ Trọng lượng lách tương đối -_ Trọng lượng tuyến ức tương đối - - Số lượng bach cau
- _ Công thức bạch cầu: BC trung tính, BC toan, BC môno, tế bào lympho và tế bào diệt tu nhién (NK)
- Quang dung huyết
- Hoa héng man cảm với hồng cầu cừu
Thí nghiệm tiến hành tại Labo Miễn dịch của bộ môn Miễn dịch — Sinh lý bệnh, Đại
học Y Hà Nội
2.2.4 Nghiên cứu bào chế viên nén bao phim Cugama
»® Nguyên liệu
- Bột simarin màu vàng, khơ tơi đạt TCCS: 04TCI,-17/04 (Phulục: 1 ) - Cao mã đề khô, xốp đạt TCCS: 04TCI,-16/04 (Phulục: 1 )
- Các loại tá duoc dùng trong bào chế như lactose, avicel, tinh bột, bột talc đạt
tiêu chuẩn DĐVN HI, DĐVNH, tập 3, Dược điển Mỹ USP 95
© Thiết bị: - Máy dập viên KORSCH
- Nồi bao viên ERWEKA
- May thir do ra LOGAN
- May thi dé mai mon CAMPBELL ELECTRONICS
- Máy đo độ cứng ERWEKA TBH200 - _ Cân phân tích độ ẩm HA60-PRECISA
Trang 36- Phương pháp nghiên cứu viên bao phim theo kỹ thuật bao màng mỏng
Nghiên cứu bào chế viên nén bao phim thuốc Cugama được tiến hành theo quy định trong DĐVN 3
2.2.5 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn viên nén bao phim Cugama và các tiêu chuẩn liên quan (dược liệu, bán thành phẩm)
Đã xây dựng các chỉ tiêu cho tiêu chuẩn quả cúc gai di thực, dược liệu mã đẻ, bột
silymarin, cao khô tỉnh chế mã đề và tiêu chuẩn viên nén bao phim Cugama theo các yêu cầu chung của DĐVNA3
2.2.5 Nghiên cứu độ ổn định của viên bao phim Cugaima
Thuốc Cugama được đóng trong lọ nhựa PVC, phía trên có một lớp bông mỡ và một
gói silscagel nhỏ — làm chất chống ẩm, lọ có 2 nắp đậy kín Thuốc cugama được bảo quản
ở nhiệt độ phòng, nhiệt độ và dộ ẩm thay đổi theo mùa, tránh ánh sáng Thờigian theo dõi:
2 nam
Chi tiêu theo dõi: theo tiêu chuẩn cơ sở: 04TCI, — 18/04 của Viện được liệu với các chỉ tiêu quy định trong D ĐVN 3 và phương pháp xác định độ ổn định của thuốc [ 2] 2.2.6 Xử lý kết qủa nghiên cứu
Các kết quả nghiên cứu được tính theo giá trị trung bình + sai số chuẩn (M + SE) Đánh giá xắc suất thống kê so sánh giữa hai số trung bình được tính theo test “t” của
Student dùng Microsoft — excel
Trang 37CHƯƠNG3
KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU
3.1 Thu thập tài liệu và phân tích bổ sung thành phần hoá học 11 cây thuốc: Ban (nọc sởi), ban tròn, bạch truật, cải trời, cúc gai di thực, dành dành, mã đề, nhó đông, rau
đắng (biển súc), trạch tả, ráy gai
Ba trong số 11 cây thuốc trên chưa được nghiên cứu sơ bộ thành phần hoá học là: : Ban (nọc sởi), ban tròn, cúc gai đi thực Tám cây thuốc còn lại đã được biết thành phần hoá học như đã nêu trong chương 1 — phần tổng quan tài liệu Vì vậy chúng tôi chỉ tiến hành phân tích sơ bộ thành phần hoá học của dược liệu thu hái từ 3 cây thuốc trên
3.11 Kết qúa phân tích sơ bộ thành phần hoá học cây ban (Hypericum japonicum Thunb ) Bảng 3.1 : Kết quả phân tích sơ bộ thành phần hoá học cây ban (thân, cành, lá, hoa)
Trang 389 Glycosid tim 9 Xanthydrol 0 0 - Kedde 10 Amino acid 10 Ninhydrin - 0 - 11 Đường tự do 8 a-naftol T +
Ghi chú: Ð: đỏ; ĐC: đỏ cam H: hồng; HĐ: hồng đỏ; LT: Lơtfm ĐT: đỏ tia; + tím; X: xanh;
XL: xanh lục; VC: vàng cam; VL: vang luc; VN: vang nau
Nhận xét: Bằng phương pháp SKLM cho thấy trong thân, cành, lá và hoa cây ban tròn có
flavonoid, hợp chất phenol, acid nhân thơm, đường tự do, cowmnarin, đầu béo và sterol
3.1.2 Kết qủa phân tích sơ bộ thành phần hoá học lá cây ban tròn (Hypericum
patulum Thunb Ex Murr }
Bảng 3.2 : Kết quả phân tích sơ bộ thành phần hoá bọc lá cây ban tròn
STT Nhóm chất Hệ dung Thuốc thử Mau của vết | Số vết | Đánh giá
Trang 39Alcaloid Munier DC +? 9 Glycosid tim 9 Xanthydrol 0 0 - Kedde 10 Amino acid 10 Ninhydrin - 0 - 11 Đường tự do 8 a-naftol T +? * 9
Ghi chú: Ð: đỏ; ĐC: đỏ cam H: hồng; HĐ: hồng đỏ; LT: Lơ tím ĐT: đỏ tía; T: tím; X: xanh; XL: xanh lục, VC: vàng cam; VL: vang lục; VN: vàng nâu
Nhận xéí: Bằng phương pháp SKLM cho thấy trong lá cây ban tròn có flavonoid, hợp chất
phenol, acid nhân thơm và sterol
3.1.3 Kết qúa phản tích sơ bộ thành phần hoá học quả cúc gai DT [Silybum marianum (L.) Gaertn.] Bảng 3.3: Kết quả phân tích sơ bộ thành phần hoá học quả cúc gai di thực STT | Nhóm chất Hệ dung | Thuốc thử hiện màu | Mảucủa | Số vết | Đánh moi SKLM vét gia két qua 1 Dau béo 1 Rhodamin B và hơi VC 1 +++ iod T 1 2 Sterol 3 Acid sulfuric 50% T 1 ++ XL 1 H 1 3 Hợp chất 4 a-dipyridin va FeCl, DT 4 ++ phenol
4 Coumarin 2 KOH 5%/ethanol, Huynh 3 -
4 soi UV 366 nm trước | quang VL và sau khi phun
5 KOH
Trang 40[ 8 Alcaloid 5 Munier 0 0 - Glycosid tim 9 Xanthydrol 0 0 - Kedde 10 | Amino acid 10 Ninhydrin H 3 11 | Đường tự do 8 œ-naftol T 1 9 Ghi chú: Ð: đỏ, H: hồng; HĐ: hồng đỏ; ĐT: đỏ tía; T: tím; X: xanh; XL: xanh lục; VC: vàng cam; VL; vàng lục; VN: vàng nâu
Nhận xéi: Bằng phương pháp SKLM cho thấy trong quả cúc gai di thực có flavonoid, flavonolignan, hgp chat phenol, acid nhan thom, acid amin, dudng tu do va sterol
Cây cúc gai đã được nhập trồng từ Hungaria vào nước ta từ năm 1985 nhưng đến năm 2001 Viện Dược liệu mới bắt đầu nghiên cứu trồng trọt và khảo sát hàm lượng flavonoHgnan có trong quả Kết quả nghiên cứu của đề tài nhánh KC10-07-02 từ năm 2001 đến 2004 cho thấy cây cúc gai phát triển tốt ở đồng bằng (Hà Nội) và Sapa, cho hàm lượng silymarin trong quả khá cao: từ 2,30 đến 3,2% so với quả khô -tương đương hàm
lượng silymarim trong hạt cúc gai của Bungaria Thời điểm thích hợp để thu hoạch quả cúc
gai làm nguyên liệu chiết xuất silymarin là vào lúc quả già nhưng chưa chín khô
Như vậy có thể sản xuất quả cúc gai ở Việt Nam làm nguyên liệu chiết xuất silymarin Đây là lần đầu tiên cây cúc gai được nghiên cứu toàn diện từ sản xuất nguyên liệu, tác dụng dược lý đến bào chế thuốc ở nước ta
3.1.4 Tổng hợp các thành phần chính của 11 dược liệu nghiên cứu
® - Ban (cả cây): acid hữu cơ, coumarin, đường khử, flavonoid, các hợp chất phenolic,
sterol
® - Ban tròn (lá): acid hữu cơ, flavonoid, các hợp chất phenolic, sterol
© Bạch truật (rễ củ): Dẫn chất lacton, sesquiterrpen, sterol, tỉnh đầu e Cai trdi (cum hoa, qua): flavonoid, tinhdau (cineol, fenchon, citral)
e Ciic gai (qua): amino acid, flavonoid, flavanolignan, dầu béo, đường khử, các hợp chat phenolic, sterol
e Danh danh (qua): Iridoid glycosid (gardenosid, gentiobiosid, geniposid), flavonoid, coumarin, lipid, pectin, s&c t6 (a- crocin, caroten), tanin, tỉnh dầu,