Nghiên cứu độc tính cấp và bán trường diễn của bài thuốc TB15 trên động vật thực nghiệm

Bài viết nghiên cứu tính an toàn của bài thuốc TB15 trên thực nghiệm. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu là xác định độc tính cấp đường uống trên chuột nhắt trắng dòng Swiss theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon và xác định độc tính bán trường diễn trên chuột cống trắng dòng Wistar theo quy định của Bộ Y tế Việt Nam.

Tạp chí y - dợc học quân số 3-2017 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA BÀI THUỐC TB15 TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Hà Thị Nga*; Nguyễn Hồng Ngân**; Trần Quốc Bảo*** TĨM TẮT Mục tiêu: nghiên cứu tính an tồn thuốc TB15 thực nghiệm Đối tượng phương pháp: xác định độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng dòng Swiss theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon xác định độc tính bán trường diễn chuột cống trắng dòng Wistar theo quy định Bộ Y tế Việt Nam Kết quả: chưa tìm thấy LD50 thuốc TB15 theo đường uống chuột nhắt trắng với mức liều cao cho chuột uống 24 228,0 g/kg thể trọng Với liều 23,2 g/kg/24 liều 69,6 g/kg/24 cho chuột cống trắng uống liên tục 60 ngày, thuốc không ảnh hưởng lên trọng lượng thể điện tim chuột; không gây thay đổi có ý nghĩa thống kê số huyết học, sinh hóa; khơng gây biến đổi mơ bệnh học gan, lách, thận chuột nghiên cứu Kết luận: thuốc TB15 khơng gây độc tính cấp độc tính bán trường diễn động vật thực nghiệm * Từ khóa: Bài thuốc TB15; Độc tính cấp; Độc tính bán trường diễn; Động vật thực nghiệm Studying the Acute Toxicity and Semi-Chronic Toxicity of Herbal Medicines TB15 on Experimental Animals Summary Objectives: To study the safety of herbal medicines TB15 on experimental animal Subjects and methods: The oral acute toxicity was evaluated on Swiss mice by the Litchfield - Wilcoxon’s method and the semi-chronic toxicity was evaluated on Wistar rats according to Vietnam Health Ministry’s regulation Results: With the highest dose that mice could drink in 24 hours (228.0 g/kg bw), LD50 of TB15 was not identified With the dose of 23.2 g/kg and 69.6 g/kg per day for 60 consecutive days, TB15 did not affect body weight and ECG of rats; did not cause any statistically significant changes in hematological and biochemical indexes; did not cause any changes in histology of liver, spleen, kidney of experimental rats Conclusion: Herbal medicines TB15 did not cause acute toxicity and semi-chronic toxicity on experimental animals * Key words: Herbal medicine TB15; Acute toxicity; Semi-chronic toxicity; Experimental animal ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn lipid máu có xu hướng ngày tăng Rối loạn lipid máu làm tăng nguy bệnh lý tim mạch, suy giảm chức nhiều quan (gan, thận, sinh dục ) Sử dụng kéo dài thuốc tân dược điều trị rối loạn lipid máu thường có nhiều tác dụng phụ [6] Y học cổ truyền có nhiều vị thuốc, thuốc hay điều trị rối loạn lipid máu có hiệu tính an tồn cao * Viện Y học Cổ truyền TP Hồ Chí Minh ** Học viện Quân y *** Bệnh viện Quân y 103 Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Hoàng Ngân (nguyenhoangngan@yahoo.com) Ngày nhận bài: 05/12/2016; Ngày phản biện đánh giá báo: 15/02/2017 Ngày báo đăng: 01/03/2017 24 T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2017 Bi thuc TB15 gồm vị thuốc đông dược, phát triển dùng điều trị hạ lipid máu cho bệnh nhân Viện Y Dược học Dân tộc Thành phố Hồ Chí Minh nhiều năm qua Các vị thuốc thuốc TB15 với liều lượng có tính an tồn cao [3] Đây thuốc nghiệm phương nên theo quy định Bộ Y tế cần đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trường tiền lâm sàng trước ứng dụng rộng rãi điều trị đưa vào dạng bào chế đại hóa y dược học cổ truyền [1] Vì vậy, tiến hành nghiên cứu nhằm: Đánh giá kết nghiên cứu độc tính cấp độc tính bán trường diễn dịch chiết thuốc TB15 động vật thực nghiệm ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng, vật liệu nghiên cứu * Thuốc nghiên cứu: thuốc TB15 Công thức thuốc TB15: Trạch tả (Alisma plantago Aqualica L) 30 g, Đại hoàng (Rheum palmatum L.) 08 g, Sơn tra (Crataeguscuneara Sied.et Zucc) 12 g, Bạch truật (Atractylodes macrocephala) 20 g, Phá cố (Psoralea Corylifolia L) 10 g, Đan sâm (Radix Salviae multiorrhizae) 30 g, Chỉ xác (Fructus citri Aurantii) 20 g, Qua lâu nhân (Semen Trichosanthis) 15 g - Nơi sản xuất: Khoa Dược, Viện Y Dược học Dân tộc Thành phố Hồ Chí Minh, dạng dịch chiết theo tỷ lệ 1:1 (1 ml cao chứa g dược liệu), đạt tiêu chuẩn sở - Thuốc dùng nghiên cứu thực nghiệm: thuốc TB15 dạng dịch chiết quay chân khơng đến độ đậm đặc cho chuột uống kim đầu tù chuyên dụng Cao đặc dung dịch thuốc pha loãng nồng độ khác nhau, dùng cho chuột uống đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn động vật thực nghiệm * Động vật sử dụng nghiên cứu: Chuột nhắt trắng dòng Swiss, 40 con, cân nặng 18 - 22 g Chuột cống trắng dòng Wistar, 24 con, cân nặng 160 - 180 g Động vật Ban cung cấp Động vật thí nghiệm, Học viện Qn y cung cấp, ni phòng ni động vật thí nghiệm tuần trước nghiên cứu thức ăn chuẩn dành cho động vật nghiên cứu, nước uống tự * Dụng cụ máy móc: Máy xét nghiệm sinh hố Evolution 3000 (Italia) sử dụng hóa chất hãng; máy xét nghiệm huyết học Humacount 30TS (Đức) sử dụng kít xét nghiệm hãng phần mềm xét nghiệm cho chuột; máy điện tim Fukuda FX 7102 (Fukuda, Nhật Bản); cân phân tích 10-4, model CP224S (Sartorius, Đức) Phương pháp nghiên cứu * Nghiên cứu độc tính cấp: Nghiên cứu độc tính cấp thuốc thử chuột nhắt trắng đường uống theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon [2], hướng dẫn Tổ chức Y tế Thế giới [7] thông tư hướng dẫn thử thuốc lâm sàng Bộ Y tế [1] Trước tiến hành thí nghiệm, cho chuột nhịn ăn 16 giờ, nước uống tự Sau 16 giờ, chia ngẫu nhiên chuột thành lô, lô Các lô thử cho uống thuốc với thể tích 0,2 ml/10 g/lần, 25 T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2017 ln/24 gi, lần cách Mức liều cho uống lô tăng dần: 76,0 g/kg; 91,2 g/kg; 114,0 g/kg; 152,0 g/kg; 228,0 g/kg thể trọng Theo dõi tình trạng chung chuột số lượng chuột chết lơ vòng 72 sau cho chuột uống thuốc lần cuối Tìm liều cao khơng gây chết chuột (0%), liều thấp gây chết chuột hoàn tồn (100%) liều trung gian Từ xây dựng đồ thị tuyến tính để xác định LD50 thuốc thử (nếu có) Sau đó, tiếp tục theo dõi tình trạng chung chuột (hoạt động, ăn uống, tiết…) lô hết ngày sau uống thuốc hemoglobin, hematocrit, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu số lượng tiểu cầu); sinh hóa đánh giá chức gan (ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin cholesterol toàn phần) chức thận (nồng độ creatinin huyết thanh) [4, 5] Sau 60 ngày uống thuốc, mổ chuột để quan sát đại thể toàn quan Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, lách, thận 30% số chuột lô Các xét nghiệm vi thể thực Bộ môn Khoa Giải phẫu bệnh - Pháp y, Bệnh viện Quân y 103 Tiến hành phẫu tích, quan sát tình trạng tạng sau có chuột chết (nếu có) để xác định nguyên nhân gây độc * Xử lý số liệu: theo phương pháp thống kê y sinh học, so sánh Anova test, sử dụng phần mềm SPSS 16.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 * Nghiên cứu độc tính bán trường diễn thực nghiệm: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Theo quy định Bộ Y tế Việt Nam [1], hướng dẫn Tổ chức Y tế Thế giới [7] đánh giá tính an tồn hiệu lực thuốc y học cổ truyền Chuột cống trắng 24 con, chia ngẫu nhiên thành lô, lô - Lô chứng: uống nước - Lô trị 1: uống TB15 liều 23,2 g dược liệu/kg/ngày (tương đương liều người) - Lô trị 2: uống TB15 liều 69,6 g dược liệu/kg/ngày (gấp lần liều người) Cho chuột uống hàng ngày, 60 ngày kim đầu tù chuyên dụng Theo dõi tiêu trước lúc uống thuốc, sau 30 60 ngày uống thuốc, gồm: tình trạng chung, thể trọng chuột; điện tim chuột ghi đạo trình DII; huyết học (số lượng hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hàm lượng 26 Kết nghiên cứu độc tính cấp Sau lần uống thuốc với lượng lớn, chuột có biểu mệt mỏi nhẹ, giảm vận động ăn uống, sau vài chuột trở lại hoạt động, vận động ăn uống bình thường; đồng tử mắt chuột bình thường; khơng có biểu khó thở hay tím tái; chuột ngồi phân khn, số chuột có ngồi phân nát, sau nhanh chóng trở lại bình thường Chuột nhắt trắng uống thuốc thử với mức liều khác nhau, từ liều thấp 76,0 g dược liệu/kg thể trọng đến liều cao 228,0 g dược liệu/kg thể trọng, 0,2 ml/10 g, lần 24 Chuột uống đến liều 228,0 g dược liệu/kg thể trọng liều tối đa dùng đường uống để đánh giá độc tính cấp thuốc thử, khụng cú chut no cht Tạp chí y - dợc häc qu©n sù sè 3-2017 Bảng 1: Kết đánh giá số chuột chết lơ vòng 72 sau uống TB15 Lơ chuột Số chuột thí nghiệm Liều sử dụng tính theo g dược liệu (g/kg trọng lượng thể) Thể tích cho uống Số chuột sống/chết sau 72 Lô 08 76,0 0,2 ml x lần 8/0 Lô 08 91,2 0,2 ml x lần 8/0 Lô 08 114,0 0,2 ml x lần 8/0 Lô 08 152,0 0,2 ml x lần 8/0 Lô 08 228,0 0,2 ml x lần 8/0 Tiếp tục theo dõi chuột ngày sau uống thuốc, không thấy xuất triệu chứng bất thường nào, khơng có chuột chết Chưa tìm thấy LD50 dịch chiết thuốc TB15 theo đường uống chuột nhắt trắng Với mức liều cao cho chuột uống 24 228,0 g dược liệu/kg thể trọng khơng xuất độc tính cấp Với dược liệu có liều chết LD50 gấp 10 lần điều trị xem có khoảng an tồn điều trị tốt [2] Kết khơng tìm thấy LD50 khơng thấy biểu độc tính cấp cho chuột uống đến mức liều tối đa, cho thấy dịch chiết thuốc TB15 có tính an tồn cao thử nghiệm đánh giá độc tính cấp chuột Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn * Ảnh hưởng TB15 lên tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột cống trắng dùng dài ngày: - Tình trạng chung: Chuột lô chứng lô dùng dịch chiết thuốc TB15 hoạt động bình thường, lơng mượt, da niêm mạc ăn uống bình thường, phân thành khn - Thay đổi thể trọng điện tim chuột: Bảng 2: Ảnh hưởng thuốc TB15 thể trọng điện tim chuột (đạo trình DII) Thời điểm xét nghiệm Lô chứng (1) Lô trị (2) Lô trị (3) pso sánh lô Thể trọng (g) Trước thí nghiệm (a) 168,50 ± 4,47 167,25 ± 4,56 170,63 ± 4,17 Sau 30 ngày (b) 203,75 ± 8,26 199,50 ± 3,12 198,63 ± 6,44 Sau 60 ngày (c) 226,38 ± 6,12 220,38 ± 5,55 218,25 ± 5,42 pso sánh thời điểm pb-a < 0,01; pc-a< 0,01; pc-b< 0,01 p > 0,05 p3-1 < 0,05 - Tần số tim (chu kỳ/phút, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 488,25 ± 14,90 484,13 ± 14,13 486,38 ± 15,82 Sau 30 ngày (b) 488,63 ± 17,74 484,00 ± 13,10 483,13 ± 10,66 Sau 60 ngày (c) 486,75 ± 19,47 485,13 ± 21,10 487,13 ± 14,44 pso sánh thời điểm pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 - 27 Tạp chí y - dợc học quân số 3-2017 Biên độ (mV, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 0,314 ± 0,027 0,314 ± 0,057 0,313 ± 0,031 Sau 30 ngày (b) 0,313 ± 0,035 0,313 ± 0,044 0,314 ± 0,028 Sau 60 ngày (c) 0,316 ± 0,040 0,314 ± 0,052 0,313 ± 0,038 pso sánh thời điểm Sóng bất thường p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 Không Không So sánh thời điểm sau so với trước thấy thể trọng chuột ba lô nghiên cứu tăng, thay đổi có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Thể trọng chuột hai lô uống dịch chiết thuốc TB15 thời điểm sau 30 60 ngày giảm so với lô chứng sinh lý; nhiên lô dùng TB15 liều thời điểm sau 60 ngày, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) So sánh lô với thời điểm so sánh lô Không - thời điểm thí nghiệm, tần số biên độ điện tim chuột thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Khơng có sóng bất thường điện tim lô chuột thời điểm nghiên cứu Dịch chiết thuốc TB15 với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chưa gây thay đổi điện tim chuột * Ảnh hưởng dịch chiết thuốc TB15 số tiêu huyết học chuột: Bảng 3: Ảnh hưởng dịch chiết thuốc TB15 lên số tiêu huyết học chuột (n = 8, X ± SD) Thời điểm xét nghiệm Lô chứng (1) Lô trị (2) Lô trị (3) pso sánh lô 12 Số lượng hồng cầu chuột (x10 g/l) Trước thí nghiệm (a) 7,39 ± 1,07 7,28 ± 0,72 7,36 ± 0,51 p2-1 > 0,05 Sau 30 ngày (b) 7,10 ± 0,48 7,13 ± 0,18 7,27 ± 0,52 p3-2 > 0,05 Sau 60 ngày (c) 7,26 ± 0,97 7,09 ± 0,90 7,10 ± 0,98 p3-1 > 0,05 pso sánh thời điểm pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 - Hàm lượng huyết sắc tố máu chuột (g/dl) Trước thí nghiệm (a) 13,58 ± 2,32 13,24 ± 1,16 13,10 ± 1,21 p2-1 > 0,05 Sau 30 ngày (b) 12,89 ± 1,19 12,86 ± 0,54 13,19 ± 0,86 p3-2 > 0,05 Sau 60 ngày (c) 12,98 ± 1,44 12,81 ± 1,05 12,85 ± 1,51 p3-1 > 0,05 pso sánh thời điểm pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 - Hematocrit (%) Trước thí nghiệm (a) 35,09 ± 6,54 32,86 ± 2,67 32,58 ± 2,42 Sau 30 ngày (b) 32,41 ± 3,65 32,03 ± 1,56 33,11 ± 2,16 28 p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 T¹p chí y - dợc học quân số 3-2017 Sau 60 ngày (c) pso sánh thời điểm 33,94 ± 2,97 32,70 ± 2,52 p3-1 > 0,05 32,66 ± 4,18 pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 - Thể tích trung bình hồng cầu (fl) Trước thí nghiệm (a) 47,29 ± 2,44 45,63 ± 2,47 44,24 ± 1,57 Sau 30 ngày (b) 45,56 ± 3,34 46,16 ± 2,98 45,50 ± 0,68 Sau 60 ngày (c) 46,99 ± 3,10 47,53 ± 3,39 46,80 ± 2,09 pso sánh thời điểm p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 - Số lượng bạch cầu (G/l) Trước thí nghiệm (a) 7,21 ± 1,45 7,34 ± 3,46 7,51 ± 3,66 Sau 30 ngày (b) 7,46 ± 3,76 7,40 ± 2,29 7,56 ± 4,49 Sau 60 ngày (c) 7,34 ± 2,24 7,14 ± 1,50 7,46 ± 3,93 pso sánh thời điểm p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 - Số lượng tiểu cầu (G/l) Trước thí nghiệm (a) 498,38 ± 182,74 471,50 ± 139,60 476,00 ± 82,49 Sau 30 ngày (b) 512,13 ± 141,35 512,50 ± 108,66 458,13 ± 92,78 Sau 60 ngày (c) 519,88 ± 179,52 508,13 ± 107,99 462,13 ± 126,66 pso sánh thời điểm p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 - So sánh lô với thời điểm so sánh lơ thời điểm thí nghiệm, số huyết học (số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu số lượng tiểu cầu) thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Dịch chiết thuốc TB15 với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu chưa gây thay đổi tiêu huyết học chuột * Ảnh hưởng dịch chiết thuốc TB15 số tiêu sinh hóa: Bảng 4: Ảnh hưởng dịch chiết thuốc TB15 số tiêu sinh hóa (n = 8, X ± SD) Thời điểm xét nghiệm Lô chứng (1) Lô trị (2) Lô trị (3) pso sánh lô Hoạt độ AST (UI/l) Trước thí nghiệm (a) 213,50 ± 56,85 220,51 ± 65,36 201,10 ± 38,77 p2-1 > 0,05 Sau 30 ngày (b) 219,39 ± 45,88 214,20 ± 66,02 203,69 ± 51,10 p3-2 > 0,05 Sau 60 ngày (c) 201,36 ± 58,61 199,53 ± 35,72 196,91 ± 59,36 p3-1 > 0,05 pso sánh thời điểm pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 - Hoạt độ ALT (UI/l) Trước thí nghiệm (a) 78,79 ± 51,99 71,30 ± 23,18 68,65 ± 21,51 Sau 30 ngày (b) 102,24 ± 55,63 85,19 ± 20,48 77,40 ± 20,69 p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 29 T¹p chí y - dợc học quân số 3-2017 Sau 60 ngày (c) pso sánh thời điểm 75,75 ± 24,87 70,10 ± 10,28 82,00 ± 25,49 pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 p3-1 > 0,05 - Albumin huyết tương (g/l) Trước thí nghiệm (a) 22,03 ± 2,49 23,99 ± 5,29 21,74 ± 2,54 Sau 30 ngày (b) 23,43 ± 2,16 22,13 ± 1,94 23,98 ± 1,54 Sau 60 ngày (c) 22,20 ± 4,41 22,03 ± 2,13 21,09 ± 3,10 pso sánh thời điểm pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 - Cholesterol toàn phần (mmol/l) Trước thí nghiệm (a) 2,21 ± 0,40 2,24 ± 0,64 2,41 ± 0,59 Sau 30 ngày (b) 2,19 ± 0,51 1,80 ± 0,34 1,79 ± 0,20 Sau 60 ngày (c) 2,16 ± 0,71 1,49 ± 0,26 1,42 ± 0,19 p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 < 0,05 pso sánh thời điểm p > 0,05 pc-a < 0,05 Pc-a < 0,01 - Bilirubin tồn phần (µmol/l) Trước thí nghiệm (a) 48,49 ± 12,46 51,09 ± 15,62 51,13 ± 32,66 Sau 30 ngày (b) 50,06 ± 14,59 55,76 ± 17,68 53,74 ± 19,73 Sau 60 ngày (c) 49,75 ± 19,42 53,13 ± 18,43 51,11 ± 18,90 pso sánh thời điểm pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 - Creatinin (µmol/l) Trước thí nghiệm (a) 76,69 ± 23,23 84,48 ± 15,64 75,28 ± 21,66 Sau 30 ngày (b) 96,73 ± 20,94 77,23 ± 9,23 85,45 ± 8,43 Sau 60 ngày (c) 85,91 ± 12,48 80,34 ± 5,87 82,13 ± 5,00 pso sánh thời điểm pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 Kết đánh giá số cholesterol máu toàn phần chuột cho thấy chế phẩm có tác dụng làm giảm cholesterol máu Bài thuốc TB15 Viện Y Dược học Dân tộc Thành phố Hồ Chí Minh dùng điều trị hạ lipid máu bệnh nhân Do vậy, chuột giảm thể trọng tác dụng hạ lipid máu chế phẩm So sánh lô với thời điểm so sánh lô thời điểm thí nghiệm, số sinh hóa máu chuột (hoạt độ enzym AST, ALT; albumin; bilirubin toàn phần; creatinin) thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 30 p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 - So với lô chứng sinh lý, số cholesterol tồn phần máu chuột lơ dùng dịch chiết thuốc TB15 thời điểm sau 30 60 ngày dùng thuốc giảm Khác biệt có ý nghĩa thống kê đạt với lơ dùng dịch chiết thuốc TB15 liều thời điểm sau 60 ngày dùng thuốc (p < 0,05) So sánh lô, lô dùng dịch chiết thuốc TB15 có số cholesterol tồn phần máu chuột thời điểm sau 30 60 ngày dùng thuốc giảm so với trước thí nghiệm Ở lơ dùng dịch chiết thuốc TB15 liều 2, thay đổi có ý nghĩa thống kê đạt T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2017 c thời điểm (p < 0,05 sau 30 ngày dùng thuốc p < 0,01 thời điểm sau 60 ngày dùng thuốc) Ở lô dùng dịch chiết thuốc TB15 liều 1, thay đổi có ý nghĩa thống kê đạt thời điểm sau 60 ngày dùng thuốc (p < 0,05) Dịch chiết thuốc TB15 với mức liều thời gian sử dụng nghiên cứu làm giảm cholesterol tồn phần máu; khơng làm thay đổi số sinh hóa máu chuột gồm hoạt độ enzym AST, ALT, albumin, bilirubin toàn phần, creatinin * Kết mơ bệnh học tạng chuột thí nghiệm: c b a Hình 1: Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô chứng (a), lô trị (b), lô trị (c) Quan sát đại thể mắt thường kính lúp có độ phóng đại 25 lần thấy: màu sắc, hình thái gan, lách thận hai lô dùng dịch chiết thuốc TB15 không khác so với chứng G a G b G c Hình 2: Hình ảnh vi thể gan kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị (G.b) lô trị (G.c) Khơng khác biệt so với hình ảnh vi thể gan chuột lơ chứng (G.a) Trên hình ảnh khơng thấy xuất huyết hoại tử, thối hóa tế bào gan L a L b L c Hình 3: Hình ảnh vi thể lách kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị (L.b) lơ trị (L.c) 31 T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2017 Khụng khỏc bit so với hình ảnh vi thể lách chuột lơ chứng (L.a) Trên hình ảnh thấy vùng tủy trắng bắt màu xanh thẫm, tập trung nang lympho lớn Vùng tủy đỏ có màu xanh đỏ, với xoang nang chứa nhiều hồng cầu số đại thực bào Không thấy xuất huyết hoại tử T a T b T c Hình 4: Hình ảnh vi thể thận kính hiển vi với độ khuếch đại 400 lần chuột lô trị (T.b) lô trị (T.c) Khơng khác biệt so với hình ảnh vi thể thận chuột lô chứng (T.a) Các tế bào ống thận bắt màu xanh thẫm Cấu trúc vùng chức thận bình thường KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO - Về độc tính cấp: chưa tìm thấy LD50 dịch chiết thuốc TB15 theo đường uống chuột nhắt trắng Với mức liều cao cho chuột uống 228,0 g dược liệu/kg thể trọng, biểu độc tính cấp Bộ Y Tế Thông tư Hướng dẫn thử thuốc lâm sàng (03/2012/TT-BYT) 2012 - Về độc tính bán trường diễn: với liều 23,2 g dược liệu/kg chuột/24 liều 69,9 g dược liệu/kg chuột/24 giờ, liên tục 60 ngày, dịch chiết thuốc TB15 không gây ảnh hưởng lên điện tim chuột; không làm thay đổi số huyết học (hồng cầu, huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu) sinh hóa máu (AST, ALT, bilirubin tồn phần, albumin, creatinin), khơng gây tổn thương mô bệnh học gan, lách, thận Chuột dùng thuốc nghiên cứu tăng trọng lượng, mức độ tăng so với lơ chứng sinh lý Chỉ số cholesterol máu tồn phần lơ dùng thuốc giảm so với lô chứng sinh lý so với trước dùng thuốc Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương Xét nghiệm sử dụng lâm sàng Nhà xuất Y học 2001 32 Đỗ Trung Đàm Phương pháp xác định độc tính thuốc Nhà xuất Y học 2014 Đỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học 2004 Vũ Đình Vinh Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hoá Nhà xuất Y học 2001, tr.115-287 Paul S Jellinger et al American Association of Clinical Endocrinologists and American College of endocrinology guidelines for management of dyslipidemia and prevention of atherosclerosis AACE 2017 Guidelines 2017 World Health Organization Working group on the safety and efficacy of herbal medicine Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 2000  ... hành nghiên cứu nhằm: Đánh giá kết nghiên cứu độc tính cấp độc tính bán trường diễn dịch chiết thuốc TB15 động vật thực nghiệm ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng, vật liệu nghiên. .. loãng nồng độ khác nhau, dùng cho chuột uống đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn động vật thực nghiệm * Động vật sử dụng nghiên cứu: Chuột nhắt trắng dòng Swiss, 40 con, cân nặng 18... nặng 160 - 180 g Động vật Ban cung cấp Động vật thí nghiệm, Học viện Qn y cung cấp, ni phòng ni động vật thí nghiệm tuần trước nghiên cứu thức ăn chuẩn dành cho động vật nghiên cứu, nước uống tự