NGHIÊN cứu độc TÍNH cấp và bán TRƯỜNG DIỄN của VIÊN NANG “HOẠT HUYẾT DƯỠNG cốt HV” TRÊN THỰC NGHIỆM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM PHẠM THỊ THU TRANG NGHIÊN CứU Độc tính cấp bán tr-ờng diễn viên nang hoạt huyết d-ỡng cốt hv thùc nghiÖm LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC HÀ NỘI – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM PHM TH THU TRANG NGHIÊN CứU Độc tính cấp bán tr-ờng diễn viên nang hoạt huyết d-ỡng cốt hv” trªn thùc nghiƯm Chun ngành Y học cổ truyền Mã số: 872 0115 LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Phạm Thúc Hạnh HÀ NỘI – 2018 LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận văn này, với tất lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn đến Đảng ủy, Ban Giám đốc, Phòng đào tạo Sau Đại học, Bộ mơn, Khoa phòng Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, nơi trực tiếp đào tạo tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Phạm Thúc Hạnh, Trưởng phòng Đào tạo Sau Đại học – Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, người thầy hướng dẫn trực sát, thường xuyên giúp đỡ, cho nhiều ý kiến quý báu, sát thực trình học tập, nghiên cứu để hoàn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Hà Nội quan tâm, tạo điều kiện tốt cho việc thu thập, hoàn thiện số liệu nghiên cứu để hoàn thành đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Thầy, Cô Hội đồng thông qua đề cương luận văn cho nhiều ý kiến q báu q trình hồn thiện luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy, Cô, bác sỹ, kỹ thuật viên Bộ môn Dược lý, trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập, nghiên cứu làm việc Bộ môn Tôi vô biết ơn gia đình, bạn bè, anh chị em đồng nghiệp tập thể học viên lớp cao học khóa 2016 – 2018 chuyên ngành Y học cổ truyền động viên, giúp đỡ suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Xin trân trọng cảm ơn! Học viên Phạm Thị Thu Trang LỜI CAM ĐOAN Tôi Phạm Thị Thu Trang, Học viên Cao học khóa chuyên ngành Y học cổ truyền Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn khoa học Thầy PGS.TS Phạm Thúc Hạnh Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 31 tháng 12 năm 2018 Người viết cam đoan Phạm Thị Thu Trang CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt ALT AST Tiếng Việt Chỉ số enzyme gan Tiếng Anh Alanin Amino Transferase Aspartat Amino Transferase D0 Ngày đầu uống thuốc Date D15 Ngày thứ 15 sau uống thuốc Date 15 D30 Ngày thứ 30 sau uống thuốc Date 30 HE×400 Nhuộm Hematoxylin - Eosin, Hematoxylin - Eosin độ phóng đại 400 lần TB Trung bình TNHH Trách nhiệm hữu hạn YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại WHO Tổ chức y tế giới World Health Organization MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ……………………………………………………………… Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Quá trình phát triển đưa thuốc vào sử dụng 1.1.1 Nghiên cứu thăm dò 1.1.2 Tối ưu hóa 1.1.3 Sản xuất lô thử nghiệm 1.1.4 Thử nghiệm tiền lâm sàng 1.1.5 Nghiên cứu lâm sàng 1.1.6 Đăng kí thuốc 1.2 Tổng quan nghiên cứu tiền lâm sàng 1.2.1 Nghiên cứu độc tính 1.2.2 Vai trò nghiên cứu tiền lâm sàng 1.3 Tổng quan viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 1.3.1 Xuất xứ 1.3.2 Thành phần 1.3.3 Dạng thuốc 1.3.4 Đơn vị sản xuất 1.3.5 Tác dụng 1.3.6 Liều dùng dự kiến lâm sàng 1.3.7 Phân tích thành phần viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 1.4 Cơ sở lý luận nghiên cứu đánh giá độc tính cấp bán trường diễn viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” điều trị bệnh nhân viêm khớp viêm khớp dạng thấp 1.4.1 Xây dựng thuốc nghiên cứu dựa sở sinh lý sinh lý bệnh viêm khớp, viêm khớp dạng thấp 1.4.2 Xây dựng thuốc nghiên cứu dựa sở phác đồ điều trị viêm khớp, viêm khớp dạng thấp 14 Chương CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ………………………………………………………………… 17 2.1 Chất liệu nghiên cứu 17 2.1.1 Thành phần viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 17 2.1.2 Tác dụng 18 2.1.3 Liều dùng dự kiến lâm sàng 18 2.2 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2.1 Độc tính cấp 18 2.2.2 Độc tính bán trường diễn 18 2.3 Thời gian địa điểm tiến hành nghiên cứu 18 2.4 Phương pháp nghiên cứu 19 2.4.1 Độc tính cấp 19 2.4.2 Độc tính bán trường diễn 21 2.4.3 Phương pháp xử lý số liệu 24 2.5 Đạo đức nghiên cứu 24 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 25 3.1 Độc tính cấp viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 25 3.2 Độc tính bán trường diễn viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 25 3.2.1 Tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột 25 3.2.2 Đánh giá chức tạo máu 27 3.2.3 Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan 33 3.2.4 Đánh giá chức gan 34 3.2.5 Đánh giá chức thận 36 3.2.6 Thay đổi mô bệnh học sau 30 ngày uống thuốc 36 Chương BÀN LUẬN 43 4.1 Độc tính cấp viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 43 4.2 Độc tính bán trường diễn viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 44 4.2.1 Tình trạng chung 44 4.2.2 Mức tăng trọng lượng 44 4.2.3 Chức tạo máu 45 4.2.4 Chức gan 47 4.2.5 Chức thận 50 4.2.6 Tổn thương đại thể quan 51 4.2.7 Cấu trúc vi thể gan 51 4.2.8 Cấu trúc vi thể thận 52 KẾT LUẬN……………………………………………………………… 54 KIẾN NGHỊ……………………………………………………………… 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân thể lâm sàng điều trị chứng tý 16 Bảng 2.1 Thành phần viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” 17 Bảng 3.1 Kết độc tính cấp viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” thực nghiệm 25 Bảng 3.2 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến thể trọng chuột 26 Bảng 3.3 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” số lượng hồng cầu máu chuột 27 Bảng 3.4 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến hàm lượng huyết sắc tố máu chuột 27 Bảng 3.5 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến hematocrit máu chuột 28 Bảng 3.6 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến thể tích trung bình hồng cầu máu chuột 29 Bảng 3.7 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến số lượng bạch cầu máu chuột 30 Bảng 3.8 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến công thức bạch cầu máu chuột 31 Bảng 3.9 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến số lượng tiểu cầu máu chuột 32 Bảng 3.10 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến hoạt độ AST máu chuột 33 Bảng 3.11 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến hoạt độ ALT máu chuột 33 Bảng 3.12 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” nồng độ billirubin toàn phần máu chuột 34 Bảng 3.13 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến nồng độ albumin máu chuột 35 Bảng 3.14 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến nồng độ cholesterol máu chuột 35 Bảng 3.15 Ảnh hưởng viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” đến nồng độ creatinin máu chuột 36 Công ty TNHH Dược phẩm SMARD QUY TRÌNH SẢN XUẤT TĨM TẮT VIÊN NANG CỨNG HOẠT HUYẾT DƯỠNG CỐT HV A Thành phần đặc điểm nguyên liệu Tên dược liệu Tên khoa học Mô tả Đỗ trọng Cortex Eucommiae Dải mỏng từ 5-7cm, màu nâu đen, xơ trắng, mùi đặc trưng Tục đoạn Radix Dipsaci Miềng mỏng, nhỏ, màu nâu xám, mùi đặc trưng Đương quy Radix Angelicae sinensis Lát mỏng, màu vàng nâu nhạt, mùi đương quy đặc trưng Thục địa Tadix Rehmanniae glutinosae praeparata Lát mỏng, màu đen, mùi đặc trưng Thiên niên kiện Rhizoma Homalomenae occultae Lát mỏng, nâu vàng, mùi đặc trưng Độc hoạt Radix Angelicae pubescentis Miếng mỏng, màu xám nhạt, có vùng lõi nhạt màu hơn, mùi đặc trưng Dây đau xương Caulis Tinosporae tomentosae Lát mỏng nhỏ, màu nâu xám, mùi đặc trưng Tang kí sinh Herba Loranthi gracilifolii Cành nhỏ lẫn lá, màu nâu, mùi đặc trưng Kê huyết đằng Caulis Spatholobi Lát mỏng, nâu đỏ, mùi đặc trưng Đan sâm Radix Salviae miltiorrhizae Đoạn nhỏ ngón tay, dài 5-7cm, màu đỏ sẫm, mùi đặc trưng Xuyên khung Rhizoma Ligustici wallichii Miếng mỏng, màu xám nhạt, có nhiều vân tia, mùi đặc trưng Ngưu tất Radix Achyranthis bidentatae Khúc nhỏ đũa, màu vàng nâu nhạt, mùi đặc trưng Tơ mộc Lignum sappan Đoạn nhỏ ngón tay, dài 5-7cm, màu vàng sẫm, gỗ Hồng hoa Flos Carthami tinctorii Sợi nhỏ cánh hoa khô, màu đỏ vàng, mùi đặc trưng Ích mẫu Herba Leonuri japonici Đoạn nhỏ 5-7cm, có cành hoa lá, màu xanh xám, mùi đặc trưng Tiêu chuẩn đạt Dược điển Việt Nam IV tiêu chuẩn sở Tất nguyên liệu kiểm tra phòng kiểm nghiệm cơng ty theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV tiêu chuẩn sở Yêu cầu phải đạt trước đưa vào sản xuất B Công thức sản xuất viên nang “Hoạt huyết dưỡng cốt HV” Thứ tự Tên vị thuốc Hàm lượng (mg) Đỗ trọng 20 Tục đoạn 20 Đương quy 20 Thục địa 20 Thiên niên kiện 30 Độc hoạt 30 Dây đau xương 30 Tang kí sinh 40 Kê huyết đằng 40 10 Đan sâm 40 11 Xuyên khung 40 12 Ngưu tất 40 13 Tô mộc 40 14 Hồng hoa 40 15 Ích mẫu 50 Tổng lượng dược liệu viên nang 500mg Phụ liệu vừa đủ viên nang cứng: gelatin, titanium dioxide, sunset yellow (d&c yellow no.6), allura red (fd&c no.40), briliant blue fcf (fd&c blue no.1), sodiu, lauryl sulfate, furified water C Xử lý nguyên liệu Bào chế, chế biến: Các nguyên liệu xử lý, chế biến theo Dược điển IV tiêu chuẩn sở Xử lý nguyên liệu trước sản xuất Tất nguyên liệu nghiền qua rây 400 mcm trộn máy trộn lập phương tạo thành hỗn hợp bột dược liệu trước đưa vào sản xuất D Quy trình sản xuất Dung dịch Hỗn hợp bột dược liệu cồn PVP K30 3% 10 phút Nhào trộn Xát hạt máy trộn ướt Qua rây 1.000 mcm 60 độ C 30 Sấy khô phút, độ ẩm