Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đã đánh giá độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của altretamin được tổng hợp tại Việt Nam nhằm nghiên cứu sử dụng altretamin trong điều trị.
TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2015 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƢỜNG DIỄN TRÊN THỰC NGHIỆM CỦA ALTRETAMIN TỔNG HỢP TẠI VIỆT NAM Lê Thị Hồng Hạnh*; Vũ Bình Dương*; Hồ Anh Sơn*; Phan Đình Châu** TĨM TẮT Mục tiêu: đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn altretamin tổng hợp Việt Nam Đối tượng phương pháp: sử dụng altretamin để đánh giá độc tính cấp 36 chuột nhắt trắng độc tính bán trường diễn 06 thỏ theo quy định Kết quả: nghiên cứu độc tính cấp altretamin chuột nhắt trắng theo đường uống với LD50 730 ± 60 (mg/kg) Với độc tính bán trường diễn, thỏ uống altretamin 28 ngày mức liều 21 mg/kg, khơng thay đổi có ý nghĩa thống kê trọng lượng thể, số lượng tiểu cầu, SGOT, SGPT, ure, creatinin Hình ảnh mơ bệnh học gan, thận bình thường Tuy nhiên, altretamin gây giảm số lượng hồng cầu số lượng bạch cầu so với trước thử nghiệm Kết luận: LD50 altretamin tổng hợp 730 ± 60 (mg/kg) chuột nhắt Độc tính bán trường diễn cho thấy altretamin không gây tổn thương gan thận, số lượng tiểu cầu; gây giảm số lượng hồng cầu bạch cầu máu ngoại vi thỏ * Từ khóa: Altretamin tổng hợp; Độc tính cấp; Độc tính bán trường diễn Experimental Evaluation of Acute and Semi-Chronic Toxicity of Synthesised Altretamine from Vietnam Summary Objective: To evaluate on acute and semi-chronical toxicity synthesized altretamine from Vietnam Subject and method: Synthesized altretamine was used to evaluate the acute toxicity on 36 mice and semi-chronic toxicity on 06 rabbits according to standard operating procedure Results: The results of acute toxicity of altretamine with LD50 is 730 ± 60 (mg/kg) With dose of 21 mg altretamine/kg/daily in 26 days, the treated rabbits showed that there were no significant change for body weight, platelet counts, serum SGOT, SGPT, ure and creatinine Histology of liver and kidney tissue showed no changes However, red blood cells and leukocyte count were significantly decreased in comparision with experimental beginning Conclusion: Altretamine LD50 is 730 ± 60 (mg/kg) on mice Semi-chronic study revealed that altretamine was not toxic for liver, kidney and platelet counts, but it could reduced the red blood and the leukocytes by 28 days follow-up * Key words: Synthesized altretamine; Acute toxicity; Semi-chronical toxicity * Học viện Quân y * Đại học Bách khoa Hà Nội Người phản hồi (Corresponding): Vũ Bình Dương (vbduong2978@gmail.com) Ngày nhận bài: 28/02/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 30/03/2015 Ngày báo đăng: 02/04/2015 10 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2015 - Máy đếm hồng, bch cu t ng đặt vấn đề - B dng cụ mổ động vật cỡ nhỏ Altretamin sử dụng phổ biến điều trị ung thư buồng trứng, ung thư phổi - Cân xác 10-2 mg, bơm kim tiêm ung thư vú Dược chất sử Phƣơng pháp nghiên cứu dụng điều trị ung thư với tên như: * Đánh giá độc tính cấp altretamin: hexastat (Pháp), hexinawas (Tây Ban Nha), altretamin (Mỹ) [3]… Hiện nay, Bộ Y tế chưa cấp số nhập biệt dược chứa hoạt chất này, nhu cầu sử dụng thuốc điều trị ung thư lớn hầu hết phải nhập ngoại phí điều trị cao Học viện Quân y xây dựng quy trình tổng hợp altretamin Kết cho thấy, altretamin tổng hợp tinh khiết, thơng số lý hóa hợp chất tổng hợp phù hợp với số liệu công bố đạt tiêu chuẩn Dược điển - Dựa theo phương pháp xác định độc tính cấp Abrham W.B, Turner A, theo quy định Bộ Y tế Việt Nam Tổ chức Y tế Thế giới nghiên cứu độc tính thuốc [1, 7] - Thí nghiệm tiến hành chuột nhắt trắng Chia chuột thành lô, lô 06 Cho lô chuột uống liều altretamin với mức liều tăng dần theo nhóm, đến liều gây chết 100% số chuột Mỹ 34 [2] Để sử dụng altretamin - Sau dùng thuốc, nuôi dưỡng theo điều trị cần nghiên cứu đánh giá tính an tồn dõi liên tục chuột 72 Xác định số chuột sản phẩm chết theo nhóm thí nghiệm - Tính tốn: theo phương pháp cải tiến ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu * Chế phẩm nghiên cứu: Altretamin Trung tâm Nghiên cứu Ứng dụng sản xuất thuốc, Học viện Quân y tổng hợp đạt tiêu chuẩn Dược điển Mỹ 34 * Động vật thí nghiệm: - Chuột nhắt trắng khoẻ mạnh đạt tiêu chuẩn thí nghiệm, trọng lượng 20 - 22 g - Thỏ nhà khỏe mạnh, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm, trọng lượng 1,8 - 2,2 kg Động vật ni dưỡng điều kiện phòng thí nghiệm ngày trước tiến hành nghiên cứu Livschitz P.Z [1] * Đánh giá độc tính bán trường diễn altretamin: Theo phương pháp Abraham, quy định Tổ chức Y tế Thế giới Bộ Y tế hiệu lực an toàn thuốc [1] - thỏ uống altretamin liên tục 28 ngày, liều 21 mg/kg/24 - Các tiêu đánh giá: + Tình trạng tồn thân, vận động, ăn uống, trọng lượng thể + Huyết học: hồng cầu, hemoglobin, bạch cầu, tiểu cầu + Sinh hóa: SGOT, SGPT, ure, creatinin + Mơ bệnh học: vào ngày thứ 28, mô gan, * Thiết bị dụng cụ: thận phẫu tích để đánh giá hình ảnh giải - Máy xét nghiệm sinh hoá tự động phẫu bệnh 11 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2015 - Thời điểm xét nghiệm: lấy máu xét [5] Với đường sử dụng khác nhau, LD50 nghiệm số sinh hóa, huyết học, chuột nhắt giảm đáng kể tiêm phúc thời điểm: trước uống altretamin, sau mạc, 200 mg/kg [6] đường tiêm tĩnh mạch tuần nghiên cứu LD50 171 mg/kg [8] - Dữ liệu phân tích chương trình Startview 5.0 altretamin * Ảnh hưởng altretamin đến phát triển KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ trọng lượng thỏ: BÀN LUẬN Bảng 2: Trọng lượng thỏ q trình thử Độc tính cấp altretamin Bảng 1: Kết đánh giá độc tính cấp altretamin theo đường uống SỐ LƯỢNG SỐ LƯỢNG LIỀU SỬ STT DỤNG Độc tính bán trƣờng diễn n (mg/kg TLCT) ĐỘNG VẬT ĐỘNG VẬT CHẾT SỐNG (sau 72 giờ) (sau 72 giờ) nghiệm (n = 6) THỜI ĐIỂM XÉT TLCT NGHIỆM (kg, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 2,07 ± 0,14 Sau tuần (b) 1,98 ± 0,17 Sau tuần (c) 2,02 ± 0,13 p p a-b-c > 0,05 Lô 300 06 06 Lô 450 06 01 05 Kết cho thấy TLCT thỏ thời Lô 600 06 02 04 điểm thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > Lô 750 06 03 03 0,05) Khơng có tượng thỏ giảm cân sau Lơ 900 06 05 01 uống altretamin tuần Lô 1050 06 05 01 Lô 1200 06 06 Theo dõi chuột uống altretamin với liều khác thấy: liều 300 mg/kg trọng lượng thể (TLCT), tất chuột khỏe mạnh, hoạt động ăn uống bình thường Với * Ảnh hưởng altretamin số tiêu huyết học thỏ: Bảng 3: Chỉ số huyết học thỏ trình thí nghiệm (n = 6, CHỈ TIÊU mức liều 450 mg/kg, chuột bắt ®ầu xuất hiƯn biểu hoạt động, xù lông chết Số lượng HC 24 100% chuột chết tăng dần (x1012/l) đến liều 1.200 mg/kg/24 Số chuột HST (g/dl) sống lô dần hồi phục ăn uống, hoạt động bình thường Altretamin tổng hợp có LD50 730 ± 60 (mg/kg) TLCT chuột nhắt trắng Với altretamin tổng hợp sở Số lượng BC (x 10 /l) Số lượng TC x ± SD) TRƯỚC THÍ SAU SAU NGHIỆM (a) TUẦN (b) TUẦN (c) 4,72 ± 4,34 ± 0,25 0,39* 11,75 ± 11,08 ± 10,48 ± 0,61 0,65 0,56* 8,58 ± 10,12 ± 11,78 ± 1,49 1,90 2,70* 333,00 ± 307,50 ± 302,83 ± 78,73 17,02 42,43 4,94 ± 0,21 khác nhau, LD50 có khác biệt định (x 10 /l) Với đường uống chuột (*: thấp có ý nghĩa thống kê so với thời nhắt, công bố cho thấy LD50 437 mg/kg 12 điểm trước thí nghiệm với p < 0,05) TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2015 Kết cho thấy, sau tuần uống liên tục altretamin, số lượng tế bào máu thỏ biến động khơng có ý nghĩa thống kê so với trước uống thuốc Tuy nhiên, sau tuần uống máu thỏ khơng có khác biệt đáng kể giai đoạn thử nghiệm Rất báo cơng bố altretamin liên liên tục, số lượng dòng tế bào hồng cầu, bạch quan tới tổn thương thận Có thể gặp tổn cầu máu ngoại vi thỏ giảm có ý nghĩa thống thương gan dạng hoại tử độc tế bào kê (p < 0,05) Chưa phát thấy dòng tiểu (necrosis) động vật thực nghiệm [8] cầu giảm tương ứng * Kết mơ bệnh học tạng thỏ thí Theo số cơng bố, altretamin gây tình trạng giảm bạch cầu máu ngoại vi nghiệm: chuột nhắt sử dụng, số trường hợp Quan sát đại thể mắt thường gây giảm hoạt động sản xuất tủy xương [5] kính lúp có độ phóng đại 25 lần thấy: màu Các nghiên cứu cho thấy, altretamin có sắc, hình thái gan, lách thận hai lô thể gây giảm số lượng hồng cầu, tăng hồng dùng altretamin không khác so với chứng cầu lưới dạng hồng cầu non máu ngoại vi [8], số trường hợp gây xuất huyết [5] Tuy nhiên, nghiên cứu chúng tôi, chưa phát thấy giảm tiểu cầu có ý nghĩa thống kê so với thời điểm trước thí nghiệm * Ảnh hưởng altretamin chức gan, thận: Bảng 4: Ảnh hưởng altretamin chức gan, thận thỏ (n = 6, X± SD) CHỈ TIÊU TRƯỚC THÍ SGOT SAU SAU NGHIỆM TUẦN TUẦN (a) (b) (c) 59,67 ± 17,83 ± 30,17 ± (U/l) 14,46 18,26 35,06 SGPT 30,17± 28,00 ± 34,17 ± 9,41 7,62 14,76 81,17 ± 87,33 ± 98,00 ± 9,45 5,82 13,40 4,43 ± 4,30 ± 1,38 1,18 (U/l) Creatinin (umol/l) Ure (mmol/l) 4,67 ± 0,91 p Hình 1: Hình ảnh tế bào gan thỏ (HE.40x) pa-b-c > 0,05 Kết cho thấy, hoạt độ enzym SGOT, SGPT, nồng độ ure creatinin Hình 2: Hình ảnh tế bào gan thỏ (HE.200x) 13 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2015 * Hình thái vi thể gan: Sau 28 ngày uống thuốc, tế bào gan khẳng định khơng có tổn thương thận thỏ dùng altretamin dài ngày khơng có thối hóa hoại tử Xoang mạch KẾT LUẬN tĩnh mạch trung tâm khơng xung huyết, khoảng cửa khơng viêm (hình 2) Kết đồng với kiểm tra hoạt tính enzym SGOT SGPT giới hạn bình thường - Altretamin tổng hợp có LD50 730 ± 60 (mg/kg) chuột nhắt - Bằng đường uống với liều tương ứng 21 mg/kg/24 liên tục 28 ngày, altretamin không gây ảnh hưởng đến phát triển trọng lượng thể, số lượng tiểu cầu máu ngoại vi, chức mô bệnh học gan, thận, làm làm giảm số lượng hồng cầu bạch cầu máu ngoại vi thỏ thực nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế Quy định nghiên cứu dược lý thuốc y học cổ truyền dân tộc, 1996, QĐ 371/QĐYT 1996 Hình 3: Hình ảnh tế bào thận thỏ (HE.200x) Phan Đình Châu, Vũ Bình Dương, Nguyễn Thị Thu Hằng, Bùi Thị Thu Hà Nghiên cứu quy trình sản xuất altretamin thuốc điều trị ung thư Tạp chí Dược học 2014, số 462, tr.2-6 Nguyễn Bá Đức Hóa chất điều trị ung thư NXB Y học Hà Nội 2003, tr.130-137 Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie 1966, Vol 160, p.83 Cancer Research 1980, Vol 40, p.2762 Herzog TJ Recurrent ovarian cancer: how important is it to treat to disease progression? Clin Hình 4: Hình ảnh tế bào thận thỏ (HE.200x) * Hình ảnh vi thể thận: Sau 28 ngày uống thuốc, cầu thận kích thước đều, không xung huyết, mô kẽ không viêm, ống thận khơng có tổn thương Kết 14 Cancer Res 2004, 10 (22), pp.7439-7749 National Technical Information Service Vol PB293-046 Penson RT, Seiden MV Topotecan: weighing in when there are many options Oncologist 2005, 10 (9), pp.698-700 ... 5.0 altretamin * Ảnh hưởng altretamin đến phát triển KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ trọng lượng thỏ: BÀN LUẬN Bảng 2: Trọng lượng thỏ trình thử Độc tính cấp altretamin Bảng 1: Kết đánh giá độc tính cấp altretamin. .. nhóm thí nghiệm - Tính tốn: theo phương pháp cải tiến ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu * Chế phẩm nghiên cứu: Altretamin Trung tâm Nghiên cứu Ứng dụng... trình tổng hợp altretamin Kết cho thấy, altretamin tổng hợp tinh khiết, thơng số lý hóa hợp chất tổng hợp phù hợp với số liệu công bố đạt tiêu chuẩn Dược điển - Dựa theo phương pháp xác định độc tính