NGHIÊN cứu độc TÍNH cấp và độc TÍNH bán TRƯỜNG DIỄN của VIÊN NANG BALANOXI TRÊN ĐỘNG vật THỰC NGHIỆM

NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG BALANOXI TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Nghiên cứu sinh: Phan Minh Đức Hướng dẫn khoa học: PGS.TS: Phan Anh Tuấn PGS.TS: Phạm Văn Trịnh Tóm tắt Viên nang Balanoxi sản xuất từ cao khô tỏa dương ( Balanophora Laxiflora) thu hái từ vùng đỉnh núi Hồng thuộc xóm Khn Mản, xã Bình n, huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang Qua nghiên cứu xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi động vật thực nghiệm nhận thấy: Trong nghiên cứu độc tính cấp chuột nhắt trắng chủng Swiss uống thuốc với liều cao 20g/kg cân nặng khơng có chuột chết Trong nghiên cứu độc tính bán trường diễn, thỏ chủng Newzeland White uống thuốc thử với liều 0,9g/kg 1,8g/kg cân nặng suốt tuần liên tục kết cho thấy với liều 1,8g/kg cân nặng làm thay đổi số HC, HB, HCT, công thức bạch cầu thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (P≥0,05) thay đổi khơng có khác biệt so với nhóm chứng, số sinh hóa khác AST, ALT, Ure, Creatnin có thay đổi thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê với (P≥ 0,05) Điều cho thấy Viên nang Balanoxi an toàn sử dụng dài ngày Từ khoa: Balanoxi, Tỏa Dương, Độc tính cấp, độc tính bán trường diễn Summary Balanoxi capsules are made up from Balanophora Laxiflora, which is plucked from the top of the Red Mountain at Khuon Man hamlet, Binh Yen commune, Son Duong district, Tuyen Quang province According to the research on the acute and subchronic toxicity of Balanoxi capsules on testing animals, it has been realized as follows: In the acute toxicity research, Swiss white mice were taken the test with the highest dose of 20g/kg, and the results thereof showed that no mouse was caused to die In the subchronic toxicity research, New Zealand white rabbits were taken the test at doses of 0,9g/kg and 1,8g/kg during consecutive weeks; the results showed that the use of 1,8g/kg dose changed the indicators of HC, HB, HCT, white blood cells but this change had no statistical significance (P≥ 0,05) and had no difference as compared to the control group As for other biochemical indicators such as AST, ALT, Ure, Creatnin, there were some relevant changes but all without statistical significance (P≥ 0,05) This has shown that it is quite safe to use Balanoxi capsules in a long time Key words: Balanoxi, Balanophora Laxiflora, Acute Toxicity, Subchronic Toxicity I ĐẶT VẤN ĐỀ Theo WHO, tỉ lệ cặp vợ chồng cộng đồng bị vô sinh (12 - 18%) tùy nước, trung bình 15%, tỉ lệ có xu hướng ngày tăng Trong cặp vô sinh, vô sinh nam giới bị suy giảm tinh trùng chiếm tới 70-80% SGTT ngày gia tăng chiếm tỷ lệ cao Việc điều trị SGTT gặp nhiều khó khăn, chủ yếu SGTT có nhiều nguyên nhân phức tạp YHHĐ có nhiều phương pháp điều trị SGTT, kết chưa theo mong muốn thầy thuốc người bệnh hay có tác dụng khơng mong muốn SGTT thường phải điều trị kéo dài Gần nhiều nhà khoa học quay lại với YHCT Vì thuốc YHCT theo kinh nghiệm dân gian có nhiều dược liệu tác dụng tốt với chứng suy giảm tinh trùng uống kéo dài mà có ảnh hưởng bất lợi Cây Tỏa dương hay gọi củ ngọc núi (Balanophora laxiflora) tìm thấy rừng sâu vùng Tuyên Quang, Yên Bái, Lào cai, dân địa phương sử dụng từ lâu để làm thuốc bổ Thận tráng dương, Y văn dùng làm thuốc điều trị cho đàn ông di tinh, mộng tinh, rối loạn cương dương, vô sinh Ở Trung Quốc, Malaysia người ta thường dùng rượu Tỏa dương loại rượu kích thích tình dục Vì mong muốn tạo sản phẩm đơng dược vừa có tác dụng điều trị vừa dễ bảo quản an toàn cho bệnh nhân từ loài Tỏa dương (Balanophora laxiflora) dạng viên nang với tên dược phẩm Balanoxi Do lựa chọn thực việc nghiên cứu: Xác định độc tính cấp liều chết LD50 viên nang Balanoxi chuột nhắt trắng Đánh giá độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi thỏ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU II NGUYÊN LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 2.1.1 Viên nang BALANOXI gồm: Cao toàn phần Tỏa dương : 500mg Thuốc bào chế dạng dược liệu khô, chiết xuất cồn cho bay thành dạng cao khơ tồn phần theo tiêu chuẩn sở Viện Y Học Bản Địa Việt Nam đóng vào viên nang cứng có hàm lượng 500mg theo tiêu chuẩn sở khoa Dược Viện Y học Cổ Truyền Quân Đội Viên thuốc bỏ vỏ nang lấy bột thuốc hòa nước cất cho động vật thực nghiệm uống khoa Nghiên cứu thực nghiệm – Viện YHCT Quân đội 2.1.2 Hoá chất, thiết bị - Các hoá chất xét nghiệm làm tiêu mô bệnh học - Máy xét nghiệm huyết học Swelab Alfa – Thụy Điển, máy xét nghiệm sinh hóa BTS 350 – BioSystem – Tây Ban Nha 2.1.3 Động vật thực nghiệm - Cht nh¾t tr¾ng chđng Swiss Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ơng cung cấp Trọng lợng trung bình con: 20g 2, không phân biệt giống Chuột khỏe mạnh, đảm bảo tiêu chuẩn sinh lý bình thờng Chuột nhịn ăn 15 giê tríc thÝ nghiƯm, níc ng cung cÊp ®Çy ®đ - Thỏ chủng Newzeland White, lơng trắng, khỏe mạnh, hai giống, có trọng lượng 1,8 -2,5kg; Trung tâm chăn nuôi Viện Kiểm nghiệm cung cấp Động vật ni phòng thí nghiệm ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu 2.1.4 Điều kiện thử vi khí hậu: Nhiệt độ 250C, độ ẩm 80% 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp viên nang Balanoxi theo đường uống chuột nhắt trắng Nghiên cứu theo phương pháp Litchfield- Wilcoxon theo hướng dẫn WHO Chuột nhắt trắng trọng lượng 20± 2g chia thành lô, lô 10 gồm lô đối chứng lô thử Chuột nhịn ăn qua đêm trước uống thuốc, uống nước đầy đủ Cho chuột uống thuốc kim cong đầu tù, đưa thẳng vào dày chuột Thể tích cho uống 0,25ml/10g thể trọng chuột Liều quy đổi thực nghiệm thức: 4,0g; 8,0g; 12,0g; 16,0g; 20,0g thuốc/kg thể trọng Theo dõi liên tục biểu sinh lý chuột thí nghiệm vòng 24h đầu Mổ chuột chết tìm ngun nhân gây chết nhận xét đại thể Sau 72 giờ, mổ 1/3 số chuột sống lơ nhận xét đại thể Theo dõi tình trạng chung chuột ngày Xác định liều chết LD50 theo tỷ lệ chuột chết vòng 72 đầu 2.2.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi theo đường uống thỏ chủng Newzeland White Thỏ chia ngẫu nhiên làm nhóm, nhóm 10 con, nhốt riêng lồng - Lô chứng (n=10): uống nước cất liều 1,5ml/kg thể trọng/ngày - Lô thử (n=10): uống thuốc thử “Balanoxi” liều 0,9g/kg thể trọng /ngày (liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số 3) - Lơ thử (n=10): uống thuốc thử “Balanoxi” liều 1,8g/kg thể trọng/ngày (gấp lần lô nghiên cứu 1) Thỏ uống nước cất thuốc thử “Balanoxi” liên tục tuần, ngày lần vào buổi sáng Các tiêu theo dõi trước trình nghiên cứu: - Tình trạng chung, thể trọng thỏ - Đánh giá chức phận tạo máu thông qua số lượng hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hematocrit, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu số lượng tiểu cầu - Đánh giá chức gan thông qua định lượng số enzym chất chuyển hoá máu: ALT, AST - Đánh giá chức thận thông qua định lượng nồng độ Ure, Creatinin huyết Các thông số theo dõi kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau tuần uống thuốc, sau tuần uống thuốc Các xét nghiệm sinh hóa, huyết học tiến hành Bộ môn Sinh lý lao động – Học viện quân y Mô bệnh học: + Sau tuần uống thuốc, thỏ mổ để quan sát đại thể toàn quan + Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận 30% số thỏ lơ chuột có tổn thương đại thể gan, thận + Các xét nghiệm vi thể thực Bộ môn Giải phẫu bệnh – Viện 103 – Học viện Quân y 2.3 Xử lý số liệu Các số liệu nghiên cứu xử lý thống kê theo phương pháp t-test Student test trước sau (Avant-Apres) Số liệu biểu diễn dạng : ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Độc tính cấp Kết nghiên cứu độc tính cấp viên nang Balanoxi theo đường uống chuột nhắt trắng nhận thấy: Chuột nhắt trắng uống thuốc đến liều cao 20g/kg cân nặng khơng có chuột chết, không xuất triệu chứng bất thường 72 sau uống thuốc suốt ngày 3.2.Nghiên cứu độc tính bán trường diễn 3.2.1 Tình trạng chung thay đổi thể trọng thỏ 3.2.1.1 Tình trạng chung: Trong suốt thời gian thí nghiệm, thỏ nhóm ăn uống, hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, lông mượt, ăn uống tốt, phân khô Không thấy biểu đặc biệt lơ thỏ suốt thời gian nghiên cứu 3.2.1.2 Sự thay đổi thể trọng thỏ: Trong suốt thời gian thí nghiệm, thỏ nhóm ăn uống, hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, lông mượt, ăn uống tốt, phân khơ Khơng thấy biểu đặc biệt lô thỏ suốt thời gian nghiên cứu Bảng 1: Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến thể trọng thỏ ( X ± SD) Thời gian Trước thực nghiệm Lô chứng (n=10) 2,07±0,20 Lô thử (n=10) 2,03±0,15 Lô thử (n=10) 2,04±0,15 > 0,05 Sau tuần thực nghiệm 2,35±0,22 2,37±0,15 2,34±0,21 > 0,05 P p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm < 0,05 < 0,05 < 0,05 2,63±0,18 2,55±0,19 2,46±0,19 < 0,05 < 0,05 < 0,05 p (trước - sau) > 0,05 Nhận xét: Kết bảng cho thấy: sau tuần tuần uống viên nang “Balanoxi”, trọng lượng thỏ lô (lô chứng lô thử ) có thay đổi so với trước nghiên cứu (p0,05) 3.2.2 Ảnh hưởng viên nang Balanoxi đến chức tạo máu Bảng 2: Ảnh hưởng Balanoxi số lượng HC, Hb, Hct máu thỏ ( X ± SD) Số lượng hồng cầu (T/l) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) 4,50 ± 0,70 4,72 ± 0,32 4,69 ± 0,31 4,03 ± 0,52 4,41 ± 0,61 4,31 ± 0,40 > 0,05 > 0,05 > 0,05 4,20 ± 0,71 4,21 ± 0,46 4,31 ± 0,54 > 0,05 > 0,05 > 0,05 P P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 2.2 cho thấy: sau tuần tuần uống viên nang “Balanoxi”, số lượng hồng cầu máu thỏ lô thử lô thử khơng có khác biệt so sánh với lô đối chứng so sánh lô dùng thuốc thử thời điểm theo dõi ( p>0,05) Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hàm lượng Huyết sắc tố máu thỏ ( X ± SD) Hàm lượng huyết sắc tố (g/dl) Thời gian Trước thực nghiệm Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) 10,33 ± 1,02 8,63 ± 1,16 9,64 ± 1,09 9,03 ± 1,09 9,13 ± 0,87 > 0,05 > 0,05 9,30 ± 1,20 9,36 ± 1,04 > 0,05 > 0,05 Sau tuần thực 9,94 ± 0,91 nghiệm p (trước - sau) > 0,05 Sau tuần thực 10,30 ± 1,33 nghiệm p (trước - sau) > 0,05 P P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 2.3 cho thấy: sau tuần tuần uống viên nang “Balanoxi”, hàm lượng Huyết sắc tố máu thỏ lô thử lơ thử khơng có khác biệt so sánh với lô đối chứng so sánh lô dùng thuốc thử thời điểm theo dõi ( p>0,05) Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến Hematocrit máu thỏ ( X ± SD) Thời gian Trước thực nghiệm Hematocrit (%) Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) 30,31 ± 0,36 30,94 ± 1,18 31,19 ± 1,50 29,60 ± 7,66 27,47 ± 6,24 > 0,05 > 0,05 28,37 ± 8,36 28,29 ± 7,17 > 0,05 > 0,05 Sau tuần thực 29,80 ± 2,73 nghiệm p (trước - sau) > 0,05 Sau tuần thực 29,03 ± 2,87 nghiệm p (trước - sau) > 0,05 P P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 2.4 cho thấy: sau tuần tuần uống viên nang “Balanoxi”, Hematocrit máu thỏ lô thử lô thử khơng có khác biệt so sánh với lô đối chứng so sánh lô dùng thuốc thử thời điểm theo dõi ( p>0,05) Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến số lượng bạch cầu máu thỏ ( X ± SD) Số lượng bạch cầu (G/l) Lô chứng Lô thử 1(2) Lô thử (3) (1) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) 10,16 ± 3,30 8,86 ± 2,15 7,56 ± 1,05 9,96 ± 2,30 8,00 ± 2,26 8,10 ± 1,47 > 0,05 > 0,05 > 0,05 9,67 ± 2,57 8,80 ± 1,16 7,78 ± 1,53 > 0,05 > 0,05 > 0,05 P P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến công thức bạch cầu máu thỏ ( X ± SD) Thời gian Cơng thức LƠ CHUỘT P Lô chứng Lô thử (2) Lô thử (2) bạch (1) cầu(%) Trước Lympho 50,88 ± 3,87 54,51 ± 9,41 55,63 ± 7,92 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 uống thuốc Trung tính 33,84 ± 2,09 30,35 ± 5,90 31,00 ± 3,09 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Sau tuần Lympho 50,50 ± 6,59 54,94 ± 7,44 56,07 ± 5,00 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 uống thuốc Trung tính 31,88 ± 5,35 30,24 ± 8,06 30,39 ± 8,32 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 p (trước - sau) >0,05 >0,05 >0,05 Sau tuần Lympho 50,35 ± 8,23 49,49 ± 6,58 56,13 ± 7,04 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 uống thuốc Trung tính 34,73 ± 6,98 32,23 ± 9,27 29,26 ± 9,33 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 p (trước - sau) >0,05 >0,05 >0,05 Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến số lượng tiểu cầu Thời gian máu thỏ ( X ± SD) Số lượng tiểu cầu (G/l) Lô Chứng (1) Lô thử Lô thử (n=10) (n=10) P Trước thực 219,25 ± 37,29 nghiệm Sau tuần 228,14 ± 44,86 thực nghiệm p (trước - sau) > 0,05 Sau tuần 219,63 ± 53,88 thực nghiệm p (trước - sau) > 0,05 216.29 ± 30.14 207,14 ± 57,80 246,11 ± 29,74 236,50 ± 47,35 > 0,05 > 0,05 206,56 ± 55,26 204,57 ± 65,09 > 0,05 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 5, 6, cho thấy sau tuần uống viên nang Balanoxi, xét nghiệm đánh giá chức tạo máu (số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu số lượng tiểu cầu) máu thỏ lô thử lơ thử khơng có khác biệt so sánh với lô đối chứng so sánh lô dùng thuốc thử thời điểm theo dõi ( p>0,05) 3.2.3 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến chức gan Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hoạt độ AST (GOT) máu thỏ (U/Lit) thỏ ( X ± SD) Thời gian Hoạt độ AST (U/l) Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) P Trước thực P1-2; p1-3; p2-3 30,18 ± 12,51 31,14 ± 15,02 32,54 ± 13,14 > 0,05 nghiệm Sau tuần P1-2; p1-3; p2-3 43,70 ± 17,91 45,77 ± 12,00 41,65 ± 11,53 > 0,05 thực nghiệm p trước -sau > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau tuần P1-2; p1-3; p2-3 42,61 ± 14,20 36,05 ± 16,12 37,43 ± 17,08 > 0,05 thực nghiệm p trước -sau > 0,05 > 0,05 > 0,05 Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hoạt độ ALT (GPT) máu thỏ (U/Lit) ( X ± SD) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần Hoạt độ ALT (U/l) Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) P 44,27 ± 9,66 43,63 ± 14,06 45,01 ± 15,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 50,43 ± 14,30 49,98 ± 14,41 48,39 ± 25,69 P1-2; p1-3; p2-3 10 thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 59,60 ± 12,49 46,56 ± 11,48 45,31 ± 14,48 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 thực nghiệm p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Bảng 10 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hoạt độ GGT máu thỏ (U/Lit) ( X ± SD) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần Hoạt độ GGT (U/l) Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) P 14,24 ± 3,27 16,48 ± 6,54 14,98 ± 7,38 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 19,15 ± 5,71 18,76 ± 7,67 12,93 ± 7,17 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 16,49 ± 7,48 11,99 ± 7,94 10,69 ± 4,46 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 thực nghiệm p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Bảng 11 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến nồng độ Bililubin toàn phần máu thỏ (µmol/lit) ( X ± SD) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Nồng độ Bilirubin tồn phần(µmol/lit) Lơ chứng (1) Lơ thử 1(2) Lô thử (3) P 15,74 ± 10,24 17,36 ± 14,47 18.79 ± 15,86 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 24,84 ± 13,25 30,73 ± 15,93 29,04 ± 16,80 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 22,42 ± 9,75 15,78 ± 6,51 20,52 ± 14,29 > 0,05 > 0,05 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 8; 9; 10; 11 cho thấy sau tuần uống “Balanoxi”, xét nghiệm đánh giá chức gan (hoạt độ AST, ALT, GGT, Bililubin toàn phần) máu thỏ lơ thử lơ thử khơng có khác biệt so sánh 11 với lô đối chứng so sánh lô dùng thuốc thử thời điểm theo dõi ( p>0,05) 3.2.4 Ảnh hưởng thuốc viên nang “Balanoxi” đến đến chức thận Bảng 12 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến nồng độ Ure Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần máu thỏ ( X ± SD) Ure (mmol/L) Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) P 3,87 ± 1,35 3,46 ± 0,67 3,20 ± 0,35 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 3,07 ± 0,92 3,72 ± 1,25 2,76 ± 0,67 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 3,97 ± 0,73 3,30 ± 1,21 3,36 ± 0,95 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 thực nghiệm p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Bảng 13 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hàm lượng Creatinin thỏ ( X ± SD) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Creatinin (µmol/L) Lơ chứng (1) Lơ thử 1(2) Lơ thử (3) P 110,86 ± 8,17 112,81 ± 8,67 109,88 ± 11,99 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 106,04 ± 15,57 103,04 ± 13,91 104,20 ± 13,72 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 115,53 ± 12,06 108,11 ± 14,32 114,10 ± 13,37 > 0,05 > 0,05 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 12; 13 cho thấy sau tuần uống “Balanoxi”, xét nghiệm đánh giá chức thận (nồng độ Creatinin, hàm lượng Ure) máu thỏ lô thử lô thử khơng có khác biệt so sánh với lơ đối chứng so sánh lô dùng thuốc thử thời điểm theo dõi ( p>0,05) 12 3.2.4 Kết mô bệnh học: Sau tuần uống thuốc 2.5.1 Đại thể Trên tất thỏ thực nghiệm (cả lô chứng lô nghiên cứu), khơng quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan tim, phổi, gan, lách, tụy, thận hệ thống tiêu hoá thỏ * Hình ảnh đại thể gan thận thỏ thực nghiệm Ảnh Hình ảnh đại thể gan thận thỏ lơ đối chứng 13 Ảnh 2: Hình ảnh đại thể gan thỏ lô thử (số ) 14 Ảnh 3: Hình ảnh đại thể gan thỏ lơ thử (số ) Nhận xét: Chưa nhận thấy khác biệt hình ảnh đại thể gan, thận thỏ lô đối chứng uống nước cất, lô thử lơ thử uống viên nang “Balanoxi” với liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số liều gấp lần liều điều trị người Bề mặt gan, thận nhẵn, bóng đều, màu nâu đỏ đồng nhất, khơng có u cục, khơng xuất huyết, đàn hồi ấn 3.2.5 Vi thể 3.2.5.1 Hình thái vi thể gan + Lơ chứng: Dưới kính hiển vi độ phóng đại 200 đến 400 lần nhận thấy, số tế bào gan bị thối hóa hạt, tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy xoang mạch nan hoa có xung huyết Khoảng cửa mỏng, vài tế bào sợi, lympho bào Kết luận: hình ảnh gan bình thường 15 Ảnh 4: Hình thái vi thể gan thỏ (thỏ số 01 ) lô chứng (HE x 200) + Lơ thử 1: Dưới kính hiển vi độ phóng đại 200 đến 400 lần nhận thấy, số tế bào gan bị thối hóa hạt, tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy xoang mạch nan hoa có xung huyết Khoảng cửa mỏng, vài tế bào sợi, lympho bào Kết luận: hình ảnh gan bình thường Ảnh 5: Hình thái vi thể gan thỏ lơ thử (thỏ số 34)(HE x 200) 16 + Lô thử 2: Dưới kính hiển vi độ phóng đại 400 lần nhận thấy, tế bào gan bị thối hóa hạt, tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy xoang mạch nan hoa có xung huyết, chứa hồng cầu Khoảng cửa mỏng, vài tế bào sợi, lympho bào Kết luận: hình ảnh gan có xung huyết nhẹ Ảnh 6: Hình thái vi thể gan thỏ lô thử (thỏ số47)(HE x 200) Nhận xét: Hình ảnh vi thể gan lơ thử lô thử 2, chưa nhận thấy khác biệt so với lơ đối chứng 3.2.5.2 Hình thái vi thể thận + Lơ chứng: Dưới kính hiển vi độ phóng đại 400 lần nhận thấy, cầu thận nở to, mạch máu xung huyết lòng chứa hồng cầu, khoang Bowman giãn nhẹ, chứa dịch Các tế bào biểu mô ống thận thối hóa hạt Các mạch máu mơ kẽ có xung huyết Kết luận: hình ảnh thận bình thường 17 Ảnh 7: Hình thái vi thể thận thỏ (thỏ số 01) lô chứng (HE x 400) + Lô thử 1: Dưới kính hiển vi độ phóng đại 400 lần nhận thấy, cầu thận nở to, mạch máu xung huyết lòng chứa hồng cầu, khoang Bowman giãn nhẹ, chứa dịch Các tế bào biểu mô ống thận thối hóa hạt, vài tế bào thối hóa rỗ Các 18 mạch máu mô kẽ xung huyết Kết luận: Hình ảnh thận xung huyết nhẹ Ảnh 8: Hình thái vi thể thận thỏ (thỏ số 34) lô thử (HE x 400) + Lơ thử 2: Dưới kính hiển vi độ phóng đại 400 lần nhận thấy, cầu thận nở to, mạch máu xung huyết lòng chứa hồng cầu, khoang Bowman giãn rộng, chứa dịch Các tế bào biểu mơ ống thận thối hóa hạt Các mạch máu mơ kẽ xung huyết Kết luận: Hình ảnh thận xung huyết nhẹ 19 Ảnh 9: Hình thái vi thể thận thỏ (thỏ số 42) lô thử (HE x 400) Nhận xét: Hình ảnh vi thể thận lơ thử lô thử 2, chưa nhận thấy khác biệt so với lô đối chứng IV NHẬN XÉT VÀ BÀN LUẬN 4.1 Độc tính cấp thuốc Balanoxi chuột nhắt trắng theo đường uống Chuột uống thuốc với thể tích liều cao 20,0g/kg thể trọng Đây lượng thuốc tối đa chuột dung nạp Sau 72 uống thuốc theo dõi tình trạng chung chuột ngày tiếp theo, khơng có chuột chết có biểu bất thường Nên không xác định liều gây chết (Lethal dose- LD50) liều chết 50% (LD50) viên nang Balanoxi chuột nhắt trắng đường uống theo phương pháp Litchfield-Wilcoxon 4.2 Ảnh hưởng viên nang Balanoxi đến tình trạng chung cân nặng thỏ Trên hai lô thỏ, lô uống viên nang “Balanoxi” liều tương đương liều lâm sàng dùng cho người (0,9g/kg thể trọng/ngày) lô uống liều cao gấp lần liều lâm sàng (1,8g/kg thể trọng /ngày) liên tục tuần, kết cho thấy: 20 - Cả hai liều thuốc thử không làm ảnh hưởng xấu đến tình trạng chung, mức độ tăng trọng lượng thỏ 4.3 Ảnh hưởng viên nang Balanoxi đến chức tạo máu thỏ Máu thành phần quan trọng thể Các số xét nghiệm tế bào máu ngoại vi có giá trị lớn việc đánh giá chức tạo máu thể [6] Với liều 1,8g/kg cân nặng làm giảm số HC, HB, HCT khơng có ý nghĩa thống kê (P≥0,05) thay đổi khơng có khác biệt so với nhóm chứng (P≥0,05) thời điểm nghiên cứu Không làm thay đổi kết xét nghiệm đánh giá số lượng công thức bạch cầu số lượng tiểu cầu nhóm thử nhóm chứng Như thấy nang Balanoxi không ảnh hưởng nhiều tới khả tạo máu thể thỏ 4.4 Ảnh hưởng viên nang Balanoxi đến chức gan thỏ Nghiên cứu ảnh hưởng thuốc chức gan cần thiết nghiên cứu độ an toàn loại thuốc [6], [9] Trong định lượng nồng độ Enzym có nguồn gốc từ tế bào gan huyết phương pháp gián tiếp đánh gía mức độ tổn thương tế bào gan thuốc thông dụng hiệu Trong nghiên cứu định lượng hoạt độ Enzym ALT, AST huyết thỏ thực nghiệm Kết thực nghiệm cho thấy thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (P≥0.05) nhóm thử thuốc thay đổi khơng khác biệt so với nhóm chứng Qua cho thấy Viên nang Balanoxi không làm ảnh hướng tới chức tế bào gan 4.5 Ảnh hưởng viên nang Balanoxi đến chức thận thỏ Thận quan tiết có vai trò quan trọng để đảm bảo định nội môi đào thải chất độc khỏi thể thuốc có độc gây tổn thương tế bào thận ảnh hưởng tới chức chuyển hóa thận Trong Ure, Creatnin sản phẩm đào thải gần hồn tồn qua Thận Khi có tổn thương thận, Creatinin, Ure tăng (Creatinin tăng sớm tin cậy Ure Creatinin chất chuyển hóa cuối cùng, sản phẩm phân hủy Creatin photphat, nồng dộ 21 creatinin không phụ thuộc vào chế độ ăn) Nên số thường dùng để đánh giá chức thận [6], [7] Kết nghiên cứu cho thấy thay đổi kết xét nghiệm Creatinin, Ure máu thỏ khơng có ý nghĩa thống kê (P≥0,05) Qua cho thấy Viên nang Balanoxi không làm tổn thương tới chức thận 4.6 Ảnh hưởng viên nang Balanoxi đến giải phẫu bệnh gan, thận thỏ - Không gây tổn thương rõ rệt mặt hình thái quan sát đại thể quan thỏ - Cấu trúc vi thể gan, thận thỏ: hai liều không ảnh hưởng đến cấu trúc vi thể gan, thận thỏ Hình ảnh vi thể gan thận thỏ khơng có khác biệt lơ chứng lơ uống thuốc thử viên nang “Balanoxi” tuần liên tục sau tuần ngừng uống thuốc KẾT LUẬN Viên nang Balanoxi khơng khơng gây độc tính cấp, khơng xác định LD50 chuột nhắt trắng đường uống 20g/kg thể trọng Viên nang Balanoxi không gây ảnh hưởng đến tình trạng phát triển chung thỏ Gây ảnh hưởng không đáng chức tạo máu, chức gan, thận hình ảnh giải phẫu bệnh gan thận thỏ (sự khác biệt lô thử lơ thử nhóm chứng khơng có ý nghĩa thống kê (P≥ 0,05)) TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Quán Anh, Trần Thị Trung Chiến, Lê Văn Vệ (2009), Vơ sinh nam giới, Bệnh học giới tính, NXB Y học 253-323 Shalendar Bhasin, J Larry Jameson (2008), Testes, Harrisons, 17th Edition, Chaps 43, 81, 82, Bibliographic Links Trần Quán Anh (2009), Tinh trùng, Bệnh học giới t ính nam, NXB Y học 72-122 Litfield, Wilcoxon (1948), ”A simplified method ò evaluating dose-efect experiments”, J.Pharmacol Exp Ther, pp 99-113 Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, NXB Y học, trang 23-26 22 Nguyễn Thế Khanh, Phạm Tử Dương (2001), Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, NXB Y học, trang 32-45 Vũ Đình Vinh (2001), Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hóa, NXB Y học, trang 21-28 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, trang 914 World Health Organisation (2000), ” General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation ò Traditional Medicine”, PP 42-51 23 ... dạng viên nang với tên dược phẩm Balanoxi Do lựa chọn thực việc nghiên cứu: Xác định độc tính cấp liều chết LD50 viên nang Balanoxi chuột nhắt trắng Đánh giá độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi. .. nghiệm ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu 2.1.4 Điều kiện thử vi khí hậu: Nhiệt độ 250C, độ ẩm 80% 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp viên nang Balanoxi theo đường... sau (Avant-Apres) Số liệu biểu diễn dạng : ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Độc tính cấp Kết nghiên cứu độc tính cấp viên nang Balanoxi theo đường uống chuột nhắt