TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Bộ môn Dược lý KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BẤT THƯỜNG CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM DAF TRÊN THỰC NGHIỆM Nơi tiến hành nghiên cứu: Bộ môn Dược lý- Trường Đại học Y Hà Nội Cán tham gia nghiên cứu: PGS.TS Phạm Thị Vân Anh PGS.TS Vũ Thị Ngọc Thanh KTV Nguyễn Kiều Vân KTV Nguyễn Thành Long Hà Nội - 2018 A ĐỘC TÍNH CẤP 1.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu Thuốc nghiên cứu: Viên nén bao phim DAF Trình bày: Lọ nhựa trắng chứa 60 viên nén bao phim Số lô: X010718 Ngày sản xuất: 09/07/2018 Ngày gửi mẫu: 17/08/2018 Nơi sản xuất: công ty TNHH Thiên Dược, TS Nguyễn Thị Ngọc Trâm Liều dùng lâm sàng: viên/ngày chia làm hai lần, lần viên Chuẩn bị mẫu nghiên cứu: lấy 30 viên, nghiền cối sứ, thêm 42 ml nước cất thành 60 ml vừa đủ Đây dung dịch đậm đặc cho chuột nhắt trắng uống kim chuyên dụng Dung dịch đậm đặc dùng để nghiên cứu độc tính cấp tính xác định LD50 1.1.2 Đối tượng nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 18 – 22g Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp Chuột ni phòng thí nghiệm Bộ môn Dược lý 5-10 ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu thức ăn chuẩn dành riêng cho chuột (do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp), uống nước tự 1.2 Máy móc phục vụ nghiên cứu - Cân điện tử Nhật, độ xác 0,001 gam - Kim đầu tù cho chuột uống - Cốc chia vạch, bơm kim tiêm 1ml 1.3 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu độc tính cấp viên nén bao phim DAF theo đường uống chuột nhắt trắng Nghiên cứu độc tính cấp xác định LD 50 viên nén bao phim DAF chuột nhắt trắng theo đường uống [1], [2], [3] Trước tiến hành thí nghiệm, cho chuột nhịn ăn qua đêm Chuột chia thành lô khác nhau, lô 10 Cho chuột uống viên nén bao phim DAF với liều tăng dần thể tích để xác định liều thấp gây chết 100% chuột liều cao không gây chết chuột (gây chết 0% chuột) Theo dõi tình trạng chung chuột, q trình diễn biến bắt đầu có dấu hiệu nhiễm độc (như nơn, co giật, kích động, tiết…) số lượng chuột chết vòng 72 sau uống thuốc Tất chuột chết mổ để đánh giá tổn thương đại thể Từ xây dựng đồ thị tuyến tính để xác định LD 50 thuốc thử Sau tiếp tục theo dõi tình trạng chuột đến hết ngày thứ sau uống 1.4 Xử lý số liệu Các số liệu xử lý thống kê theo thuật toán thống kê T-test Student phần mềm Microsoft Excel Kết nghiên cứu Chuột nhắt trắng uống viên nén bao phim DAF từ liều thấp đến liều cao Lô chuột uống đến liều 0,25 ml/10 g, lần 24 dung dịch đậm đặc tương đương 37,5 viên/kg, theo dõi thấy liều DAF khơng có biểu gì, khơng xuất triệu chứng bất thường 72 sau uống thuốc thử Kết trình bày bảng Bảng 1: Kết nghiên cứu độc tính cấp viên nén bao phim DAF Lô chuột n Liều (ml/kg) Liều Tỷ lệ (viên/kg chết thể trọng) (%) Dấu hiệu bất thường khác Lô 10 45 22,5 Không Lô 10 60 30,0 Không Lô 10 75 37,5 Không Kết bảng cho thấy: lô chuột uống viên nén bao phim DAF liều 22,5 viên/kg đến liều tối đa 37,5 viên/kg khơng có biểu độc tính cấp Từ bảng tính liều dung nạp tối đa (Luôn nhỏ liều chết 50%) viên nén bao phim DAF là: 37,5 viên/kg Kết luận: - Chưa xác định LD50 chuột nhắt trắng viên nén bao phim DAF theo đường uống - Viên nén bao phim DAF khơng có biểu độc tính cấp liều 37,5viên/kg tương ứng gấp 78,125 liều dự kiến lâm sàng khơng có độc tính cấp (tính người trưởng thành 50kg, liều dự kiến viên/người/ngày, hệ số ngoại suy chuột nhắt 12) Theo tổ chức Y tế giới viên nén bao phim DAF thuốc từ dược liệu y học cổ truyền an toàn [3] TÀI LIỆU THAM KHẢO Gerhard Vogel H (2012), Drug discovery and evaluation Pharmacological assays, Springer OECD (2001), Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation, acute oral toxicity, Environmental Health and Safety Monograph Series on Testing and Assesment No 19 World Health Organization (2013), Working group on the safety and efficacy of herbal medicine, Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization B ĐỘC TÍNH BẤT THƯỜNG Thuốc nghiên cứu: viên nén bao phim DAF - Thuốc nghiên cứu: Viên nén bao phim DAF Trình bày: lọ nhựa trắng chứa 60 viên nén bao phim Số lô: X010718 Ngày sản xuất: 09/07/2018 Ngày gửi mẫu: 17/08/2018 Nơi sản xuất: công ty TNHH Thiên Dược, TS Nguyễn Thị Ngọc Trâm Liều dùng lâm sàng: Chuẩn bị mẫu nghiên cứu: lấy 30 viên, nghiền cối sứ, thêm nước cất thành 60 ml vừa đủ Đây dung dịch đậm đặc cho chuột nhắt trắng uống kim chuyên dụng Dung dịch đậm đặc dùng để nghiên cứu độc tính bất thường Phương pháp thư ®éc tÝnh bÊt thêng: Theo Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 13.5 tiêu chuẩn sở thuốc nghiên cứu: Viên nén bao phim DAF §éc tÝnh bÊt thêng cđa thc th đợc xác định cách theo dõi số chuột sèng vµ chÕt thêi gian 48 giê sau cho cht mét liỊu thc qua ®êng dïng theo qui định Dựng chut nht trng khoẻ mạnh, cân nặng 18 - 22 g, giống đực cái, cha dùng vào thí nghiệm no, chuột phải thai cho bú, đợc chăn nuôi điều kiện bình thờng Chuẩn bị dung dịch thử Nếu hớng dẫn khác, chuẩn bị dung dịch thử cách ly thuc th pha nước cất nước muối sinh lý đến nồng độ phù hợp (nÕu thư theo ®êng ng) ®Ĩ thu đợc dung dịch hn dịch có chứa lợng chất cần thử phù hợp với mức liều qui định TiÕn hµnh thư Theo hướng dẫn Dược điển Việt nam IV, lấy trực tiếp dung dịch đậm đặc DAF pha cho chuột uống Mỗi chuột 0,5ml uống lần Dïng chuét, cho 0,5 ml dung dịch thử đờng uống: Cho uống kim cong đầu tù dụng cụ khác thích hợp, phải đảm bảo đa thuốc vào thực quản dày Đánh giá kết Nếu hớng dẫn khác quan sát chuột 48 sau dùng thuốc Nếu chuột chết mẫu thử đạt yêu cầu Nếu có chuột chết, làm lại thử nghiệm với 10 chuột khác, dùng chuét cã thÓ träng 19 ± g Sau 48 giờ, chuột chết mẫu thử đạt yêu cầu Kt qu: Sau cho chut uống viên nén bao phim DAF, chuột ăn uống, hoạt động tiết bình thường Khơng có chuột chết vòng 48 sau uống thuốc Kết luận: Mẫu viên nén bao phim DAF công ty cổ phần Thiên Dược sản xuất số lô X010718 Ngày sản xuất: 09/07/2018 đạt yều cầu thử độc tính bất thường theo Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 13.5 tiêu chuẩn sở viên nén bao phim DAF TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế - Dược Điển Việt Nam IV (2009) Độc tính bất, phụ lục 13.5 Nhà xuất Y học Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2018 Trưởng nhóm nghiên cứu PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận chữ ký PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Trưởng phòng Tổ chức Cán ... Health Organization B ĐỘC TÍNH BẤT THƯỜNG Thuốc nghiên cứu: viên nén bao phim DAF - Thuốc nghiên cứu: Viên nén bao phim DAF Trình bày: lọ nhựa trắng chứa 60 viên nén bao phim Số lô: X010718 Ngày...A ĐỘC TÍNH CẤP 1.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu Thuốc nghiên cứu: Viên nén bao phim DAF Trình bày: Lọ nhựa trắng chứa 60 viên nén bao phim Số lô: X010718... có biểu độc tính cấp Từ bảng tính liều dung nạp tối đa (Luôn nhỏ liều chết 50%) viên nén bao phim DAF là: 37,5 viên/ kg Kết luận: - Chưa xác định LD50 chuột nhắt trắng viên nén bao phim DAF theo