NGHIÊN cứu độc TÍNH cấp và độc TÍNH bán TRƯỜNG DIỄN của VIÊN NANG ALANOXI TRÊN ĐỘNG vật THỰC NGHIỆM

NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN NANG ALANOXI TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Nghiên cứu sinh: Phan Minh Đức Hướng dẫn khoa học: PGS.TS: Phan Anh Tuấn PGS.TS: Phạm Văn Trịnh TÓM TẮT • Viên nang Balanoxi sản xuất từ cao khô tỏa dương (Balanophora Laxiflora) thu hái từ vùng đỉnh núi Hồng thuộc xóm Khn Mản, xã Bình n, huyện Sơn Dương, tỉnh Tun Quang • NC xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi động vật thực nghiệm nhận thấy: Trong NC độc tính cấp chuột nhắt trắng chủng Swiss uống thuốc với liều cao 20g/kg cân nặng khơng có chuột chết Trong nghiên cứu độc tính bán trường diễn, thỏ chủng Newzeland White uống thuốc thử với liều 0,9g/kg 1,8g/kg cân nặng suốt tuần liên tục kết cho thấy với liều 1,8g/kg cân nặng làm thay đổi số HC, HB, HCT, công thức bạch cầu thay đổi ý nghĩa thống kê (P≥0,05) thay đổi khơng có khác biệt so với nhóm chứng, số sinh hóa khác AST, ALT, Ure, Creatnin có thay đổi thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê với (P≥ 0,05) Điều cho thấy Viên nang Balanoxi an tồn sử dụng dài ngày • Từ khoa: Balanoxi, Tỏa Dương, Độc tính cấp, độc tính bán trường diễn Summary • Balanoxi capsules are made up from Balanophora Laxiflora, which is plucked from the top of the Red Mountain at Khuon Man hamlet, Binh Yen commune, Son Duong district, Tuyen Quang province • According to the research on the acute and subchronic toxicity of Balanoxi capsules on testing animals, it has been realized as follows: In the acute toxicity research, Swiss white mice were taken the test with the highest dose of 20g/kg, and the results thereof showed that no mouse was caused to die In the subchronic toxicity research, New Zealand white rabbits were taken the test at doses of 0,9g/kg and 1,8g/kg during consecutive weeks; the results showed that the use of 1,8g/kg dose changed the indicators of HC, HB, HCT, white blood cells but this change had no statistical significance (P≥ 0,05) and had no difference as compared to the control group As for other biochemical indicators such as AST, ALT, Ure, Creatnin, there were some relevant changes but all without statistical significance (P≥ 0,05) This has shown that it is quite safe to use Balanoxi capsules in a long time • Key words: Balanoxi, Balanophora Laxiflora, Acute Toxicity, Subchronic Toxicity ĐẶT VẤN ĐỀ • Theo WHO, tỉ lệ cặp vợ chồng cộng đồng bị vô sinh (12 - 18%) tùy nước, trung bình 15%, tỉ lệ có xu hướng ngày tăng • Trong cặp vơ sinh, vơ sinh nam giới bị suy giảm tinh trùng chiếm tới 70-80% • SGTT ngày gia tăng chiếm tỷ lệ cao • Việc điều trị SGTT gặp nhiều khó khăn, chủ yếu SGTT có nhiều nguyên nhân phức tạp ĐẶT VẤN ĐỀ • YHHĐ có nhiều phương pháp điều trị SGTT, kết chưa theo mong muốn thầy thuốc người bệnh hay có tác dụng khơng mong muốn SGTT thường phải điều trị kéo dài • Gần nhiều nhà khoa học quay lại với YHCT Vì thuốc YHCT theo kinh nghiệm dân gian có nhiều dược liệu tác dụng tốt với chứng suy giảm tinh trùng uống kéo dài mà có ảnh hưởng bất lợi ĐẶT VẤN ĐỀ • Cây Tỏa dương hay gọi củ ngọc núi (Balanophora laxiflora) tìm thấy rừng sâu vùng Tuyên Quang, Yên Bái, Lào cai, dân địa phương sử dụng từ lâu để làm thuốc bổ Thận tráng dương, Y văn dùng làm thuốc điều trị cho đàn ông di tinh, mộng tinh, rối loạn cương dương, vơ sinh • Ở Trung Quốc, Malaysia người ta thường dùng rượu Tỏa dương loại rượu kích thích tình dục • Vì chúng tơi mong muốn tạo sản phẩm đơng dược vừa có tác dụng điều trị vừa dễ bảo quản an toàn cho bệnh nhân từ loài Tỏa dương (Balanophora laxiflora) dạng viên nang với tên dược phẩm Balanoxi MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Xác định độc tính cấp liều chết LD50 viên nang Balanoxi chuột nhắt trắng Đánh giá độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi thỏ NGUYÊN LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NC 2.1 Nguyên liệu NC 2.1.1 Viên nang BALANOXI gồm: • Thuốc bào chế dạng dược liệu khô, chiết xuất cồn cho bay thành dạng cao khơ tồn phần theo tiêu chuẩn sở Viện Y Học Bản Địa Việt Nam đóng vào viên nang cứng có hàm lượng 500mg theo tiêu chuẩn sở khoa Dược Viện Y học Cổ Truyền Quân Đội •Viên thuốc bỏ vỏ nang lấy bột thuốc hòa nước cất cho động vật thực nghiệm uống khoa Nghiên cứu thực nghiệm – Viện YHCT Quân đội 2.1.2 Hoá chất, thiết bị • Các hố chất xét nghiệm làm tiêu mơ bệnh học • Máy xét nghiệm huyết học Swelab Alfa - Thụy Điển, máy xét nghiệm sinh hóa BTS 350 BioSystem - Tây Ban Nha 2.1.3 Động vật thực nghiệm •Chuột nhắt trắng chủng Swiss Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp •Trọng lượng trung bình con: 20g ± 2, khơng phân biệt giống Chuột khỏe mạnh, đảm bảo tiêu chuẩn sinh lý bình thường Chuột nhịn ăn 15 trước thí nghiệm, nước uống cung cấp đầy đủ •Thỏ chủng Newzeland White, lông trắng, khỏe mạnh, hai giống, có trọng lượng 1,8 -2,5kg; Trung tâm chăn ni Viện Kiểm nghiệm cung cấp •Động vật ni phòng thí nghiệm ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu 2.1.4 Điều kiện thử vi khí hậu: Nhiệt độ 250C, độ ẩm 80% Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến số lượng tiểu cầu máu thỏ Số lượng tiểu cầu (G/l) Thời gian Trước nghiệm thực Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Lô Chứng (1) Lô thử (n=10) Lô thử (n=10) p 219,25 ± 37,29 216.29 ± 30.14 207,14 ± 57,80 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 228,14 ± 44,86 246,11 ± 29,74 236,50 ± 47,35 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05   219,63 ± 53,88 206,56 ± 55,26 204,57 ± 65,09 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05   Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến số lượng tiểu cầu máu thỏ Số lượng tiểu cầu (G/l) Thời gian p Lô Chứng (1) Lô thử (n=10) Lô thử (n=10) Trước thực nghiệm 219,25 ± 37,29 216.29 ± 30.14 207,14 ± 57,80 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Sau tuần thực nghiệm 228,14 ± 44,86 246,11 ± 29,74 236,50 ± 47,35 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05   Sau tuần thực nghiệm 219,63 ± 53,88 206,56 ± 55,26 204,57 ± 65,09 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05   3.2.3 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến chức gan Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hoạt độ AST (GOT) máu thỏ (U/Lit) thỏ Hoạt độ AST (U/l) Thời gian Trước thực nghiệm   P Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) 30,18 ± 12,51 31,14 ± 15,02 32,54 ± 13,14 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 Sau tuần thực nghiệm 43,70 ± 17,91 45,77 ± 12,00 41,65 ± 11,53 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 p trước -sau > 0,05 > 0,05 > 0,05   Sau tuần thực nghiệm 42,61 ± 14,20 36,05 ± 16,12 37,43 ± 17,08 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 p trước -sau > 0,05 > 0,05 > 0,05   Bảng Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hoạt độ ALT (GPT) máu thỏ Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Hoạt độ ALT (U/l) Lô chứng (1) 44,27 ± 9,66 Lô thử 1(2) 43,63 ± 14,06 Lô thử (3) 45,01 ± 15,05 50,43 ± 14,30 49,98 ± 14,41 48,39 ± 25,69 > 0,05 > 0,05 > 0,05 59,60 ± 12,49 46,56 ± 11,48 45,31 ± 14,48 > 0,05 > 0,05 > 0,05  p P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   Bảng 10 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hoạt độ GGT máu thỏ (U/Lit) Hoạt độ GGT (U/l) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Lô chứng (1) 14,24 ± 3,27 Lô thử 1(2) 16,48 ± 6,54   Lô thử (3) 14,98 ± 7,38 19,15 ± 5,71 18,76 ± 7,67 12,93 ± 7,17 > 0,05 > 0,05 > 0,05 16,49 ± 7,48 11,99 ± 7,94 10,69 ± 4,46 > 0,05 > 0,05 > 0,05 P P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   Bảng 11 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến nồng độ Bililubin toàn phần máu thỏ (µmol/lit) Nồng độ Bilirubin tồn phần(µmol/lit) Thời gian Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Lô chứng (1) 15,74 ± 10,24 Lô thử 1(2) 17,36 ± 14,47 Lô thử (3) 18.79 ± 15,86 24,84 ± 13,25 30,73 ± 15,93 29,04 ± 16,80 > 0,05 > 0,05 > 0,05 22,42 ± 9,75 15,78 ± 6,51 20,52 ± 14,29 > 0,05 > 0,05 > 0,05   P P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   3.2.4 Ảnh hưởng thuốc viên nang “Balanoxi” đến đến chức thận Bảng 12 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến nồng độ Ure máu thỏ Ure (mmol/L) Thời gian p Lô chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) 3,87 ± 1,35 3,46 ± 0,67 3,20 ± 0,35 3,07 ± 0,92 3,72 ± 1,25 2,76 ± 0,67 > 0,05 > 0,05 > 0,05 3,97 ± 0,73 3,30 ± 1,21 3,36 ± 0,95 > 0,05 > 0,05 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   Bảng 13 Ảnh hưởng viên nang “Balanoxi” đến hàm lượng Creatinin thỏ Creatinin (µmol/L)   Thời gian P Lơ chứng (1) Lô thử 1(2) Lô thử (3) Trước thực nghiệm Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) Sau tuần thực nghiệm p (trước - sau) 110,86 ± 8,17 112,81 ± 8,67 109,88 ± 11,99 106,04 ± 15,57 103,04 ± 13,91 104,20 ± 13,72 > 0,05 > 0,05 > 0,05 115,53 ± 12,06 108,11 ± 14,32 114,10 ± 13,37 > 0,05 > 0,05 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05 P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   P1-2; p1-3; p2-3 > 0,05   3.2.5 Kết mô bệnh học: Sau tuần uống thuốc Ảnh Hình ảnh đại thể gan thận thỏ lô đối chứng Ảnh 2: Hình ảnh đại thể gan thỏ lơ thử (số ) Ảnh 3: Hình ảnh đại thể gan thỏ lơ thử (số ) Ảnh 5: Hình thái vi thể gan thỏ lô thử (thỏ số 34)(HE x 200) Ảnh 6: Hình thái vi thể gan thỏ lơ thử (thỏ số47) (HE x 200) Ảnh 7: Hình thái vi thể thận thỏ (thỏ số 01) lô chứng (HE x 400) Ảnh 8: Hình thái vi thể thận thỏ (thỏ số 34) lô thử (HE x 400) Ảnh 9: Hình thái vi thể thận thỏ (thỏ số 42) lơ thử (HE x 400) KẾT LUẬN • Viên nang Balanoxi khơng khơng gây độc tính cấp, khơng xác định LD50 chuột nhắt trắng đường uống 20g/kg thể trọng • Viên nang Balanoxi khơng gây ảnh hưởng đến tình trạng phát triển chung thỏ Gây ảnh hưởng không đáng chức tạo máu, chức gan, thận hình ảnh giải phẫu bệnh gan thận thỏ (sự khác biệt lô thử lơ thử nhóm chứng khơng có ý nghĩa thống kê (p ≥ 0,05)) XIN TRÂN TRỌNG CẢM ƠN! ... laxiflora) dạng viên nang với tên dược phẩm Balanoxi MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Xác định độc tính cấp liều chết LD50 viên nang Balanoxi chuột nhắt trắng Đánh giá độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi... Dương, tỉnh Tuyên Quang • NC xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn viên nang Balanoxi động vật thực nghiệm nhận thấy: Trong NC độc tính cấp chuột nhắt trắng chủng Swiss uống thuốc với liều... thống kê với (P≥ 0,05) Điều cho thấy Viên nang Balanoxi an tồn sử dụng dài ngày • Từ khoa: Balanoxi, Tỏa Dương, Độc tính cấp, độc tính bán trường diễn Summary • Balanoxi capsules are made up from