TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI KHẢO SÁT TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU CẤP VÀ BÁN CẤP CỦA CAO TOÀN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L ) TRÊN MÔ HÌNH CHUỘT GÂY TĂNG LI[.]
TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU CẤP VÀ BÁN CẤP CỦA CAO TOÀN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L.) TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT GÂY TĂNG LIPID MÁU BẰNG TYLOXAPOL NGUYỄN THỊ HOA ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA DƯỢC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU CẤP VÀ BÁN CẤP CỦA CAO TỒN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L.) TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT GÂY TĂNG LIPID MÁU BẰNG TYLOXAPOL Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ HOA Giảng viên hướng dẫn: ThS Nguyễn Dương Ngọc Thới ĐỒNG NAI, THÁNG 07/2022 i TĨM TẮT Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học – Khóa quy 2017 KHẢO SÁT TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU CẤP VÀ BÁN CẤP CỦA CAO TOÀN PHẦN BÌM BA RĂNG (Merremia tridentata L.) TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT GÂY TĂNG LIPID MÁU BẰNG TYLOXAPOL Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Hoa GVHD: ThS Nguyễn Dương Ngọc Thới Đặt vấn đề Rối loạn lipid máu (RLLPM) xem yếu tố nguy bệnh tim mạch-gây nhiều biến chứng đột quỵ, nhồi máu tim, suy mạch vành Y học đại áp dụng nhiều biện pháp để kiểm soát điều trị RLLPM thay đổi lối sống, chế độ ăn uống sinh hoạt điều độ, rèn luyện thể lực dùng thuốc Các thuốc có hiệu điều trị tốt có nhiều tác dụng khơng mong muốn Một xu hướng điều trị hướng thuốc có nguồn gốc tự nhiên, vừa mang lại hiệu điều trị, vừa hạn chế tác dụng khơng mong muốn cho người bệnh Bìm ba (Merremia tridentata L.) thuộc họ Bìm bìm (Colvolvulaceae) số quốc gia Thái Lan, Malaisia, Ấn Độ sử dụng nhiều theo dân gian để trị bệnh viêm khớp, sốt rét, tiểu đường, zona thần kinh Trữ lượng BBR Việt Nam lớn, phân bố rãi khắp tỉnh, nhóm nghiên cứu chứng minh tác dụng hạ đường huyết chuột BBR Trong trình nghiên cứu phát cao BBR làm giảm số số lipid máu chuột Vì vậy, đề tài: “Khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao tồn phần bìm ba (Merremia tridentata L.) mơ hình chuột gây tăng lipid máu tyloxapol” thực với mục tiêu sau: - Chiết xuất kiểm tra chất lượng cao Bìm ba răng; - Đánh giá tính khả dụng mơ hình chuột tăng lipid máu cấp tính tyloxapol; - Khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao Bìm ba mơ hình chuột gây tăng lipid máu cấp tính tyloxapol; ii - Đánh giá tính khả dụng mơ hình chuột tăng lipid máu bán cấp tyloxapol; - Khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao Bìm ba mơ hình chuột gây tăng lipid máu bán cấp tyloxapol Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu - Dược liệu sử dụng đề tài toàn thân mặt đất BBR tươi thu hái vào tháng năm 2022 xã Ân Hảo Đơng, huyện Hồi Ân, tỉnh Bình Định - Chuột nhắt trắng khỏe mạnh, giống đực, chủng Swiss albino, trọng lượng 20-25 g, cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm y tế Nha Trang Phương pháp nghiên cứu Chiết xuất kiểm tra chất lượng cao Bìm ba a) Chiết xuất Bột dược liệu chiết với nước phương pháp chiết nóng nhiệt độ 100 ºC 20 phút, chiết lần, lẫn với 5000 ml nước Gom dịch chiết, cô cách thủy 60 oC thu cao đặc b) Kiểm tra chất lượng Chỉ tiêu Chất lượng mong muốn Cảm quan Cao đặc, màu nâu, mùi thơm Độ ẩm ≤ 20,0% Hiệu suất chiết ≥15,0% Định tính Các vết mẫu thử trùng với vết mẫu chuẩn Định lượng ≥ 0,04% cynarosid Phương pháp kiểm nghiệm cao Kiểm tra số tính chất cao khô - Cảm quan: màu, mùi - Độ ẩm: xác định cân sấy ẩm Ohaus - Định tính: phương pháp sắc ký lớp mỏng - Định lượng: phương pháp HPLC iii Phương pháp khảo sát tác dụng hạ lipid cấp cao BBR Cho chuột nhịn đói qua đêm trước tiến hành thử nghiệm Chuẩn bị dung dịch tiêm tyloxapol cách pha nước muối sinh lý NaCl 0,9% Sau đó, gây tăng lipid cách tiêm tĩnh mạch tyloxapol liều 250 mg/kg (điều kiện tiêm 0,1 ml/ 10 g thể trọng chuột) Ngay sau đó, chuột cho uống atorvastatin liều 64 mg/kg cao BBR với liều 100 mg/kg, 200 mg/kg cốm BBR liều 200 mg/kg Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 Lô (Sinh lý) : tiêm tĩnh mạch IV dung dịch nước muối sinh lý NaCl 0,9%, uống nước cất Lô (Bệnh lý) : tiêm IV Tyloxapol liều 250 mg/kg, uống nước cất Lô (Đối chứng) : tiêm IV Tyloxapol liều 250 mg/kg, uống atorvastatin liều 64 mg/kg Lô (BBR liều 1) : tiêm IV Tyloxapol liều 250 mg/kg, uống cao BBR liều 100 mg/kg Lô (BBR liều 2) : tiêm IV Tyloxapol liều 250 mg/kg, uống cao BBR liều 200 mg/kg Vào thời điểm 24 sau tiêm tyloxapol, tiến hành lấy 0,5 ml máu tĩnh mạch đuôi chuột đo nồng độ cholesterol toàn phần triglycerid máu Phương pháp khảo sát tác dụng hạ lipid bán cấp cao BBR Cho chuột nhịn đói qua đêm trước tiến hành thử nghiệm Vào sáng thứ hai, chuột lấy máu tĩnh mạch đuôi để định lượng nồng độ cholesterol triglycerid máu thời điểm T0 Sau đó, chia chuột ngẫu nhiên vào lơ khác : Lô (Sinh lý) : tiêm tĩnh mạch (IV) dung dịch nước muối sinh lý NaCl 0,9% Lô (Bệnh lý): tiêm IV dung dịch tyloxapol liều 250 mg/kg, lần/tuần liên tục tuần Chuẩn bị dung dịch tiêm tyloxapol cách pha nước muối sinh lý NaCl 0,9% Gây tăng lipid cách tiêm IV tyloxapol liều 250 mg/kg (điều kiện tiêm 0,1 ml/ 10 g chuột), lần/ tuần vào ngày thứ ba, thứ năm, thứ bảy hàng tuần tuần Lấy máu đuôi chuột vào buổi sáng thứ hai tuần thứ (T7) tuần thứ hai (T14) đem định lượng để xác định nồng độ cholesterol toàn phần triglycerid máu iv Sau tuần (T14), chuột có mức cholesterol >200 mg/dL chọn vào thử nghiệm chia ngẫu nhiên thành lơ có nồng độ cholesterol không khác biệt: Lô chứng bệnh: uống nước cất 0,1 ml/10g x lần/ngày Lô đối chứng (ator5): uống Atorvastatin liều mg/kg x lần/ ngày Lơ thử nghiệm (BBR 100): uống cao tồn phần BBR liều 100 mg/kg/ngày Lô thử nghiệm (BBR 200): uống cao toàn phần BBR liều 200 mg/kg/ngày Từ tuần thứ ba trở đi, chuột cho uống atorvastatin liều mg/kg cao toàn phần BBR với liều 100 mg/kg, 200 mg/kg ngày, tuần Trong trình điều trị, chuột tiêm tyloxapol lần/ tuần vào ngày thứ ba, thứ năm, thứ bảy để trì mức tăng cholesterol triglycerid Theo dõi lipid máu sau tuần (T21, T28) Phương pháp xác định số lipid máu Chuột cho nhịn đói qua đêm (12 giờ), cho uống nước đầy đủ Máu chuột thí nghiệm lấy tĩnh mạch đuôi, khoảng 0,5 ml, cho vào ống eppendorf, sau ly tâm với vận tốc 5000 vịng/phút 10 phút Tách lấy huyết đem định lượng cholesterol toàn phần triglycerid máu Xử lý số liệu thống kê thực nghiệm Các số liệu kết thu được trình bày dạng trung bình (mean) ± SEM (Standard error of mean – sai số chuẩn số trung bình) Các kết thu sau q trình thực nghiệm thống kê, phân tích phần mềm Minitab 17 So sánh khác biệt có ý nghĩa thống kê hai nhóm thử nghiệm giá trị p < 0,05 Kết Chiết xuất kiểm tra chất lượng cao a) Chiết xuất Từ 500 g bột dược liệu BBR, tiến hành chiết nóng với dung mơi nước, nhiệt độ 100 °C, thu 80,40 g cao đặc v b) Kiểm tra chất lượng cao Chỉ tiêu Chất lượng mong muốn Kết Cảm quan Cao đặc, màu nâu, mùi thơm đặc trưng Đạt Độ ẩm ≤ 20% 7,77% (đạt) Hiệu suất chiết ≥15,0% 16,26% (80,40 g) Định tính Dương tính với apigenin, luteolin, Đúng quercitrin, apigertrin cynarosid Định lượng ≥ 0,04% cynarosid 0,068% (đạt) Kết khảo sát tác dụng hạ lipid cấp cao BBR Ở nhóm chuột điều trị cao toàn phần BBR liều 100 mg/kg, nồng độ cholesterol toàn phần giảm 34,1% triglycerid giảm 47,8% sau 24 điều trị Ở nhóm chuột điều trị cao toàn phần BBR liều 200 mg/kg, nồng độ cholesterol toàn phần giảm 48,97% triglycerid giảm 50,88% sau 24 điều trị Kết khảo sát tác dụng hạ lipid cấp cao BBR Ở nhóm điều trị cao tồn phần BBR liều 200 mg/kg/ngày Vào cuối đợt thử nghiệm, thời điểm T28 nồng độ cholesterol toàn phần triglycerid giảm 23,72% 16,43% Với cao toàn phần BBR liều 100 mg/kg/ngày, sau tuần điều trị khơng thể tác động giảm cholesterol tồn phần triglycerid giảm 8,6% so với ngày điều trị (T14) Kiến nghị Nghiên cứu bước đầu khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao chiết tồn phần BBR mơ hình động vật thực nghiệm Do thời gian thực đề tài hạn chế, với mong muốn có thêm nghiên cứu cụ thể hơn, đề nghị nội dung sau: - Tiếp tục khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao toàn phần BBR thời gian khảo sát dài hơn; - Đánh giá tác dụng hạ lipid máu cao BBR mơ hình chuột tăng lipid gây chế độ ăn; - Nghiên cứu chế hạ lipid máu cao toàn phần BBR vi MỤC LỤC TÓM TẮT iii MỤC LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ x LỜI CẢM ƠN xi CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 2.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY BÌM BA RĂNG 2.1.1 Mô tả thực vật 2.1.2 Phân bố, sinh thái 2.1.3 Thành phần hóa học 2.1.4 Tác dụng dược lý 2.1.5 Tình hình nghiên cứu nước 2.1.6 Tình hình nghiên cứu nước 2.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ LIPID 11 2.2.1 Đặc tính cấu tạo lipid 11 2.2.2 Thành phần cấu trúc lipoprotein 11 2.2.3 Phân loại lipoprotein 12 2.2.4 Chuyển hóa lipoprotein 12 2.3 RỐI LOẠN LIPID MÁU 14 2.3.1 Định nghĩa 14 2.3.2 Phân loại 14 2.3.3 Nguyên nhân 15 2.3.4 Triệu chứng chẩn đoán 16 2.3.5 Điều trị 18 2.5 MƠ HÌNH RỐI LOẠN LIPID máu TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM 21 2.5.1 Mô hình tăng lipid máu ngoại sinh chế độ dinh dưỡng 21 2.5.2 Mơ hình tăng lipid máu chất tẩy rửa chất hóa học 21 vii CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 25 3.1.1 Dược liệu 25 3.1.2 Động vật thí nghiệm 25 3.2 HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ 25 3.2.1 Hóa chất 25 3.2.2 Trang thiết bị 25 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.3.1 Chiết xuất kiểm tra chất lượng cao Bìm ba 26 3.3.2 Phương pháp kiểm nghiệm cao 27 3.3.3 Phương pháp khảo sát tác dụng hạ lipid cấp cao BBR 28 3.3.4 Phương pháp khảo sát tác dụng hạ lipid bán cấp cao BBR 29 3.3.5 Phương pháp xác định số lipid máu 30 3.3.6 Xử lý số liệu thống kê thực nghiệm 33 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 34 4.1 KẾT QUẢ 34 4.1.1 Chiết xuất kiểm tra chất lượng cao Bìm ba 34 4.1.3 Kết khảo sát tác dụng hạ lipid cấp cao BBR 36 4.1.4 Kết khảo sát tác dụng hạ lipid bán cấp cao BBR 39 4.2 BÀN LUẬN 48 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 50 5.1 KẾT LUẬN 50 5.2 KIẾN NGHỊ 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 viii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng anh WHO World Health Organization Tiếng việt Tổ chức Y tế giới BBR Bìm ba RLLPM Rối loạn lipid máu SKLM Sắc ký lớp mỏng HPLC High-performanceliquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography DĐVN V Dược điển Việt Nam V UV Ultra violet (Phổ) tử ngoại OD Optical density Mật độ quang HDL High density lipoprotein Lipoprotein tỉ trọng cao LDL Low density lipoprotein Lipoprotein tỉ trọng thấp TG Triglyceride TC Total cholesterol CM Chylomicron IV Intravenous Tiêm tĩnh mạch PPAR-α Peroxisome proliferrator Peroxisome proliferrator activated receptor α activated receptor α HMG-CoA 3-hydroxy-3-methylglutaryl 3-hydroxy-3-methylglutaryl reductase coenzyme A reductase coenzyme A reductase LPL Lipoprotein lipase Lipoprotein lipase YHHĐ Cholesterol toàn phần Y học đại ... dụng mơ hình chuột tăng lipid máu cấp tính tyloxapol; - Khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao Bìm ba mơ hình chuột gây tăng lipid máu cấp tính tyloxapol; - Đánh giá tính khả dụng mơ hình chuột tăng. .. khả dụng mơ hình chuột tăng lipid máu cấp tính tyloxapol; - Khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao Bìm ba mơ hình chuột gây tăng lipid máu cấp tính tyloxapol; ii - Đánh giá tính khả dụng mơ hình chuột. .. tăng lipid máu bán cấp tyloxapol; - Khảo sát tác dụng hạ lipid máu cao Bìm ba mơ hình chuột gây tăng lipid máu bán cấp tyloxapol 3 CHƯƠNG TỔNG QUAN 2.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY BÌM BA RĂNG 2.1.1 Mô tả