Hiện chưa có nhiều nghiên cứu tại Việt Nam công bố chi tiết các tác dụng dược lý của quả vả (ficus auriculata). Đề tài này nhằm khảo sát tác động hạ đường huyết cũng như độc tính cấp của cao chiết cồn từ quả Vả trên chuột nhắt trắng.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 KHẢO SÁT TÁC DỤNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT VÀ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CAO CHIẾT CỒN TỪ QUẢ VẢ (FICUS AURICULATA L, MORACEAE) Huỳnh Ngọc Trinh*, Đỗ Thanh Hảo*, Mai Quốc Bảo**, Trần Mạnh Hùng* TÓM TẮT Mở đầu – mục tiêu: Hiện chưa có nhiều nghiên cứu Việt Nam công bố chi tiết tác dụng dược lý Vả (Ficus auriculata) Đề tài nhằm khảo s{t t{c động hạ đường huyết độc tính cấp cao chiết cồn từ Vả chuột nhắt trắng Đối tượng – phương pháp nghiên cứu: Quả Vả chiết xuất phương ph{p ng}m dầm dung môi ethanol 50% Chuột g}y tăng đường huyết alloxan v| điều trị cao Vả glibenclamid Chuột cho uống liều 100g/kg, chia làm lần thử nghiệm độc tính cấp Kết quả: cao Vả liều 250 mg/kg, uống lần/ngày có tác dụng hạ glucose huyết tương đương với glibenclamid Cao n|y không g}y chết chuột thử nghiệm liều 100g/kg Kết luận: cao tồn phần cồn 50% Vả có tác dụng hạ glucose huyết v| an to|n chuột thử nghiệm Từ khóa: alloxan, Ficus auriculata, hyperglycemia ABSTRACT HYPOGLYCEMIC EFFECT AND ACUTE TOXICITY OF TOTAL ETHANOLIC EXTRACT FROM FICUS AURICULATA FRUITS Huynh Ngoc Trinh, Do Thanh hao, Mai Quoc Bao, Tran Manh Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 1- 2018: 354 - 358 Background: there is not many researches in Viet Nam with respect to the pharmacological effects of Ficus auriculata (FA) fruits This work aimed at investigating the hypoglycemic effect and the acute toxicity of FA ethanolic extract in mice Materials and method: FA fruits were extracted with ethanol 50% by maceration method Hyperglycemic mice were produced by alloxan injection and treated with FA extract or glibenclamide In acute toxicity assay, mice were orally gavage of 100 g/kg FA extract, divived in doses Results: FA extract at the dose of 250 mg/kg, PO twice a day presented remarkable anti-hyperglycemic effect which was comparable to glibenclamid mg/kg This extract did not cause any mortality in mice at the dose of 100 g/kg Conclusion: Total ethanol 50% extract of FA fruits demontrated the significant anti-diabetic effect and had no acute toxicity in experimental mice Keywords: alloxan, Ficus auriculata, hyperglycemia ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Vả với tên khoa học Ficus auriculata L, thuộc họ Moraceae l| lo|i c}y kh{ quen thuộc nƣớc ta, Vả phận dùng đƣợc sử dụng rộng rãi Quả Vả không thực phẩm gi|u dinh dƣỡng m| l| vị thuốc cổ truyền hiệu với nhiều *Khoa Dƣợc, Đại học Y Dƣợc TP.HCM **Công ty TNHH Sản Xuất Thƣơng Mại Dịch Vụ Lộc Mai Tác giả liên lạc: PGS TS Huỳnh Ngọc Trinh ĐT: 0907 733 259 Email: trinhbl81@yahoo.com 354 Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 công dụng nhƣ nhiệt, giải độc, tiêu đờm, lợi tiểu, suy nhƣợc, ăn, tăng tiết sữa, chữa kết kỵ, tiêu hóa hay chứng viêm loét dày, tá tràng, (1,4) Một số nghiên cứu gần đ}y cho thấy lá, thân hay Vả có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan, điều hòa nồng độ cholesterol huyết ổn định đƣờng huyết(2,3) Tuy nhiên, chƣa có nhiều nghiên cứu Việt Nam công bố chi tiết tác dụng dƣợc lý Vả; đó, việc khai th{c v| đƣa v|o sử dụng giống tiềm n|y nhiều hạn chế Để góp phần tìm kiếm thêm ngun liệu l|m thuốc khám phá tác dụng dƣợc lý thuốc dân gian, tiến h|nh đề t|i “Khảo sát tác dụng hạ đƣờng huyết v| độc tính cấp cao chiết cồn từ Vả” NGUYÊN VẬT LIỆU – PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thú thử nghiệm Chuột nhắt trắng chủng Swiss albino, giống đực, cân nặng khoảng 25 – 30g, khỏe mạnh, không dị tật, khơng có biểu bất thƣờng Viện Vaccin Sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp Chuột đƣợc ni ổn định nhiệt độ phòng 3-4 ng|y trƣớc bắt đầu thử nghiệm Thức ăn (do Viện Vaccin Sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp) v| nƣớc uống đƣợc cung cấp đầy đủ ngày Hóa chất Alloxan (Sigma-Aldrich Chemie Gmbh, Đức) Thuốc thử glucose (ISE, Italy) Thuốc glibenclamid 5mg công ty cổ phần XNK Y Tế Domesco Ethanol (Trung Quốc) Cao toàn phần Vả Nguyên liệu Vả khô công ty TNHH Sản Xuất Thƣơng Mại Dịch Vụ Lộc Mai cung cấp Nguyên liệu đƣợc xây thô tiến hành chiết xuất phƣơng ph{p ng}m dầm (maceration), sử dụng dung môi ethanol 50% với tỷ lệ dƣợc liệu: dung môi = 1:7 Dịch chiết thu Chuyên Đề Dƣợc Nghiên cứu Y học đƣợc đem cô để đuổi dung môi thu đƣợc cao tồn phần Vả chất đặc sánh, màu nâu sẫm, vị đắng nhẹ, mùi thơm đặc trƣng Hiệu suất chiết trung bình 13,74 % Khảo sát tác dụng hạ đƣờng huyết Chuột đƣợc cho nhịn đói qua đêm trƣớc tiêm alloxan Chuột đƣợc g}y tăng đƣờng huyết c{ch tiêm tĩnh mạch dung dịch alloxan liều 55 mg/kg (pha dung dịch NaCl 0,9%) Ở thời điểm 48 sau tiêm, chuột đƣợc lấy m{u tĩnh mạch đuôi để đ{nh gi{ nồng độ đƣờng huyết Những chuột có nồng độ đƣờng huyết cao 160mg/dL đƣợc lựa chọn vào thí nghiệm khảo sát tác dụng hạ đƣờng huyết cao Vả Chuột đƣợc chia ngẫu nhiên thành lô cho nồng độ đƣờng huyết lơ khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê Bao gồm lô điều trị nhƣ sau: Thử nghiệm 1: uống cao Vả lần/ngày Lô bệnh (n=5): cho chuột uống nƣớc cất (10 mL/kg, lần/ngày) Lô OD 250 (n=6): cho chuột uống cao Vả với liều 250 mg/kg/lần, lần/ngày Lô OD 500 (n=5): cho chuột uống cao Vả với liều 500 mg/kg/lần, lần/ngày Thử nghiệm 2: uống cao Vả lần/ngày Lô bệnh (n=6): cho chuột uống nƣớc cất (10 mL/kg, lần/ngày) Lô BID 250 (n=7): cho chuột uống cao Vả với liều 250 mg/kg/lần, lần/ngày Lô BID 500 (n=6): cho chuột uống cao Vả với liều 500 mg/kg/lần, lần/ngày Lô glibenclamid (n=8): cho chuột uống thuốc đối chứng glibenclamid liều mg/kg/lần, lần/ngày Ngoài ra, đợt thử nghiệm có lơ sinh lý (n=6), bao gồm chuột khỏe mạnh, không tiêm alloxan để g}y tăng glucose huyết Chuột đƣợc cho uống nƣớc cất 1-2 lần ngày với thể tích 10 mL/kg 355 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Chuột đƣợc điều trị vòng 15 ngày Theo dõi nồng độ glucose huyết chuột ngày Chuột đƣợc cho nhịn đói qua đêm trƣớc đợt lấy m{u M{u đƣợc lấy qua tĩnh mạch đuôi để định lƣợng nồng độ glucose huyết phƣơng ph{p enzym – màu Phƣơng pháp thử độc tính cấp Ghi nhận triệu chứng bất thƣờng, thay đổi hành vi thể trạng chuột Tính tỉ lệ chuột chết vòng 72 Nếu có chuột chết tiến hành thử nghiệm x{c định liều gây chết 50 % thú thử nghiệm (LD50) Những chuột không chết đƣợc theo dõi tiếp tục triệu chứng bất thƣờng vòng tuần Cao tồn phần Vả đƣợc pha nƣớc cất với nồng độ đậm đặc tối đa bơm đƣợc qua kim cho chuột uống Qua thăm dò độ hòa tan cao Vả nƣớc cho thấy cao Vả tan tốt nƣớc tăng đến nồng độ g cao/ml Phân tích số liệu Chuột đƣợc cho nhịn đói qua đêm trƣớc tiến hành thí nghiệm Dùng kim đầu tù cho chuột uống dung dịch cao Vả hay nƣớc cất theo nhóm chuột nhƣ sau: KẾT QUẢ Nhóm chứng: uống nƣớc cất 10 ml/kg thể trọng chuột, uống lần, cách Nhóm thử: uống cao Vả với liều 50 g cao/kg/lần, uống lần, cách Các số liệu thu đƣợc đƣợc trình b|y dƣới dạng Trung bình ± SEM đƣợc đ{nh gi{ ý nghĩa thống kê phần mềm SPSS 20 phép kiểm T-test Mann-Whitney Sự khác biệt có ý nghĩa P < 0,05 Tác dụng hạ glucose huyết Thử nghiệm Kết so sánh hiệu hạ đƣờng huyết liều 250 mg/kg so với liều 500 mg/kg cao Vả cho chuột uống lần ng|y đƣợc trình bày bảng Bảng 1: Nồng độ đường huyết (mg/dL) lô chuột thử nghiệm Lô OD 250 OD 500 Chứng bệnh Sinh lý Ngày 273,11 ± 38,99 274,01 ±46,21 268,21 ± 31,90 94,69 ± 16,99 Ngày 207,00± 31,64 236,81± 38,25 256,91 ± 39,83 65,51 ± 12,05 Lô chuột sinh lý có nồng độ glucose huyết trung bình khơng thay đổi đ{ng kể trình thử nghiệm Nồng độ glucose huyết chuột dao động khoảng 50-120 mg/dL lô chứng bệnh, nồng độ glucose huyết tăng cao suốt trình thử nghiệm Vào cuối thử nghiệm (Ngày 15), nồng độ glucose huyết trì mức cao với nồng độ trung bình 242,90 mg/dL, gấp 3,3 lần so với lô sinh lý Nhƣ vậy, mơ hình gây tăng glucose huyết alloxan chuột nhắt trắng 15 ngày thử nghiệm Khi cho uống cao Vả liều 250 mg/kg lần ngày, nồng độ glucose huyết chuột thấp so với lô bệnh vào tất thời điểm thử 356 Ngày 10 254,65± 48,39 236,98± 44,84 271,90± 38,47 71,45± 12,28 Ngày 15 203,57± 32,91 187,33± 25,26 242,90± 38,89 84,94± 6,69 nghiệm nhƣng nồng độ glucose huyết chuột cao v| chƣa kh{c biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ bệnh Vào ngày 15, nồng độ glucose huyết giảm 25% so với thời điểm ban đầu Ở liều 500 mg/kg, nồng độ glucose huyết giảm dần vòng 15 ng|y điều trị giảm đến 32% vào ngày 15 so với thời điểm ban đầu Tuy nhiên, nồng độ glucose huyết nhóm chuột chƣa kh{c biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh Nhƣ vậy, cao Vả liều 250 500 mg/kg, lần/ngày có tác dụng hạ đƣờng huyết Do đó, tiến hành thử nghiệm với tần suất cho uống lần/ngày so sánh với thuốc đối chứng glibenclamide liều mg/kg, uống lần nhất/ngày Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Thử nghiệm Kết theo dõi nồng độ đƣờng huyết chuột suốt trình thử nghiệm đƣợc trình bày bảng Ở liều mg/kg, thuốc đối chứng glibenclamid thể rõ t{c động hạ glucose Nghiên cứu Y học huyết từ ng|y v| trì t{c động ngày 15 Vào cuối thử nghiệm, nồng độ glucose huyết nhóm chuột thấp 31 % so với lô chứng bệnh khác biệt n|y mang ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Bảng 2: Nồng độ glucose huyết (mg/dL) lô chuột thử nghiệm Lô BID 500 BID 250 Glibenclamide Bệnh Sinh lý Ngày 270,99 ± 43,14 272,70 ± 27,97 269,42 ± 23,45 265,67 ± 21,06 92,41 ± 3,98 Ngày 215,91± 37,89 155,98± 29,83 215,83± 26,10 337,42 ± 38,07 81,19 ± 5,11 Ngày 10 207,08± 49,41 144,37± 21,80 234,43± 32,98 302,67± 23,13 82,30± 3,39 Ngày 15 189,14± 51,66 (*) 151,92± 30,96 (**) 215,32± 28,90 (*) 312,61± 32,11 80,48± 5,07 (*) P < 0,05; (**) P < 0,01 Ở liều thử nghiệm 500 mg/kg 250 mg/kg, uống lần ngày, cao Vả có tác dụng hạ đƣờng huyết rõ rệt; đó, nồng độ đƣờng huyết sau 15 ng|y điều trị giảm lần lƣợt 30 % 41 % so với ng|y Tác dụng khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê so với glibenclamide nhƣ chƣa có khác biệt mức liều cao Vả Điều đ{ng lƣu ý l| có 1/6 chuột uống cao Vả liều 500 mg/kg x lần có nồng độ đƣờng huyết giảm thấp vào ngày 15 (chỉ 25,36 mg/dL) thể trạng chuột (giảm trọng lƣợng, di chuyển chậm chạp, lƣng gù) Điều cho thấy liều 500 mg/kg có tác dụng hạ glucose huyết mạnh Trong đó, liều 250 mg/kg cho tác dụng hạ đƣờng huyết rõ có 2/7 chuột có mức glucose huyết trở bình thƣờng (