Bài viết khảo sát độc tính cấp đường uống, tác dụng dự phòng và điều trị viêm trên chuột nhắt của cao cồn 96% từ lá Dâm bụt (Hibiscus rosa-sinensis L.).
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG VÀ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM CẤP CỦA CAO CHIẾT CỒN LÁ DÂM BỤT (HIBISCUS ROSA-SINENSIS L.) TRÊN CHUỘT NHẮT Đỗ Thị Hồng Tươi*, Nguyễn Đặng Kim Quyên*, Hà Thị Hồng Phúc*, Trần Thị Vân Anh* TĨM TẮT Mục tiêu: Khảo sát độc tính cấp đường uống, tác dụng dự phòng điều trị viêm chuột nhắt cao cồn 96% từ Dâm bụt (Hibiscus rosa-sinensis L.) Phương pháp: Thử nghiệm độc tính cấp đường uống cao chiết Dâm bụt chuột nhắt Swiss albino, đực cái, 6-7 tuần tuổi, trọng lượng khoảng 25 g, theo dõi tỉ lệ chết biểu độc tính vòng 72 Khảo sát tác dụng dự phòng điều trị viêm cao với liều uống 100 mg/kg 200 mg/kg chuột nhắt gây phù bàn chân carrageenan 1% Kết quả: Cao cồn 96% từ Dâm bụt độc tính cấp đường uống chuột với liều tối đa cho uống qua kim Dmax 32 g/kg (tương ứng 94,8 g bột Dâm bụt khơ/kg) Cao chiết thể tác động dự phòng viêm cấp chuột cho uống liều 100 mg/kg 200 mg/kg giúp giảm độ phù bàn chân chuột so với lô chứng bệnh thời điểm khảo sát, liều 200 mg/kg có tác động tốt Cả hai liều 100 mg/kg 200 mg/kg thể tác dụng điều trị viêm cấp chậm yếu thuốc đối chứng diclofenac Kết luận: Cao chiết Dâm bụt độc tính cấp đường uống chuột với liều tối đa Dmax 32 g/kg (tương ứng 94,8 g bột Dâm bụt khô/kg) Cao chiết thể tác dụng phòng điều trị viêm cấp chuột nhắt với liều 100 mg/kg 200 mg/kg Từ khóa: Dâm bụt Hibiscus-rosa sinensis L., độc tính cấp, tác dụng kháng viêm ABSTRACT STUDY ON ORAL ACUTE TOXICITY AND ANTI-INFLAMMATORY EFFECT OF ETHANOL EXTRACT FROM HIBISCUS ROSA-SINENSIS L LEAVES IN MICE Do Thi Hong Tuoi, Nguyen Đang Kim Quyen, Ha Thi Hong Phuc, Tran Thi Van Anh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 78 – 82 Objectives: This study evaluated the oral acute toxicity and anti-inflammatory effects of ethanol extract from of Hibiscus rosa-sinensis L leaves Methods: Oral acute toxicity of H rosa-sinensis extract was investigated in male and female Swiss albino mice by monitoring mortality and toxicity within 72 hours Anti-inflammatory effect was determined in 1% carrageenan-induced paw edema mouse model Results: H rosa-sinensis L extracts did not show any acute oral toxicity in mice at maximum dose (Dmax) of 32 g/kg corresponding to 94.8 g plant dry powder/kg The extract exhibited protective effect against acute inflammation at the oral doses of 100 mg/kg and 200 mg/kg by decreasing hind paw edema in mice compared to pathological control at all tested times This effect of the dose of 200 mg/kg was better than that of 100 mg/kg one Both two doses of 100 mg/kg and 200 mg/kg showed a treatment effect against acute inflammation; which was later and weaker than that of reference drug diclofenac Conclusions: The extract of Hisbicus rosa-sinensis L did not show oral acute toxicity in mice at the Khoa Dược - Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi ĐT: 0908683080 78 Email: hongtuoi@ump.edu.vn Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học maximum oral dose (Dmax) of 32 g/kg (corresponding to 94.8 g dry plant/kg) This extract exhibited protective and curative effects on inflammation at the oral doses of 100 mg/kg and 200 mg/kg in mice Keywords: Hibiscus rosa-sinensis L., oral acute toxicity, anti-inflammatory effect ĐẶT VẤN ĐỀ Dâm bụt (Hibiscus rosa–sinensis L.) loài dược liệu sử dụng phổ biến Việt Nam nước giới để hỗ trợ điều trị nhiều bệnh khác viêm dày, mụn nhọt, lở ngứa, sưng tấy, đái tháo đường…(3) Nhiều cơng trình nghiên cứu tác dụng dược lý Dâm bụt cho thấy dịch chiết có tiềm điều trị bệnh liên quan đến hội chứng chuyển hóa(6), viêm đại tràng(4) đái tháo đường(9),… Với mục đích cung cấp sở khoa học, chứng minh an toàn công dụng trị liệu Dâm bụt, đề tài tiến hành khảo sát độc tính cấp đường uống, tác dụng dự phòng điều trị viêm cao chiết ethanol 96% từ Dâm bụt (Hibiscus rosa–sinensis L.) mơ hình chuột nhắt ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Mẫu thử Cao Dâm bụt chiết phương pháp ngấm kiệt với ethanol 96% (tỷ lệ dược liệu: dung môi g: 12 ml) Dâm bụt thu hái bánh tẻ vào tháng 10/2017 Trảng Bom, Đồng Nai Hiệu suất chiết 17,6% Cao thử có độ ẩm 5,2% Động vật thử nghiệm Chuột nhắt Swiss albino đực cái, 6-7 tuần tuổi, khoảng 25 g, cung cấp Viện Vaccin Sinh phẩm Y tế Nha Trang Chuột sử dụng khỏe mạnh, khơng có biểu bất thường, ni ổn định mơi trường thí nghiệm ngày Chuột ni lồng kích thước 25 x 35 x 15 cm, cung cấp thức ăn nước uống đầy đủ Hóa chất Carrageenan 1% (Sigma Aldrich, Mỹ) pha dung dịch nước muối sinh lý, dung dịch chống thấm Ornano imbidente (Ugo Basile, Ý) pha ml với 250 mg NaCl 500 ml nước cất, thuốc đối chứng diclofenac (viên nén Voltaren, Novartis, Ý) Phương pháp nghiên cứu Thiết kế thực nghiệm, đo lường độc lập Khảo sát độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng(2) Cho chuột (3 đực, cái) nhịn đói 12 trước tiến hành thử nghiệm Cao phân tán hỗn dịch tween 80 pha nước cất với nồng độ 10% (tt/tt) Liều tối đa qua kim cho uống khảo sát 32 g cao/kg tương ứng với 94,8 g dược liệu khô/kg (nồng độ tối đa qua kim 1,6 g cao/ml, cho uống với thể tích 20 ml/kg chuột) Tiến hành song song với chuột đối chứng cho uống hỗn dịch tween 80 10% (tt/tt) Theo dõi ghi nhận cử động tổng quát, biểu hành vi, trạng thái lông, ăn uống, tiêu tiểu số lượng chết chuột 72 Sau 72 giờ, chuột khơng có dấu hiệu bất thường chết, tiếp tục theo dõi ngày Chuột chết ngày chuột sống sót sau ngày mổ để quan sát đại thể quan Chuột chết hay không 72 định bước tiếp theo: tiến hành với liều thấp để xác định LD50 không cần tiếp tục tiến hành thử nghiệm Khảo sát tác dụng dự phòng viêm(7) Chuột đực chia vào lơ (n = 10) cho thể tích bàn chân ban đầu (Vo - đo thiết bị plethysmometer Model 7140, Ugo Basile, Ý) khác biệt khơng có ý nghĩa (p > 0,05): Lô sinh lý lô chứng bệnh: uống nước cất; Lô dung môi: uống tween 80 pha nước cất nồng độ 1% (tt/tt); Lô đối chứng: uống diclofenac mg/kg; Lô thử 2: uống cao Dâm bụt 100 200 mg/kg Chuột cho uống nước cất, dung môi, diclofenac cao thử ngày lần vào buổi sáng (thể tích 0,1 ml/10 g) ngày Vào ngày 7, sau cho chuột uống giờ, chuột lô (trừ lô sinh lý) gây viêm cách tiêm da vào gan bàn chân phải sau 0,025 ml carrageenan 1% Đo thể tích bàn chân sau 79 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 cho uống 1, 3, 5, 24, 48, 72, 96 120 (Vt) Sau đo thể tích bàn chân thời điểm 24, 48, 72 96 giờ, chuột tiếp tục cho uống nước cất, dung môi, diclofenac cao thử (1 lần/ngày) Độ phù X (%) thời điểm tính theo công thức: X (%) = [(Vt – Vo)/ Vo] x 100, đó: Vo Vt: thể tích chân chuột thời điểm trước sau gây viêm (ml) số chuẩn số trung bình) Sự khác biệt lơ phân tích phép kiểm Kruskal-Wallis Mann-Whitney với phần mềm SPSS 22.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 Khảo sát tác dụng điều trị viêm cấp(7) Sau cho chuột uống cao ethanol 96% từ Dâm bụt với liều tối đa qua kim 32 g cao/kg, tất chuột khỏe mạnh, ăn cám viên, uống nước, tiêu tiểu, cử động bình thường khơng có chuột chết thời gian 72 quan sát tương tự lô đối chứng cho uống dung môi tween 80 10% (tt/tt) Tiếp tục theo dõi ngày, kết cho thấy khơng có chuột chết, chuột khơng có dấu hiệu bất thường hành vi, trạng thái lơng, ăn uống, tình trạng tiêu tiểu Chuột đực gây viêm cách tiêm da vào gan bàn chân phải sau 0,025 ml hỗn dịch carrageenan 1% Đo thể tích chân chuột trước sau gây viêm thiết bị plethysmometer Model 7140, Ugo Basile, Ý Các chuột có độ phù từ 50% trở lên chia vào lô (n = 10) cho khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05) độ phù lô: lô chứng bệnh uống nước cất; lô dung môi: uống tween 80 1% (tt/tt); lô đối chứng uống diclofenac 10 mg/kg; lô thử lô thử uống cao Dâm bụt liều 100 200 mg/kg Chuột cho uống nước cất, dung môi, diclofenac cao thử lần (sau phân lơ) với thể tích 10 ml/kg Đo thể tích chân chuột sau cho uống 1, (Vt), tính mức độ phù bàn chân chuột X (%) thời điểm KẾT QUẢ Độc tính cấp đường uống cao Dâm bụt Như vậy, cao chiết Dâm bụt khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống qua kim (Dmax) 32 g cao/kg (tương ứng với 94,8 g bột Dâm bụt khơ/kg) Tác động phòng viêm cấp Đề tài chọn liều thử tác động phòng điều trị viêm cao chiết Dâm bụt 100 200 mg/kg tương ứng 1/320 1/160 Dmax Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian Xử lý kết phân tích thống kê lơ chuột trình bày Bảng Kết trình bày dạng giá trị trung bình ± SEM (standard error of mean - sai Bảng Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lô Lô (n = 10) Sinh lý Chứng bệnh Dung môi Diclofenac mg/kg Cao Dâm bụt 100 mg/kg Cao Dâm bụt 200 mg/kg Độ phù trung bình ± SEM (%) V1h V3h V5h V24h V48h V72h V96h 1,74 ± 1,16 2,65 ± 1,35 4,55 ± 1,52 2,65 ± 1,35 2,65 ± 1,35 2,65 ± 1,35 2,65 ± 1,35 81,46 ± 78,64 ± 73,43 ± 68,32 ± 55,80 ± 46,00 ± 31,96 ± *** *** *** *** *** *** *** 5,85 5,02 5,94 7,25 6,45 6,84 4,93 96,55 ± 88,74 ± 86,82 ± 78,30 ± 78,24 ± 62,95 ± 47,14 ± *** *** *** *** *** *** *** 6,55 4,70 4,49 8,80 10,20 7,76 6,09 59,85 ± 42,82 ± 40,09 ± 40,09 ± 29,45 ± 23,32 ± 15,42 ± ***# ***## ***## ***# ***## ***## ***# 7,82 5,58 4,38 5,50 3,83 3,61 3,47 73,80 ± 64,65 ± 60,50 ± 58,23 ± 47,32 ± 38,76 ± 29,05 ± *** ***#$ ***##$ ***$ *** ***# *** 7,42 6,14 5,91 8,13 8,94 8,62 6,24 60,98 ± 53,26 ± 46,59 ± 48,03 ± 36,59 ± 26,97 ± 12,95 ± ***## ***## ***## ***## ***## ***## ***@### 6,69 6,50 6,28 4,05 6,14 4,48 2,28 *** p < 0,001: so với lô sinh lý thời điểm; # p < 0,01, ##p < 0,01 ###p < 0,001: so với lô chứng bệnh (diclofenac) dung môi (cao thử) thời điểm $ p < 0,05: so với lô diclofenac thời điểm; @p < 0,05: so với lô cao liều 100 mg/kg thời điểm 80 V120h 2,65 ± 1,35 27,40 ± *** 4,31 38,48 ± *** 5,61 9,12 ± ***## 3,05 21,09 ± ***# 5,34 10,53 ± ***### 1,78 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Chuột cho uống tween 80 tỷ lệ 1% (tt/tt) nước cất có độ phù cao lô chứng bệnh khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê tất thời điểm khảo sát (p > 0,05) Như vậy, tween 80 1% (tt/tt) sử dụng để pha cao thử không ảnh hưởng đến độ phù kết lô dung môi dùng so sánh, đánh giá tác động kháng viêm cao thử Lô đối chứng diclofenac liều mg/kg làm giảm độ phù bàn chân chuột so với lô chứng bệnh Sự khác biệt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) sau gây viêm Lô cao Dâm bụt liều 100 mg/kg 200 mg/kg có tác động giảm độ phù bàn chân chuột so với lô chứng bệnh thời điểm khảo sát (p < 0,05), trừ thời điểm sau 96 cho uống cao liều 100 mg/kg (Bảng 1) Liều 200 mg/kg có tác dụng tốt liều 100 mg/kg măc dù khác biệt Nghiên cứu Y học độ phù thời điểm lơ khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) So với lô đối chứng diclofenac mg/kg, chuột cho uống cao Dâm bụt liều 200 mg/kg có độ phù khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê thời điểm khảo sát (p > 0,05) Lô uống liều 100 mg/kg có độ phù cao lơ diclofenac có ý nghĩa sau 3, 24 (p < 0,05); thời điểm lại, khác biệt lơ khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Tác dụng điều trị viêm cấp Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lơ chuột trình bày Bảng Lô đối chứng diclofenac 10 mg/kg làm giảm độ phù bàn chân chuột rõ rệt so với lô chứng bệnh thời điểm khảo sát (p < 0,001) Bảng Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lô Lô (n = 10) Chứng bệnh Dung môi Diclofenac 10 mg/kg Cao Dâm bụt 100 mg/kg Cao Dâm bụt 200 mg/kg V0h 65,85 ± 6,19 65,11 ± 3,91 64,92 ± 3,35 64,64 ± 2,91 63,60 ± 2,73 Độ phù trung bình ± SEM (%) V1h V3h 72,97 ± 5,16 69,95 ± 2,87 61,89 ± 6,78 64,00 ± 5,48 *** *** 39,52 ± 3,37 30,68 ± 2,95 **# 49,55 ± 3,15 40,49 ± 3,15 # *# 51,19 ± 3,33 45,18 ± 4,18 V5h 58,20 ± 3,56 49,78 ± 4,36 *** 26,86 ± 3,31 ** 30,34 ± 3,27 37,16 ± 5,11 ** p < 0,01 ***p < 0,001: so với lô chứng bệnh (diclofenac) lô dung môi (cao thử) thời điểm # p < 0,05: so với lô diclofenac thời điểm Lô cao Dâm bụt liều 100 mg/kg 200 mg/kg thể tác động điều trị viêm cấp mô hình chuột nhắt trắng thơng qua làm giảm độ phù lơ liều 100 mg/kg có ý nghĩa thơng kê sau (p < 0,05) lô liều 200 mg/kg sau (p < 0,05) Ở thời điểm lại, độ phù lơ uống cao giảm từ khoảng 12,5% đến 25% khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) So với diclofenac liều 10 mg/kg, chuột cho uống cao thử có độ phù cao lơ có ý nghĩa thống kê sau 1, (p < 0,05) khơng có ý nghĩa sau (p > 0,05) So sánh liều 100 mg/kg liều 200 mg/kg, cao Dâm bụt thể tác động kháng viêm tương đương thời điểm khảo sát (p < 0,05) Như vậy, cao ethanol 96% từ Dâm bụt thể tác động điều trị viêm liều 100 mg/kg 200 mg/kg sau Tác động chậm yếu so với thuốc đối chứng diclofenac 10 mg/kg BÀN LUẬN Dâm bụt sử dụng dân gian với nhiều công dụng trị viêm niêm mạc dày, mụn nhọt, lở ngứa, sưng tấy Lá tươi giã nhỏ trộn với muối đắp lên vết thương mưng mủ chóng lành(3) Nhằm góp phần giải thích cơng dụng dân gian Dâm bụt sở khoa học, nhóm nghiên cứu khảo sát độc tính cấp đường uống tác dụng kháng viêm cao chiết Dâm bụt (Hibiscus rosasinensis L.) chuột nhắt 81 Nghiên cứu Y học Cao chiết Dâm bụt độc tính cấp với Dmax 32 g cao/kg tương đương 94,8 g bột dược liệu khô/kg Kết phù hợp với nghiên cứu tính an tồn cao chiết Dâm bụt động vật thí nghiệm(4,5) Tác động kháng viêm cao ethanol 96% từ Dâm bụt phù hợp với báo cáo trước Zubia cộng (2015)(1) Tác dụng liên quan đến thành phần flavonoid có Dâm bụt Theo báo cáo phân tích hóa học Dâm bụt, chứa nhiều thành phần flavonoid nhóm chất khác tannin, terpenoid, saponin, acid hữu cơ…(4,8) Kết đề tài làm tiền đề cho nghiên cứu hóa học với định hướng tìm chất có tác dụng kháng viêm Dâm bụt KẾT LUẬN Cao ethanol 96% từ Dâm bụt khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa Dmax 32 g/kg (tương ứng với 94,8 g bột Dâm bụt khô/kg) Cao chiết liều 100 mg/kg 200 mg/kg thể tác dụng điều trị viêm dự phòng viêm cấp chuột nhắt TÀI LIỆU THAM KHẢO Begum Z, Younus I, Ali SM (2015) “Anti-inflammatory, analgesic and anti-pyretic activities of Hibiscus rosa sinensis Linn 82 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 and phytochemicals” World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences; 4(12): 116 – 123 Bộ Y tế (2015) Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu Ban hành theo định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27/10/2015, tr 13-17 Đỗ Huy Bích cộng (2006) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam - tập NXB Khoa học kỹ thuật, tr 603- 604 Kandhare AD et al (2012) “Effect of hydroalcoholic extract of Hibiscus rosa sinensis Linn leaves in experimental colitis rats” Asian Pac J Trop Biomed; 2(5): 337 – 344 Nath P, Yadav AK (2015) “Acute and sub-acute oral toxicity assessment of the methanolic extract from leaves of Hibiscus rosasinensis L in mice” Journal of Intercultural Ethnopharmacology; 4(1): pp 70 – 73 Nwibo DD et al (2016) “Effects of Hibiscus rosa-sinensis leaf products on haematological indices, lipid profile and hepatic parameters of hyperlipidemic rat” African Journal of Pharmacy and Pharmacology; 10(12): 223 – 229 Patel M, Murugananthan G, Gowda KPS (2012) “In vivo animal models in preclinical evaluation of anti-inflammatory activity-A review” Int J Pharm Res Allied Sci; 1(2): 1-5 Rauan SZ et al (2013) “Anti-inflammatory effects of Hibiscus rosa sinensis L and Hibiscus rosa sinensis Var Alba ethanol extracts” International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences; 5(4): 754 – 762 Sachdewa A, Nigam R, Khemani LD (2003) “Effect of Hibiscus rosa sinensis Linn ethanol flower extract on blood glucose and lipid profile in streptozotocin induced diabetes in rats” Journal of Ethnopharmacology; 89(1): 61 – 66 Ngày nhận báo: 25/04/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/06/2018 Ngày báo đăng: 20/09/2018 ... dụng dân gian Dâm bụt sở khoa học, nhóm nghiên cứu khảo sát độc tính cấp đường uống tác dụng kháng viêm cao chiết Dâm bụt (Hibiscus rosasinensis L.) chuột nhắt 81 Nghiên cứu Y học Cao chiết Dâm. .. độ phù bàn chân chuột X (%) thời điểm KẾT QUẢ Độc tính cấp đường uống cao Dâm bụt Như vậy, cao chiết Dâm bụt độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống qua kim (Dmax) 32 g cao/ kg (tương ứng... hướng tìm chất có tác dụng kháng viêm Dâm bụt KẾT LUẬN Cao ethanol 96% từ Dâm bụt độc tính cấp đường uống với liều tối đa Dmax 32 g/kg (tương ứng với 94,8 g bột Dâm bụt khô/kg) Cao chiết liều 100