Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm khảo sát độc tính bán trường diễn và tác dụng kháng viêm, giảm đau của cao phối hợp thiên niên kiện và bách bệnh trên thực nghiệm. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN VÀ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA CAO PHỐI HỢP THIÊN NIÊN KIỆN VÀ BÁCH BỆNH TRÊN THỰC NGHIỆM Phan Phước Hiền*, Nguyễn Thị Thu Hương**, Lê Thị Mỹ Thảo**, Dương Thị Mộng Ngọc** TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Thiên niên kiện (Homalomena occulta) thường sử dụng riêng lẻ kết hợp với dược liệu khác để giảm triệu chứng đau nhức giúp tăng cường thể lực Cây Bách bệnh (Erycoma longifolia) sử dụng với tác dụng chống oxy hóa, tăng cường thể lực sức khỏe tình dục cho nam giới Với mục đích ứng dụng hai thuốc việc bảo vệ sức khỏe nâng cao chất lượng sống cho đối tượng người cao tuổi, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Khảo sát độc tính bán trường diễn tác dụng kháng viêm, giảm đau cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh chuột nhắt trắng” Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát in vitro hoạt tính ức chế peroxid hóa lipid cao phối hợp thực thực nghiệm malonyl dialdehyd não chuột Khảo sát in vivo gồm khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn đường uống, khảo sát tác dụng kháng viêm cấp cao phối hợp chuột nhắt trắng thực nghiệm carragenin khảo sát tác dụng giảm đau thực nghiệm gây đau xoắn bụng acid acetic Kết quả: Cao phối hợp Thiên niên kiện-Bách bệnh thể hoạt tính ức chế peroxid hóa lipid với IC50 751,5 µg/ml Cao phối hợp độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng với liều LD0 = 21,5g cao/kg thể trọng chuột Cao phối hợp liều 2,15 g/kg (liều tương đương 1/10 LD0) sau tháng uống khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng Các thông số huyết học, số sinh hóa thuộc chức gan - thận nằm giới hạn bình thường Cao phối hợp hai liều uống 1,075 g/kg 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau Tác dụng kháng viêm cao phối hợp tăng theo thời gian sử dụng thuốc đạt tối đa thời điểm 72 kháng viêm Kết luận: Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh định hướng nghiên cứu thành dạng chế phẩm phù hợp (viên nang rượu thuốc) hỗ trợ điều trị loại bệnh mạn tính người cao tuổi đau nhức xương khớp tăng cường thể trạng tổng quát Từ khóa: Thiên niên kiện, Bách bệnh, hoạt tính ức chế peroxid hóa lipid, độc tính bán trường diễn, tác dụng kháng viêm, tác dụng giảm đau ABSTRACT STUDY ON SUBCHRONIC TOXICITY, ANTI-INFLAMMATORY AND ANALGESIC EFFECTS OF COMBINED EXTRACT OF HOMALOMENA OCCULTA AND EURYCOMA LONGIFOLIA ON EXPERIMENTATION Phan Phuoc Hien, Nguyen Thi Thu Huong, Le Thi My Thao, Duong Thi Mong Ngoc * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No – 2014: 156 - 163 Aim of study: Homalomena occulta rhizome has been used in traditional medicine as single or combined form of herb with tonic and analgesic purposes Erycoma longifolia root was used as antioxidants, tonic and androgenic drug The present study was conducted in the aim of evaluating the acute and subchronic toxicity, the anti-inflammatory and analgesic effects of the combined extract of Homalomena occulta and Erycoma longifolia ∗ Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh ∗∗ Trung Tâm Sâm Dược liệu Tp Hồ Chí Minh-Viện Dược liệu Tác giả liên lạc: PGS.TS Phan Phước Hiền ĐT: 0945734433 156 Email: pphien@gmail.com Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học Materials and Methods: Anti-lipid peroxidation activity of the combined extract was determined by malonyl dialdehyde test using mouse brain as substrate Oral acute toxicity test and subchronic toxicity test were carried out to evaluate the safety of the combined extract Carrageenan-induced acute inflammatory model and acetic acid-induced abdominal pain in mice were performed to determine anti-inflammatory and analgesic effects of the combined extract Results: The combined extract showed anti-lipid peroxidation activity with IC50 of 751.5 µg/ml The combined extract had oral acute toxicity at the infralethal dose of 21.5 g/kg mouse body weight After 2-month treatment of the combined extract at the dose of 2.15 g/kg (equal to 1/10 of infralethal dose), there were no abnormal changes in hematological and biochemical parameters, indicating that the combined extract did not show subchronic toxicity The combined extract at doses of 1.075 g/kg and 2.15 g/kg mouse body weight had antiinflammatory and analgesic effects The anti-inflammatory effect of the combined extract was time-dependent and reached the highest effect after 72 hrs of treatment Conclusion: The results of this study (combined extract of Homalomena occulta and Erycoma longifolia) might be useful for further study on natural drugs used in supporting the treatment of chronic conditions of elderly people as osteoarthritis and enhancing physical strength Keywords: Homalomena occulta, Erycoma longifolia, anti-lipid peroxidation activity, subchronic toxicity, anti-inflammatory effect, analgesic effect sức khỏe nâng cao chất lượng sống cho ĐẶT VẤN ĐỀ đối tượng người cao tuổi, tiến hành Đau nhức xương khớp dần trẻ hóa thấy nghiên cứu đề tài: “Khảo sát độc tính bán trường rõ người làm việc văn phòng diễn tác dụng kháng viêm, giảm đau công lao động khuân vác nặng nhọc, gây khó chịu, thức phối hợp dược liệu Thiên niên kiện Bách mệt mỏi đau đớn kéo dài Người bệnh chuột nhắt trắng” phải ngồi chỗ, tự thực ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU sinh hoạt hàng ngày phát sinh bệnh khác Bệnh đau nhức xương khớp nhiều ảnh Đối tượng nghiên cứu hưởng nhiều đến chất lượng sống, hiệu Cao phối hợp phối chế từ cao chiết công việc gây tổn thất kinh tế cho người bệnh Thiên niên kiện (65,45%) cao chiết Bách bệnh xã hội Việc lạm dụng thuốc giảm đau, đặc (34,55%) Cao tiêu chuẩn hóa theo quy biệt chế phẩm có corticoid, khiến cho bệnh định Dược điển Việt Nam IV tiêu chuẩn nhân có nhiều tai biến (tổn thương sở Độ ẩm cao Thiên niên kiện 17,8%, dày, tá tràng, tăng huyết áp, đái tháo đường, hàm lượng flavonoid tồn phần cao Thiên lỗng xương, nhiễm khuẩn, suy thượng thận ) niên kiện là: 1,49%, hàm lượng coumarin tồn Theo xu hướng người hạn phần cao Thiên niên kiện là: 6,71% Độ ẩm chế sử dụng thuốc nhóm thay cao Bách bệnh 16,42%, hàm lượng alkaloid loại thảo dược có nguồn gốc từ thiên toàn phần cao Bách bệnh là: 0,75%, hàm nhiên Trong dân gian người dân thường sử lượng coumarin toàn phần cao Bách bệnh dụng Thiên niên kiện (Homalomena occulta) riêng là: 22,85% lẻ kết hợp Thiên niên kiện với loại thuốc Động vật thử nghiệm để giảm triệu chứng đau nhức giúp tăng Chuột nhắt trắng đực (chủng Swiss albino, 5-6 cường thể lực (7) Cây Bách bệnh (Erycoma tuần tuổi, trọng lượng trung bình 25 g ± g) longifolia) sử dụng với tác dụng tăng cường cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y sức khỏe tình dục cho nam giới (1,7) Với mục đích tế Nha Trang, nuôi điều kiện ổn định ứng dụng hai thuốc việc bảo vệ Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 157 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học chế độ dinh dưỡng Hóa chất-Thuốc đối chiếu Carragenin (Sigma-Aldrich, USA), Trolox (Calbiochem Ltd Co.), Aspirin pH8 (viên bao phim, chứa acid acetylsalicylic 500 mg, Mekophar), Celebrex® (viên nang chứa celexcocib 200 mg, Pfizer) Các kit định lượng protein toàn phần, triglyceride, urea, creatinin, GOT, GPT cung cấp hãng Human, Đức Phương pháp nghiên cứu Phương pháp xác định sản phẩm q trình peroxy hố lipid (2) 0,1 ml mẫu thử nồng độ thử nghiệm cho phản ứng với 0,5 ml dịch đồng thể não thêm đệm phosphat 50 mM vừa đủ ml Ủ hỗn hợp phản ứng 37oC 15 phút dừng phản ứng ml acid tricloacetic 10% Sau ly tâm lấy dịch cho phản ứng với 1ml acid thiobarbituric 0,8% 15 phút nhiệt độ 100oC Làm lạnh tiến hành đo quang bước sóng λ = 532 nm Trolox, đồng phân vitamin E sử dụng làm chất đối chiếu Cơng thức tính % hoạt tính chống oxy hóa (HTCO):HTCO% = [(ODC – ODT) / ODC] x 100 Trong đó, ODC: Mật độ quang chứng dung môi ODT: Mật độ quang mẫu thử Thử nghiệm độc tính cấp (3, 6) Chuột nhắt chia thành lô tương tự, chuột lô nhận liều chất khảo sát Sự đánh giá dựa vào phản ứng toàn ứng hay bất ứng (sống hay chết) nhận thấy chuột nhóm sau 72 Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống để ghi nhận triệu chứng bất thường (nếu có) Khảo sát độc tính bán trường diễn(6) %V= Thời gian thử nghiệm độc tính bán trường diễn thực chuột nhắt trắng hai tháng Chuột chia thành lô chứng (uống nước cất) lô thử (uống cao phối hợp), lô 12 Các tiêu quan sát sau tháng tháng: - Huyết học: Số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, tiểu cầu, tỷ lệ thể tích huyết cầu máu (hematocrit), hemoglobin - Thơng số thuộc chức gan: Men gan transaminase GOT GPT - Thông số thuộc chức thận: Creatinin, urea - Các thông số khác: Triglycerid, protein - Giải phẫu đại thể-vi thể quan: Tim, gan, thận: tiến hành sau kết thúc thí nghiệm Thực nghiệm gây phù chân chuột carragenin-Khảo sát tác dụng kháng viêm cấp(6, 8) Chuột chia thành lô với số lượng 10 chuột cho uống nước cất (lô chứng) thuốc thử nghiệm (lô thử, lô thuốc đối chiếu celecoxib) 30 phút trước tiêm carragenin 1% (50 µl) vào gang bàn chân phải chuột Do khác biệt có ý nghĩa thống kê thể tích chân chuột phải trái nên đề tài chọn chân trái (không tiêm carrageenin) làm lô đối chứng Mẫu thử nghiệm tiếp tục cho uống ngày liên tục ngày sau tiêm carragenin trước đo thể tích chân chuột Để đánh giá mức độ viêm, đo thể tích chân chuột thiết bị đo thể tích chân chuột (Plethysmometer UgoBasile, Italy) vào thời điểm sau tiêm carragenin giờ, 24 giờ, 48 72 Tiến hành đo lần lấy trị số trung bình Độ sưng phù chân chuột biểu thị mức độ viêm tính theo cơng thức: Số đo thể tích chân phải – số đo thể tích chân trái x 100 Số đo thể tích chân trái Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lô chứng tính theo cơng thức: 158 Chun Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học % ức chế = (X – Y)/X *100 X: mức độ viêm chân chuột lô chứng Y: mức độ viêm chân chuột lô đối chiếu, lơ thử nghiệm hoạt tính cao phối hợp Thiên niên kiện Thực nghiệm gây đau xoắn bụng acid Bách bệnh thấp acetic để khảo sát tác dụng giảm đau (6) Chuột cho uống nước cất (lô chứng) cao thử nghiệm (lô thử) hàng ngày ngày 60 phút trước tiêm phúc mô acid acetic 0,6% vào ngày Sau 10 phút, ghi nhận số lần xoắn bụng đau súc vật thử thời gian 10 phút gồm giai đoạn: - 10 phút, 11 - 20 phút, 21 - 30 phút tổng số lần xoắn bụng 30 phút Thuốc đối chiếu Aspirin pH8 cho uống liều 200 mg/kg, 60 phút trước tiêm phúc mô acid acetic Phương pháp xử lý thống kê số liệu thực nghiệm Số liệu thực nghiệm thể số trung bình (M) ± sai số chuẩn giá trị trung bình (SEM) Xử lý số liệu phần mềm MS Excel 2007, xử lý thống kê dựa vào phép kiểm One– Way ANOVA Student-Newman-Keuls test (phần mềm Jandel Scientific SigmaStat-98) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% P < 0,05 so với lô chứng tương ứng KẾT QUẢ Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa in vitro thực nghiệm MDA Bảng 1: Hoạt tính chống oxy hóa cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh Mẫu Chứng Nồng độ (µg/ml) 2000 1000 500 Cao phối hợp 250 125 62,5 OD1 0,421 0,099 0,167 0,312 0,347 0,412 0,457 OD2 0,557 0,107 0,208 0,303 0,341 0,399 0,413 ODtb HTCO(%) 0,4890 0,1030 78,94 0,1875 61,66 0,3075 37,12 0,3440 29,65 0,4055 17,08 0,4350 11,04 Từ bảng kết 1, thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính y = 0,0513x + 11.448 xác định IC50 cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh 751,5 µg/ml Tuy nhiên, so sánh với chứng dương Trolox (IC50 562,7 µg/ml), Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Kết khảo sát độc tính cấp đường uống Cao phối hợp Thiên niên kiện – Bách bệnh độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng Sau uống cao phối hợp liều 25 g/kg (liều cao bơm qua kim) chuột có biểu gãi mõm liên tục, hoạt động chậm, lơng xù, khó thở khoảng – Sau - 24 thấy xuất chuột chết (tỉ lệ chuột chết 60 %) Sau 72 cho uống, số chuột sống sót ăn uống sinh hoạt bình thường Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống không ghi nhận triệu chứng bất thường Liều liều chết LD0 cao phối hợp xác định 21,5g cao/kg thể trọng chuột Liều tương đối an tồn Ds chuột nhắt trắng lấy giá trị 1/5-1/10 LD0 Liều tương đối an toàn người ngoại suy từ liều chuột nhắt trắng sau: Liều chuột nhắt trắng x 0,085 (= hệ số ngoại suy liều có hiệu tương đương chuột nhắt trắng người) x thể trọng trung bình người trưởng thành (# 50 kg) Do đó, liều thử nghiệm chọn cho thử nghiệm tiếp theo: 1/10 LD0 = 2,15 g/kg 1/20 = 1,075 g/kg LD0 Kết khảo sát độc tính bán trường diễn Chuột thử nghiệm chuột đực tuần tuổi, giai đoạn tăng trưởng phát triển để chuyển sang giai đoạn trưởng thành (5,4) nên thông số hồng cầu, hemoglobin, hematocrit, protein, creatinin lô chứng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 g/kg sau tháng, tháng tăng so với trước thử nghiệm Các thông số trở nên ổn định sau tháng sau tháng (Bảng 2) Lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 g/kg có tác dụng làm tăng hồng cầu so với lơ chứng sau tháng Có thể giải thích 159 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 cao thuốc làm tăng khả hấp thu chất dinh dưỡng chuột thử nghiệm, gián tiếp làm tăng tốc độ trưởng thành hồng cầu dẫn đến tăng số lượng hồng cầu so với lô chứng(4) Số lượng tiểu cầu, bạch cầu lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 g/kg mức bình thường Hàm lượng GOT, GPT, protein, triglycerid creatinin lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 g/kg khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Hàm lượng urea uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 g/kg giảm so với lô chứng sau tháng Lượng urea thấp q trình khử acid amin thể chuột uống cao thuốc thấp lô chứng Kết giải phẫu đại thể-vi thể quan tim, gan, thận khơng có khác biệt lô uống cao phối hợp lô chứng uống nước cất Như vậy, cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 2,15 g/kg (liều tương đương 1/10 LD0) sau tháng uống khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng Các thông số huyết học, số sinh hóa thuộc chức gan - thận nằm giới hạn bình thường(5) Bảng 2: Kết khảo sát độc tính bán trường diễn cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh Chỉ tiêu khảo sát Hồng cầu (triệu tế bào/µl) Hemoglobin (g/dl) Hematocrit(%) Tiểu cầu 10 tế bào/µl) Bạch cầu (tế bào/µl) GOT (IU/l) GPT (IU/l) Protein toàn phần (g/l) Triglycerid (mg/dl) Creatinin (mg/dl) Urea (mg/dl) Thể trọng (g) Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Trước thử nghiệm 5,10 ± 0,19 5,17 ± 0,14 7,59 ± 0,75 7,40 ± 0,10 27,90 ± 0,76 28,65 ± 0,67 533,9 ± 41,4 535,0 ± 30,7 5050 ± 456,1 5500 ± 258,2 48,6 ± 5,2 45,1 ± 0,9 45,9 ± 3,4 45,8 ± 1,6 4,94 ± 0,14 4,55 ± 0,16 113,8 ± 10,3 107,7 ± 10,4 0,50 ± 0,03 0,50 ± 0,04 52,46 ± 3,32 51,34 ± 1,47 24,10 ± 0,23 25,30 ± 0,33 Sau tháng a 6,64 ± 0,42 ab 8,43 ± 0,20 a 11,12 ± 0,65 ab 13,35 ± 0,37 a 34,70 ± 1,72 ab 43,20 ± 1,37 513,1 ± 40,8 a 417,0 ± 21,0 5800 ± 366,7 5150 ± 428,5 40,1 ± 2,0 41,8 ± 1,8 47,6 ± 2,3 47,0 ± 2,5 5,16 ± 0,19 a 5,26 ± 0,12 113,5 ± 4,8 119,6 ± 4,6 a 0,77 ± 0,06 a 0,70 ± 0,04 50,51 ± 2,29 47,99 ± 3,83 30,90 ± 1,93 29,20 ± 1,16 Sau tháng a 6,23 ± 0,22 a 6,39 ± 0,24 a 11,37 ± 0,71 a 10,75 ± 0,31 29,65 ± 1,46 31,10 ± 1,01 472,0 ± 62,1 418,0 ± 56,8 4900 ± 541,6 4850 ± 494,7 38,1 ± 3,5 a 36,6 ± 2,8 44,0 ± 3,3 43,0 ± 2,7 5,06 ± 0,19 a 5,28 ± 0,14 121,0 ± 8,9 121,6 ± 6,2 a 0,71 ± 0,04 a 0,81 ± 0,03 51,72 ± 1,34 ab 44,27 ± 3,01 35,80 ± 1,76 34,30 ± 1,78 a: P < 0,05 so với trước thử nghiệm; b: P < 0,05 so với lô chứng chân chuột tăng tối đa sau tiêm Kết khảo sát tác dụng kháng viêm carragenin (đạt 119,9 %) giảm dần sau 24 Carragenin (viscarin) chất giờ, 48 72 sau tiêm sulfopolygalactocid, chiết xuất từ Chondrus Mức độ viêm chân chuột sau tiêm crispus, có tác dụng gây viêm cấp Mức độ carragenin: Mức độ viêm chân chuột lô viêm tối đa khoảng thời gian 3-4 (6) uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh Kết thực nghiệm cho thấy độ sưng phù 160 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 liều 1,075 g/kg, liều 2,15 g/kg, lô đối chiếu uống Celebrex® (celexcocib liều 25 mg/kg) giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng (Bảng 3) Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg có tác dụng kháng viêm cấp sau gây phù chân chuột carragenin Mức độ giảm viêm lô uống cao thử nghiệm giảm từ 22 - 27% so với lô chứng uống nước cất (Bảng 4) Mức độ viêm chân chuột sau 24 tiêm carragenin: Mức độ viêm chân chuột lơ uống Celebrex® giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Mức độ viêm chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg khơng có tác dụng kháng viêm sau 24 gây phù chân chuột carragenin Mức độ viêm chân chuột sau 48 tiêm carragenin: Mức độ viêm chân chuột lơ uống Celebrex® giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Mức độ viêm chân chuột lô uống cao Nghiên cứu Y học phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg giảm so với lô chứng chưa đạt ý nghĩa thống kê Như cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg khơng có tác dụng kháng viêm sau 48 gây phù chân chuột carragenin Mức độ viêm chân chuột sau 72 tiêm carragenin: Mức độ viêm chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg, liều 2,15 g/kg, lơ đối chiếu uống Celebrex® giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg có tác dụng kháng viêm sau 72 gây phù chân chuột carragenin Mức độ giảm viêm lô uống cao thử nghiệm giảm từ 39-40% so với lô chứng uống nước cất Thuốc đối chiếu Celebrex® liều uống 25 mg/kg thời điểm khảo sát thể tác dụng kháng viêm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Tác dụng kháng viêm tăng theo thời gian sử dụng thuốc đạt tối đa thời điểm 72 (giảm viêm 65,88%) Bảng 3: Mức độ viêm chân chuột lô thử nghiệm Lô thử nghiệm N = 12 Chứng 1,075 g/kg 2,15 g/kg Celebrex 25 mg/kg Cao phối hợp Sau 119,94 ± 8,12 87,22 ± 5,21* 93,11 ± 5,88* 71,67 ± 2,33* Mức độ giảm viêm chân chuột (%) Sau 24 Sau 48 72,47 ± 6,55 73,44 ± 4,73 65,93 ± 7,72 41,82 ± 2,32* 64,02 ± 4,80 60,71 ± 4,59 54,89 ± 8,66 29,47 ± 2,08* Sau 72 65,53 ± 7,69 39,73 ± 6,07* 40,90 ± 6,54* 22,36 ± 2,01* * P < 0,05 so với lô chứng thời điểm sau giờ, sau 24 giờ, sau 72 Bảng 4: Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lô chứng Mức độ giảm viêm chân chuột (%) Sau Sau 24 Sau 48 Sau 72 giờ giờ -1,34 5,17 39,37 Cao phối 1,075 g/kg 27,28 hợp 2,15 g/kg 22,37 9,02 14,27 37,59 Celebrex 25 mg/kg 40,25 42,29 53,97 65,88 Lô thử nghiệm N = 12 BÀN LUẬN Bàn luận tác dụng kháng viêm cấp Ở thời điểm sau gây viêm độ sưng phù chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền kiện - Bách bệnh giảm rõ rệt so với lô chứng (liều 1,075 g/kg giảm 32,72%, liều 2,15g/kg giảm 18,83 % so với lô chứng) Tuy nhiên thời điểm sau 24 sau 48 gây viêm độ sưng phù lơ uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh không khác biệt so với lơ chứng, điều có giảm đột ngột mức độ viêm so với thời điểm sau tiêm carragenin nên cao phối hợp chưa thể rõ hoạt tính kháng viêm Sau 72 giờ, lô chuột uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh lại có tác dụng kháng viêm, chứng tỏ cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách 161 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 bệnh có tác dụng kháng viêm mạn tính Kết khảo sát tác dụng giảm đau Thời điểm từ đến phút thứ 10 Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 2,15 g/kg giảm chưa đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg có tác dụng giảm đau phút thứ – 10 sau gây đau xoắn bụng acid acetic Tác dụng giảm đau liều 1,075 g/kg tương đương với thuốc đối chiếu aspirin liều 200 mg/kg Thời điểm từ phút thứ 11 đến phút 20 Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075g/kg liều 2,15 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau phút thứ 11 – 20 sau gây đau xoắn bụng acid acetic Tác dụng giảm đau liều 1,075 g/kg tương đương với thuốc đối chiếu aspirin liều 200 mg/kg Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng với Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 g/kg giảm chưa đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng So sánh tổng số lần xoắn bụng 30 phút sau tiêm Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075g/kg liều 2,15 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng (Bảng 5) Bàn luận khảo sát tác dụng giảm đau cấp Cao thử nghiệm thể tác dụng giảm đau đạt ý nghĩa thống kê hai liều uống 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg Mức độ giảm đau 48,35% liều 1,075 g/kg 22,03% liều 2,15 g/kg so với lô chứng uống nước cất Tác dụng giảm đau cao thử nghiệm yếu thuốc đối chiếu aspirin (mức độ giảm đau 59,51%) Mức độ giảm đau xoắn bụng lô uống cao thử nghiệm liều 1,075g/kg điển hình liều 2,15g/kg ghi nhận chi tiết giai đoạn 10 phút 30 phút Lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có tác dụng giảm đau cấp 30 phút sau tiêm acid acetic chứng tỏ cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có tác dụng ức chế chất trung gian hóa học gây đau Thời điểm từ phút thứ 20 đến phút thứ 30 Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Bảng 5: Kết khảo sát tác dụng giảm đau cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh Lô thử nghiệm N = 12 Chứng 1,075 g/kg Cao phối hợp 2,15 g/kg Aspirin 200 mg/kg Số lần xoắn bụng 0-10 phút 11-20 phút 21-30 phút 24,50 ± 2,66 17,67 ± 1,15* 19,08 ± 2,58 16,42 ± 1,62* 20,25 ± 1,72 8,92 ± 1,32* 15,08 ± 1,54* 6,00 ± 1,23* 13,50 ± 1,51 4,20 ± 1,04* 11,25 ± 2,20 1,17 ± 0,41* Tổng số lần xoắn bụng % giảm đau so với chứng 30 phút 58,25 ± 2,76 30,08 ± 2,00* 45,42 ± 3,92* 23,58 ± 2,86* 48,35 22,03 59,51 * P < 0,05 so với lô chứng KẾT LUẬN Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có biểu độc tính cấp đường uống với liều LD0 2,15 g/kg Cao phối hợp Thiên niên kiện-Bách bệnh liều 2,15 g/kg (liều = 1/10 LD0) sau tháng uống làm tăng số lượng hồng cầu 162 khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng Cao phối hợp Thiên niên kiện-Bách bệnh hai liều uống 1,075 g/kg 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau, kháng viêm Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có hoạt tính ức chế q trình peroxy hóa lipid tế bào Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Đề tài thực với tài trợ kinh phí Sở Khoa học Công nghệ Tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu TÀI LIỆU THAM KHẢO Ang HH, Nga TH, Tan TH (2003) Effects of Eurycoma longifolia Jack on sexual qualities in middle-aged male rats Phytomedicine10 (6 - 7): pp 590 - 593 Cheseman K.H (1985) Studies on lipid peroxidation in normal and tumor tissues, J Biol Chem., pp 235, 507 – 514 Đỗ Trung Đàm (1996) Phương pháp xác xác định độc tính cấp thuốc Nhà xuất Y học Hà Nội, tr - 24 Nguyễn Đình Giậu, Nguyễn Chi Mai, Trần Thị Việt Hồng (2000) Sinh lý học người động vật Nhà xuất Đại Học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh, tr – 91, 187 – 188, 235 – 237 Suckow MA, Danneman P, Brayton C (2001) The laboratory mouse, CRC Press, pp 18 – 21 Viện Dược Liệu (2006) Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học lý thuốc từ thảo dược, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 57 – 63, 140 – 141, 171 - 183, 279 – 284, 295, 311 - 313, 355 - 367, 377 - 387 Viện Dược liệu (2007) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tập I, tập II, tr 116 – 118, 868 Winter CA, Risley EA, and Nuss GW (1962) Carrageenininduced edema in hind paw of the rat as an assay for antiiflammatory drugs Proc Soc Exp Biol Med.,111:pp 544 - 547 Ngày nhận báo: 3/10/2013 Ngày phản biện nhận xét báo: 02/10/2013, 14/10/2013 Ngày báo đăng: 02/01/2014 163 ... Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao phối hợp Chứng Cao. .. tính bán trường diễn chuột nhắt trắng Cao phối hợp Thiên niên kiện- Bách bệnh hai liều uống 1,075 g/kg 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau, kháng viêm Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có hoạt tính. .. lô thử nghiệm hoạt tính cao phối hợp Thiên niên kiện Thực nghiệm gây đau xoắn bụng acid Bách bệnh thấp acetic để khảo sát tác dụng giảm đau (6) Chuột cho uống nước cất (lô chứng) cao thử nghiệm