Nghiên cứu này nhằm đánh giá đặc tính thấm của captopril từ thuốc dán chứa captopril với 2 nồng độ 5% và 10% qua các loại da động vật bóc tách là chuột nhắt, chuột cống và thỏ làm cơ sở cho việc thử đặc tính thấm của captopril qua da người.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT TÍNH THẤM CỦA CAPTOPRIL TRONG THUỐC DÁN QUA DA CHUỘT NHẮT, DA CHUỘT CỐNG VÀ DA THỎ CƠ LẬP Nguyễn Cơng Phi*, Nguyễn Thiện Hải*, Lê Quan Nghiệm* TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu nhằm đánh giá đặc tính thấm captopril từ thuốc dán chứa captopril với nồng độ 5% 10% qua loại da động vật bóc tách chuột nhắt, chuột cống thỏ làm sở cho việc thử đặc tính thấm captopril qua da người Phương pháp: Bào chế thuốc dán cấu trúc dược chất tan dính (drug in adhesive) chứa 5% 10% captopril Đánh giá tính thấm captopril từ thuốc dán qua tế bào khuếch tán kiểu Franz, với màng khuếch tán da động vật bóc tách chuột nhắt, chuột cống thỏ Captopril định lượng phương pháp HPLC theo quy trình khảo sát Kết quả: Kết thực nghiệm thuốc dán chứa 10% captopril cho tốc độ thấm cao thuốc dán chứa 5% captopril Trong loại da động vật khảo sát da chuột nhắt cho tiềm thời (tlag) sớm 0,25 ± 0,11 tốc độ thấm cao (flux) 63,65 ± 2,68 µg/cm2/giờ gấp 2,12 lần so với da chuột cống gấp 1,67 lần so với da thỏ Kết luận: Kết thực nghiệm cho thấy captopril có tốc độ thấm cao tiềm thời sớm da chuột nhắt so với da chuột cống da thỏ, thuốc dán chứa 10% captopril có khả thấm tốt có khả chế tạo thuốc dán chứa captopril dùng điều trị bệnh cao huyết áp Từ khóa: tốc độ thấm, tế bào khuếch tán, captopril ABSTRACT INVESTIGATION OF SKIN PERMEATION FROM TRANSDERMAL PATCHES CONTAINING CAPTOPRIL THROUGH EXCISED MOUSE, RAT AND RABBIT SKIN Nguyen Cong Phi, Nguyen Thien Hai, Le Quan Nghiem * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 45 - 49 Objectives: The aim of the present study was to investigate the skin permeation of captopril from transdermal patches containing captopril through excised mouse, rat and rabbit skins Methods: The Drug in Adhesive Patches (DIA Patches) containing 5% and 10% captopril were prepared and evaluated the skin permeation of captopril through excised mouse, rat and rabbit skin by using Franz diffusion cells The amount of captopril permeated was determinated by the validated HPLC method Results: Among the various skins investigated, mouse skin showed the highest skin permeation with the flux 63.65 ± 2.68 µg/cm2/h This flux was approximately 2.12-fold and 1.67-fold higher than that of rat skin and rabbit skin respectively Keywords: flux, Franz diffusion cell, drug in adhesive patches, captopril lựa chọn hiệu điều trị bệnh cao huyết ĐẶT VẤN ĐỀ áp lâu dài đường uống Tuy nhiên nhược Captopril, thuốc ức chế men chuyển, điểm thuốc dùng nhiều lần * Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS Nguyễn Cơng Phi ĐT: 0908118685 Chuyên Đề Dược Học Email: ncphi@uphcm.edu.vn 45 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 ngày, hấp thu bị ảnh hưởng thức ăn (sinh khả dụng giảm 30-50%), thời gian bán thải ngắn (khoảng 2-3 giờ), bị chuyển hóa qua gan lần đầu, dẫn đến hiệu điều trị không ổn định Xác định tính thấm Captopril qua màng da thử nghiệm Hệ trị liệu qua da, cụ thể dạng thuốc dán hấp thu qua da (transdermal patch), với ưu điểm giúp giảm số lần dùng thuốc, giảm tác dụng phụ, tăng sinh khả dụng linh động sử dụng đảm bảo tuân thủ đỉều trị bệnh nhân, ngày chứng tỏ vai trò quan trọng lâm sàng Tuy nhiên vấn đề đặt việc bào chế sản xuất thuốc dán hấp thu dược chất qua da da hàng rào sinh học cản trở lớn đến thấm hấp thu chất Nghiên cứu tính thấm qua nhiều loại da đóng vai trò quan trọng, làm sở cho việc đánh giá cấu trúc, cỡ liều hiệu trị liệu chế phẩm thuốc dán Chuột nhắt trắng, giống Swiss albino có khối lượng trung bình 20 ± g nhanh nhẹn, khỏe mạnh, không bị bệnh da NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Nguyên liệu Dược chất: Captopril (Changzhou Pharmaceutical Factory, Trung Quốc); Methanol (Merck, Đức); Hóa chất: metyl sulfoxid, 3-metyl1-butanol, decanol, (Acros, Bỉ); Chất dính DuroTak D87-2287 (Henkel Co., Mỹ); Một số hóa chất: natri hydroxyd, acid phosphoric, natri clorid, dinatri hydrophosphat, kali clorid, kali dihydrophosphat (Merck, Đức) Quy trình bào chế thuốc dán Captopril Thành phần quy trình bào chế miếng thuốc dán nồng độ 5% captopril 10% captopril trình bày bảng hình Bảng 1: Thành phần thuốc dán captopril STT 46 Thành phần Thuốc dán Thuốc dán 10% 5% captopril captopril DuroTak 2287 35 g 35 g Captopril 1g 2,13 g Metyl sulfoxid 0,37 ml 0,39 ml 3-metyl-1-butanol 0,8 ml 0,85 ml Decanol 0,3 ml 0,31 ml Chuột cống trắng, giống Sprague-Dawley có khối lượng trung bình 230 ± 20 g nhanh nhẹn, khỏe mạnh, không bị bệnh da Thỏ (New Zealand) khối lượng trung bình 2,3 ± 0,2 kg, nhanh nhẹn, khỏe mạnh, không bị bệnh da Thỏ chuột giết ete Cạo lông phần lưng không làm tổn hại lớp sừng Cắt rời phần da lưng diện tích x cm, loại bỏ lớp mỡ máu da Bảo quản miếng da 20 oC, không ngày trước sử dụng Phương pháp tiến hành thử nghiệm tính thấm tế bào khuếch tán kiểu Franz (Perme Gear, Mỹ) Khoang cho chứa miếng thuốc dán với hàm lượng 5% 10% captopril, diện tích bề mặt khuếch tán 3,14 cm2, thể tích khoang nhận 15,5 ml chứa dung dịch đệm phosphat pH 7,4 bảo ôn 37 ± 0,5 oC (bơm tuần hoàn gia nhiệt Vision scientific, VS 1901W, Hàn Quốc) khuấy trộn với tốc độ 600 vòng/phút (2mag, MIX 6, Anh) Mẫu lấy 24 thời điểm 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 24 với thể tích mẫu 200 µl Bù lại 200 µl dung dịch đệm phosphat đẳng trương pH 7,4 Xác định hàm lượng captopril phương pháp HPLC Xác định tốc độ thấm Captopril Từ số liệu hàm lượng captopril thấm qua da chuột thời điểm lấy mẫu, tốc độ thấm Captopril qua da chuột tính theo công thức J S = dm A dt SS Với Js (flux): tốc độ thấm qua da Captopril (µg/cm2/giờ); A: diện tích bề mặt khuếch tán da (cm2); (dm/dt)ss: lượng Captopril thấm qua da theo thời gian (µg/giờ) Tốc độ thấm hoạt chất Js ngoại suy từ đồ thị giá trị slope phương trình đường Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 thẳng tuyến tính biểu cho tốc độ thấm định theo thời gian Nghiên cứu Y học Tiềm thời (lag time) suy từ đồ thị giao điểm đường thẳng tuyến tính với trục hồnh Captopril 3-metyl-1-butanol, metyl sulfoxid, decanol Phối trộn Hòa tan Hỗn hợp Phối trộn Duro Tak 87-2287 Loại bọt khí Hỗn hợp Lớp lưng mang thuốc Cán trải với độ dày 400 mcm Trải phủ thêm lớp Thuốc dán Cắt Đóng gói Sản phẩm Hình 1: Quy trình bào chế thuốc dán captopril độ dòng: ml/phút Bước sóng phát 215 Định lượng Captopril HPLC nm Thể tích tiêm mẫu 100 µl Nhiệt độ 25 oC Hệ thống HPLC (Knauer, pump 1000, UV Xử lý thống kê detector 2500, autosampler 3800, Đức) Cột Luna C18 (250 x 4,6 mm, µm, Phenomenex, Mỹ) Pha Các thí nghiệm tiến hành lần Kết động gồm methanol đệm phosphate 0,07M trình bày giá trị TB ± SD (50: 50) chỉnh pH H3PO4 NaOH Tốc KẾT QUẢ Tính thấm Captopril qua da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ Bảng 2: Kết khảo sát lượng Captopril từ miếng thuốc dán thấm qua màng da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ bóc tách (n=3) Giờ Lượng captopril miếng thuốc dán chứa 5% captopril thấm qua màng da (µg/cm ) Chuột nhắt Chuột cống Thỏ 0 46,62 4,29 30,28 128,26 5,27 55,43 Chuyên Đề Dược Học Lượng captopril miếng thuốc dán chứa 10% captopril thấm qua màng da (µg/cm ) Chuột nhắt Chuột cống Thỏ 0 64,35 4,35 26,94 191,85 7,33 61,05 47 Nghiên cứu Y học Giờ Lượng captopril miếng thuốc dán chứa 5% captopril thấm qua màng da (µg/cm ) Chuột nhắt Chuột cống Thỏ 230,76 14,59 69,04 320,05 35,97 73,72 383,89 65,17 117,47 436,56 97,05 131,36 530,85 163,62 201,53 659,82 220,76 288,54 739,84 296,62 411,97 Lượng captopril miếng thuốc dán chứa 10% captopril thấm qua màng da (µg/cm ) Chuột nhắt Chuột cống Thỏ 367,31 26,77 84,14 548,52 66,90 128,09 671,51 132,33 205,18 762,45 191,48 244,14 1080,49 307,83 430,03 1250,00 429,59 589,13 1454,81 603,03 897,32 Lượng captopril thấmqua da cô lập theo thời gian (µg/cm2) 10 12 16 20 24 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Thời gian (giờ) Hình 2: Đồ thị biểu diễn lượng captopril thấm qua da (µg/cm2) theo thời gian Bảng 3: Kết tốc độ thấm qua màng da tiềm thời captopril từ miếng thuốc dán thấm qua màng da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ bóc tách (n=3) Lượng captopril miếng thuốc dán chứa 5% captopril thấm qua màng da (µg/cm ) Chuột nhắt Chuột cống Thỏ Flux (µg/cm /giờ) 31,70 ± 2,42 14,99 ± 2,57 18,96 ± 2,53 Tiềm thời (giờ) 5,08 ± 0,97 4,36 ± 1,04 BÀN LUẬN Da chuột nhắt cho tiềm thời sớm từ lúc bắt đầu dán thuốc dán (khoảng – 30 phút) Sự thấm captopril cho đường biểu diễn bậc tốc độ thấm định da chuột nhắt Miếng thuốc dán nồng độ captopril 10% cho tốc độ thấm cao gấp lần miếng thuốc dán nồng độ 5% Da chuột cống cho tiềm thời khoảng Sự thấm captopril cho đường biểu diễn bậc tốc độ thấm định da chuột 48 Lượng captopril miếng thuốc dán chứa 10% captopril thấm qua màng da (µg/cm ) Chuột nhắt Chuột cống Thỏ 63,65 ± 2,68 30,03 ± 2,49 43,96 ± 2,44 0,25 ± 0,11 5,26 ± 0,98 5,65 ± 0,96 cống Miếng thuốc dán nồng độ captopril 10% cho tốc độ thấm cao gấp lần miếng thuốc dán nồng độ 5% Da thỏ cho tiềm thời khoảng Sự thấm captopril cho đường biểu diễn bậc tốc độ thấm định da thỏ Miếng thuốc dán nồng độ captopril 10% cho tốc độ thấm cao gấp 2,3 lần miếng thuốc dán nồng độ 5% Trong loại da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ da chuột nhắt cho tiềm thời sớm tốc độ thấm cao gấp 2,12 lần so với da Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 chuột cống, gấp 1,67 lần so với da thỏ, có lẽ có bề dày lớp da nhỏ Kết thực nghiệm chứng tỏ captopril dạng bào chế thuốc dán có khả thấm tốt qua nhiều loại da khác nhau, phù hợp với kết nghiên cứu nhiều tác giả khác KẾT LUẬN Kết thực nghiệm cho thấy da chuột nhắt có tốc độ thấm cao tiềm thời sớm so với da chuột cống da thỏ, thuốc dán chứa 10% captopril có khả thấm tốt hơn., có khả chế tạo thuốc dán chứa captopril dùng điều trị bệnh cao huyết áp TÀI LIỆU THAM KHẢO Nghiên cứu Y học BuffaloGrove, Illinois, pp 1-6, 8-20, 21-22, 34-50, 139-164, 167179, 186-188, 249-259, 263-264, 276-279, 357-446 Wu PC, Huang YB, Chang JJ, Chang JS, Tsai YH (2000), “Evaluation of pharmacokinetics and pharmacodynamics of captopril from transdermal hydrophilic gels in normotensive rabbits and spontaneously hypertensive rats”, Inl J Pharm., 209, 87-94 Wu PC, Huang YB, Fang JU Tsai YH (1998), “Percutaneous Absorption of Captopril from Hydrophilic Cellulose Derivatives Through Excised Rabbit Skin and Human Skin”, Drug Development and Industrial Pharmacy, 24, (2), 179-182 Wu PC, Huang YB, Lin HH Tsai YH (2000), “In vitro percutaneous absorption of captopril through excised rabbit skin”, International Journal of Pharmaceutics, 143, (1), 119123 Ngày nhận báo: 12.12.2012 Ngày phản biện nhận xét báo: 20.12.2012 Ngày báo đăng: 10.03.2014 Bộ Y tế (2002), Dược thư quốc gia Việt Nam, lần xuất thứ Ghosh TK, Pfister WR, Su Il Yum (1997), Transdermal and Topical Drug Delivery Systems Interpharm Press, Inc., Chuyên Đề Dược Học 49 ... NaOH Tốc KẾT QUẢ Tính thấm Captopril qua da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ Bảng 2: Kết khảo sát lượng Captopril từ miếng thuốc dán thấm qua màng da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ bóc tách (n=3)... độ thấm qua màng da tiềm thời captopril từ miếng thuốc dán thấm qua màng da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ bóc tách (n=3) Lượng captopril miếng thuốc dán chứa 5% captopril thấm qua màng da. .. thỏ Miếng thuốc dán nồng độ captopril 10% cho tốc độ thấm cao gấp 2,3 lần miếng thuốc dán nồng độ 5% Trong loại da chuột nhắt, da chuột cống da thỏ da chuột nhắt cho tiềm thời sớm tốc độ thấm cao