Nghiên cứu này thực hiện nhằm đánh giá về khả năng quét dọn gốc tự do và khả năng gây độc tế bào của cao chiết cồn và chloroform từ thân cây An xoa. Kết quả cho thấy hoạt tính chống oxy hóa của cao chiết cồn (IC50 = 60,83μg/ml) mạnh hơn cao chiết cloroform (IC50 = 74.58μg/ml).
Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 90 Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa tác dụng gây độc tế bào cao chiết cồn chloroform từ thân An xoa helicteres hirsuta Lour sterculiaceae Phan Thị Thanh Thủy Khoa Dược, Đại học Nguyễn Tất Thành pttthuy@ntt.edu.vn Tóm tắt Cây An xoa dân gian sử dụng làm thuốc điều trị ung nhọt, tiêu độc Những nghiên cứu gần cho thấy khả chống lại gốc tự tác nhân gây ung thư khả chống ung thư An xoa Nghiên cứu thực nhằm đánh giá khả quét dọn gốc tự khả gây độc tế bào cao chiết cồn chloroform từ thân An xoa Kết cho thấy hoạt tính chống oxy hóa cao chiết cồn (IC50 = 60,83μg/ml) mạnh cao chiết cloroform (IC50 = 74.58μg/ml) Tuy nhiên, hoạt tính gây độc tế bào gan HepG2 cao chiết cloroform (IC50 = 9.17μg/ml) lại mạnh cao chiết cồn (IC50 = 19.96μg/ml) Như vậy, An xoa có chứa hoạt chất ngăn ngừa ung thư (chất chống oxy hóa) hoạt chất có khả tiêu diệt tế bào ung thư ® 2018 Journal of Science and Technology - NTTU Đặt vấn đề Cây An xoa (Helicteres hirsuta Lour) gọi dó lông, thường dùng làm thuốc chữa ung nhọt; rễ làm thuốc dịu đau, tiêu độc, kiết lị, cảm cúm, đậu, sởi, sốt rét rắn độc cắn; vỏ thân cho sợi dùng dệt bao tải [1] Theo nghiên cứu Indonesia An xoa có khả chống lại tế bào ung thư, ung thư gan Các nghiên cứu gần đây, phân lập số hợp chất Lignan có tác dụng gây độc với tế bào ung thư Pinoresinol, Medioresinol, Syringaresinol, Boehmenan, Boehmenan H, Dihydrodiconiferyl alcohol [2] Vật liệu phương pháp 2.1 Vật liệu nghiên cứu Thân An xoa thu thập thị trấn Lộc Ninh, tỉnh Bình Phước Mẫu thực vật gồm lá, hoa, thân An xoa đối chiếu với tài liệu TS Võ Văn Chi [1] Kết xác định An xoa (Helicteres hirsuta Lour.) thuộc họ Trôm (Sterculiaceae) Thân phơi khô xay nhỏ thành bột 0,5 – 1mm để làm thí nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận 22.08.2018 Được duyệt 08.11.2018 Cơng bố 25.12.2018 Từ khóa An xoa, hoạt tính chống oxy hóa, hoạt tính gây độc tế bào, IC50, ung thư 2.2.1 Chiết xuất Ngâm bột thân An xoa với dung môi cồn chloroform nhiệt độ phòng 24 (100g bột khơ với lít dung mơi) D ịc h c hiết cô tới khối lượng không đổi để thu cao thành phẩm 2.2.2 Xác định hoạt tính chống oxy hố [3] Khả chống oxy hóa xác định phương pháp dọn gốc tự DPPH [6] Pha loãng dịch chiết mẫu nồng độ phù hợp sau hút thêm 0,5ml dung dịch DPPH vào ống nghiệm để bóng tối 30 phút, đo độ hấp thụ quang học 517nm Hoạt tính chống oxy hóa xác định theo cơng thức: ( ) IC(%): Hoạt tính dọn gốc tự DPPH ODc: Mật độ quang mẫu chứng âm ODt: Mật độ quang mẫu thử Từ IC (%) nồng độ mẫu ta dựng đường hồi qui tuyến tính, từ tính IC50 (khả dọn dẹp 50% DPPH mẫu) Giá trị IC50 thấp tương ứng với hoạt tính chống oxy hóa mẫu thử cao ngược lại Mẫu chứng dương sử dụng để so sánh Vitamin C 2.2.3 Thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư [4] [5] Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 91 40 60 80 100 Kết thảo luận Ống Chứng âm 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Mẫu cao cồn 96% Nồng độ OD trung (µg/ml) bình 0,815 20 0,780 40 0,581 60 0,428 80 0,278 100 0,163 IC (%) 11,274 33,925 51,320 68,339 81,479 22,528 39,129 55,325 68,822 y = 0,7754x - 7,827 R² = 0,9989 3.1 Hoạt tính chống oxy hóa Bảng Thơng số thử hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao cồn 96% 0,631 0,496 0,364 0,254 80 70 60 50 40 30 20 10 IC (%) - Dòng tế bào ung thư HepG2 - Thử độc tế bào: 200l dung dịch tế bào pha log nồng độ x 104 tế bào/ml vào giếng (đĩa 96 giếng) mơi trường DMEM Mẫu thử pha lỗng cho đạt đến nồng độ cuối 128g/ml nồng độ pha loãng thấp Ủ nhiệt độ 370C, 5% CO2 ngày - Đối chứng dương gồm 200l dung dịch tế bào, nồng độ 3x104 tế bào/ml - Đối chứng âm gồm 200l môi trường nuôi cấy - Ellipticine (Sigma) dùng làm chất tham khảo - Sau ngày nuôi cấy; ủ tiếp với MTT 0,2mg/ml 370C giờ; loại bỏ môi trường, thêm 100l DMSO lắc đọc kết bước sóng 540nm 50 100 Nồng độ µg/ml 150 Hình Sơ đồ tương quan nồng độ hoạt tính chống oxy hóa cao chloroform Nồng độ cao tăng khả bắt gốc tự cao mạnh Dựa vào phương trình hồi qui, ta tính giá trị IC50 nồng độ thu dọn 50% gốc tự DPPH Các mẫu có giá trị IC50 thấp hoạt tính chống oxy hóa cao Bảng Giá trị IC50 mẫu thử Mẫu Cao cồn Cao chloroform Vitamin C Giá trị IC50 (µg/ml) 60,83 74,58 3,38 Giá trị IC50 (µg/ml) 74.58 IC (%) 80 60.83 y = 0,8741x - 3,1797 R² = 0,9909 µg/ml 60 40 20 3.38 Giá trị IC50 (µg/ml) 0 50 100 Nồng độ µg/ml 150 Hình Sơ đồ tương quan nồng độ hoạt tính chống oxy hóa cao cồn Bảng Thơng số thử hoạt tính dọn gốc tự DPPH cao phân đoạn Cloroform Ống Chứng âm Mẫu cao Cloroform Nồng độ OD trung bình (µg/ml) 0,815 20 0,752 IC (%) 7,681 Cao cồn Cao Vitamin C chloroform Axis Title Hình Biểu đồ so sánh giá trị IC50 loại cao chiết hoạt tính chống oxy hóa Giá trị IC50 khả dọn dẹp gốc tự DPPH cao cồn, cao chloroform 60,83µg/ml 74,58µg/ml, cho thấy cao cồn có hoạt tính chống oxy hóa mạnh cao chloroform Nồng độ so với IC50 vitamin C 6,38µg/ml cao Nhưng có tinh khiết hóa hợp chất có khả chống oxy hóa cao giá trị IC50 thấp Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 92 3.2 Thử hoạt tính gây độc tế bào cao Bảng Kết thử hoạt tính độc tế bào STT Giá trị IC50 (g/ml) d ng tế bào ung thư ep Cao Ethanol 96% 19,96 Cao Chloroform 9,17 Ellipticine 0,44 Tên mẫu Giá trị IC50 (µg/ml) dòng tế bào ung thư HepG2 25 19.96 Từ thử nghiệm xác định hoạt tính chống oxy hóa gây độc tế bào cho thấy: - Các hợp chất chống oxy hóa phân cực nhiều nên phân bố nhiều cao cồn, hợp chất có khả gây độc tế bào phân cực phân bố nhiều cao chloroform - Cao cồn cao chloroform cao chứa nhiều thành phần hợp chất Trong đó, cao cồn chứa nhiều hợp chất có khả chống oxy hóa, cao chloroform chứa hợp chất có khả gây độc tế bào Sự tinh khiết hóa thành phần hợp chất loại cao cho tác dụng mạnh cao tương ứng 20 Kết luận 15 Khả chống oxy hóa cao cồn mạnh so với cao chloroform Khả gây độc tế bào ung thư cao cồn yếu so với cao chloroform Những kết cho thấy: - Khả chống oxy hóa quét dọn gốc tự do, chứng tỏ An xoa có chứa hợp chất ngăn ngừa phòng chống ung thư - Khả gây độc tế bào tế bào gan HepG2, chứng tỏ An xoa có chứa hợp chất chữa bệnh ung thư 9.17 10 0.44 Cao Ethanol 96% Cao Chloroform Ellipticine Hình Biểu đồ so sánh giá trị IC50 loại cao chiết hoạt tính gây độc tế bào ung thư Hoạt tính gây độc tế bào gan HepG2 cao chloroform (IC50 = 9,17g/ml) mạnh cao cồn (IC50 = 19,96g/ml) Tài liệu tham khảo Võ Văn Chi (2012) Từ n thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học Hà Nội, pp 1011-1017 Chin Y-W, Jones WP, Rachman I, Riswan S, Kardono LBS, Chai H-B, et al (2006) Cytotoxic lignans from the stems of Helicteres hirsuta collected in Indonesia, Phytother Res, 20:62–5 Molyneux P (2004) The use of the stable free radical diphenylpicryl hydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity J Sci Technol, 26:211-21 Fresney R.I (1993): Culture of animal Cells; John Wiley & Sons Inc., New York A manual of basis techniques, rd Edition Scudiero D.A., Shoemaker R.H., Kenneth D.P., Monks A., Tierney S., Nofziger T.H., Currens M.J., Seniff D., Boyd M.R (1988) Evaluation of a soluable tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines Cancer Reseach 48: 4827-4833 In vitro antioxydant and cytotoxic activities of alcohol and chloroform extract Helicteres hirsuta Lour Sterculiaceae Thuy Thi Thanh Phan Falcuty of Pharmacy, Nguyen Tat Thanh University pttthuy@ntt.edu.vn Abstract Helicteres hirsuta Lour Sterculiaceae is known as a type of medicine for cancer treatment, detoxification Recent research shows that the ability to fight free radicals as well as the ability to fight cancer of Helicteres hirsuta Lour Sterculiaceae This study was conducted to evaluate the ability of free radical scavenging and cytotoxic activities of alcohol extracts and chloroform extracts of Helicteres hirsuta Lour Sterculiaceae The results showed that the antioxidant activity of alcohol extracts (IC50 = 60.83μg/ml) was higher than that of chloroform extract (IC50 = 74.58μg/ml) However, HepG2 hepatotoxic activity of chloroform extracts (IC50 = 9.17μg/ml) was stronger than that of alcohol extract (IC50 = 19.96μg/ml) Thus, Helicteres hirsuta Lour Sterculiaceae contains anti-oxidant and cytotoxic active ingredients Keywords Helicteres hirsuta L antioxidant activity, cytotoxic, IC50, cancer Đại học Nguyễn Tất Thành ... khả gây độc tế bào Sự tinh khiết hóa thành phần hợp chất loại cao cho tác dụng mạnh cao tương ứng 20 Kết luận 15 Khả chống oxy hóa cao cồn mạnh so với cao chloroform Khả gây độc tế bào ung thư cao. .. dòng tế bào ung thư HepG2 25 19.96 Từ thử nghiệm xác định hoạt tính chống oxy hóa gây độc tế bào cho thấy: - Các hợp chất chống oxy hóa phân cực nhiều nên phân bố nhiều cao cồn, hợp chất có khả gây. .. học & Cơng nghệ Số 92 3.2 Thử hoạt tính gây độc tế bào cao Bảng Kết thử hoạt tính độc tế bào STT Giá trị IC50 (g/ml) d ng tế bào ung thư ep Cao Ethanol 96% 19,96 Cao Chloroform 9,17 Ellipticine