Khảo sát độc tính cấp đường uống và tác động kháng viêm cấp của cao chiết lá Phù dung (Hibiscus mutabilis L.) trên chuột nhắt

Đề tài nghiên cứu về độc tính cấp đường uống và tác dụng kháng viêm của cao chiết lá Phù dung (Hibiscus mutabilis L.). Phương pháp: Khảo sát độc tính cấp đường uống của cao chiết lá Phù dung trên chuột nhắt Swiss albino đực và cái, theo dõi tỷ lệ chết và biểu hiện độc tính trong vòng 72 giờ. Tác động phòng và điều trị viêm của cao với liều 100 và 200 mg/kg được xác định trên mô hình gây viêm bàn chân chuột nhắt bằng carrageenan 1%, mỗi lô 10 chuột.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG VÀ TÁC ĐỘNG KHÁNG VIÊM CẤP CỦA CAO CHIẾT LÁ PHÙ DUNG (HIBISCUS MUTABILIS L.) TRÊN CHUỘT NHẮT Đỗ Thị Hồng Tươi*, Nguyễn Thị Bạch Tuyết**, Nguyễn Thị Phương Trúc***, Trần Thị Vân Anh* TÓM TẮT Mục tiêu: Đề tài nghiên cứu độc tính cấp đường uống tác dụng kháng viêm cao chiết Phù dung (Hibiscus mutabilis L.) Phương pháp: Khảo sát độc tính cấp đường uống cao chiết Phù dung chuột nhắt Swiss albino đực cái, theo dõi tỷ lệ chết biểu độc tính vòng 72 Tác động phòng điều trị viêm cao với liều 100 200 mg/kg xác định mơ hình gây viêm bàn chân chuột nhắt carrageenan 1%, lô 10 chuột Kết quả: Cao chiết Phù dung khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống qua kim (Dmax) 40 g cao/kg (tương ứng 571 g bột Phù dung khô/kg) Cao chiết thể tác động phòng viêm cấp chuột cho uống cao liều 100 mg/kg 200 mg/kg giúp giảm độ phù bàn chân chuột so với lô chứng bệnh thời điểm khảo sát Trên mơ hình khảo sát tác động điều trị viêm, liều 100 mg/kg cao chiết Phù dung có tác dụng kháng viêm tốt liều 200 mg/kg So với lô chứng, cao liều 100 mg/kg làm giảm độ phù bàn chân chuột sau khoảng 25% Kết luận: Cao Phù dung khơng thể độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng với liều tối đa (Dmax) 40 g cao/kg (tương ứng 571 g bột Phù dung khô/kg) Cao chiết thể tác động dự phòng điều trị viêm cấp chuột nhắt với liều cho uống 100 mg/kg Từ khóa: Phù dung, độc tính cấp, tác động kháng viêm ABSTRACT STUDY ON ORAL ACUTE TOXICITY AND ANTI-INFLAMMATORY EFFECT OF EXTRACT FROM HIBISCUS MUTABILIS L LEAVES IN MICE Do Thi Hong Tuoi, Nguyen Thi Bach Tuyet, Nguyen Thi Phuong Truc, Tran Thi Van Anh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 40 – 44 Objectives: This work studied on oral acute toxicity and anti-inflammatory effect of extract from Hibiscus mutabilis L leaves Methods: Oral acute toxicity of H mutabilis extract was investigated in male and female Swiss albino mice by monitoring mortality and toxicity within 72 hours Anti-inflammatory effect at doses of 100 and 200 mg/kg was determined in 1% carrageenan-induced paw edema mouse model, 10 mice per group Result: H mutabilis extract did not show any signs of oral acute toxicity in mice at the maximum dose (Dmax) of 40 g extract/kg corresponding to 571 g plant dry powder/kg The extract exhibited protective effect against acute inflammation at the oral doses of 100 mg/kg and 200 mg/kg by decreasing hind paw edema in mice compared to pathological control at all tested times In treatment protocol, the dose of 100 mg/kg showed a better anti-inflammatory effect than 200 mg/kg one After 3h and 5h of oral administration of 100 mg/kg extract, hind paw edema reduced about 25% compared to control group Conclusions: H mutabilis extract did not show oral acute toxicity in mice at the maximum dose of 40 g/kg * Khoa Dược - Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ** Khoa Dược - Đại học Toulouse III, Paul Sabatier Trạm Y tế - Đại học Thủ Dầu Một, Bình Dương Tác giả liên lạc: PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi ĐT: 0908683080 Email: hongtuoi@ump.edu.vn *** 40 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học (corresponding to 571 g dry plant/kg) This extract exhibited protective and curative effects on inflammation at oral doses of 100 mg/kg and 200 mg/kg in mice Keywords: Hibiscus mutabilis L., acute toxicity, anti-inflammatory effect ĐẶT VẤN ĐỀ Hóa chất Từ hàng nghìn năm trước, người biết phát hiện, chắt lọc tinh tuý từ cỏ sinh vật tồn tự nhiên để tạo thuốc nâng cao sức khoẻ điều trị bệnh Phù dung (Hibiscus mutabilis L., họ Bông Malvaceae) mọc hoang trồng nhiều nơi để làm cảnh có hoa thay đổi màu sắc vào thời điểm khác ngày; vỏ thân dùng để bện thừng, dệt vải làm giấy, hoa tươi khô dùng để làm thuốc(2,3) chữa mụn nhọt, sưng tấy, kinh nguyệt không Ở Trung Quốc, hoa phù dung dùng giải nhiệt giải độc, chữa ho lâu ngày, thuốc giảm đau chữa vết bỏng…(2) Nhằm góp phần đánh giá tác dụng kháng viêm thuốc dân gian sở khoa học, đề tài thực “Khảo sát độc tính cấp đường uống tác động kháng viêm cao chiết Phù dung (Hibiscus mutabilis L.) chuột nhắt” Carrageenan 1% (Sigma Aldrich, Mỹ) pha dung dịch nước muối sinh lý, dung dịch chống thấm Ornano imbidente (Ugo Basile, Ý) pha ml với 250 mg NaCl 500 ml nước cất, diclofenac (viên nén Voltaren 75 mg, Novartis, Ý) ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Mẫu thử Cao ethanol 96% từ Phù dung chiết phương pháp ngấm kiệt với dung môi ethanol 96% (tỷ lệ 1g bột dược liệu: 10 ml dung môi) Phù dung thu hái bánh tẻ vào tháng 6/2017 Thái Bình Hiệu suất chiết 12,96% Cao thử có độ ẩm trung bình 3,43% Động vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng đực cái, chủng Swiss albino, - tuần tuổi, trọng lượng khoảng 25 g, cung cấp Viện Vaccin Sinh phẩm Y tế Nha Trang Sử dụng chuột khỏe mạnh, khơng có biểu bất thường Chuột ni lồng kích thước 25 x 35 x 15 cm, cung cấp thức ăn nước uống đầy đủ Chuột nuôi môi trường thí nghiệm ngày để ổn định trước thử nghiệm Phương pháp nghiên cứu Thiết kế thực nghiệm, đo lường độc lập Khảo sát độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng(1) Cho chuột (3 đực, cái) nhịn đói 12 trước tiến hành thử nghiệm Cao phân tán hỗn dịch tween 80 pha nước với nồng độ 10% (tt/tt) Liều chọn cao Phù dung 40 g cao/kg tương ứng với 571 g dược liệu khô/kg (nồng độ tối đa qua kim g cao/ml, cho uống với thể tích 20 ml/kg) Tiến hành song song với chuột đối chứng cho uống hỗn dịch tween 80 10% (tt/tt) Theo dõi ghi nhận cử động tổng quát, biểu hành vi, trạng thái lông, ăn uống, tiêu tiểu số lượng chết chuột 72 Sau 72 giờ, chuột khơng có dấu hiệu bất thường chết, tiếp tục theo dõi ngày Chuột chết ngày chuột sống sót sau ngày mổ để quan sát đại thể quan Chuột chết hay không 72 đầu định bước tiếp theo: tiến hành với liều thấp liều trước để xác định LD50 không cần tiếp tục tiến hành thử nghiệm Khảo sát tác động dự phòng viêm cấp(7) Chuột đực chia vào lô cho Vo (đo thiết bị plethysmometer Model 7140, Ugo Basile, Ý) khác biệt ý nghĩa thống kê (10 chuột/lơ): Lơ sinh lý lô chứng bệnh: uống nước cất; Lô dung môi: uống tween 80 pha nước cất nồng độ 1% (tt/tt); Lô đối chứng: uống diclofenac mg/kg; Lô thử 2: uống cao Phù 41 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 dung liều 100 200 mg/kg KẾTQUẢ Chuột cho uống ngày lần vào buổi sáng (9 đến 11 giờ) với thể tích 10 ml/kg ngày Ngày 7, sau cho chuột uống nước dung môi cao thử giờ, chuột lô (trừ lô sinh lý) gây viêm cách tiêm da vào gan bàn chân phải sau 0,025 ml carrageenan 1% cho vào lồng có giá đỡ để tránh nhiễm trùng chân Đo thể tích chân chuột sau gây viêm 1, 3, 5, 24, 48, 72, 96 120 (Vt) Sau đo thể tích bàn chân thời điểm 24, 48, 72 96 giờ, chuột tiếp tục cho uống nước cất, dung môi, diclofenac cao thử (1 lần/ngày) Độ phù bàn chân X (%) thời điểm khảo sát tính theo cơng thức: X (%) = [(Vt – Vo)/ Vo] x 100, đó: Vo Vt: thể tích chân chuột thời điểm trước sau gây viêm (ml) Độc tính cấp đường uống Khảo sát tác dụng điều trị viêm cấp(7) Chuột đực gây viêm cách tiêm da vào gan bàn chân phải sau 0,025 ml hỗn dịch carrageenan 1% Đo thể tích chân chuột trước sau gây viêm Các chuột có độ phù bàn chân từ 50% trở lên chia ngẫu nhiên vào lơ đảm bảo khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê độ phù lô, lô 10 gồm: lô chứng bệnh uống nước cất; lô dung môi: uống tween 80 1% (tt/tt); lô đối chứng uống diclofenac 10 mg/kg; lô thử lô thử uống cao Phù dung liều 100 200 mg/kg Độc tính cấp đường uống cao ethanol 96% từ Phù dung khảo sát chuột nhắt trắng, chủng Swiss albino Sau cho chuột uống cao thử Phù dung với liều tối đa bơm qua kim 40 g cao/kg, tất chuột thử nghiệm khỏe mạnh, ăn cám viên, uống nước, tiêu tiểu, cử động bình thường, khơng có dấu hiệu bất thường khơng có chuột chết thời gian 72 quan sát tương tự lô đối chứng cho uống dung môi tween 80 10% (tt/tt) Tiếp tục theo dõi chuột ngày, kết cho thấy khơng có chuột chết, chuột khơng có dấu hiệu bất thường hành vi, trạng thái lơng, ăn uống tình trạng tiêu tiểu Như vậy, cao chiết Phù dung không xác định LD50, khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống qua kim (Dmax) 40 g cao/kg (tương ứng 517 g bột Phù dung khơ/kg) Tác dụng dự phòng viêm cấp Cao chiết Phù dung khơng thể độc tính cấp đường uống với Dmax 40 g cao/kg, chọn liều thử tác động phòng/điều trị viêm 100 200 mg/kg tương ứng 1/400 1/200 Dmax Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lô chuột trình bày Bảng Xử lý kết phân tích thống kê Chuột lơ dung mơi cho uống tween 80 1% (tt/tt) nước cất có độ phù bàn chân cao lô chứng bệnh khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê tất thời điểm khảo sát (p > 0,05) Điều cho thấy tween 80 1% (tt/tt) sử dụng để pha cao thử không ảnh hưởng đến độ phù chân chuột kết lô dung môi dùng so sánh tác động kháng viêm cao Kết trình bày dạng giá trị trung bình ± SEM (standard error of mean - sai số chuẩn số trung bình) Sự khác biệt lơ phân tích phép kiểm Kruskal-Wallis Mann-Whitney với phần mềm SPSS 22.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 Lô đối chứng diclofenac liều mg/kg làm giảm độ phù bàn chân chuột so với lô chứng bệnh Sự khác biệt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) sau gây viêm Lô cao Phù dung liều 100 mg/kg 200 mg/kg có tác động giảm độ phù bàn chân chuột so với lô dung môi thời điểm khảo sát (p < 0,05) Tại thời điểm Chuột cho uống nước cất, dung môi, diclofenac cao thử lần (sau phân lô) với thể tích 10 ml/kg Đo thể tích chân chuột sau cho uống 1, (Vt), tính mức độ phù bàn chân chuột X (%) thời điểm 42 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học khảo sát, độ phù lô liều 100 mg/kg thể tốt liều 200 mg/kg khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) điểm từ sau đến 48 (p < 0,05); sau 72, 96 100 giờ, khác biệt lơ khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) So với lô đối chứng diclofenac mg/kg, độ phù lô cao Phù dung 100 mg/kg khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê thời điểm khảo sát (p > 0,05), trừ thời điểm sau (p < 0,05) Lô uống liều 200 mg/kg có độ phù cao lơ diclofenac có ý nghĩa thời Như vậy, cao Phù dung thể tác động dự phòng viêm cấp liều cho uống 100 200 mg/kg, liều 100 mg/kg thể tác động sớm tốt liều 200 mg/kg Tác động tương đương với diclofenac sau 24 Bảng Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lô Lô (n = 10) Sinh lý Chứng bệnh Dung môi Diclofenac mg/kg Cao Phù dung 100 mg/kg Cao Phù dung 200 mg/kg V1h 1,74 ± 1,16 81,46 ± *** 5,85 96,55 ± *** 6,55 59,85 ± ***# 7,82 49,68 ± ***### 5,89 V3h 2,65 ± 1,35 78,64 ± *** 5,02 88,74 ± *** 4,70 42,82 ± ***## 5,58 60,45 ± ***##$ 6,66 73,63 ± ***#@ 6,71 63,35 ± ***##$ 5,74 Độ phù trung bình ± SEM (%) V5h V24h V48h V72h V96h V120h 4,55 ± 1,52 2,65 ± 1,35 2,65 ± 1,35 2,65 ± 1,35 2,65 ± 1,35 2,65 ± 1,35 73,43 ± 68,32 ± 55,80 ± 46,00 ± 31,96 ± 27,40 ± *** *** *** *** *** *** 5,94 7,25 6,45 6,84 4,93 4,31 86,82 ± 78,30 ± 78,24 ± 62,95 ± 47,14 ± 38,48 ± *** *** *** *** *** *** 4,49 8,80 10,20 7,76 6,09 5,61 40,09 ± 40,09 ± 29,45 ± 23,32 ± 15,42 ± 9,12 ± ***## ***# ***## ***## ***# ***## 4,38 5,50 3,83 3,61 3,47 3,05 54,62 ± 43,14 ± 29,87 ± 28,21 ± 19,94 ± 14,10 ± ***##$ ***# ***## ***## ***## ***## 6,98 8,36 6,39 7,29 4,36 5,43 56,84 ± ***###$ 4,89 64,54 ± ***$$ 5,55 48,22 ± ***#$ 6,42 39,80 ± ***# 7,05 27,43 ± ***# 5,55 13,35 ± ***## 4,22 *** p < 0,001 so với lô sinh lý thời điểm p < 0,01 ##p < 0,001 so với lô chứng bệnh (diclofenac) lô dung môi (cao thử) thời điểm $ p < 0,05 so với lô diclofenac thời điểm @p < 0,05 so với lô cao liều 100 mg/kg thời điểm # Tác động điều trị viêm cấp Sự thay đổi độ phù bàn chân chuột theo thời gian lơ chuột trình bày Bảng Lô đối chứng diclofenac liều 10 mg/kg làm giảm độ phù bàn chân chuột so với lô chứng bệnh Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,001) 1giờ sau gây viêm So với lô dung môi, cao Phù dung liều 100 mg/kg thể tác dụng kháng viêm làm giảm độ phù bàn chân chuột sau khoảng 25% (p < 0,01) lô cho uống cao liều 200 mg/kg, độ phù thấp lô dung môi từ 3% đến 13% khác biệt ý nghĩa thống kê ba thời điểm khảo sát (p > 0,05) Bảng Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lô Lô thử nghiệm (n = 10) Chứng bệnh Dung môi Diclofenac 10 mg/kg Cao Phù dung 100 mg/kg Cao Phù dung 200 mg/kg V0h 65,85 ± 6,19 65,11 ± 3,91 64,92 ± 3,35 65,46 ± 3,06 64,26 ± 3,02 Độ phù trung bình ± SEM (%) V1h V3h 72,97 ± 5,16 69,95 ± 2,87 61,89 ± 6,78 64,00 ± 5,48 *** *** 39,52 ± 3,37 30,68 ± 2,95 ** 46,66 ± 3,87 38,26 ± 4,34 #@ # 58,39 ± 3,23 47,36 ± 5,26 V5h 58,20 ± 3,56 49,78 ± 4,36 *** 26,86 ± 3,31 ** 32,19 ± 3,21 36,93 ± 4,30 ** p < 0,01 ***p < 0,001 so với lô chứng bệnh (diclofenac) lô dung môi (cao thử) thời điểm # p < 0,05 so với lô diclofenac thời điểm @p < 0,05 so với lô cao liều 100 mg/kg thời điểm Tác dụng làm giảm độ phù bàn chân lô diclofenac 10 mg/kg cao gấp 1,6 đến 2,2 lần so lô cao Phù dung liều 100 mg/kg; nhiên khác biệt độ phù lô khơng có ý nghĩa thống kê thời điểm (p > 0,05) Chuột cho uống cao thử liều 200 mg/kg có độ phù cao 43 Nghiên cứu Y học lơ diclofenac có ý nghĩa thống kê sau 1, (p < 0,05) khơng có ý nghĩa sau (p > 0,05) So sánh liều 100 200 mg/kg cao thử, kết cho thấy có khác biệt độ phù sau có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Như vậy, cao Phù dung thể tác động điều trị viêm liều 100 mg/kg sau Tác động thể chậm yếu so với thuốc đối chứng diclofenac 10 mg/kg BÀN LUẬN Theo kinh nghiệm dân gian, hoa Phù dung dùng chữa mụn nhọt, tươi hoa tươi nhân dân giã đắp mụn nhọt mưng mủ để hút mủ giảm đau(2) Có thể dùng hoa phơi khô tán nhỏ, dùng thêm nước chè đặc, trộn thành thứ bột nhão, đắp lên chỗ sưng đau(3,8) Dựa kinh nghiệm dân gian, nhóm nghiên cứu thực đề tài “Khảo sát độc tính cấp đường uống tác động kháng viêm cao chiết Phù dung (Hibiscus mutabilis L.) chuột nhắt” Kết cho thấy cao Phù dung có liều tối đa cho uống mà khơng làm chết chuột khơng thể độc tính cấp 40 g cao/kg, tương đương 517 g bột dược liệu khơ/kg Điều chứng tỏ cao Phù dung có tính an tồn cao, có khả phát triển thành sản phẩm ứng dụng lâm sàng Dựa tài liệu tham khảo tác dụng kháng viêm cao chiết ethyl acetat từ Phù dung liều 100 mg/kg chuột(5) đề tài chọn khảo sát tác động phòng điều trị viêm cao Phù dung liều 100 mg/kg 200 mg/kg Kết cho thấy cao chiết Phù dung thể tác động dự phòng điều trị viêm liều 100 200 mg/kg Tác dụng giải thích thành phần flavonoid có dược liệu Theo báo cáo trước Phù dung chứa quercetin, isoquercetin, dẫn chất quercetin quercemeritrin, quercetin-3-Dxylosid, quercetin-3-sambubiosid hyperin, quercetin-4' glucosid quercimetrin, rutin, anthocyanin cyanidin, meratrin, hybridin, kaempferol, guaijaverin(2,5,6) Kết đề tài 44 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 phù hợp với nghiên cứu chứng minh tác dụng kháng viêm rutin, quercetin kaempferol mơ hình gây phù bàn chân chuột(4) So với diclofenac, tác động kháng viêm cao Phù dung thể chậm yếu hơn; điều giải thích cao thử có nguồn gốc tự nhiên, diclofenac thuốc có nguồn gốc hóa học Kết đề tài gợi ý khả phát triển chế phẩm từ cao Phù dung để ứng dụng phòng và/hoặc điều trị bệnh liên quan đến chứng viêm KẾT LUẬN Cao ethanol 96% từ Phù dung độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống qua kim (Dmax) 40 g cao/kg (tương ứng 571 g bột Phù dung khơ/kg) Trên mơ hình chuột nhắt gây viêm cấp carrageenan, cao chiết thể tác động phòng viêm cấp với liều uống 100 mg/kg 200 mg/kg tác dụng điều trị viêm với liều 100 mg/kg TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2015) Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu Ban hành theo Quyết định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27/10/2015, trang 13-17 Đỗ Huy Bích cộng (2006) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt nam – tập Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tr 524-526 Đỗ Tất Lợi (2001) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Khoa học, tr 108-109 Gomes A, Fernandes E, Lima JL, Mira L, Corvo ML (2008) “Molecular mechanisms of anti-inflammatory activity mediated by flavonoid” Current Medicinal Chemistry; 15(16): 1586-1605 Hiremath SN, Shashikant RP, Pal SC (2010) “Phytochemical and pharmacological Evaluation of Hibiscus mutabilis leaves" J Chem Pharm Res; 2(1): 300-309 Hou Z, Liang X, Su F, Su W (2015) “Preparative isolation and purification of seven compounds from Hibiscus mutabilis L leaves by two-step high-speed counter-current chromatography" Chem Ind Chem Eng Q; 21(2): 331−341 Patel M, Murugananthan G, Gowda KPS (2012) “In vivo animal models in preclinical evaluation of anti-inflammatory activity-A review” Int J Pharm Res Allied Sci; 1(2): 1-5 Salem ZMM, Salem AZM (2014) “Studies on biological activities and phytochemicals composition of Hibiscus species- A review" Life Sci J; 11(5):1-8 Ngày nhận báo: 25/04/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/06/2018 Ngày báo đăng: 20/09/2018 ... đề tài Khảo sát độc tính cấp đường uống tác động kháng viêm cao chiết Phù dung (Hibiscus mutabilis L.) chuột nhắt Kết cho thấy cao Phù dung có liều tối đa cho uống mà khơng làm chết chuột khơng... tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống qua kim (Dmax) 40 g cao/ kg (tương ứng 517 g bột Phù dung khơ/kg) Tác dụng dự phòng viêm cấp Cao chiết Phù dung khơng thể độc tính cấp đường uống với... dụng kháng viêm cao chiết ethyl acetat từ Phù dung liều 100 mg/kg chuột( 5) đề tài chọn khảo sát tác động phòng điều trị viêm cao Phù dung liều 100 mg/kg 200 mg/kg Kết cho thấy cao chiết Phù dung