Đề tài cung cấp cơ sở về tính an toàn và tác dụng dược lý của Kim thất láng qua khảo sát độc tính cấp đường uống và tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan của dược liệu này
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG VÀ TÁC ĐỘNG CHỐNG OXY HÓA, BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT KIM THẤT LÁNG (GYNURA NITIDA DC., ASTERACEAE) Trần Thị Nguyệt Ánh*, Trần Thị Ngọc Tú*, Bùi Mỹ Linh**, Đỗ Thị Hồng Tươi* TÓMTẮT Mở đầu: Đề tài cung cấp sở tính an tồn tác dụng dược lý Kim thất láng qua khảo sát độc tính cấp đường uống tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan dược liệu Phương pháp nghiên cứu: Cây Kim thất láng chiết với dung môi khác Dựa kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa in vitro phương pháp DPPH, chọn cao chiết tiềm Khảo sát độc tính cấp đường uống xác định LD50 cao chiết tiềm phương pháp Behrens; tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan chuột nhắt gây tổn thương gan cách cho uống paracetamol liều 400 mg/kg Kết quả: Cao tiềm cao cồn 50% (hiệu suất chiết 26,2%) thể hoạt tính chống oxy hóa in vitro với EC50 615,23 µg/ml Khi cho uống, LD50 chuột nhắt cao cồn 50% từ Kim thất láng 25,64 ± 1,39 g cao/kg Cho chuột uống paracetamol 400 mg/kg gây tổn thương gan, làm tăng đáng kể hoạt tính AST, ALT huyết Cao Kim thất láng liều 130 260 mg/kg làm giảm hoạt tính AST, ALT huyết, hàm lượng MDA gan, phục hồi GSH so với lô chứng bệnh Liều 260 mg/kg cho tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan tốt liều 130 mg/kg tương đương với thuốc đối chứng silymarin 100 mg/kg, đưa hàm lượng MDA GSH gan trở mức sinh lý bình thường Phân tích đại thể vi thể gan cho thấy việc uống cao Kim thất láng ngày làm giảm tổn thương gan paracetamol gây Kết luận: Cao cồn 50% từ Kim thất láng thể độc tính cấp đường uống chuột nhắt với LD50 25,64 ± 1,39 g/kg tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan liều 130 mg/kg 260 mg/kg; liều 260 mg/kg có tác động tương đương silymarin liều 100 mg/kg Từ khóa: Kim thất láng, độc tính cấp, paracetamol, chống oxy hóa, bảo vệ gan ABSTRACT STUDY ON ACUTE ORAL TOXICITY AND ANTIOXIDANT, HEPATOPROTECTIVE EFFECTS OF EXTRACTS FROM GYNURA NITIDA DC., ASTERACEAE Tran Thi Nguyet Anh, Tran Thi Ngoc Tu, Bui My Linh, Do Thi Hong Tuoi * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 647 – 654 Introduction: The aim of this study is to evaluate acute oral toxicity and antioxidant, hepatoprotective effects of Gynura nitida DC., Asteraceae in order to provide the evidences about the safety and pharmacological effect of this plant Methods: Dry material was extracted with different solvents (96%, 70%, 50% ethanol and water) Based on the in vitro antioxidant activity of the extracts by DPPH test, potential solvent was selected The oral acute toxicity was evaluated in mice and LD50 estimated by Behrens method The antioxidant and hepatoprotective effects of G nitida extracts were examined in mice induced liver damage by oral administration of 400 mg/kg paracetamol * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Khoa Dược, Trường Đại học Bn Ma Thuột Tác giả liên lạc: PGS TS Đỗ Thị Hồng Tươi ĐT: 0908683080 ** Chuyên Đề Dược Email: hongtuoi@ump.edu.vn 647 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Results: The potential solvent is 50% ethanol (rendement of extraction de 26.2%) This extract expressed acute oral toxicity with value of EC50 of 615.23 g/ml For oral acute toxicity of 50% ethanol extract in mice, LD50 was 25.64 ± 1.39 g/kg Oral administration of 400 mg/kg paracetamol induced liver injury associated to significant increases in AST, ALT The oral doses of 130 and 260 mg/kg of G nitida extract decreased ALT, AST, MDA levels and increased GSH compared to pathological group The antioxidant and hepatoprotective effects of dose of 260 mg/kg were better than those of 130 mg/kg; this effect was similar to that of 100 mg/kg silymarin with normal MDA and GSH levels as those of physiological group Macro-and micro-analyse of liver showed that oral administration of G nitida extract for days decreased paracetamol-induced liver injury Conclusion: The 50% ethanol extract of G nitida had oral acute toxicity in mice with LD50 of 25.64 ± 1.39 g/kg as well as expressed antioxidant, hepatoprotective effects at the doses of 130 mg/kg and 260 mg/kg; effects at 260 mg/kg similar to those of 100 mg/kg silymarin Key words: Gynura nitida DC., acute toxicity, paracetamol, antioxidant, hepatoprotective effect hóa, bảo vệ gan Kim thất láng ĐẶT VẤNĐỀ hạn chế Từ sở trên, đề tài thực Gan dễ bị ảnh hưởng chất độc nên bệnh “Khảo sát độc tính cấp đường uống gan đa dạng phức tạp Xu hướng điều trị tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan Kim thất láng (Gynura nitida DC.)” bệnh gan sử dụng thuốc từ dược liệu nhờ ưu điểm sử dụng lâu dài, an toàn ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Gần đây, Kim thất láng (Gynura nitida DC., Asteraceae) thường gọi Rau rừng, người dân ưa thích phân phối siêu thị nhiều tỉnh Việt Nam(5,11) Một số báo cáo cho thấy lồi chi Gynura có tác dụng kháng viêm, chống oxy hóa G procumbens sử dụng dân gian Thái Lan trị viêm chỗ, thấp khớp, bệnh virus(1,6) Dịch chiết ether G bicolor ngăn cản hoạt động NF-κB, ức chế sản xuất NO, PGE2, giảm đáp ứng viêm tế bào RAW 267.7(16) Dịch chiết ethyl acetat G bicolor chứa hợp chất phenol có hoạt tính chống oxy hóa mạnh(16) G procumbens thể khả khử DPPH tương ứng với tổng lượng phenolic theo thứ tự dịch chiết methanol > ethanol > nước; khả ức chế CYP3A4, CYP1A2 tương ứng với lượng flavonoid: dịch chiết ethanol > methanol > nước(1) Theo Wan cộng (2014), dịch chiết từ G formosana có khả chống oxy hóa, khử gốc tự phụ thuộc lượng hợp chất phenolic flavonoid nhiệt độ khác nhau(15) Tuy nhiên, báo cáo tính an tồn tác động chống oxy Mẫu thử 648 Phần mặt đất Kim thất láng thu hái Buôn Ma Thuột, Đắk Lắk vào tháng 10/2016, định danh, cung cấp PGS.TS Bùi Mỹ Linh, Trường Đại học Buôn Ma Thuột Hóa chất 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), acid ascorbic, MDA chuẩn, GSH chuẩn, acid thiobarbituric (Sigma-Aldrich, Mỹ); paracetamol (Sanofi-Aventis, Việt Nam); thuốc thử FolinCiocalteu, methanol, acid tricloroacetic (TCA), Tris-HCl (Merck, Đức), silymarin (viên Légalon®, số lơ: B1600984, ngày sản xuất: 01/4/2016; hạn dùng: 31/3/2021, Madaus GmbH, Đức), formalin, NaCl, KCl (Guangdong Guanghua, Trung Quốc) Động vật nghiên cứu Chuột nhắt Swiss albino đực cái, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 22-25 g, Viện Vaccin sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp Chuột khoẻ mạnh, nuôi ổn định ngày lồng 25x35x15 cm (6 chuột/lồng), cung cấp thức ăn, nước uống đầy đủ Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Phương pháp nghiên cứu Chiết xuất dược liệu Cao chiết nóng theo tỷ lệ g bột dược liệu với 10 ml dung môi (nước, cồn 50%, 70%, 96% dung môi tiềm năng) 90 oC, chiết lần, 30 phút/lần; dịch chiết bốc dung môi bếp cách thủy 50 oC cô giảm áp thu hồi dung môi, thu cao tồn phần, hút ẩm đến khối lượng khơng đổi (trong bình hút ẩm) Khảo sát hoạt tính chống oxy hố in vitro phương pháp DPPH(14) Hoạt tính chống oxy hóa mẫu tỷ lệ thuận với giảm cường độ màu DPPH xác định cách đo OD 517 nm Kết tính theo cơng thức: HTCO (%) = [(ODchứng ODthử)/ ODchứng] × 100 Mẫu chứng (có DPPH, khơng có mẫu thử) acid ascorbic tiến hành song song Xác định EC50 (nồng độ có HTCO 50%) phần mềm Excel 2010 Khảo sát chất lượng cao toàn phần tiềm Dựa vào hoạt tính chống oxy hóa in vitro 04 cao, xác định dung môi tiềm năng, chiết cao tiềm Độ tinh khiết (độ ẩm, độ tro tồn phần, độ tro khơng tan acid) cao tiềm xác định theo phụ lục tương ứng Dược điển Việt Nam V(2) Hợp chất polyphenol cao tiềm định lượng phương pháp Folin - Ciocalteu sử dụng chất chuẩn pyrogallol(2,12) Khảo sát độc tính cấp đường uống chuột nhắt Thực theo “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu” Bộ Y tế ban hành theo định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27/10/2015(3) Chuột (50% đực, 50% cái) nhịn đói 12 giờ, cho uống liều cao thử điều kiện ổn định, quan sát 72 Giai đoạn sơ xác định liều lớn không làm chết (LD0) liều tối thiểu gây chết 100% chuột (LD100) Sau đó, chia chuột làm lơ (10 con/lô), chia liều lô Chuyên Đề Dược Nghiên cứu Y học theo cấp số cộng khoảng từ LD0 - LD100 Theo dõi chuột 72 giờ, ghi nhận biểu độc (cử động tổng quát, hành vi, trạng thái lông, ăn uống, tiêu tiểu…), số chuột chết/sống, lập bảng số liệu, tính LD50 Số lượng thực tế Số Tổng Số chết sống số (1) (2) (3) (4) Liều Số chết (5) Số lượng tích lũy Số % Tổng số sống chết (6) (7) (8) LD50 tính theo phương pháp Behrens: LD50 = D1 + [(50-a) x d]/(b-a) Trong đó: D1: liều có % chết sát 50%; a: % chết sát 50%; b: % chết sát 50%; d: khoảng cách liều có % chết sát 50% sát 50% Tính sai số chuẩn LD50: Vẽ đồ thị biểu diễn % chết tích lũy theo liều, xác định LD16 LD84 Sai số chuẩn LD50 tính theo cơng thức: , với s = (LD84 - LD16)/2 phân phối chuẩn; số Behrens k = 0,66; d: bước nhảy liều liều gần LD50; n: số chuột trung bình nhóm Nếu sau 72 giờ, chuột khơng có dấu hiệu bất thường chết, theo dõi tiếp 14 ngày Chuột chết thời gian quan sát, mổ xác để xem nguyên nhân chết Những chuột sống sau 14 ngày mổ để xem quan bên có bất thường khơng Khảo sát tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan chuột nhắt(9,10) Chuột chia ngẫu nhiên thành lô (n = 6): lô (sinh lý) lô (chứng bệnh): uống nước cất, lô (đối chiếu): uống silymarin 100 mg/kg, lô 4, 5: uống cao thử với liều 130 260 mg/kg; uống lần/ngày vào buổi sáng, thể tích 10 ml/kg, liên tục ngày Ngày thứ 7, sau cho chuột uống nước cất, cao thử silymarin, gây độc gan cho chuột (trừ lô 1) cách cho uống paracetamol liều 400 mg/kg Sau cho uống paracetamol, gây mê chuột đá CO2, mổ lấy máu tim đo hoạt tính ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase) phương pháp đo động học enzym; tách gan, quan sát đại thể, 649 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học ghi trọng lượng Một phần gan ngâm formol 10% để nhuộm hematoxylin-eosin (HE), phân tích vi thể; phần lại để định lượng MDA, GSH Định lượng malonyl dialdehyd (MDA), glutathion (GSH) gan: phần gan nghiền đồng thể KCl 1,15% (tỉ lệ 1g:10 ml) 0-4°C Lấy ml dịch đồng thể, thêm ml TrisHCl ủ 60 phút 37°C; thêm ml TCA 10%, ly tâm 15 phút 10000 rpm 4°C; lấy ml dịch phản ứng với ml acid thiobarbituric 0,8% hóa in vitro cao nồng độ 1000 µg/ml 20,89%, 48,21%, 73,62% 10,05% Từ đó, khảo sát hoạt tính chống oxy nồng độ khác cao cồn 50% để xác định EC50 so với chất acid ascorbic Dựa theo phương trình tuyến tính nồng độ hoạt tính chống oxy hóa cao Kim thất láng (y = 0,0543x + 16,593, R² = 0,9934) chất đối chứng acid ascorbic (y = 6,9411x - 0,4636, R² = 0,9936), xác định EC50 cao cồn 50% acid ascorbic 615,23 7,27 µg/ml Tris-HCl ủ 60 phút 37°C; thêm ml TCA 10%, Từ đó, tiến hành chiết cao tiềm với cồn 50% có hiệu suất chiết 26,2%, thu cao đặc, màu xanh đen đậm, có mùi thơm đặc trưng dược liệu ly tâm 15 phút, 10000 rpm 4oC; lấy ml dịch Chất lượng cao cồn 50% 100°C 15 phút, đo OD 532 nm để định lượng MDA Lấy ml dịch đồng thể, thêm ml phản ứng với 1,8 ml đệm phosphat-EDTA, Cao có độ ẩm trung bình 10,8%, độ tro tồn 0,2 ml thuốc thử Ellman, ủ nhiệt độ phòng phần trung bình 8,8%, độ tro khơng tan phút, đo OD 412 nm để định lượng GSH Hàm acid trung bình 0,6% Cao chứa nhóm hợp chất lượng MDA GSH (nmol/ml dịch đồng thể) polyphenol với hàm lượng polyphenol tồn tính theo phương trình hồi quy phần theo phương pháp Folin-Ciocalteu 85 mg MDA/GSH chuẩn Từ đó, xác định hàm lượng pyrogallol/g cao MDA GSH (nmol/g protein) theo công thức: C = Cnmol/ml × 1000/Cprotein; Cprotein xác định phương pháp Bradford dựa vào đường cong chuẩn độ albumin huyết bò (BSA)(4) Phân tích kết xử lý số liệu thống kê Kết xử lý Excel, trình bày dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SEM), phân tích thống kê test Kruskal-Wallis Mann-Whitney (phần mềm SPSS 20.0) Sự khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 KẾTQUẢ Hiệu suất chiết hoạt tính chống oxy hóa cao tồn phần Hiệu suất chiết cao với 04 dung môi cồn 96%, cồn 70%, cồn 50% nước 8,13%, 18,67%, 25,93% 22,93% Hoạt tính chống oxy 650 Độc tính cấp đường uống chuột nhắt cao cồn 50% từ Kim thất láng Cho chuột uống đồng lượng cao thử nồng độ tối đa phân tán nước cất qua kim 1500 mg/ml, thể tích cho chuột uống 20 ml/kg (tương đương 30 g cao/kg) Quan sát thấy chuột giảm di chuyển, thở nhanh 2-3 phút Sau phút, chuột co thắt thành bụng kéo dài 30 phút Khoảng từ 30 - 60 phút, 20% (2/10) chuột co giật chết, số chuột lại di chuyển, ăn cám uống nước bình thường Sau 72 giờ, 60% (6/10) chuột chết Tiến hành giảm liều cao thử, kết cho thấy liều cao không gây chết chuột (LD0) 14 g cao/kg Tiến hành xác định LD50: Số lượng chuột chết sống lô sau 72 trình bày Bảng Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Bảng 1: Số lượng chuột chết/sống lô uống cao Kim thất láng Liều (g/kg) Số lượng chuột thực Số lượng chuột tích lũy tế Số Số Tổng Số Số Tổng % chết chết sống số chết sống số 14 10 10 34 34 18 10 24 26 7,69 22 10 16 21 23,81 26 5 10 10 19 52,63 30 10 16 20 80,00 Giá trị LD50 xác định theo phương pháp Behrens: LD50 = D1 + [(50-a) x d]/(b-a) = 22 + [(50 23,81) x 4]/(52,63 - 23,81) = 25,64 mg/kg Đồ thị biểu diễn tỷ lệ phần trăm chết tích lũy (%) theo liều dùng Hình Nghiên cứu Y học Tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan in vivo cao cồn 50% từ Kim thất láng Liều dùng thử nghiệm sinh lý (Ds) chuột nhắt khơng vượt q 1/10 LD50(5) Do đó, đề tài chọn liều cho uống cao cồn 50% 130 mg/kg 260 mg cao/kg (tương ứng 1/200 1/100 LD50, tương đương 500 mg 1000 mg bột dược liệu khơ/kg) để khảo sát tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan chuột nhắt gây tổn thương gan paracetamol Tác động lên hoạt tính enzym gan Tác động cao Kim thất láng lên hoạt tính enzym AST, ALT trình bày Bảng Bảng 2: Hoạt tính AST, ALT lơ chuột thử nghiệm Lô (n = 6) Sinh lý Chứng bệnh Silymarin 100 mg/kg Cao thử liều 130 mg/kg Cao thử liều 260 mg/kg AST (U/L) 123,78 ± 6,92 *** 5975,22 ± 292,76 ALT (U/L) 62,78 ± 4,61 *** 9910,62 ± 446,31 ***## 4834,17 ± 1222,15 ***## 7508,58 ± 548,42 ***## 3965,93 ± 719,95 2449,82 ± 635,53 4166,92 ± 144,96 2448,63 ± 459,07 ***## ***## ***## *** p < 0,001 so với lô sinh lý, ##p < 0,01 so với lô chứng bệnh Hình 1: Đồ thị biểu diễn tỷ lệ chết tích lũy (%) theo liều uống cao Kim thất láng Từ đồ thị, xác định LD16 = 16,07 g/kg LD84 = 30,67 g/kg Phân phối chuẩn s = (LD84 - LD16)/2 = (30,67 – 16,07)/2 = 7,3 Sai số chuẩn LD50 tính theo cơng thức: Es k s d n 0 , 66 x ,3 x / 10 , 39 Vậy LD50 cao cồn 50% từ Kim thất láng 25,64 ± 1,39 (g/kg) Chuột chết thử nghiệm chuột sống sau 14 ngày mổ, quan sát đại thể cho thấy khơng có thay đổi đại thể tất chuột thử nghiệm Chuyên Đề Dược Hoạt tính AST, ALT lơ chứng bệnh cao lô sinh lý (p < 0,001; AST tăng 48,3 lần, ALT tăng 157,9 lần) Khi dự phòng tổn thương gan cách cho chuột uống silymarin 100 mg/kg cao thử liều 130 260 mg/kg, hoạt tính AST, ALT chuột giảm có ý nghĩa so với lơ chứng bệnh (p < 0,01) Cụ thể: lô silymarin, AST giảm 2,43 lần ALT giảm 2,05 lần; lô cao thử liều 130 260 mg/kg: AST giảm 1,43 2,44 lần; ALT giảm 1,32 2,50 lần Tác dụng cao Kim thất láng liều 260 mg/kg khác biệt khơng có ý nghĩa so với silymarin 100 mg/kg (p > 0,05) Giữa liều cao thử, liều 260 mg/kg giảm hoạt tính ALT tốt liều 130 mg/kg (p < 0,05; thấp 1,9 lần); hoạt tính AST chuột uống cao thử liều 130 mg/kg cao gấp 1,7 lần so với liều 260 mg/kg khác biệt khơng có ý nghĩa (p > 0,05); số lượng chuột thử nghiệm ít, khoảng dao động chuột lô rộng 651 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Tác động lên hàm lượng MDA, GSH gan Từ phương trình tuyến tính protein (y = 0,1704x + 0,2541, R2 = 0,9553), MDA chuẩn (y = 0,0356x + 0,0912, R² = 0,9936) GSH chuẩn (y = 0,0007x + 0,1431, R² = 0,9951) suy hàm lượng MDA GSH gan (Bảng 3) Bảng 3: Hàm lượng MDA, GSH gan lô chuột thử nghiệm Lô (n = 6) Sinh lý Chứng bệnh Silymarin liều 100 mg/kg Cao thử liều 130 mg/kg Cao thử liều 260 mg/kg nmol MDA/g protein 2,96 ± 0,27 ** 14,33 ± 2,09 ## 2,63 ± 0,29 nmol GSH/g protein ## 3,92 ± 0,34 ## 2,39 ± 0,37 972,93 ± 39,28 ** 153,61 ± 15,09 *## 685,81 ± 102,28 **## 287,26 ± 26,94 ## 916,20 ± 85,65 * p < 0,05 **p < 0,01 so với lô sinh lý ## p < 0,01 so với lô chứng bệnh Hàm lượng MDA lô chứng bệnh tăng 4,84 lần so với lô sinh lý (p < 0,01) Lô silymarin 100 mg/kg lô thử có hàm lượng MDA gan thấp lơ chứng bệnh (p < 0,01), cụ thể MDA lô giảm 5,45; 3,66 5,60 lần khơng khác biệt có ý nghĩa so với sinh lý (p > 0,05) Ngoài ra, hàm lượng MDA lơ cao liều 260 mg/kg thấp có ý nghĩa so với liều 130 mg/kg (p < 0,05) không khác biệt so với silymarin 100 mg/kg (p > 0,05) Về hàm lượng GSH gan, lô chứng bệnh giảm 6,33 lần so với lô sinh lý (p < 0,01) Lượng GSH lô silymarin 100 mg/kg, lô cao Kim thất láng liều 130 260 mg/kg tăng 4,46; 1,87 5,96 lần so với lô chứng bệnh (p < 0,01) Hàm lượng GSH lô silymarin lô cao liều 130 mg/kg khoảng 70% 30% lô sinh lý (p < 0,05) Ở lô cao thử liều 260 mg/kg, GSH gan phục hồi gần trở mức sinh lý (khoảng 94%, p > 0,05), khác biệt khơng có ý nghĩa so với silymarin 100 mg/kg (p > 0,05) Giữa 652 liều cao thử, lượng GSH lô uống liều 260 mg/kg cao lô 130 mg/kg (p < 0,01) Tác động lên đại thể, vi thể gan Về đại thể, tất chuột sinh lý có gan màu đỏ, khơng phù mề, mặt nhẵn mềm mại Chuột chứng bệnh có gan bạc màu, bề mặt có chấm trắng sung huyết Đa số chuột lô cao thử lơ silymarin có gan màu đỏ, bề mặt nhẵn, không nốt trắng sung huyết Kết phân tích vi phẫu gan chuột lơ trình bày Bảng Hình Bảng 4: Kết phân tích vi phẫu gan chuột thử nghiệm Lơ (n=6) Kết phân tích vi phẫu gan 6/6 mẫu gan bình thường, khơng viêm hay hoại tử 4/6 mẫu gan viêm mức độ 8/18 (hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm 6/6 tiểu Chứng bệnh thùy gan: 2/4); 2/6 mẫu gan viêm mức độ 6/18 (hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm 4/6 tiểu thùy gan: 2/4) 3/6 mẫu gan viêm mức độ 8/18 Silymarin 100 mg/kg 3/6 mẫu gan viêm mức độ 6/18 1/6 mẫu gan viêm mức độ 8/18; 1/6 mẫu gan viêm mức độ 7/18 (hoại tử quanh tĩnh mạch Cao Kim thất trung tâm 5/6 tiểu thùy gan: 2/4); 2/6 láng liều mẫu gan viêm mức độ 6/18; 1/6 mẫu gan 130 mg/kg viêm mức độ 4/18 (hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm 3/6 tiểu thùy gan: 1/4); 1/6 mẫu gan viêm mức độ 3/18 Cao Kim thất 3/6 mẫu gan viêm mức độ 7/18 láng liều 3/6 mẫu gan viêm mức độ 6/18 260 mg/kg Sinh lý Kết cho thấy lô sinh lý không chuột xuất tình trạng viêm gan Với lơ chứng bệnh, xuất tình trạng viêm gan cấp thể qua bất thường đại thể vi thể gan (hoại tử nặng tế bào gan) Khi cho chuột uống cao cồn 50% từ Kim thất láng liều 130 260 mg/kg mẫu đối chứng silymarin 100 mg/kg, kết cho thấy có giảm tổn thương gan paracetamol gây rõ rệt Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm Nghiên cứu Y học Hoại tử tiểu thùy gan Hình 2: Vi thể cấu trúc tế bào gan tác dụng dược lý loài thuộc chi Gynura BÀNLUẬN Từ hiệu suất chiết hoạt tính chống oxy hóa in vitro khảo sát phương pháp DPPH, cồn 50% chọn dung môi tiềm để chiết khối lượng lớn cao Kim thất láng Cao cồn 50% thể hoạt tính chống oxy hóa in vitro với EC50 615,23 mg/ml, hàm lượng polyphenol toàn khả chống oxy hóa, cải thiện tăng hoạt tính AST, ALT dịch chiết G formosana chuột cống bị viêm gan nhiễm mỡ không rượu cao chiết G procumbens thỏ bị tổn thương gan chế độ ăn giàu cholesterol(7,8,14,15) KẾTLUẬN phần tương ứng 85 mg pyrogallol/g cao, phù Cao cồn 50% từ Kim thất láng thể hợp với số báo cáo hàm lượng độc tính cấp đường uống với LD50 25,64 ± 1,39 polyphenol G procumbens khoảng 70,7 mg g/kg Cho chuột nhắt uống cao liều 130 260 GAE/g cao số lồi chi Gynura có hoạt tính mg/kg ngày liên tiếp thể tác động chống oxy hóa theo chế bắt gốc tự chống oxy hóa, bảo vệ gan, giảm tổn thương gan (1) Đề tài khảo sát khả chống oxy hóa, bảo paracetamol gây ra; liều 260 mg/kg vệ gan in vivo cao cồn 50% từ Kim thất tác động tốt liều 130 mg/kg tương tự tác láng chuột nhắt gây tổn thương gan động silymarin 100 mg/kg Đề tài mở triển paracetamol báo cáo với liều 200 - 400 vọng nghiên cứu phát triển sản phẩm từ Kim mg/kg gây độc gan vòng 6-24 giờ(10) thất láng ứng dụng phòng và/hoặc điều trị Kết cho thấy paracetamol làm tăng AST, bệnh gan ALT, MDA giảm GSH tương tự báo cáo TÀILIỆUTHAMKHẢO Madkour cộng (2013) Cao chiết Kim thất (9) láng cho uống liều 130 260 mg/kg thể tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan; giúp giảm hoạt tính AST, ALT, hàm lượng MDA tăng GSH, đặc biệt với liều 260 mg/kg thể tác dụng tương tự silymarin 100 mg/kg, giúp giá trị MDA GSH trở gần với mức sinh lý Tác dụng bảo vệ gan cao Kim thất láng khẳng định giảm tổn thương gan lô điều trị so với lô chứng bệnh phân tích vi thể cấu trúc gan Tác động chống oxy hóa, bảo vệ Afandi A, et al (2014), “Antioxidant properties of Gynura procumbens extracts and their inhibitory effects on two major human recombinant cytochrome P450s using a high throughput luminescence assay”, Asian journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 7(5), pp 36-41 Bộ Y tế (2010), Dược điển Việt Nam 5, NXB Y học, PL 203, 204, 205 Bộ Y tế (2015), Quyết định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27/10/2015, Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu Bradford MM (1976), “A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding”, Analytical Biochemistry, 72, pp 248 - 254 Đỗ Trung Đàm (2014), Phương pháp xác định độc tính thuốc, NXB Y học, Hà Nội, tr.15-157, 199-215 gan Kim thất láng phù hợp với báo cáo Chuyên Đề Dược 653 Nghiên cứu Y học 10 11 12 13 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Iskander M, et al (2002), “Antiinflammatory screening of the medical plant Gynura procumbens”, Plant Foods for Human Nutrition, 57(3-4), pp 233-244 Ismail MAH, et al (2016), “Effects of Gynura procumbens extract on liver function test of hypercholesterolemia induced rabbits”, 78(6-7), pp 49-54 Ma J (2017), “Antioxidant and anti-inflammatory activities of ethyl acetate extract of Gynura formosana leaves”, Experimental and therapeutic medicine, 14, pp 2303-2309 Madkour FF, Abdel-Daim MM (2013), “Hepatoprotective and antioxidant activity of Dunaliella salina in paracetamol-induced acute toxicity in rats”, Indian journal of Pharmaceutical Sciences, 75(6), pp 642-648 Maes M, et al (2016), “Experimental models of hepatotoxicity related to acute liver failure”, Toxicology and Applied Pharmacology, 290, pp 86-97 Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, III, Nhà xuất trẻ, tr 230-233 Singleton VL, et al (1999), “Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of FolinCiocalteu reagent”, Methods Enzymol, 299, pp 152-178 Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học 654 14 Wan C, et al (2011), “Antioxidant activity and free radical-scavenging capacity of Gynura divaricate leaf extracts at different temperatures”, Pharmacognosy Magazine, 7(25), pp 40-45 15 Wan Y, et al (2014), “Therapeutical effect of Gynura formosana alcohol extract on non-alcoholic fatty liver disease in rats”, Global journal of Intergrated Chinese Medicine and Western Medicine, 2(2) 16 Wu C, et al (2013), “Antiinflammatory activity of Gynura bicolor ether extract through inhibits nuclear factor kappa B activation”, Journal of Traditional and Complementary Medicine, 3(1), pp 48-52 Ngày nhận báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2018 Ngày báo đăng: 15/03/2019 Chuyên Đề Dược ... chất độc nên bệnh Khảo sát độc tính cấp đường uống gan đa dạng phức tạp Xu hướng điều trị tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan Kim thất láng (Gynura nitida DC.)” bệnh gan sử dụng thuốc từ dược... thể tác động chống oxy hóa theo chế bắt gốc tự chống oxy hóa, bảo vệ gan, giảm tổn thương gan (1) Đề tài khảo sát khả chống oxy hóa, bảo paracetamol gây ra; liều 260 mg/kg vệ gan in vivo cao. .. với mức sinh lý Tác dụng bảo vệ gan cao Kim thất láng khẳng định giảm tổn thương gan lô điều trị so với lô chứng bệnh phân tích vi thể cấu trúc gan Tác động chống oxy hóa, bảo vệ Afandi A, et