Trong đề tài này với mục tiêu nhằm nghiên cứu tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan của sản phẩm Tai nấm vàng (TNV) - sản phẩm từ sự kết hợp bốn loại nấm linh chi, vân chi, thái dương và hầu thủ. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học TÁC ĐỘNG CHỐNG OXY HÓA, BẢO VỆ GAN CỦA CHẾ PHẨM TAI NẤM VÀNG Nguyễn Thị Thùy Linh*, Võ Phùng Nguyên* TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan sản phẩm Tai Nấm Vàng (TNV) – sản phẩm từ kết hợp bốn loại nấm Linh chi, Vân chi, Thái dương Hầu thủ Phương pháp: Tác động chống oxy hóa bảo vệ gan nghiên cứu mơ hình gây tổn thương gan chuột nhắt cấp tính CCl4 Chuột cho uống TNV dự phòng 14 ngày với liều 1,4 g/kg thể trọng x lần/ngày trước chuột gây viêm gan cấp tetraclorua carbon (CCl4) tiêm phúc mô 0,25%, 10 mL/Kg Các số sinh hóa ALT, AST, bilirubin huyết malondialdehyd (MDA), protein carbonyl (PC) mô xác định để đánh giá tác động TNV Giải phẫu bệnh học gan chuột xem xét Kết quả: CCl4 gây tăng men transaminase, bilirubin huyết thanh, MDA protein carbonyl mô gan chuột Các tác động bị giảm dùng trước TNV Các kết xét nghiệm mô bệnh học hỗ trợ thêm cho kết sinh hóa Kết luận: Tai Nấm Vàng có tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan chuột liều cho uống 1,4 g/kg thể trọng, lần/ngày 14 ngày Từ khóa: Tai nấm vàng TNV, Linh chi, Vân chi, Thái dương, Hầu thủ, chống oxy hóa, bảo vệ gan, malondialdehyde (MDA), protein carbonyl (PC), carbon tetraclorua (CCl4), chuột nhắt ANTIOXIDANT, HEPATOPROTECTIVE ACTIVITY OF “TAI NAM VANG” Nguyen Thi Thuy Linh, Vo Phung Nguyen * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 487 - 493 ABSTRACT Objective: Evaluate the antioxidant, hepatoprotective activity of TAI NAM VANG – a product of the combination of four mushrooms: Ganoderma lucidum (GL), Trametes versicolor (TV), Agaricus blazei (AB) and Hericium erinaceus (HE) Method: Antioxidant and hepatoprotective activity of TNV were studied on the model of acute carbon tetraclorua – induced liver damage in mice Mice were orally administered TNV at the dose 1.4 g/kg b.w, twice a day for or 14 days as prophylaxis treatment before given intraperitoneally injection of single dose CCl4 0.25%, 10 mL/Kg Biochemical parameters such as serum ALT, AST, bilirubin; liver tissue malondialdehyde (MDA) and protein carbonyl (PC) were measured to evaluate antioxidant and hepatoprotective activity of TNV Liver sections of mice were also histopathological examined Result: CCl4 treatment induced an increase in serum transaminase, bilirubin and tissue MDA, PC in mice These effects were reduced by pretreatment with TNV These biochemical results were supported by histopathological results Conclusion: The study confirms the antioxidant and hepatoprotective activity of TNV given 1,4 g/kg twice for and 14 days in mice Keywords: Ganoderma lucidum (GL), Trametes versicolor (TV), Agaricus blazei (AB) and Hericium *Khoa Dược, ĐH Y Dược Tp Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: DS Nguyễn Thị Thùy Linh ĐT: 0984454133 Chuyên Đề Dược Khoa Email: linhviky@yahoo.com 487 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 erinaceus (HE), antioxidant, hepatoprotective, malondialdehyde (MDA), protein carbonyl (PC), carbon tetraclorua (CCl4), mice ĐẶT VẤN ĐỀ Oxy hóa q trình sinh lý bình thường thể, có cân gốc tự sinh trình yếu tố bảo vệ nội sinh nguyên nhân dẫn đến nhiều bệnh khác như: bệnh thần kinh, ung thư, huyết áp,… Chính vậy, việc tìm kiếm thêm nguồn chất chống oxy hóa thu hút quan tâm nhiều nhà nghiên cứu Cho tới có nhiều dược liệu chứng minh có khả phòng ngừa, ngăn chặn oxy hóa, bảo vệ gan sữa ong chúa, trà xanh, atiso, loại nấm Linh chi, Vân chi, Thái dương, Hầu thủ…(2,5) Tai Nấm Vàng (TNV) chế phẩm bao gồm loại nấm quý: Linh chi, Vân chi, Thái dương, Hầu thủ hứa hẹn chế phẩm có nhiều cơng dụng q, có khả chống oxy hóa bảo vệ gan Việc nghiên cứu tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan viên TNV góp phần làm rõ chế tác động thuốc đóng góp cho phát triển y học dân tộc nhu cầu sử dụng nhân dân ĐỐI TƯỢNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Động vật thử nghiệm: Chuột nhắt trắng (đực) giống Swiss albino, trọng lượng 22 g ± g, viện vắc-xin sinh phẩm Nha trang cung cấp Chuột nuôi ổn định hộp nhựa (28x25x15cm) ngày trước thử nghiệm cung cấp đầy đủ thức ăn nước uống Nguyên liệu: Chế phẩm viên nang Tai Nấm Vàng công ty trách nhiệm hữu hạn Giai Cảnh sản xuất cung cấp với thành phần: Cao khô nấm Thái Dương 17,57 mg Cao khô nấm Vân Chi 17,57 mg Cao khô nấm Hầu Thủ 17,57 mg Cao khô nấm Linh Chi 122,99 mg 488 Tá dược: Magnesi carbonat nhẹ, Aerosil, bột Talc, Magnestearat vừa đủ 460 mg Phương pháp nghiên cứu Khảo sát khả bảo vệ viên TNV sử dụng uống dự phòng ngày 14 ngày liều 1,4 g/kg x lần/ngày trước gây độc gan chuột cách tiêm phúc mô CCl4 0,25% 10 mL/Kg pha dầu olive Ở thử nghiệm chuột chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 con, gồm lô trắng (uống nước cất ED); lô chứng (uống nước cất, tiêm olive); lô uống TNV, tiêm olive; lô gây độc (uống nước cất ED, tiêm CCl4) lô thử (uống TNV, tiêm CCl4) Đánh giá Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO): đánh giá thơng qua hàm lượng malondialdehyde (MDA) protein carbonyl (PC) mô gan Tác động bảo vệ gan khảo sát mức độ mơ học thơng qua số sinh hóa gan men gan ALT, AST bilirubin huyết Xác định hàm lượng MDA MDA sản phẩm cuối q trình peroxy hóa lipid màng tế bào, phân tử MDA phản ứng với hai phân tử thiobarbituric môi trường pH 2-3, nhiệt độ 90100 oC 60 phút tạo phức màu hồng hấp thu cực đại bước sóng 532 nm Đo cường độ màu phức suy lượng MDA có mẫu Nếu lượng MDA mẫu thử giảm có ý nghĩa thống kê so với mẫu gây mơ hình, mẫu thử xác định có hoạt tính chống oxy hóa (2) Tiến hành: Mơ gan nghiền tạo dịch đồng thể 5% dung dịch phosphat buffer saline (PBS, pH 7,4) Lấy 200 µl dịch sau ly tâm (9500 vòng/phút x15 phút) thêm 500 µl nước cất, 100 µl SDS 10% ủ 37 oC 30 phút Thêm 500 µl HCl 0,1N, lắc kỹ 15 phút Ly tâm lấy ml dịch, thêm vào 250 µl TBA 0,5% Đun cách thủy 95 oC 60 phút để nguội đến nhiệt độ phòng Đo quang Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 bước sóng 532 nm Tất giai đoạn từ lấy mẫu gan, cân nghiền mẫu tiến hành nhiệt độ 0-4 0C Xác định hàm lượng protein carbonyl Protein carbonyl, sản phẩm tạo q trình oxy hóa protein, cho phản ứng với 2,4-dinitrophenylhydrazin tạo tủa Hòa tan tủa guanidinchlorid cho dung dịch màu vàng, đo quang bước sóng 370 nm (3) Tiến hành: nghiền mẫu gan tạo dịch đồng thể 6,7% dung dịch đệm PBS pH 6,5 Ly tâm lấy dịch Tất giai đoạn từ lấy mẫu, cân nghiền mẫu tiến hành nhiệt độ 0-4 0C Bảng Hỗn hợp phản ứng định lượng protein carbonyl Thành phần 100 mM PBS (pH 7,2) 80mM FeSO4.7H2O mM FeCl3.6H2O M KCl 0,4 M MgCl2.2H2O Mẫu thử Nước cất Tổng cộng Ống chứng (μl) 320 20 20 20 20 200 120 720 Ống thử (μl) 320 20 20 20 20 200 120 720 Ủ hỗn hợp 30 oC 30 phút, cho vào hỗn hợp 720 µl TCA 20%, ly tâm lấy cắn Thêm vào ống chứng 720 µl HCl N, ống thử 720 µl 2,4- DNPH 0,2%, lắc nhẹ 60 phút Thêm vào mẫu 720 µl TCA 20%, vortex 10 giây, ly tâm (3000 vòng x 15 phút), lấy cắn Rửa cắn lần với 1,5 ml dung dịch ethanol/ethyl acetat (1:1), để khô Hòa tan 1,8 ml guanidinchloride Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học M, ly tâm, lấy dịch đo quang bước sóng 370 nm Xác định hàm lượng protein toàn phần (Phương pháp Bradford) Tiến hành: Phản ứng tạo màu protein Coomassie(1) Pha mẫu đo quang theo bảng bước sóng 595 nm Bảng Thành phần hỗn hợp phản ứng định lượng protein toàn phần Thành phần Nước Coomassie Dịch gan Tổng cộng Ống trắng 500 μl 500 μl μl 1ml Ống thử 498 μl 500 μl μl 1ml Khảo sát mô học: Mẫu mô gan lô xử lý nhuộm theo phương pháp Hematoxylin-eosin Bộ môn giải phẫu bệnh - Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh Xét nghiệm sinh hóa: Mẫu máu đựng ống khơng có chất chống đơng dùng để xét nghiệm thơng số thuộc chức gan phòng xét nghiệm sinh hóa - Bệnh viện Chợ Rẫy, TP Hồ Chí Minh máy xét nghiệm sinh hố Hitachi 717, thuốc thử hãng Biolabo (Pháp) Phân tích thống kê: Dữ liệu trình bày dạng Mean (Số trung bình) ± SEM (sai số chuẩn số trung bình) Sự khác biệt nhóm phân tích phương pháp Mann-Whitney với phần mềm Minitab 14 P