Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm trình bày về cây đinh lăng mang nhiều tác dụng tiêu biểu của họ nhân sâm. Trong đó lá Đinh lăng có thể thu hái quanh năm. Do đó cần nghiên cứu các tác dụng dược lý để tăng giá trị sử dụng của nó. Đề tài này tiến hành nhằn xác định tác dụng chống oxy hóa và hạ cholesterol của dịch chiết lá đinh lăng trên chuột nhắt trắng.
NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG OXY HOÁ VÀ HẠ CHOLESTEROL CỦA CAO TOÀN PHẦN CHIẾT XUẤT TỪ LÁ ĐINH LĂNG POLYSCIAS FRUSTICOSA L, HARMS Nguyễn Trần Châu Đỗ Mai Anh∗ TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Cây Đinh lăng mang nhiều tác dụng tiêu biểu họ Nhân Sâm Trong ñó Đinh lăng thu hái quanh năm Do cần nghiên cứu tác dụng dược lý ñể tăng giá trị sử dụng Đề tài tiến hành nhằn xác ñịnh tác dụng chống oxy hóa hạ cholesterol dịch chiết Đinh lăng chuột nhắt trắng Phương pháp - Phương tiện: Nghiên cứu thực nghiệm thực Phòng thí nghiệm Khoa Y Học Cổ Truyền-Đại học Y Dược TP.HCM chuột nhắt trắng nhằm khảo sát tác dụng chống oxy hóa mơ hình gây tăng hàm lượng MDA não gan chuột nhắt trắng CCl4 , ñồng thời ñánh giá tác dụng hạ cholesterol ñộng vật gây tăng cholesterol máu ñường uống Kết quả: Cao Đinh lăng liều 200mg/kg 500mg/kg làm giảm hàm lượng MDA não gan chuột nhắt sau ñược gây tăng CCl4 Và làm giảm nồng ñộ cholesterol máu so với lô không ñiều trị Đạt ý nghĩa thống kê mức 95% so với nhóm chứng Trong liều 200mg/kg thể tác dụng cao Kết luận: Cao Đinh lăng liều 200mg/kg có tác dụng chống oxy hóa hạ cholesterol chuột nhắt cao so với liều 500mg/kg Từ khóa: Đinh lăng, chống oxy hóa, hạ cholesterol ABSTRACT STUDIES ON ANTIOXIDANT AND LOWERING CHOLESTEROL EFFECTS OF EXTRACT FROM POLYSCIAS FRUCTICOSA L HARMS LEAVES ON MICE Nguyen Tran Chau Đo Mai Anh Background:Based on the specific effects of Polyscias Fructicosa which is equivalent to the species of Araliaceae family as well as its leaf easy to use whole the year, the present study was designed to evaluate the antioxidant activity and lowering cholesterol effects of extract from Polyscias fructicosa leaves on mice in oder to increase its usable value of Polyscias fructicosa Method: This experimental study was carried out in Pharmacological Laboratory of Faculty of Traditional Medicine-University of Medicine and Pharmacy in HCM city on mice in order to evaluate antioxidant effect based on the level of malonyl dialdehycle (MDA) in mouse’s brain and liver as well as lowering cholesterol effects on the mice were given 150mg cholesterol/kg in ten days Results: The Polyscias fructicosa extracts with dose of 200mg/kg and 500mg/kg decreased the level of mouse’s brain and liver as well as cholesterolemia which was caused by CCl4 and cholesterol administration.There were the stastitically significant difference between the study and control group as well as the effect between the dose of 200mg/kg and dose of 500mg/kg Conclusion: The extracts from Polyscias fructicosa leaves with dose of 200mg/kg has antioxidant and the lowering cholesterol activity on mice much more than dose of 500mg/kg Key words: Polyscias fructicosa, antioxidant activity, lowering cholesterol ĐẶT VẤN ĐỀ Gốc tự nguyên nhân liên quan đến nhiều chứng bệnh lão hóa sớm, chứng bệnh tim mạch, chứng viêm…[7], Trong Y học Cổ truyền Việt Nam, nhiều thảo dược có chứa flavonoid, anthocyanosid, tanin dùng làm thức ăn nước uống hàng ngày, có khả chống oxy hóa, Đinh lăng thuốc có nhiều tác dung tiêu biểu họ Nhân Sâm [3],[4],[9]), Có đặc điểm dễ trồng, dễ sử dụng, Lá Đinh lăng thu hái quanh năm, Cần nghiên cứu tác dụng dược lý ñể nâng cao giá trị sử dụng Đinh lăng, MỤC TIÊU Khảo sát tác dụng chống oxy hóa hạ cholesterol cao tồn phần chiết xuất từ Đinh lăng chuột nhắt trắng, PHƯƠNG TIỆN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương tiện Nguyên liệu: Lá thu hái từ Đinh lăng (Polyscias fruticosa) trồng vườn Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM Súc vật thử nghiệm: chuột nhắt trắng 20 ± 2g, mua Viện Pasteur Tp.HCM, ni điều kiện ổn định dinh dưỡng Phương tiện nghiên cứu: sử dụng trang thiết bị Phòng thí nghiệm Y Dược học cổ truyền - Khoa YHCT – ĐH Y Dược Tp.HCM, Hóa chất – thuốc thử: Đệm phosphate (pH 7,2) Dung dịch NaCl 0,9% Kali clorua (KCl) Acid Thiobarbituric (Merk, Germany) Acid Tricloacetic Đệm Tris HCl (Merk, Germany) Dầu oliu Cholesterol, U,S,P(Wilson Laboratories) Phương pháp nghiên cứu: Chiết xuất cao băng phương pháp ngấm kiệt Khảo sát tác dụng chống oxy hóa [8]: ∗ Khoa Y học Cổ Truyền – ĐH Y Dược Tp HCM Địa liên hệ: ThS Nguyễn Trần Châu Đỗ Mai Anh ĐT: 083.9077818 Email: maianh_3380@yahoo.com.vn 96 Súc vật thử nghiệm chia làm nhóm: * Nhóm bình thường (khơng tiêm CCl4): - Lơ đối chứng: cho chuột uống nước cất hàng ngày ngày, sau tiêm phúc mơ dung dịch dầu, Sau tiêm 24 giờ, tiến hành mổ lấy gan não ñể ñịnh lượng MDA, - Lô thử: chuột ñược uống cao thử nghiệm hàng ngày với liều 200mg/kg ngày, sau tiêm phúc mơ dung dịch dầu, Sau tiêm 24 giờ, tiến hành mổ lấy gan não để định lượng MDA, - Lơ đối chiếu: cho chuột uống Vitamin E hàng ngày với liều 1g/kg ngày, sau tiêm phúc mơ dung dịch dầu, Sau tiêm 24 giờ, tiến hành mổ lấy gan não để định lượng MDA, * Nhóm bệnh lý (tiêm CCl4): - Lơ đối chứng: cho chuột uống nước cất hàng ngày ngày, sau tiêm phúc mô dung dịch CCl4 5% pha dầu (0,5g/kg thể trọng), Sau tiêm 24 giờ, tiến hành mổ lấy gan não để định lượng MDA, - Lơ thử: chuột ñược uống cao thử nghiệm hàng ngày với liều 200mg/kg ngày, sau tiêm phúc mơ dung dịch CCl4 5% pha dầu, Sau tiêm 24 giờ, tiến hành mổ lấy gan não ñể ñịnh lượng MDA, - Lô ñối chiếu: cho chuột uống Vitamin E hàng ngày với liều 1g/kg ngày, sau tiêm phúc mơ dung dịch CCl4 5% pha dầu, Sau tiêm 24 giờ, tiến hành mổ lấy gan não ñể ñịnh lượng MDA, * Số chuột lơ: n = 10 Xác định hàm lượng MDA tổ chức gan hay não: Xác ñịnh hàm lượng MDA não: Tách não chuột nghiền ñồng thể dung dịch ñệm Phosphate theo tỉ lệ 1:10 nhiệt ñộ 0-50C, Lấy 1ml dung dịch ñồng thể thêm 1ml dung dịch ñệm Phosphate ủ 370C 15 phút, Sau đó, thêm vào 1ml acid Tricloacetic 10%, ly tâm lấy dịch cho phản ứng với 1ml acid Thiobarbituric 0,8% 1000C 15 phút đo màu bước sóng 532nm, Xác định hàm lượng MDA gan: Tách gan chuột nghiền ñồng thể dung dịch KCl 1,15% theo tỉ lệ 1:10 nhiệt ñộ 0-50C, Lấy 2ml dung dịch ñồng thể thêm 1ml ñệm Tris 25mM ủ 370C 60 phút, Sau đó, thêm vào 1ml acid Tricloacetic 10%, ly tâm lấy dịch cho phản ứng với 1ml acid Thiobarbituric 0,8% 1000C 15 phút đo màu bước sóng 532nm, Tính tốn kết quả: - Hàm lượng MDA mẫu thử (nmol/ml) ñược tính theo cơng thức: Cthử = (ODthử / ODchuẩn) ×Cchuẩn Trong đó: OD: mật độ quang C:hàm lượng MDA (nmol/ml) - Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO) tính theo công thức: HTCO (%) = [(CMDAchứng - CMDAthử ) / CMDAchứng] ×100, Khảo sát tác dụng hạ cholesterol [8]: Định lượng cholesterol máu chuột trước thí nghiệm, Cho chuột uống cholesterol 150mg/kg 10 ngày, Sau định lượng lại cholesterol, Chia chuột thành lơ: + Lơ đối chứng: uống nước cất, + Lô thử 1: uống cao Đinh lăng liều 200mg/kg, + Lô thử 2: uống cao Đinh lăng liều 500mg/kg, Cho chuột uống thuốc liên tục tháng, sau lấy máu định lượng lại cholesterol So sánh mức ñộ tăng cholesterol lơ, Nếu thuốc có tác dụng hạ cholesterol mức độ tăng cholesterol lơ thử thuốc thấp lơ đối chứng, Xác định hàm lượng cholesterol huyết chuột: máy xét nghiệm sinh hóa Bravo Plus Phòng thí nghiệm Y Dược học cổ truyền – ĐH Y Dược Tp HCM, Phương pháp xử lý thống kê số liệu thực nghiệm [1]: Dùng chương trình MS-Excel máy tính để: Loại giá trị bất thường; Xác định giá trị thống kê mơ tả M S; Phân tích Anova yếu tố; So sánh giá trị trung bình có liệu tương ứng cặp “t-Test: Paired Two Sample for Mean”; So sánh giá trị trung bình có phương sai khác “t-Test: Two Sample Assuming Unequal Variances”, Ký hiệu thống kê dùng bảng biểu: *, # :khác biệt có ý nghĩa thống kê với ñộ tin cậy 95%, KẾT QUẢ Tác dụng chống oxy hóa mẫu dựa hàm lượng MDA não chuột Bảng 1: Tác dụng chống oxy hóa mẫu nghiên cứu dựa hàm lượng MDA não chuột, Hàm lượng HTCO(% Lô Liều ) uống MDA (nmol/ml) (mg/kg) CCl4 - Đối chứng Cao Cao CCl4 + Đối chứng Cao 20,75 ± 2,41 200 500 200 20,1 ± 0,625 20,52 ± 0,925 # 25,75 ± 1,41 * 20,88 ± 0,39 18,91 97 Cao Đối chứng CCl4 - * 500 23,5 ± 1,37 20,75 ± 2,41 8,74 Vitamin E 1g/kg 19,5 ± 0,8 6,02 # CCl4 + Đối chứng 25,75 ± 1,41 * Vitamin E 1g/kg 19,9 ± 0,55 25,82 * P