Bài viết đề cập về: Rối loạn lipid máu là một trong những yếu tố khởi đầu cho quá trình hình thành và phát triển của xơ vữa động mạch, nguyên nhân hàng đầu làm tăng tỉ lệ tử vong của bệnh lý tim mạch. Trong nỗ lực tìm kiếm các giải pháp làm giảm nồng độ cholesterol máu của các chế phẩm từ dược liệu, đề tài tiến hành nghiên cứu tác dụng của cao chiết ngưu tất - đan sâm - tam thất trên chuột nhắt trắng tăng cholesterol ngoại sinh.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 TÁC DỤNG HẠ CHOLESTEROL MÁU CỦA CAO CHIẾT NGƯU TẤTĐAN SÂM- TAM THẤT TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG Nguyễn Thanh Tuấn*, Nguyễn Phương Dung** TĨM TẮT Tình hình - Mục đích nghiên cứu: Rối loạn lipid máu yếu tố khởi đầu cho trình hình thành phát triển xơ vữa động mạch, nguyên nhân hàng đầu làm tăng tỉ lệ tử vong bệnh lý tim mạch Trong nỗ lực tìm kiếm giải pháp làm giảm nồng độ cholesterol máu chế phẩm từ dược liệu, tiến hành nghiên cứu tác dụng cao chiết Ngưu tất- Đan sâm- Tam thất (NT – ĐS – TT) chuột nhắt trắng tăng cholesterol ngoại sinh Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm bệnh chứng mơ hình tăng cholesterol ngoại sinh Đối tượng nghiên cứu: Cao NT-ĐS-TT chiết ethanol 70% Súc vật nghiên cứu chuột nhắt trắng (Mus musculus var albino), trọng lượng trung bình 20 ± 2g mua Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh có nồng độ cholesterol > 200mg% sau gây mơ hình Phương tiện đánh giá: Nồng độ cholesterol máu sau tuần gây mơ hình Dùng phép kiểm t-Student, phép kiểm Anova yếu tố để xử lý thống kê số liệu thực nghiệm Kết chính: Sau tuần uống cao NT-ĐS-TT (20 g/kg 40 g/kg thể trọng), nồng độ cholesterol giảm 49,70% 51,71% tương đương lô chuột uống cao NT (20g/kg), cao ĐS (20g/kg) cao TT (20g/kg) Cao NT-ĐS-TT chưa thể độc tính cấp liều cao cho chuột uống (170,32g cao khô kiệt/kg) Cao NTĐS-TT (uống, 40g dược liệu khô/kg) không làm thay đổi số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, Hb, Hct, SGOT, SGPT, cholesterol, creatinin chuột nhắt sau dùng liên tiếp 60 ngày Kết luận: Cao NT-ĐS-TT (5-3-2) có tác dụng hạ cholesterol máu chuột nhắt tăng cholesterol ngoại sinh liều uống 20g/kg 40g/kg thể trọng Cao NT-ĐS-TT an toàn sử dụng liều uống 40g/kg, 60 ngày chuột nhắt trắng Từ khóa: Tăng cholesterol, Ngưu tất, Đan sâm, Tam thất ABSTRACT HYPOCHOLESTEROL EFFECTS OF THE EXTRACT FROM ACHYRANTHES BIDENTATA, SALVIA MILTIORRHIZA AND NOTOGINSENG ON MICE Nguyen Thanh Tuan, Nguyen Phuong Dung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No – 2012: 150 - 156 Background and Aims: Dyslipidemia plays an important role in the formation and development of atherosclerosis, the leading cause in increasing cardiovascular disease mortality This study was conducted for evaluating cholesterol blood lowering effect on extract from Achyranthes bidentata, Salvia miltiorrhiza and Panaxnotoginseng on mice model Study design and setting: Experimental study on the hypercholesterolemic model of mice Subjects: 70% ethanol extract from Achyranthes bidentata, Salvia miltiorrhiza and Panaxnotoginseng Phòng khám Đa khoa Kiều Tiên Tác giả liên lạc: BS Nguyễn Thanh Tuấn 150 ** Khoa Y học cổ truyền - Đại học Y Dược Tp HCM ĐT: 0913123348 Email: tuandhyd@yahoo.com Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học White mice (Mus musculus var Albino, n=150), average weight 20 ± g with cholesterol levels >200mg% (from Institute of Pasteur Institute in HCM) were used Outcome measures: Blood cholesterol levels was determined after weeks treatment t-Student and one way Anova were used for statistical analysis Results: After weeks treatment with the ethanolic extract from Achyranthes bidentata, Salvia miltiorrhiza and Panaxnotoginseng (20g/kg, 40g/kg) blood cholesterol concentration was decreased (49.70% and 51.71%) Similar results were found with the groups of Achyranthes bidentata (20g/kg), Salvia miltiorrhiza (20g/kg) and Panaxnotoginseng (20g/kg) used separately No acute toxicity found with the highest possible dose (170,32 g/kg) and no statistical differences of red blood cells and white blood cells, platelets, hemoglobin, hematocrit, SGOT, SGPT, blood cholesterol, serum creatinine after 60 days of taking the ethanolic extract from Achyranthes bidentata, Salvia miltiorrhiza and Panaxnotoginseng (40g/kg) Conclusion: The ethanolic extract from Achyranthes bidentata, Salvia miltiorrhiza and Notoginseng(5-3-2) had shown hypocholesterolemic activity at doses of 20 g/kg and 40 g/kg body weight The extract at the dose of 40 g/kg is safe for 60 days treatment on mice Key words: blood cholesterol, serum cholesterol, hypercholesterolemia, hypocholesterolemic, Achyranthes bidentata, Salvia miltiorrhiza, Panaxnotoginseng phương pháp sắc ký lớp mỏng cho vết có ĐẶT VẤN ĐỀ màu sắc Rf tương tự với mẫu đối chiếu Rối loạn lipid máu yếu Ngưu tất, Đan sâm, Tam thất tố khởi đầu cho trình hình thành phát Cao chiết Ngưu tất, ký hiệu NT Hiệu suất triển xơ vữa động mạch, nguyên nhân hàng chiết 44, 17% đầu làm tăng tỉ lệ tử vong bệnh lý tim Cao chiết Đan sâm, ký hiệu ĐS Hiệu suất mạch nước phát triển (3,4) Điều chỉnh rối chiết 26,66% loạn lipid máu có khả phòng ngừa Cao chiết Tam thất, ký hiệu TT Hiệu suất nguy (4) Trong nỗ lực tìm kiếm chiết 19, 42% giải pháp giảm nồng độ cholesterol máu, nhiều thảo dược quan tâm nghiên cứu, Cả loại cao bào chế có Ngưu tất, Đan sâm, Tam thất (1,6).Sự phương pháp ngấm kiệt với dung môi phối hợp dược liệu có khả giữ ethanol 70% nguyên gia tăng tác dụng điều trị giảm Thuốc đối chiếu: Lovastatin 20 mg (Domesco – bớt liều lượng thành phần dược liệu Việt Nam, lô SX170909, HSD 170912) không? Để trả lời câu hỏi này, chúng tơi tiến Hóa chất gây mơ hình: Cholesrerol (Kanto hành so sánh tác dụng hạ cholesterol máu Chemical Co - Nhật bản) cao phối hợp Ngưu tất- Đan sâm- Tam thất với Súc vật thử nghiệm: Chuột nhắt trắng (Mus cao Ngưu tất, cao Đan sâm, cao Tam thất musculus var albino), trưởng thành, khoẻ mạnh, chuột nhắt trắng tăng cholesterol ngoại sinh phái, trọng lượng trung bình 20 ± 2g, mua PHƯƠNG TIỆN - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh Trong CỨU suốt q trình thử nghiệm, chuột nuôi điều kiện ổn định dinh dưỡng chế Nguyên liệu – Hóa chất độ chiếu sáng Nguyên liệu: Cao chiết hỗn hợp Ngưu tấtĐan sâm-Tam thất (5-3-2), ký hiệu NT-ĐS-TT Hiệu suất chiết 39,33%, độ ẩm 47,18%, hàm lượng saponin tồn phần 18,96%, định tính Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Các thử nghiệm dược lý dược tiến hành Trung tâm Phát triển Cơng nghệ Sinh học TP Hồ Chí Minh Giải phẫu mô học gan, thận 151 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 thực Khoa Giải Phẫu Bệnh - Bệnh viện Thống Nhất, thành phố Hồ Chí Minh Phương pháp khảo sát độc tính cấp (2, 5) Chia chuột làm nhiều lô, chuột lô cho uống liều cao NTĐS-TT với liều tăng dần Theo dõi tỷ lệ chuột chết vòng 72 sau uống Tính LD50 (nếu có) theo cơng thức Karber - Behrens Phương pháp khảo sát độc tính bán trường diễn (5) Chia ngẫu nhiên chuột nhắt trắng thành lô, lô 10 - Lơ bình thường (BT): uống nước cất, 0,2 ml/10 g thể trọng, liên tục 60 ngày - Lô thử (NT-ĐS-TT): uống cao NT-ĐS-TT liều tương đương 40 g dược liệu khơ/kg thể trọng, thể tích 0,2 ml/10 g thể trọng Cuối thử nghiệm, ghi nhận so sánh số: số lượng hồng cầu (triệu/mm3), số lượng bạch cầu (ngàn/mm3), tiểu cầu (ngàn/ mm3), hemoglobin (g/dL), hematocrit (%), cholesterol (mg/dL), SGOT (U/L), SGPT (U/L), creatinin (mg/dL), vi thể gan thận Phương pháp nghiên cứu tác dụng hạ cholesterol (5) Định lượng cholesterol máu chuột (khơng cho ăn trước 14 giờ) trước thí nghiệm Cho chuột uống cholesterol (250 mg/kg thể trọng) liên tục 14 ngày Ngày thứ 15, định lượng cholesterol máu, chọn chuột có nồng độ cholesterol >200 mg% để tiếp tục đưa vào nghiên cứu Chia ngẫu nhiên chuột thử nghiệm thành nhiều lô, lô 7-10 chuột Lơ chứng bệnh lý (BL): uống nước cất thể tích 0, 2ml/10g thể trọng Lô đối chứng (LOV): uống Lovastatin liều 20mg/kg thể trọng, thể tích 0,2ml/10g thể trọng Lơ thử (NT): uống cao Ngưu tất liều tương đương 20g dược liệu khơ/kg thể trọng, thể tích 0, 2ml/10g thể trọng Lô thử (ĐS): uống cao Đan sâm liều tương đương 20g dược liệu khơ/kg thể trọng, thể tích 0, 2ml/10g thể trọng Lô thử (TT): uống cao Tam thất liều tương đương 20g dược liệu khô/kg thể trọng thể tích 0, 2ml/10g thể trọng Lơ thử (TH1): uống cao NT-ĐS-TT, liều tương đương 20g dược liệu khô/kg thể trọng, thể tích 0, 2ml/10g thể trọng Lơ thử (TH2): uống cao NT-ĐS-TT, liều tương đương 40g dược liệu khô/kg thể trọng, thể tích 0, 2ml/10g thể trọng Cho uống thuốc đối chứng cao thử liên tục tuần Cuối thử nghiệm, lấy máu đuôi để định lượng cholesterol Thử nghiệm tiến hành song song với lô chứng cho uống nước cất (lô BT) Phương pháp xử lý thống kê số liệu thực nghiệm Dùng chương trình MS-Excel máy tính để tính giá trị thống kê mơ tả: số trung bình (M), độ lệch chuẩn (SD) Ứng dụng phép kiểm t-Student độc lập để so sánh số trung bình lơ khác thời điểm Ứng dụng phép kiểm Anova yếu tố để đánh giá khác biệt trị số cholesterol lô thử nghiệm thời điểm KẾT QUẢ Độc tính cấp Ở liều tối đa đưa trực tiếp vào dày chuột 170,32g cao khơ kiệt/kg thể trọng, khơng có chuột chết vòng 48 Vì thế, chưa xác định LD50 đường uống chuột nhắt trắng Độc tính bán trường diễn Bảng 1: Trị số huyết học, sinh hóa chuột nhắt sau dùng thuốc 60 ngày Chỉ tiêu Hồng cầu 152 % so t với lô P Stat BT 101,04 9,10 ± 1,11 9,20 ± 1,10 0,26 >0,05 % Lô BT (n=10) Lô NT-ĐSTT (n=10) Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nhận xét Hình ảnh giải phẫu mơ học gan, thận chuột nhắt uống cao NT-ĐS-TT (uống, 40g dược liệu khô/kg thể trọng) sau 60 ngày không khác biệt so với lơ bình thường uống nước cất Tác dụng hạ cholesterol cao NT, cao ĐS, cao TT Bảng 2: Nồng độ cholesterol chuột nhắt trắng sau tuần uống cao NT (20g/kg), cao ĐS (20g/kg) cao NT (20g/kg) BT BL LOV NT ĐS TT Thuốc thử nghiệm Nước cất Cholesterol Cholesterol + Lovastatin Cholesterol + Ngưu tất (20g/kg) Cholesterol + Đan sâm (20g/kg) Cholesterol + Tam thất (20g/kg) Ở lô điều trị Lovastatin (uống, 20mg/kg), nồng độ cholesterol giảm 62,60% (P0,05) Lô Ở lô chứng bệnh lý (uống cholesterol 250mg/kg) nồng độ cholesterol máu tăng 79,91% (P0,05 % (ngàn/mm3) Tiểu cầu 661,71 ± 674,71 ± 101,96 0,18 >0,05 139,71 143,39 % (ngàn/ mm ) 100,78 Hct (%) 49,81 ± 4,35 50,03 ± 3,11 0,11 >0,05 % 101,96 Hb (g/dL) 14,74 ± 0,97 14,86 ± 1,25 0,19 >0,05 % 67,33 ± 62,19 ± 100,43 GOT (U/L) 0,55 >0,05 19,30 15,30 % 60,41 ± 58,96 ± GPT (U/L) 92,36% 0,16 >0,05 19,16 14,21 Cholesterol 145,20 ± 144,15 ± 99,28% 0,15 >0,05 (mg/dL) 13,85 12,11 Creatinin 0,56 ± 0,11 0,60 ± 0,14 97,61% 0,58 >0,05 (mg/dL) Nghiên cứu Y học n 10 10 10 10 10 10 Cholesterol (mg/dL) 147,80 ± 17,79 266,00 ± 20,37*** # 173,40 ± 12,88*** ### 186,47 ± 12,04*** ### 180,08 ± 13,57*** ## 176,50 ± 16,67*** So với lô BT 100% 179,91% 117,31% 126,13% 121,80% 119,38% Ghi chú: * P