Khảo sát độc tính cấp đường uống và tác động hạ đường huyết trên chuột nhắt của viên nang cứng Mimostam

Khảo sát độc tính cấp đường uống và tác dụng hạ đường huyết trên chuột nhắt trắng của viên nang cứng Mimostam chứa cao chiết từ hỗn hợp dược liệu gồm Râu mèo, Mướp đắng và Mắc cỡ.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG VÀ TÁC ĐỘNG HẠ ĐƯỜNG HUYẾT TRÊN CHUỘT NHẮT CỦA VIÊN NANG CỨNG MIMOSTAM Đỗ Thị Hồng Tươi*, Nguyễn Thị Bạch Tuyết**, Dương Thị Mộng Ngọc*** TĨM TẮT Mục tiêu: Khảo sát độc tính cấp đường uống tác dụng hạ đường huyết chuột nhắt trắng viên nang cứng Mimostam chứa cao chiết từ hỗn hợp dược liệu gồm Râu mèo, Mướp đắng Mắc cỡ Phương pháp: Khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-amylase α-glucosidase in vitro bột thuốc viên nang cứng Mimostam phương pháp so màu Khảo sát độc tính cấp đường uống chuột đực cái, theo dõi tỷ lệ chết biểu độc tính vòng 72 Tác dụng hạ đường huyết viên nang Mimostam đánh giá chuột đực gây đái tháo đường cách tiêm tĩnh mạch liều streptozotocin 170 mg/kg Chuột cho uống viên Mimostam liều 0,5 g/kg ngày, lần/ngày 14 ngày liên tục, đo nồng độ glucose ngày Glibenclamid liều mg/kg sử dụng làm thuốc đối chứng Kết quả: Bột thuốc viên Mimostam ức chế α-amylase α-glucosidase in vitro với IC50 655 µg/ml 655,24 µg/ml so với 13,56 µg/ml 450,74 µg/ml đối chứng acarbose Viên nang Mimostam khơng thể độc tính cấp đường uống chuột nhắt với liều tối đa qua kim Dmax 10 g/kg Trên chuột bị đái tháo đường, sau tuần điều trị, viên nang Mimostam cho uống liều 0,5 g/kg g/kg giảm đường huyết 41,4% 37,2% so với 63,1% lô glibenclamid Mimostam liều g/kg 0,5 g/kg thể tác động hạ đường huyết tương đương glibenclamid mg/kg sau 10 ngày điều trị, tác dụng thấp glibenclamid sau 15 ngày Kết luận: Viên nang Mimostam độc tính cấp đường uống liều tối đa Dmax 10 g/kg Chế phẩm thể tác động hạ đường huyết với liều 0,5 g/kg tương đương glibenclamid mg/kg Tác động giải thích phần nhờ khả ức chế α-amylase α-glucosidase Từ khóa: Viên nang Mimostam, α-amylase, α-glucosidase, độc tính cấp, tác dụng hạ đường huyết ABSTRACT STUDY ON ORAL ACUTE TOXICITY AND HYPOGLYCEMIC EFFECT OF MIMOSTAM CAPSULE IN MICE Do Thi Hong Tuoi, Nguyen Thi Bach Tuyet, Duong Thi Mong Ngoc * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 102- 108 Objectives: This study evaluated oral acute toxicity and hypoglycemic effect of Mimostam capsule from extract of mixture of Momordica charantia Linn., Orthosiphon stamineus Benth and Mimosa pudica L Methods: In vitro inhibitory activity on α-amylase and α-glucosidase enzymes was spectrophotometrically evaluated In vivo experiments were carried out in Swiss albino mice, - week aged; weighing 25 g The oral acute toxicity in male and female mice was studied on the death rate within 72 hours after being dosed Hypoglycemic effect of Mimostam capsule was examined in diabetic mice induced by iv streptozotocine at 170 mg/kg Mice were orally received Mimostam capsule once a day at the doses of 0.5 and g/kg for 14 continuous days Blood glucose was determined every days Glibenclamide at the dose of mg/kg was used as a reference drug  Khoa Dược - Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ** Khoa Dược - Đại học Toulouse III, Paul Sabatier Trung tâm Sâm Dược liệu TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi ĐT: 0908683080 Email: hongtuoi@ump.edu.vn *** 102 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Results: Mimostam capsule inhibited in vitro activity of α-amylase and α-glucosidase enzymes with IC50 values of 655 µg/ml and 655.24 µg/ml compared to those of 13.56 µg/ml and 450.74 µg/ml of acarbose positive control This product had no oral acute toxicity in mice at the maximum dose of 10 g/kg In hyperglycemic model, after week-treatment, glucose levels of mice treated with Mimostam capsule at 0.5 g/kg and g/kg were decreased 41.4% and 37.2% respectively, compared to 63.1% of mg/kg glibenclamide group Mimostam capsule at g/kg and 0.5 g/kg showed a hypoglycemic effect equivalent to mg/kg glibenclamide after and 10 days of treatment This effect was lower than that of glibenclamide after 15 days Conclusions: Mimostam capsule did not show oral acute toxicity in mice at the maximum oral dose (Dmax) of 10 g/kg This product showed hypoglycemic effect at the oral doses of 0.5 and g/kg similar to that of mg/kg glibenclamide This effect of Mimostam capsule could be partially explained by its inhibitory activity on αamylase and α-glucosidase enzymes Key words: Mimostam capsule, α-amylase, α-glucosidase, acute toxicity, hypoglycemic effect sở khoa học tính an tồn tác dụng ĐẶT VẤN ĐỀ chế phẩm ứng dụng điều trị bệnh đái Theo Tổ chức Y tế giới, Việt Nam tháo đường nước có tỷ lệ tăng bệnh đái ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU tháo đường nhanh giới với gần triệu người mắc bệnh tỷ lệ tăng từ Mẫu thử 20% năm(15) Các nhóm thuốc tổng hợp Viên nang cứng Mimostam 500 mg chứa 200 điều trị khó ngăn chặn mg cao chiết hỗn hợp dược liệu Râu mèo, biến chứng tác dụng không mong muốn Mướp đắng Mắc cỡ sản xuất ngày cho bệnh nhân Do đó, sử dụng thảo dược 26/3/2018 Viên Mimostam kiểm nghiệm thay tiềm việc kiểm soát đạt tiêu chuẩn sở đóng gói chai nhựa đường huyết thời gian dài Hiện nay, nghiên nút kín ThS Dương Thị Mộng Ngọc cung cứu phát triển loại thuốc trị đái tháo cấp Viên chứa bột thuốc màu nâu đen, có mùi đường từ thiên nhiên định thơm đặc trưng dược liệu hướng Việt Nam giới Một số dược Động vật thử nghiệm liệu báo cáo có tác dụng hạ đường huyết Chuột nhắt Swiss albino, - tuần tuổi, Mướp đắng (Momordica charantia Linn.), trọng lượng trung bình khoảng 25 g Viện Râu mèo (Orthosiphon stamineus Benth), Mắc Vaccin Sinh phẩm Y tế Nha Trang cung cỡ (Mimosa pudica L.), Bạc hà (Mentha arvensis cấp Chuột khoẻ mạnh, khơng có biểu bất L.), Nghệ (Curcuma longa L.), Mã đề (Plantago thường, nuôi ổn định mơi trường thí asiatica L.)…(2,4,11,12,14) Trong khn khổ đề tài nghiệm ngày lồng kích thước 25 x 35 x “Nghiên cứu xây dựng cơng thức quy trình 15 cm (6 chuột/lồng) cung cấp thức ăn, bào chế viên nang từ cao hỗn hợp Râu mèo, nước uống đầy đủ thử nghiệm Mướp đắng Mắc cỡ” Sở Khoa học Hóa chất cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh phê duyệt nhóm nghiên cứu ThS Dương Thị Mộng Ngọc (Trung tâm sâm dược liệu Tp Hồ Chí Minh), đề tài thực khảo sát độc tính cấp đường uống tác dụng hạ đường huyết chuột nhắt viên nang cứng Mimostam chứa cao chiết hỗn hợp dược liệu gồm Râu mèo, Mướp đắng Mắc cỡ nhằm cung cấp Streptozotocin, α-amylase, α-glucosidase, p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosid (pNPG) (Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ); acarbose (CKD Bio, Hàn Quốc), ethylen diamin tetra-acetic (EDTA) (Merck, Đức), kit định lượng glucose (Clinitech, Pháp), glibenclamid (Stada, Việt Nam), tinh bột, Na2CO3, cồn 96%, ether ethylic 103 Nghiên cứu Y học (Guangdong Guanghua, Trung Quốc), NaCl 0,9% (OPV, Việt Nam) Phương pháp nghiên cứu Thiết kế thực nghiệm, đo lường độc lập Khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-amylase in vitro Hoạt tính ức chế α-amylase khảo sát dựa vào phương pháp đo màu(4,7) Hỗn hợp phản ứng gồm ml tinh bột 1% (kl/tt), ml α-amylase (1,5 đơn vị/ml) pha đệm acetat 0,1 M (pH 7,2), ml dung dịch mẫu thử (bột thuốc viên Mimostam/đối chứng acarbose), ml đệm acetat Ủ hỗn hợp 25 phút 37°C Thêm ml HCl 1N, trộn để kết thúc phản ứng Thêm 0,1 ml iod 1% Đo OD bước sóng 565 nm Mẫu chuẩn (có α-amylase, khơng có mẫu thử) tiến hành song song Thí nghiệm lặp lại lần, lấy giá trị trung bình xác định hoạt tính ức chế αamylase: % ức chế = (ODmẫu thử - ODmẫu chuẩn)/ ODmẫu chuẩn x 100 Xác định IC50 (nồng độ mẫu thử ức chế 50% hoạt tính α-amylase) dựa vào phương trình hồi quy % ức chế nồng độ mẫu thử Khảo sát tác dụng ức chế enzym α-glucosidase in vitro(9) Hỗn hợp phản ứng gồm 40 µl α-glucosidase (0,2 IU/ml), 50 µl mẫu thử acarbose đệm phosphat pH 6,8 (so màu mẫu thử) Ủ 20 phút nhiệt độ phòng, thêm 40 µl pNPG mM đệm phosphat pH 6,8 Trộn đều, ủ 20 phút nhiệt độ phòng Kết thúc phản ứng cách thêm 130 µl Na2CO3 0,2 M (pH 9,7), trộn Đo OD bước sóng 405 nm Mẫu chuẩn (khơng có mẫu thử) tiến hành song song Hoạt tính ức chế α-glucosidase tính theo cơng thức: % ức chế = [(ODmẫu chuẩn-ODso màu mẫu chuẩn) - (ODmẫu thửODso màu mẫu thử)]/(ODmẫu chuẩn-ODso màu mẫu chuẩn) x 100 Xác định IC50 (nồng độ mẫu thử ức chế 50% hoạt tính α-glucosidase) dựa vào phương trình hồi quy % ức chế nồng độ mẫu thử Khảo sát độc tính cấp đường uống chuột (3 đực, cái) nhịn đói 12 giờ, cho uống viên nang Mimostam liều 104 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 tối đa qua kim (thể tích 20 ml/kg) theo “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu” Bộ Y tế(1) Theo dõi ghi nhận cử động tổng quát, biểu hành vi, trạng thái lông, ăn uống, tiêu tiểu số lượng chết chuột 72 Nếu sau 72 giờ, chuột khơng có dấu hiệu bất thường chết, tiếp tục theo dõi vòng ngày Nếu có chuột chết, giảm liều, tìm liều tối thiểu gây chết 100% chuột (LD100), liều tối đa không gây chết chuột (LD0) liều gây chết 50% chuột (LD50) Khảo sát tác động lên trọng lượng đường huyết chuột nhắt trắng gây đái tháo đường streptozotocin(8) Chuột nhịn đói 12 giờ, gây tăng đường huyết streptozotocin (pha NaCl 0,9%) tiêm tĩnh mạch liều 170 mg/kg Sau ngày, định lượng glucose máu (chuột nhịn đói 12 giờ) Những chuột có đường huyết đói ≥ 200 mg/dL xem chuột bị đái tháo đường, điều trị glibenclamid mg/kg (đối chứng dương) viên Mimostam liều 0,5 g/kg g/kg, cho uống lần/ngày vào buổi sáng (8 - 10 giờ) 14 ngày Theo dõi đường huyết chuột thử nghiệm ngày cách lấy máu tĩnh mạch đuôi chuột cho nhịn đói, định lượng glucose huyết theo nguyên tắc enzym màu kit thử Clinitech (Pháp) Nồng độ glucose tính theo cơng thức: Nồng độ glucose (mg/dl) = [(Athử Atrắng)/(Achuẩn - Atrắng)] x Cchuẩn x độ pha lỗng - Xử lý kết phân tích thống kê Kết trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SEM) Số liệu phân tích thống kê phép kiểm Kruskal-Wallis Mann-Whitney với phần mềm SPSS 22.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 KẾTQUẢ Hoạt tính ức chế enzym α-amylase in vitro Bột thuốc viên Mimostam thể hoạt tính Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 ức chế enzym α-amylase với giá trị IC50 655 µg/ml cao 48,3 lần so với IC50 mẫu đối chứng acarbose 13,56 µg/ml (Bảng 1) Giá trị IC50 acarbose phù hợp với báo cáo trước với IC50 acarbose 12,48 µg/ml điều kiện phản ứng(7) Nghiên cứu Y học Hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase in vitro Từ kết thu được, xác định giá trị IC50 bột thuốc viên nang Mimostam đối chứng dương acarbose 655,24 µg/ml 450,74 µg/ml (Bảng 2) Bảng Hoạt tính ức chế enzym α-amylase in vitro Chất đối chiếu acarbose Nồng độ (µg/ml) % ức chế (Mean ± SD) 29,81 ± 3,22 10 41,19 ± 2,08 15 55,18 ± 3,26 20 61,83 ± 1,38 25 78,00 ± 1,49 30 81,74 ± 1,08 Phương trình: y = 0,0013x + 0,3126x - 5,3196 R = 0,9843 IC50 = 13,56 µg/ml Bột thuốc viên nang cứng Mimostam Nồng độ (µg/ml) % ức chế (Mean ± SD) 125 22,49 ± 1,94 250 34,05 ± 6,34 500 40,68 ± 3,67 1000 59,23 ± 7,44 1500 63,46 ± 5,84 2000 70,12 ± 3,27 3000 78,17 ± 2,17 Phương trình: y = 1,143 x – 67,142 x + 1153,6 R = 0,9849 IC50 = 655 µg/ml Bảng Hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase in vitro Acarbose Nồng độ (µg/ml) Hoạt tính ức chế (%) 1000 73,90 ± 2,76 500 54,57 ± 0,11 250 35,05 ± 0,65 125 21,50 ± 3,56 62,5 18,54 ± 1,17 31,25 9,29 ± 0,97 Phương trình: y = 0,1913x - 1,2989x + 37,434 R = 0,9954 IC50 = 450,74 µg/ml Độc tính cấp đường uống viên nang Mimostam Khảo sát chuột với liều tối đa bơm qua kim 10 g/kg Sau cho chuột uống, tất chuột khỏe mạnh, ăn cám viên, uống nước, tiêu tiểu, cử động bình thường khơng có chuột chết 72 ngày quan sát Quan sát đại thể quan sau ngày không ghi nhận dấu hiệu bất thường tim, gan, thận, phổi hệ tiêu hóa Như vậy, viên nang cứng Mimostam khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa cho uống qua kim (Dmax) 10 g/kg trọng lượng chuột Tác động viên Mimostam lên trọng lượng đường huyết chuột đái tháo đường Sau ngày nuôi ổn định điều kiện thí nghiệm, chuột có khối lượng trung bình khoảng Bột thuốc viên nang cứng Mimostam Nồng độ (µg/ml) Hoạt tính ức chế (%) 1500 75,61 ± 2,25 1000 60,77 ± 6,47 500 42,76 ± 4,77 250 32,64 ± 4,40 125 21,79 ± 7,18 62,5 7,03 ± 1,00 Phương trình: y = 0,2848x - 2,1029x + 48,384 R = 0,9981 IC50 = 655,24 µg/ml 30 g Sau ngày tiêm streptozotocin, thời điểm bắt đầu điều trị (N0), chuột sinh lý có trọng lượng tiếp tục tăng lên, trung bình 36,8 g chuột tiêm streptozotocin có đường huyết ≥ 200 mg/dL có trọng lượng trung bình 29,5 g, thấp có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Kết giải thích streptozotocin gây độc tế bào tụy dẫn đến tình trạng giảm đáng kể trọng lượng thể chuột so với chuột sinh lý (tăng cân liên tục), triệu chứng điển hình bệnh đái tháo đường Trong thời gian điều trị, chuột lơ tiêm streptozotocin có khối lượng thể giảm khoảng 8,5 - 14 g so với chuột sinh lý thời điểm khảo sát (p < 0,01) Chuột lơ chứng bệnh có trọng lượng thay đổi khơng đáng kể q trình thử nghiệm so với thời điểm N0, lô cho uống thuốc viên nang 105 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Mimostam lô uống glibenclamid, trọng lượng thể ổn định tăng khoảng - g Mặc dù khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) điều gợi ý việc uống viên Mimostam bước đầu giúp trì thể trạng chuột thí nghiệm (Bảng 3) Kết khảo sát tác động hạ đường huyết viên nang Mimostam chuột bị đái tháo đường trình bày Bảng Bảng Trọng lượng trung bình lơ chuột đái tháo đường 15 ngày (N: ngày) Lô (n=6) Sinh lý N0 N1 N2 N3 N4 N5 N6 N7 N8 N9 N10 36,8 ± 37,4 ± 38,2 ± 39,6 ± 39,0 ± 40,1 ± 40,5 ± 40,8 ± 40,4 ± 40,9 ± 41,8 ± 1,4 1,2 1,1 1,1 1,0 1,1 1,2 1,2 1,2 1,0 1,2 28,3 27,6 28,1 28,5 28,4 27,3 28,0 28,4 28,7 27,9 28,5 ± 2,1** ± 2,0** ± 1,8** ± 1,8** ± 1,9** ± 1,7** ± 1,7** ± 1,7** ± 1,7** ± 1,8** ± 2,1** Chứng bệnh Glibenclamid 31,7± mg/kg 1,8* Mimo-stam 29,9± g/kg 1,4* Mimo-stam 28,0± 0,5 g/kg 0,9* 31,4± 31,4 ± 1,9* 1,9* 29,9 ± 29,1 ± 1,5* 1,1* 28,9 ± 30,2 ± 0,9* 0,9* N11 41,4 ± 0,8 28,2 ± 1,8** N12 42,3 ± 1,0 28,7 ± 1,9** N13 N14 42,6 ± 41,7± 1,3 0,9 28,7 ± 28,4 ± 1,8** 2,0** 30,9 ± 31,5 ± 30,3 ± 31,0 ± 30,9 ± 31,4 ± 31,5 ± 31,1 ± 30,9 ± 31,0 ± 31,2 ± 31,1± 1,6* 1,9* 2,1* 2,2* 2,2* 2,3* 2,5* 2,6* 2,9* 2,9* 3,0* 3,1* 30,2 ± 29,6 ± 29,4 ± 30,6± 30,2 ± 30,8 ± 30,1 ± 31,2 ± 30,9 ± 31,6 ± 31,5 ± 31,3± 1,3* 1,2* 1,5* 1,4* 1,4* 1,6* 1,6* 1,8* 1,8* 1,8* 1,7* 2,1* 31,4 ± 30,2 ± 29,9 ± 25,8 ± 29,2 ± 30,2 ± 28,4 ± 29,9 ± 31,2 ± 30,5 ± 30,8 ± 29,9± 0,8* 0,8* 0,9* 1,0* 1,1* 1,3* 1,4* 2,0* 2,4* 1,9* 1,7* 1,5* * p < 0,05 ** p < 0,01 so với lô sinh lý thời điểm khảo sát Bảng Đường huyết chuột bị đái tháo đường lô vào ngày 0, 5, 10, 15 Lô (n = 6) Sinh lý Chứng bệnh Glibenclamid mg/kg Mimostam g/kg Mimostam 0,5 g/kg ** $ p < 0,01 so với lô sinh lý Ngày 101,65 ± 4,26 ** 263,70 ± 14,37 ** 266,88 ± 17,94 ** 263,02 ± 19,25 ** 266,59 ± 14,09 # Đường huyết trung bình ± SEM (ml/dL) Ngày Ngày 10 74,47 ± 4,16 73,51 ± 4,25 ** ** 287,01 ± 13,96 297,21 ± 30,47 **## **## 190,48 ± 20,32 136,20 ± 15,39 **## **# 180,58 ± 11,55 152,31 ± 18,55 ** **## 199,12 ± 22,53 146,58 ± 15,01 Ngày 15 85,00 ± 6,10 ** 275,60 ± 34,34 ## 98,50 ± 12,28 **##$ 154,18 ± 16,79 **##$ 167,47 ± 15,96 p < 0,05; ## p < 0,01: so với lô chứng bệnh p < 0,05: so với lô glibenclamid thời điểm khảo sát Tại thời điểm ban đầu, chuột tiêm streptozotocin 170 mg/kg có đường huyết tăng cao 2,6 lần so với chuột sinh lý (p < 0,01) Những chuột có đường huyết lớn 200 mg/dL phân chia vào lô (chứng bệnh, glibenclamid lô uống viên nang Mimostam) cho đường huyết trung bình lơ khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Sau ngày, kết cho thấy lô đối chứng glibenclamid mg/kg lô cho uống viên nang Mimostam liều 0,5 g/kg, g/kg làm giảm đường huyết khoảng 28,6%, 25,3% 31,3% so với thời điểm trước điều trị thấp có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh thời điểm (p < 0,05) Vào ngày 10, đường huyết lô điều trị glibenclamid mg/kg, viên nang 106 Mimostam liều 0,5 g/kg g/kg giảm khoảng 49,0%, 42,1% 45,0% so với thời điểm trước điều trị thấp có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh (p < 0,05) Tương tự, sau 15 ngày điều trị, kết cho thấy lô điều trị glibenclamid mg/kg, viên nang Mimostam liều 0,5 g/kg g/kg giảm 63,1%, 41,4% 37,2% so với trước điều trị thấp có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh thời điểm (p < 0,05) Đường huyết chuột lô cho uống viên nang Minostam liều g/kg 0,5 g/kg khác khơng có nghĩa thống kê thời điểm khảo sát (p > 0,05) So sánh với thuốc đối chứng glibenclamid uống liều mg/kg, kết cho thấy tác động hạ đường huyết lô điều trị viên nang Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Mimostam liều g/kg 0,5 g/kg khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê sau 10 ngày điều trị (p < 0,05); sau 15 ngày điều trị, tác dụng hạ đường huyết viên nang Mimostam thấp hơn, đường huyết lô uống viên nang Mimostam cao có ý nghĩa thống kê so với lơ glibenclamid mg/kg (p < 0,05) Như vậy, viên nang Mimostam cho chuột uống liều g/kg 0,5 g/kg thể tác động hạ đường huyết tương đương thuốc đối chứng dương glibenclamid mg/kg sau 10 ngày điều trị, tác dụng thấp glibenclamid sau 15 ngày BÀN LUẬN Để tìm sản phẩm hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường, nhà khoa học nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết dược liệu riêng rẽ hỗn hợp dược liệu theo xu hướng lương y doanh nghiệp Theo xu hướng này, năm 2014 - 2016, Sở Khoa học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh ký hợp đồng giao cho ThS Dương Thị Mộng Ngọc, Trung tâm Sâm Dược liệu TP Hồ Chí Minh, thực đề tài “Nghiên cứu chiết xuất thử tác dụng hạ đường huyết cao dược liệu từ Râu mèo, Mướp đắng Mắc cỡ” Với kết khả quan thu tác động hạ glucose huyết từ đề tài(3), nhóm nghiên cứu bào chế viên nang cứng Mimostam nhằm góp phần cung cấp thuốc có nguồn gốc tự nhiên ứng dụng phòng và/hoặc điều trị bệnh đái tháo đường Tác dụng ức chế α-amylase αglucosidase viên Mimostam phù hợp với báo cáo trước tác dụng ức chế hai enzym dược liệu riêng lẻ Theo Poovitha Parani (2016), dịch chiết từ loại Mướp đắng ức chế α-amylase αglucosidase với IC50 khoảng 0,26 đến 0,29 mg/ml(10) Dịch chiết cồn 50% Râu mèo sinensetin phân lập ức chế αglucosidase với IC50 4,63 0,66 Nghiên cứu Y học mg/ml; ức chế α-amylase với IC50 36,70 mg/ml 1,13 mg/ml(7) Dịch chiết Mắc cỡ báo cáo tác động ức chế αamylase với IC50 khoảng 54 đến 91 µg/ml α-glucosidase với IC50 khoảng 55 đến 93 µg/ml(13) Trên chuột nhắt, viên nang cứng Mimostam khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa Dmax 10 g/kg Từ đó, đề tài chọn khảo sát tác dụng hạ đường huyết chuột đái tháo đường với liều 0,5 g/kg tương đương 1/20 1/10 Dmax theo khuyến cáo Bộ Y tế liều thử tác dụng dược lý thường nhỏ 1/5 Dmax(1) Kết thu cho thấy viên Mimostam thể tác dụng hạ đường huyết tương đương với thuốc đối chứng glibenclamid Tác dụng phù hợp với báo cáo trước khả hạ đường huyết Râu mèo, Mướp đắng Mắc cỡ Cao nước Râu mèo làm giảm đường huyết điều hòa rối loạn chuyển hóa lipid chuột gây đái tháo đường streptozotocin(7,9) Đối với Mướp đắng, cao (liều 50 - 200 mg/ml) báo cáo tác dụng hạ đường huyết mơ hình gây tăng glucose huyết streptozotocin khơng ảnh hưởng đến đường huyết chuột bình thường(6,10,16) Cao chiết ethanol cao chiết nước từ Mắc cỡ có tác dụng làm giảm đường huyết mơ hình gây đái tháo đường alloxan(12) Kết gợi ý tác dụng ức chế α-amylase α-glucosidase chế liên quan đến tác động hạ đường huyết viên nang Mimostam Tác động liều 0,5 g/kg g/kg khác biệt ý nghĩa thống kê thời điểm khảo sát; kết gợi ý dùng liều 0,5 g/kg chuột nhắt để ngoại suy liều điều trị dự kiến người (4 - viên 500 mg/ngày) Đề tài góp phần cung cấp sở khả ứng viên nang cứng Mimostam phòng và/hoặc điều trị đái tháo đường lâm sàng KẾTLUẬN Viên nang cứng Mimostam thể tác động 107 Nghiên cứu Y học ức chế enzym α-amylase α-glucosidase in vitro với IC50 655 µg/ml 655,24 µg/ml so với IC50 đối chứng acarbose 13,56 µg/ml 450,74 µg/ml Chế phẩm khơng thể độc tính cấp đường uống với liều tối đa Dmax 10 g/kg, thể tác động hạ đường huyết liều 0,5 g/kg g/kg tương đương tương đương với đối chứng glibenlamid mg/kg sau 10 ngày điều trị LỜI CẢM ƠN: Nhóm nghiên cứu xin chân thành cảm ơn tài trợ kinh phí Sở Khoa học Cơng nghệ Thành Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 10 11 phố Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu Ban hành theo định số 141/QĐK2ĐT ngày 27 tháng 10 năm 2015, tr.13-17 Choi SY, Jung SH, Lee HS, Park KW, Yun BS, Lee KW (2008) “Glycation inhibitory activity and the identification of an active compound in P asiatica extract” Phytother Res.; 22: 323–329 Dương Thị Mộng Ngọc, Nguyễn Thị Ngọc Đan, Phạm Thị Nguyệt Hằng, Phí Thị Xuyến, Đỗ Thị Phương (2015) “Khảo sát độc tính cấp tác dụng hạ glucose huyết thực nghiệm cao hỗn hợp Mắc cỡ, Râu mèo Mướp đắng” Tạp chí Y học Tp Hồ Chí Minh; 19(5): 91-95 Gupta D, Chandrashekar, Richard L., Yogendra, Gupta N (2012) “In vitro antidiabetic activity of stem bark of Bauhinia purpurea Linn.” Der Pharmacia Lettre; 4(2): 614-619 Mai Thị Cúc, Đỗ Thị Hồng Tươi (2015) “Phân tích sơ thành phần hóa học, khảo sát hoạt tính ức chế α-amylase, αglucosidase in vitro độc tính cấp đường uống trà thảo mộc Karantina” Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh; 19(3): 3237 Miura T, Itoh C, Iwamoto N, Kato M, Kawai M, Park SR, Suzuki I (2001) “Hypoglycemic activity of the fruit of the Momordica charantia in type diabetic mice” J Nutr Sci Vitaminol.; 47(5): 340344 Mohamed EA, Siddiqui MJ, Ang LF, Sadikun A, Chan SH, Tan SC, Asmawi MZ, Yam MF (2012) “Potent α-glucosidase and αamylase inhibitory activities of standardized 50% ethanolic 108 12 13 14 15 16 extracts and sinensetin from Orthosiphon stamineus Benth as antidiabetic mechanism” BMC Complement Altern Med.; 12: 176 Ngô Thị Nga, Mai Thị Cúc, Đỗ Thị Hồng Tươi (2017) “Khảo sát tác dụng hạ lipid huyết hạ đường huyết cao cồn 50% từ trà thảo mộc Panas Karantina chuột nhắt” Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh; 21(2): 7-15 Phạm Thị Diệu Hạnh, Phùng Văn Trung, Nguyễn Ngọc Hạnh, Nguyễn Đông Trúc (2007) “Khảo sát hoạt tính ức chế men alpha glucosidase cao chiết hạt mướp đắng” Tạp chí Khoa học Trường đại học Cần Thơ; 7: 130-137 Poovitha S, Parani M (2016) “In vitro and in vivo α-amylase and α-glucosidase inhibiting activities of the protein extracts from two varieties of bitter gourd (Momordica charantia L.)” BMC Complement Altern Med.; 16(1): 185 Sriplang K, Adisakwattana S, Rungsipipat A, Yibchok-anun S (2007) “Effects of Orthosiphon stamineus aqueous extract on plasma glucose concentration and lipid profile in normal and streptozotocin-induced diabetic rats” Journal of Ethnopharmacology; 109(3): 510-514 Sutar NG, Sutar UN, Behera BC (2009) “Antidiabetic activity of the leaves of Mimosa pudica Linn in albino rats” Journal of herbal medicine and toxicology; 3(1): 123-126 Thamizharasan S, Umamaheswari S, Rajeswary H (2016) “Aamylase and ɑ-glucosidase activity of Mimosa pudica Linn flowers” Indian journal of research; 5(7): 224 Viện dược liệu (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam – tập I NXB khoa học kỹ thuật, tr 172-173 World Health Organization http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs312/fr/, truy cập ngày 6/6/2018 Yadav M, Lavania A, Tomar R, Prasad GBKS, Jainm S, Yadav H (2010) “Complementary and comparative study on hypoglycemic and antihyperglycemic activity of various extracts of Eugenia jambolana seed, Momordica charantia fruits, Gymnema sylvestre, and Trigonella foenum graecum seeds in rats” Appl Biochem Biotechnol.; 160: 2388-2400 Ngày nhận báo: 25/04/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/06/2018 Ngày báo đăng: 20/09/2018 ... Minh), đề tài thực khảo sát độc tính cấp đường uống tác dụng hạ đường huyết chuột nhắt viên nang cứng Mimostam chứa cao chiết hỗn hợp dược liệu gồm Râu mèo, Mướp đắng Mắc cỡ nhằm cung cấp Streptozotocin,... 450,74 µg/ml Độc tính cấp đường uống viên nang Mimostam Khảo sát chuột với liều tối đa bơm qua kim 10 g/kg Sau cho chuột uống, tất chuột khỏe mạnh, ăn cám viên, uống nước, tiêu tiểu, cử động bình... trị, tác dụng hạ đường huyết viên nang Mimostam thấp hơn, đường huyết lơ uống viên nang Mimostam cao có ý nghĩa thống kê so với lô glibenclamid mg/kg (p < 0,05) Như vậy, viên nang Mimostam cho chuột