Bài viết trình bày khảo sát mô hình gây mụn trên tai thỏ bằng isopropyl lanolate. Đánh giá tác dụng điều trị mụn của cao chiết cồn lá Sống đời trên mô hình đã khảo sát.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TRỊ MỤN TRÊN THỎ CỦA CAO CHIẾT CỒN 60% CỦA LÁ SỐNG ĐỜI KALANCHOE PINNATA (LAM.) PERS Huỳnh Ngọc Như*, Chu Hạnh Nguyên*, Võ Thanh Phong*, Lê Thị Lan Phương* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Mụn trứng cá bệnh mạn tính phổ biến cộng đồng, đặc biệt tuổi dậy thì, có tới 80% đến 90% thiếu niên Việt Nam mắc phải Cây Sống đời dân gian sử dụng rộng rãi để trị bỏng, trị mụn, trị ho cầm máu,… Từ nghiên cứu gần đây, giới cho thấy Sống đời Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers có tính kháng viêm, kháng khuẩn, giảm nhờn, tiêu sừng tế bào chết Tuy nhiên, nước ta chưa có nghiên cứu tác dụng trị mụn từ Sống đời Nghiên cứu thực để chứng minh tác dụng trị mụn trứng cá Sống đời Việt Nam Từ đó, tận dụng nguồn dược liệu dồi nước, góp phần làm đa dạng phương pháp điều trị mụn Mục tiêu nghiên cứu: Khảo sát mơ hình gây mụn tai thỏ isopropyl lanolate Đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời mơ hình khảo sát Phương pháp nghiên cứu: Xác định độc tính cấp cao chiết cồn Sống đời chuột nhắt trắng, tính liều sử dụng, quy đổi sang liều thỏ xác định liều điều trị chỗ theo diện tích da sử dụng thỏ Khảo sát mơ hình gây mụn tai thỏ isopropyl lanolate tuần Đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời mơ hình khảo sát, so với lô chứng thông qua biểu lâm sàng: Mẩn đỏ, sưng, viêm, tăng sừng, nhân mụn (comedones) Kết quả: Xác định liều Dmax cao chiết cồn Sống đời 16g cao/kg chuột Isopropyl lanolate với liệu trình bơi - 10 mg/cm2 tai thỏ/ngày x ngày/tuần tuần, tạo mụn độ Cao chiết Sống đời sử dụng với liều 10 mg cao/8 cm2/lần/ ngày, 14 ngày, làm mụn độ giảm xuống mụn độ Lơ chứng khơng thay đổi độ mụn Kết luận: Cao chiết cồn Sống đời có tác dụng điều trị mụn tai thỏ với liều 10 mg cao/8 cm2/lần/ ngày, 14 ngày Nghiên cứu đóng góp sở thực nghiệm tính an toàn hiệu điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời Từ khóa: Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers., isopropyl lanolate, mụn trứng cá ABSTRACT EVALUATING THE ANTI - ACNE EFFECT OF ETHANOLIC 60% EXTRACT OF KALANCHOE PINNATA LAM LEAF IN THE RABBIT EAR MODEL Huynh Ngoc Nhu, Chu Hanh Nguyen, Vo Thanh Phong, Le Thi Lan Phuong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 20 - No - 2016: 31 - 36 Background: Acne is a popular disease in the world Many people could get it, special during their puberty In Viet Nam, there are 80% to 90% of teenagers who have acne Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers is a traditional medicine in Viet Nam Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers Leaf is used for treating burn wound, acne, cough, and bleeding Many studies approved that Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers is useful in anti-inflammatory, antibacterial, reducing oil, stratum corneum, and dead cells However, in Viet Nam, none study carried about the effect of Kalanchoe pinnata in acne treatment Therefore, we preceded this study to demonstrate the effect of ethanolic 60% extract of Kalanchoe pinnata Lam leaf in acne treatment As a result of this study, Kalanchoe * Khoa Y học cổ truyền- Đại học Y Dược TP HCM Tác giả liên lạc: BS Huỳnh Ngọc Như ĐT: 01693490009 Email: hnnhuyds@gmail.com 31 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 pinnata (Lam.) Pers could be a new medicine to treat acne Aims of study: Survey the acne in rabbit ear model used isopropyl lanolate, and studies the effect of the acne treatment of ethanolic 60% extract of Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers Methods: Study the acute toxicity of alcoholic extract in mice The dose of mice was calculated by the Do Trung Dam’s method of determining the acute toxicity After that, the dose of rabbit was calculated by converting accord the body surface Isopropyl lanolate was used to get comedones in rabbit ear model during weeks Then, comedones were treating by the ethanolic 60% extract of Kalanchoe pinnata Lam leaf during weeks and compared with the control group through the signs including redness, swelling, inflammation, hyperkeratosis, and acne (comedones) Results: Identify the Dmax = 16g / kg in mice The dose 5-10 mg/cm2 rabbit’s ear/day of Isopropyl lanolate with days /week x weeks could create level of acne in rabbit ears The ethanolic 60% extract of Kalanchoe pinnata Lam leaf could treat acne with dose 10 mg/8 cm2 rabbit’s ear/times/day, for 14 days The level of acne was reduced to level in-group K In the other, the level of acne in control group still was level Conclusion: The ethanolic 60% extract of Kalanchoe pinnata lam Leaf could treat acne The study supports that the acne treatment of ethanolic 60% extract of Kalanchoe pinnata Lam leaf is safe and effective Key words: Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers., isopropyl lanolate, acne dạng phương pháp điều trị mụn Đó lý ĐẶT VẤN ĐỀ tiến hành nghiên cứu Mụn trứng cá bệnh mạn tính thường Mục tiêu nghiên cứu gặp cộng đồng, có tới 80% đến 90% Khảo sát độc tính cấp cao chiết cồn Sống thiếu niên Việt Nam mắc phải Bệnh ảnh hưởng đời xấu đến tâm lý người bệnh, chi phí điều trị cao cho cộng đồng(1) Ngày việc sử dụng Khảo sát mơ hình gây mụn tai thỏ lồi dược liệu thiên nhiên chữa bệnh ngày Đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết tăng Trong Sống đời dân gian dùng cồn Sống đời trị bỏng, trị mụn, trị ho cầm máu(2) Từ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU nghiên cứu gần giới, Sống đời Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers có tính kháng Ngun liệu nghiên cứu viêm, kháng khuẩn, ức chế gia tăng hoạt động Lá Sống đời tươi Kalanchoe pinnata vi khuẩn Propionibacterium anes (P.aces), (Lam.) Pers thu hái địa bàn Thành phố làm giảm chuyển hóa acid béo tự tế Cao Lãnh, Đồng Tháp (xác định qua đặc điểm bào, giảm tích tụ chất nhờn, hạn chế viêm tấy thực vật học, vi phẫu) Rửa sạch, loại tạp chất, nang lông, tiêu sừng, tiêu tế bào chết, làm thông sấy nhiệt độ 60oC, xay bột thơ kích thước 2-5 thống se nhỏ lỗ chân lơng làm giảm hình mm (độ ẩm ≤ 5%) Chiết dược liệu với dung môi thành nhân mụn(4,5,6) ethanol 60 % theo tỷ lệ 1:10 (dược liệu: ethanol) Tuy nhiên, Việt Nam chưa có nghiên cứu tác dụng trị mụn trứng cá từ Sống đời Với điều kiện địa lý cụ thể nước ta, khác thổ nhưỡng khí hậu, việc thực nghiên cứu để chứng minh tác dụng trị mụn trứng cá Sống đời vấn đề thiết thực Từ đó, tận dụng nguồn dược liệu dồi nước gớp phần làm đa 32 phương pháp ngấm kiệt 24 nhiệt độ phòng (28oC), thu dịch chiết, cô cách thủy dịch chiết 60oC thành cao đặc có độ ẩm ≤ 20% Phương tiện Hóa chất Hóa chất gây mụn isopropyl lanolate Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học công ty NK Ingredients Pte Ltd, Singapore; ethanol 60% PA Trung Quốc Behrens (nếu có) làm sở tính liều thử nghiệm dược lý Thiết bị dụng cụ Cân phân tích Sartorious, lò nung, bếp cách thủy, dụng cụ chăm sóc thỏ, số dụng cụ thường quy phòng thí nghiệm Xác định liều điều trị dựa liều độc tính cấp, quy đổi theo diện tích da sử dụng Động vật nghiên cứu Tác dụng điều trị mụn Thỏ New Zealand, giống đực, khỏe mạnh, nặng -3 kg, cung cấp Viện Vắcxin Sinh phẩm Y tế Nha Trang, nuôi ổn định ánh sáng, nhiệt độ dinh dưỡng phòng thí nghiệm Y dược cổ truyền Độc tính cấp Chuột nhắt trắng Swiss albino, khỏe mạnh, đồng giới tính, 6-8 tuần tuổi, trọng lượng 20 ± g, cung cấp Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh, ổn định nhiệt độ, ánh sáng, dinh dưỡng phòng thí nghiệm tuần trước thử nghiệm Phương pháp nghiên cứu Khảo sát độc tính cấp cao chiết cồn Sống đời(3) Tiến hành Cho chuột nhịn đói 12 trước thử nghiệm, uống nước tự Tiến hành cho uống kim đầu tù lần 0,2 ml/10 g thể trọng Giai đoạn thăm dò (4 chuột/lơ): Khởi đầu từ liều cao bơm qua kim đầu tù cho uống Xác định liều LD0 (liều tối đa không gây chết) liều LD100 (liều tối thiểu gây chết 100%) Giai đoạn xác định (20 chuột /lô): Chuột chia lô cho sử dụng thuốc liều khoảng LD0 LD100 chia theo cấp số nhân Đánh giá kết Theo dõi biểu hành vi vận động chuột vòng 72 sau dùng thuốc Ghi nhận số chuột chết lô Xác định Dmax LD50 theo phương pháp Karber- Liều chuột xác định Dmax LD50 /10 g chuột Mơ hình dò liều theo độc tính cấp áp dụng chuột, cần quy đổi sang liều thỏ Liều thỏ = ¼ liều chuột(4) Liều xác định dựa theo độc tính cấp liều tồn thân (đường uống), với phương pháp thoa chổ da, cần quy đổi liều cho thích hợp Tổng diện tích da thỏ (2 kg) = 1600 cm2 Diện tích điều trị mụn tai thỏ = x = cm2 Liều điều trị tai thỏ (thỏ kg) = Liều thỏ x 8/1600 Khảo sát mơ hình gây mụn tai thỏ (8) Tiến hành Đánh dấu tai thỏ vị trí gây mụn hình chữ nhật kích thước x cm2 Gây mụn tai thỏ cách thoa isopropyl lanolate: 10 mg/cm2/lần/ngày x ngày/ tuần x tuần Đánh giá kết Chụp hình thời điểm ngày 0, 3, 7, 11, 14 Quan sát mức độ tăng sừng thượng bì, mức độ tăng tiết bã nhờn, nhân mụn (comedones), tượng viêm chổ, xác định mức độ mụn Bảng Phân độ mụn tai thỏ(8) Độ Đặc điểm lâm sàng Khơng có khác biệt với ban đầu Tăng nhẹ chất sừng, dãn lỗ chân lơng Hình thành comedone đóng, tăng sừng lớp thượng bì Hình thành comedone mở Các nang dãn rộng, gồ lên mặt da, có tượng viêm Các nang lớn thơng thương với nhau, có tượng viêm Đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời Chọn mẫu đạt tiêu chuẩn dân số gây mụn, tiến hành chia lô: con/ lô x lô Lô điều trị: Thoa cao chiết cồn Sống đời với liều tính theo mơ hình độc tính cấp, hiệu 33 Nghiên cứu Y học chỉnh diện tích da sử dụng Lơ chứng : Thoa nước cất Liệu trình điều trị: lần/ngày x ngày/tuần x tuần Đánh giá kết quả: Chụp hình thời điểm ngày 0, 3, 7, 11, 14 Quan sát tượng mẩn đỏ, sưng, viêm nang lơng da; tình trạng sừng, tiết bã nhờn, tính chất nhân mụn, lỗ chân lông; đếm số lượng nhân mụn số sang thương viêm (nếu có) So sánh lô điều trị với lô chứng Phương pháp thống kê- xử lý số liệu Các liệu trình bày dạng Mean ± SEM Việc xử lý thống kê đề tài dùng phần mềm SPSS phiên 16.0 MS.Excel 2010 KẾT QUẢ Độc tính cấp cao chiết cồn Sống đời Chuột thử nghiệm cho uống cao chiết cồn Sống đời với liều tối đa bơm qua kim 16g cao/kg chuột, khơng làm chuột chết Cho thấy cao chiết có độ an toàn cao Bảng Kết thử nghiệm độc tính cấp cao chiết cồn Sống đời Số chuột Số chuột Số chuột tử Phân suất đực (con) (con) vong (con) tử vong (%) Sơ khởi 2 0 Xác định 10 10 0 Lô thử Do đó, khơng thể xác định liều LD50 Liều Dmax cao chiết 16g cao/kg chuột Xác định liều điều trị dựa Dmax quy đổi theo diện tích da Liều chuột xác định Dmax: Chọn liều ¼ Dmax g cao/kg chuột Quy đổi sang liều thỏ ¼ liều chuột g cao/kg thỏ Quy đổi sang liều sử dụng chỗ da 10 mg cao/8 cm2 tai thỏ Mơ hình gây mụn tai thỏ Đánh giá thời điểm ngày 0, 3, 7, 11, 14 (N0, N3, N7, N11, N14) Quan sát mức độ tăng sừng thượng bì, tăng tiết bã nhờn, tượng viêm chỗ, hình thành nhân mụn (comedon) 34 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Kết luận: Sau 14 ngày gây mụn hóa chất isopropyl lanolate, tất tai thỏ đạt mức độ mụn độ (comedon mở, tăng sừng thượng bì tăng nhiều, khơng có tượng viêm) theo phân độ mụn dựa triệu chứng lâm sàng mơ hình tai thỏ đánh giá mức độ gây mụn trứng cá thành phần mỹ phẩm Tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời Đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời so sánh với nhóm chứng thời điểm: Ngày 0, 3, 7, 11, 14 (N0, N3, N7, N11, N14) Kết luận: Cao chiết cồn 60% Sống đời có hiệu điều trị mụn Trong 14 ngày điều trị, lô điều trị K: Mụn độ (comedon mở) giảm xuống mụn độ (Tăng nhẹ chất sừng, dãn lỗ chân lông) Lô chứng C không thay đổi độ mụn: Mụn độ BÀN LUẬN Tính an tồn cao chiết Trong thử nghiệm độc tính cấp, liều cao cao chiết cồn 60% Sống đời cho chuột uống 16 g cao/kg chuột (tương ứng với 79,8 g cao, khoảng 5013,6 g dược liệu tươi/người 60 kg) khơng có chuột chết Do đó, chưa tính liều LD50 đường uống Theo dân gian ghi nhận sách "Những thuốc vị thuốc Việt Nam" Giáo sư Đỗ Tất Lợi, Sống đời tươi sử dụng đường uống khoảng 40 g/lần/ngày Liều nghiên cứu mơ hình gấp 125 lần liều thường sử dụng, cho thấy cao chiết có tính an tồn cao Mơ hình gây mụn tai thỏ Những điểm giống khác mô hình xây dựng so với mơ hình William E Morris, Shih Chao Kwan Điểm giống Đều nghiên cứu thỏ New Zealand giống đực, nặng - kg, thoa hoạt chất isopropyl lanolate liều 10 mg/ cm2 tai Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 thỏ/lần/ngày x ngày/tuần Kết cho thấy isopropyl lanolate gây mụn độ Điểm khác Bảng Điểm khác mơ hình gây mụn xây dựng mơ hình William E Morris, Shih Chao Kwan Điểm Mơ hình xây dựng khác Tiến Gây mụn đồng thời hành tai thỏ Thời gian Ngày 0, 3, 7, 11, 14 đánh giá Quan sát mắt Hình thường, trực tiếp thức gián tiêp thơng qua đánh giá hình ảnh chụp So sánh tai thỏ Nhóm thời điểm trước chứng sau kết thúc mơ hình William E Morris, Shih Chao Kwan Gây mụn tai trái, tai phải không tác động Kết thúc mơ hình, giết chết thỏ, giải phẫu bệnh tai thỏ Quan sát kính hiển vi tiêu giải phẫu bệnh Cố định formalin, nhuộm ematoxylin - eosin So sánh bên tai thỏ: Tai lành, tai gây mụn Nhận xét: Tuy có số khác biệt mơ hình, cho kết giống nhau: Isopropyl lanolate gây mụn độ Mơ hình sử dụng cho thử nghiệm đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời Tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời Ở liều điều trị 10 mg cao/8cm2/lần/ngày, cao chiết cồn 60% Sống đời có hiệu điều trị mụn 14 ngày Tác dụng điều trị mụn flavonoid Sống đời có tác dụng giảm viêm, ngăn ngừa hình thành nhân mụn, đồng thời với acid hữu giúp tiêu sừng, se nhỏ lỗ chân lông Mụn trứng cá theo Y học cổ truyền tương ứng với chứng Phấn thích, Tòa sang: Phần lớn phong nhiệt kết tụ Phế kinh, phát mặt mũi; ăn uống nhiều chất cay nóng, dầu mỡ sinh thấp nhiệt da; Tỳ vận hóa kém, thấp ngưng kết lâu ngày sinh đàm hóa nhiệt ngưng trệ bì phu mà sinh bệnh Y học cổ truyền chia mụn trứng cá thành thể: Phế kinh phong nhiệt, Trường Vị thấp nhiệt, Tỳ hư(7) Nghiên cứu Y học Theo lý luận YHCT, Sống đời xếp vào nhóm dược liệu có tác dụng chữa mụn nhọt mẫn ngứa Sống đời có vị nhạt, ngọt, chua, chát, tính hàn Tác dụng nhiệt tiêu độc, tiêu ứ thống, huyết, độc sinh cơ, …(2) phù hợp với phép trị thể bệnh mụn trứng cá Tuy nhiên, giải phần ngọn, cần phải kết hợp với phương thuốc phương pháp điều trị khác để giải nguyên hình thành mụn trứng cá (phần gốc)(7) Nghiên cứu đóng góp sở thực nghiệm tính an tồn hiệu điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời, tạo tiền đề cho nghiên cứu tác dụng điều trị mụn, chế phẩm thương mại cao chiết tương lai Qua đó, cung cấp thêm sản phẩm thuốc có nguồn gốc thiên nhiên điều trị mụn trứng cá, góp phần tận dụng nguồn dược liệu địa phương, đưa YHCT trở thành phận thiếu lĩnh vực chăm sóc sức khỏe ban đầu, phát triển YHCT nước nhà KẾT LUẬN Xác định liều Dmax cao chiết cồn Sống đời 16g cao/ kg chuột Kiểm chứng mơ hình gây mụn tai thỏ New Zealand hóa chất isopropyl lanolate: - 10 mg/cm2 tai thỏ/ngày x ngày/tuần x tuần Cho kết gây mụn độ theo bảng phân độ mơ hình William E Morris Shih Chao Kwan Cao chiết cồn Sống đời có tác dụng điều trị mụn tai thỏ Ở liều điều trị 10mg cao/ cm2 tai thỏ/ lần/ngày, 14 ngày, lô điều trị mụn độ giảm xuống mụn độ 1, lô chứng không thay đổi độ mụn (độ 3) Cần mở rộng quy mô xây dựng mô hình thực nghiệm với số lượng động vật đủ lớn, phương thức đánh giá rõ ràng xác (phương pháp giải phẫu bệnh) Đồng thời nghiên cứu dạng bào chế chế phẩm từ cao chiết 35 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 cồn Sống đời, để tăng hiệu tăng độ hài lòng người dùng TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 Dương Thị Lan (2009) Nghiên cứu ảnh hưởng bệnh trứng cá thông thường đến chất lượng sống người bệnh Luận văn Thạc sĩ Y học, Đại Học Y Hà Nội, tr 2-5 Đỗ Tất Lợi (2004) Những Cây thuốc Vị thuốc Việt Nam NXB Y học, tr 116-181 Đỗ Trung Đàm (2005) Phương pháp nghiên cứu tác dụng thuốc từ dược thảo Viện dược liệu, tr 380- 392 Ferreira RT et al (2014) Mechanisms Underlying the Antinociceptive, Antiedematogenic, and Anti-Inflammatory Activity of the Main Flavonoid from Kalanchoe pinnata Hindawi, Article ID 429256, 3-8 Joseph B et al (2011) Rare Medicinal Plant- Kalanchoe pinnata Research Journal of Microbiology (4): 322-327, ISSN 1816-4935 Quazi MA et al (2011) The miracle plant ( Kalanchoe pinnata) a phytochemical and pharmacological review IJRAP, ISSN 2229-3566, 2(5), 1478-1482 Trần Văn Kỳ (2002) Ngoại khoa Đông y NXB Y học, tr 115118 William EM, Shin CK (1983) Use of the rabbit ear model in evaluating the comedogenesis potential of cosmetic ingredients J Soc Cosmet Chem, 34, 215-225 Ngày nhận báo: 30/07/2016 Ngày phản biện nhận xét báo: 31/08/2016 Ngày báo đăng: 25/11/2016 ... cồn Sống đời Tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời Ở liều điều trị 10 mg cao/ 8cm2/lần/ngày, cao chiết cồn 60% Sống đời có hiệu điều trị mụn 14 ngày Tác dụng điều trị mụn flavonoid Sống đời. .. sàng mơ hình tai thỏ đánh giá mức độ gây mụn trứng cá thành phần mỹ phẩm Tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời Đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết cồn Sống đời so sánh với nhóm chứng... ngày Đánh giá tác dụng điều trị mụn cao chiết tăng Trong Sống đời dân gian dùng cồn Sống đời trị bỏng, trị mụn, trị ho cầm máu(2) Từ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU nghiên cứu gần giới, Sống đời Kalanchoe